CN102218028B - 一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供一种抗肝癌的反义寡核苷酸药物癌泰得(其序列为：5’-ACT CACTCA GGC CTC AGA CT-3’)为活性成分的注射制剂及其制备方法。该注射剂，包括用于供临床静脉滴注前配成溶液的冻干粉针或浓溶液，是由单剂量活性成分癌泰得与药剂学中有效的附加剂制备而成，pH为7～9，含量规格为10mg～500mg，所述的药剂学中有效的附加剂为抗氧剂0～5％、填充剂0～60％、稳定剂0～10％、pH调节剂0～10％、离子强度调节剂0～10％等，上述百分比为该成分总质量占溶液体积的百分比。本发明的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂，对肝癌细胞具有良好的抑制作用，质量可控、稳定性好。

Description

一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂及其制备方法

技术领域

本发明属化学制药领域，是以一种反义寡核苷酸药物癌泰得(其序列为：5’-ACT CAC TCAGGC CTC AGA CT-3’)为活性成分的注射制剂，用于肝癌治疗及其化疗联合用药的应用。 

背景技术

目前肝癌的主要治疗方法是：较小没有转移的单个肝癌以手术切除为主，不能手术的中晚期肝癌可以考虑介入治疗和中医治疗。化疗对肝癌的效果较差：据统计有效率在11％左右，但严重的副作用几乎都是化疗药物引起，所以肝癌原则上不化疗。反义寡核苷酸是一种基因靶向新型药物，能够在基因水平上干扰致病蛋白的产生，从而达到生物***的作用。 

端粒酶活性与肿瘤的发生密切相关，其活性抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的热点。 

端粒酶是由一个RNA组分和若干蛋白质组成的逆转录酶，它能利用自身RNA为模板合成端粒DNA，弥补随细胞有丝***逐渐缩短的端粒。其中端粒酶RNA(human telomerase RNA，hTR)含有与端粒重复序列互补的序列，在端粒延长时作为模板，其在大多数细胞中都表达；而含有逆转录酶活性的蛋白，即人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)是端粒酶的限速成分，仅在端粒酶阳性的细胞中表达，与端粒酶活性相关，它是正常细胞转变为肿瘤细胞的关键性因素，因此抑制hTERT活性就有可能抑制肿瘤细胞的生长和转移，达到抗肿瘤的目的。 

“癌泰得”就是针对人端粒酶催化亚基hTERT基因筛选获得的、可特异抑制肿瘤细胞生长的反义寡核苷酸药物，与传统小分子药物相比，作用效率高、毒性低，且不易产生耐药，该药物的研发将为几乎无药可用的中晚期肝癌患者提供一种治疗选择。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗肝癌的反义寡核苷酸药物癌泰得(其序列为：5’-ACT CACTCA GGC CTC AGA CT-3’)为活性成分的注射制剂及其制备方法。 

采用的技术方案： 

一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂，包括静脉滴注前配成溶液的冻干粉针或浓溶液，是由单剂量活性癌泰得与药剂学中有效的附加剂制成，pH为7～9。 

所述的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂中癌泰得含量规格为10mg～500mg，优选含 量规格为100mg～500mg。 

所述的药剂学中有效的附加剂为抗氧剂、填充剂、稳定剂、保护气体、离子强度调节剂、pH调节剂等。 

所述的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、硫脲、抗坏血酸、硫代甘油、谷胱甘肽、丙氨酸、半胱氨酸、没食子酸等； 

所述的填充剂为乳糖、甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、木糖醇、山梨醇、乳糖酸钙、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖与甘露醇1∶1混合物或水解明胶与甘露醇的混合物； 

所述的稳定剂为肌酐、甘氨酸、辛酸钠或烟酰胺； 

所述的保护气体为氮气、氩气、氖气、氪气或二氧化碳气体； 

所述的离子强度调节剂为硫酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠或醋酸钠； 

所述的pH调节剂为甲磺酸、马来酸、盐酸、醋酸、枸橼酸、氢氧化钠、碳酸氢钠或磷酸钠。 

所述的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸冻干粉针，是由活性癌泰得加附加剂制成溶液，经分装，冷冻干燥而成，分装前溶液中：其中活性成分癌泰得溶液的浓度为4～200mg/ml，填充剂为0～60％，抗氧剂为0～5％，稳定剂为0～10％，pH调节剂为0～10％，离子强度调节剂为0～10％，上述百分比为该成分总质量占溶液体积的百分比。 

所述的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸浓溶液，是由活性癌泰得加附加剂制备而成的溶液，其中活性成分癌泰得溶液的浓度为1～100mg/ml，抗氧剂为0～5％，稳定剂为0～10％，pH调节剂为0～10％，离子强度调节剂为0～10％，上述百分比为该成分总质量占溶液体积的百分比。 

一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂的制备方法： 

(1)一种治疗肝癌的反义寡核苷酸冻干粉针的制备方法： 

药液的配制：称取处方量的癌泰得及附加剂，加入注射用水适量，搅拌使之充分溶解后加注射用水至全量； 

将上述药液按无菌操作法采用0.22μm微孔滤膜进行除菌过滤； 

滤液进行含量、澄明度及pH值检查合格后备用； 

药液灌装、冷冻干燥、轧盖即得成品。 

(2)一种治疗肝癌的反义寡核苷酸浓溶液的制备方法： 

药液的配制：称取处方量的癌泰得及附加剂，加入注射用水适量，搅拌使之充分溶解。 

将上述药液用0.45μm微孔滤膜粗滤； 

测定粗滤液的pH值及含量，合格后用0.22μm微孔滤膜精滤除菌； 

药液灌装、封口、灯检、包装即得成品。 

本发明所述的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂检测指标和方法如下： 

有关物质： 

在硫代寡核苷酸合成中主要产生两类杂质：一类杂质是比全长序列少若干个核苷酸的n-x序列，另一类杂质是在合成中硫代不充分造成的(P＝O)_x杂质。 

缩短寡核苷酸的检测： 

取本品适量，加水制成适当浓度的溶液，采用毛细管电泳法进行测定，按峰面积归一化法计算，除溶剂峰外，各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的5％。 

其他寡核苷酸的检测： 

将本品配成供试品溶液及5％浓度的自身对照溶液，采用高效液相色谱法，按不加校正因子的主成分自身对照法计算，除溶剂峰外，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。 

含量测定： 

色谱条件与***适用性试验：用阴离子交换色谱柱，以乙二胺四醋酸二钠-三羟基氨基甲烷-乙腈为流动相A；乙二胺四醋酸二钠-三羟基氨基甲烷-氯化铵-乙腈为流动相B；检测波长为260nm；柱温为50℃。理论板数按癌泰得峰计算不低于2000。 

测定法：取本品适量，加纯水制成适当浓度的溶液，采用高效液相色谱法，按外标法以峰面积计算癌泰得含量。 

检测结果见表1。 

表1癌泰得实施例样品检测结果 

本发明的一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂包括供临床静脉滴注前配成溶液的冻干粉针或浓溶液，对肝癌细胞具有良好的抑制作用，质量可控、稳定性好。 

具体实施方式

实施例一 

癌泰得            100g 

注射用水          2500ml 

制成              1000瓶(100mg/2.5ml) 

制法：称取癌泰得溶于1000ml注射用水中，搅拌，使之完全溶解后加注射用水至全量，混匀。用0.22μm微孔滤膜过滤，然后灌装，冷冻干燥(在冷冻干燥机内，开启冻干机，降温至-45℃，预冻3小时；用8小时逐渐升温至-25℃，连续抽真空8小时；用5小时自然升温至-10℃，保温2小时；用2小时升温至0℃，保温2小时，并连续抽真空；用4小时升温至25℃，连续抽真空8小时，至制品曲线与真空度曲线趋于一致后，冻干结束；将经精密过滤的保护气体氮气充入冷冻干燥机内，保护制品；自动压塞)，轧盖即得。 

实施例二 

制法：称取甘露醇，用600ml注射用水溶解，备用；再称取癌泰得，用1000ml注射用水中溶解，将配好备用的甘露醇溶液缓缓加至癌泰得溶液中，并不断搅拌混匀，加注射用水至全量。用0.22μm微孔滤膜过滤，然后灌装，冷冻干燥(同实施例一)，轧盖即得。 

实施例三 

制法：称取葡萄糖，用600ml注射用水溶解，备用；再称取癌泰得，用1000ml注射用水中溶解，将配好备用的葡萄糖溶液缓缓加至癌泰得溶液中，并不断搅拌混匀，加注射用水至全量。用0.22μm微孔滤膜过滤，然后灌装，冷冻干燥(同实施例一)，轧盖即得。 

实施例四 

制法：称取山梨醇和氯化钠，用600ml注射用水溶解，备用；再称取癌泰得，用1000ml注射用水中溶解，将配好备用的山梨醇氯化钠溶液缓缓加至癌泰得溶液中，并不断搅拌混匀，加注射用水至全量。用0.22μm微孔滤膜过滤，然后灌装，冷冻干燥(同实施例一)，轧盖即得。 

实施例五 

制法：称取甘露醇和亚硫酸氢钠，用600ml注射用水溶解，备用；再称取癌泰得，用1000ml注射用水中溶解，将配好备用的甘露醇亚硫酸氢钠溶液缓缓加至癌泰得溶液中，并不断搅拌混匀，加注射用水至全量。加入0.1mol/L氢氧化钠调pH至7～8。用0.22μm微孔滤膜过滤，然后灌装，冷冻干燥(同实施例一)，轧盖即得。 

实施例六 

制法：分别称取癌泰得和硫酸氢钠，加注射用水80ml，搅拌使之溶解，加注射用水至全量，用0.1mol/L氢氧化钠调pH至7～8。将上述药液先经0.45μm微孔滤膜粗滤，粗滤液的 pH值及含量检验合格后，用0.22μm微孔滤膜精滤除菌，灌封即得。 

实施例七 

制法：分别称取癌泰得和硫酸氢钠，加注射用水180ml，搅拌使之溶解，其他同实施例六制法。 

实施例八 

制法：分别称取癌泰得和硫酸氢钠，加注射用水450ml，搅拌使之溶解，其他同实施例六制法。 

实施例九 

制法：分别称取癌泰得和硫酸氢钠，加注射用水900ml，搅拌使之溶解，其他同实施例六制法。 

序列表 

<110>杭州天龙药业有限公司 

中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 

<120>一种治疗肝癌的反义寡核苷酸注射剂及其制备方法 

<130>124461 

<160>1 

<170>PatentIn version 3.3 

<210>1 

<211>20 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<400>1 

actcactcag gcctcagact                            20 

Claims (8)

1.一种反义寡核苷酸药物注射剂，其特征在于：以单剂量活性成分癌泰得(其序列为：5’-ACTCAC TCA GGC CTC AGA CT-3’)与药剂学中有效的附加剂，制成用于供临床静脉滴注前配成溶液的冻干粉针或浓溶液，pH为6～8。

2.根据权利要求1所述的癌泰得注射剂，其特征在于：所述的癌泰得含量规格为10mg～500mg。

3.根据权利要求2所述的癌泰得注射剂，其特征在于：所述的癌泰得含量规格为100mg～500mg。

4.根据权利要求1所述的癌泰得注射剂，其特征在于：所述的药剂学中有效的附加剂为抗氧剂、填充剂、稳定剂、保护气体、离子强度调节剂和pH调节剂：

所述的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、硫脲、抗坏血酸、硫代甘油、谷胱甘肽、丙氨酸、半胱氨酸或没食子酸；

所述的填充剂为乳糖、甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、木糖醇、山梨醇、乳糖酸钙、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖与甘露醇1∶1混合物或水解明胶与甘露醇的混合物；

所述的稳定剂为肌酐、甘氨酸、辛酸钠或烟酰胺；

所述的保护气体为氮气、氩气、氖气、氪气或二氧化碳气体；

所述的离子强度调节剂为硫酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠或醋酸钠；

所述的pH调节剂为甲磺酸、马来酸、盐酸、醋酸、枸橼酸、氢氧化钠、碳酸氢钠或磷酸钠。

5.根据权利要求1所述的注射用癌泰得冻干粉针，其特征在于：冷冻干燥前药液中活性成分癌泰得溶液的浓度为4～200mg/ml，填充剂为0～60％，抗氧剂为0～5％，稳定剂为0～10％，pH调节剂为0～10％，离子强度调节剂为0～10％，上述百分比为该成分总质量占溶液体积的百分比。

6.根据权利要求1所述的注射用癌泰得浓溶液，其特征在于：活性成分癌泰得溶液的浓度为1～100mg/ml，抗氧剂为0～5％，稳定剂为0～10％，pH调节剂为0～10％，离子强度调节剂为0～10％，上述百分比为该成分总质量占溶液体积的百分比。

7.根据权利要求1或5所述的注射用癌泰得冻干粉针的制备方法：

药液的配制：称取处方量的癌泰得及附加剂，加入注射用水适量，搅拌使之充分溶解后加注射用水至全量；

将上述药液按无菌操作法采用0.22μm微孔滤膜进行除菌过滤；

滤液进行含量、澄明度及pH值检查合格后备用；

药液灌装、冷冻干燥、轧盖即得成品。

8.根据权利要求1或6所述的注射用癌泰得浓溶液的制备方法：

药液的配制：称取处方量的癌泰得及附加剂，加入注射用水适量，搅拌使之充分溶解。

将上述药液用0.45μm微孔滤膜粗滤；

测定粗滤液的pH值及含量，合格后用0.22μm微孔滤膜精滤除菌；

药液灌装、封口、灯检、包装即得成品。