CN102216309B - C-met蛋白激酶的***并噻二唑抑制剂 - Google Patents
C-met蛋白激酶的***并噻二唑抑制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及可用于抑制c-Met蛋白激酶的化合物(1)。本发明还提供了包含化合物(1)的药学可接受的组合物和使用该组合物治疗增殖性疾病的方法。
Description
技术领域
本发明涉及c-Met的选择性抑制剂。本发明还提供了含有c-Met抑制剂的药学可接受的组合物以及使用该组合物治疗不同的增殖性疾病的方法。
背景技术
肝细胞生长因子(HGF)也称作扩散因子,是一种通过诱导有丝***和细胞运动而促进转化和肿瘤形成的多功能生长因子。进而,HGF通过不同的信号传递途径刺激细胞运动和侵入来促进转移,为了产生细胞效应,HGF必须与其受体c-Met(一种受体酪氨酸激酶)相结合。c-Met作为一种由50千道尔顿(kDa)α-亚基和145kDaα-亚基组成的广泛表达的异二聚体蛋白(Maggiora等人,等人,J.Cell Physiol.,173:183-186,1997),在占显著百分比的癌症人群中过表达,并且在初期肿瘤和转移灶的转变过程中被放大。涉及c-Met过表达的各种癌症包括但不限于:胃腺癌、肾癌、小细胞肺癌、结直肠癌、***癌、脑癌、肝癌、胰腺癌和乳腺癌。c-Met还涉及动脉粥样硬化和肺纤维化。
近年来,已经认为药物造成的心脏QT延长会在许多临床场合造成不利的或致命的副作用。心脏钾通道hERG(人ether-a-go-go-相关基因)编码心脏中快速延迟的整流器电流Ikr的α-亚基,其优势地促成人心室肌细胞的末端复极化。参见Dennis等人,Biochemical SocietyTransactions 35(5):1060-1063(2007)。已经证实,hERG钾通道的抑制可以导致QT间期的延长,这被广泛地视作扭转性室速(TdP)心律失常的关键性危险因子。因而,克服hERG结合已经成为药物开发的重大障碍。
除了认识到药物造成的QT延长的可能性以外,细胞色素P450活性对药理学试剂的代谢也是重要的,特别是在可能包含此类试剂的组合的治疗中。细胞色素P450酶催化许多治疗化合物的氧化,且在药物作用的程度和持续时间方面具有重要作用,这通过将药物分解代谢为无活性的代谢物或通过将前药生物活化为它们的活性形式来实现。抗癌剂在个体应答之间表现出广泛的变化,这部分地归因于药代动力学变化性。参见Scipture等人,Lancet Oncology 6:780-789(2005)。由细胞色素P450介导的最重要的代谢部位是肝,这些酶在这里到处表达。也有证据表明,所述代谢发生于肿瘤内,且这些酶在肿瘤内的存在可能对化学治疗剂的效能具有希望的或不良的作用,这取决于存在的亚型和施用的细胞毒性剂。因而,开发具有有利的药物代谢特性的抗肿瘤剂也是药物开发的一个目的。
因此,非常需要开发出可用作c-Met蛋白激酶受体抑制剂的化合物。具体地,优选的化合物应当具有对c-Met受体的高亲和力,且表现出作为拮抗剂的功能活性,同时表现出对其它激酶受体的微弱的亲和力。此外,希望提供这样的c-Met受体拮抗剂,其具有微弱的或者没有hERG结合,并且具有有利的药物代谢动力学/药效学特性。
发明内容
已经发现,6-((S)-1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1,2,4]***并[3,4-b][1,3,4]噻二唑-3-基)乙基)喹啉(化合物1)和其药学可接受的组合物可有效地抑制c-Met。具体地,化合物1在生物试验中选择性地抑制c-Met活性,例如,在已知过表达该受体的细胞中抑制c-Met活性。进而,化合物1表现出最小的hERG-相关的钾通道活性。另外,化合物1具有合适的药代动力学性质,正如通过它在动物模型和体外试验(尤其是包含细胞色素P450同功酶的代谢研究)中的行为所证实的。
因此,本发明表征了下述化合物:
或其药学可接受的盐。
本发明还提供了化合物1的晶体形式。
本发明还提供了药物组合物,其包含任意形式的化合物1和药学可接受的载体、佐剂或赋形剂。此外,本发明提供了治疗患者中增殖性疾病、病症或障碍或者减轻其严重程度的方法,所述方法包括下述步骤:向该患者施用治疗有效剂量的化合物1或其药物组合物。
具体实施方式
定义和一般命名法
除非另外指出,本文适用下面的定义。对于本发明目的而言,化学元素按照元素周期表CAS版和Handbook of Chemistry and Physics,第75版1994给出。此外,有机化学的一般原则描述在“Organic Chemistry”Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999和“March’sAdvanced Organic Chemistry,”第5版,Smith,M.B.和March,J.著,JohnWiley & Sons,New York:2001中,它们的所有内容通过引用并入本文。
本发明化合物的描述
在第一个方面,本发明表征了下述化合物:
或其药学可接受的盐。
在另一个方面,本发明表征了化合物1的晶体形式。在一个实施方案中,晶体化合物1的特征在于在20℃在X-射线衍射图(2-θ标度)中的下述峰中的一个或多个:6.2至6.4(例如,约6.3),9.1至9.3(例如,约9.2),11.4至11.6(例如,约11.5),13.2至13.4(例如,约13.3),13.7至13.9(例如,约13.8),14.1至14.3(例如,约14.2),14.7至14.9(例如,约14.8),16.1至16.3(例如,约16.2),18.1至18.3(例如,约18.2),18.6至18.8(例如,约18.7),和19.7至19.9(例如,约19.8)。
本发明化合物的组合物、制剂和给药
在另一个方面,本发明提供了组合物,其包含化合物1或其药学可接受的衍生物和药学可接受的载体、佐剂或赋形剂。在一个实施方案中,本发明组合物中的化合物的量可有效地、可测量地抑制生物样品或患者中的c-Met。优选地,将本发明组合物配制成用于施用至需要该组合物的患者。最优选地,将本发明组合物配制成用于向患者口服给药。
本文使用的术语“患者”是指动物,优选哺乳动物,最优选人。
还应该理解,化合物1可以以游离形式存在而用于治疗,或者适合的话,以其药学可接受衍生物的形式存在而用于治疗。根据本发明,药学可接受衍生物包括但不限于药学可接受的前药、盐、酯、这类酯的盐或者任何的其它加成物或衍生物,其在向有需要的患者给药后,能够直接或间接地提供在本文中以其它方式描述的化合物1或者其代谢物或残余物。
本文使用的术语“药学可接受的盐”是指这样的盐,它们在合理医学判断范畴内适合用于与人和低级动物的组织接触,而无过度的毒性、刺激性、过敏反应等。
药学可接受的盐是本领域众所周知的。例如,S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19,1977中详细描述了药学可接受的盐,其通过引用并入本文。化合物1的药学可接受的盐包括由适宜的无机和有机酸和碱衍生出的盐。药学可接受的无毒性酸加成盐的实例是用无机酸或有机酸或者使用本领域已知的其它方法(例如离子交换法)形成的氨基盐,所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸,所述有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸。其它药学可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。由适宜碱衍生出的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐。
如上所述,本发明的药学可接受的组合物还包括药学可接受的载体、佐剂或赋形剂,本文使用的药学可接受的载体、佐剂或赋形剂根据所需的特定剂型的需要,包括任意的和所有的溶剂、稀释剂或其它液体赋形剂、分散剂或助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。在Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第21版,2005,D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia著以及Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology,J.Swarbrick和J.C.Boylan著,1988-1999,MarcelDekker,New York中公开了用于配制药学可接受的组合物的各种载体及其制备的已知技术,其全部内容通过引用并入本文。任何常规载体赋形剂除与化合物1不相容(例如产生任何不希望的生物学效应或者以其它方式与药学可接受的组合物中的任意其它组分以不利的方式相互作用的情况)的以外,其使用也涵盖于本发明范围内。
可用作药学可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯化混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、羊毛脂、糖类例如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉类例如玉米淀粉和马铃薯淀粉;纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素;黄蓍胶粉末;麦芽;明胶;滑石粉;赋形剂例如可可脂和栓剂用蜡;油类例如花生油、棉籽油;红花油;芝麻油;橄榄油;玉米油和大豆油;二醇类例如丙二醇或聚乙二醇;酯类例如油酸乙酯和月桂酸乙酯;琼脂;缓冲剂例如氢氧化镁和氢氧化铝;藻酸;无热原水;等渗盐水;林格液;乙醇和磷酸盐缓冲液,以及其它无毒性可相容的润滑剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁,以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和香料、防腐剂和抗氧化剂,根据配制人员判断也可以存在于组合物中。
本发明的组合物可以通过口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻内、经颊、***内或通过植入型药盒给药。本文使用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、眼内、肝内、损伤部位内和颅内注射或输注技术。优选将组合物通过口服、腹膜内或静脉内给药。本发明组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性混悬剂。这些混悬剂可以按照本领域已知的技术,使用适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂制备。无菌注射剂还可以是在无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂,例如在1,3-丁二醇中的溶液剂。在可使用的可接受的介质和溶剂中,有水、林格液和等渗氯化钠溶液。此外,无菌不挥发性油通常用作溶剂或助悬介质。
为了实现上述目的,可以使用任何温和的不挥发性油,包括合成的甘油单酯或甘油二酯。作为天然的药学可接受的油类形式的脂肪酸,例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂,例如橄榄油或蓖麻油,特别是其聚氧乙基化形式。这些油溶液剂或混悬剂还可以含有长链醇稀释剂或分散剂,例如羧甲基纤维素或通常用于配制药学可接受的剂型(包括乳剂和混悬剂)的类似分散剂。通常用于制备药学可接受的固体、液体或其它剂型的其它常用表面活性剂例如吐温类、司盘类及其它乳化剂或生物利用度促进剂,也可用于实现制剂目的。
本发明的药学可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型形式口服给药,包括但不限于胶囊剂、片剂、水性混悬剂或溶液剂。在用于口服用途的片剂情形中,常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服给药的情形,可使用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当口服使用需要采用水性混悬剂时,将活性成分与乳化剂和助悬剂混合。如果需要的话,还可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
或者,本发明的药学可接受的组合物还可以以用于直肠给药的栓剂形式给药。其可以通过将药物与适宜的无刺激性赋形剂混合来制备,其在室温下为固体但是在直肠温度下为液体,从而可以在直肠中熔化以释放出药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学可接受的组合物还可以通过局部给药,特别是当治疗目标包括通过局部施用容易达到的区域或器官时,包括眼部、皮肤或下肠道的疾病。针对各区域或器官,可以方便地制备适宜的局部制剂。
用于下肠道的局部给药可以以直肠栓剂(同上)或适宜的灌肠制剂的形式来实现。还可以使用局部经皮贴剂。
对于局部给药,可以将药学可接受的组合物配制成含有混悬或溶解于一种或多种载体中的活性成分的适宜软膏剂形式。用于局部施用化合物1的载体包括但不限于矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者,还可以将药学可接受的组合物配制成含有混悬或溶解于一种或多种药学可接受的载体中的活性成分的适宜的洗剂或乳剂形式。适宜的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、棕榈醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
对于眼用,可以将药学可接受的组合物配制成例如在等渗、调节了pH的无菌盐水或其它水溶液中的微粒化混悬剂,或者优选在等渗、pH调节的无菌盐水或其它水溶液中的溶液剂,使用或不使用防腐剂例如苯扎氯铵。或者,对于眼用,可以将药学可接受的组合物配制在软膏例如凡士林中。本发明的药学可接受的组合物还可以通过鼻喷雾剂或吸入剂来施用。这类组合物按照药物制剂领域熟知的技术制备,可以制备成在盐水中的溶液形式,使用苄醇或其它适宜的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂。
最优选地,将本发明的药学可接受的组合物配制成用于口服给药。
用于口服给药的液体制剂包括但不限于药学可接受的乳剂、微乳、溶液、混悬剂、糖浆和酏剂。除了活性化合物以外,液体制剂还可以含有本领域常用的惰性稀释剂,例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂,例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂以外,口服组合物还可以包括佐剂,例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。
注射剂例如无菌注射水或油性混悬剂可以按照已知技术,使用适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌注射剂还可以是在无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂、混悬剂或乳剂,例如在1,3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的介质和溶剂有水、林格液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外,无菌的不挥发性油通常也可以用作溶剂或助悬介质。为了实现上述目的,可以使用任何温和的不挥发性油,包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外,脂肪酸例如油酸也可用于制备注射剂。
注射剂可以通过例如细菌过滤器过滤或者加入无菌固体组合物形式的灭菌剂来进行灭菌,所述灭菌剂在使用前可溶解或分散于无菌水或其它无菌注射介质中。
为了延长化合物1的疗效,通常需要减慢该化合物通过皮下或肌内注射的吸收。这可以通过使用具有低水溶性的结晶或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样的话,化合物1的吸收速率取决于其溶出速率,而后者又取决于结晶大小和结晶形式。或者,将化合物1溶解或混悬于油性介质中也可以实现肠胃外给药化合物形式的延迟吸收。可注射药库形式通过在生物可降解聚合物例如聚丙交酯-乙交酯中形成化合物1的微囊基质来制备。根据化合物与聚合物的比例以及所使用的具体的聚合物的性质,可以控制化合物释放的速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。药库式注射剂还可以通过将化合物1包合在适合机体器官的脂质体或微乳中制备。
通过直肠或***给药的组合物优选是栓剂,其可以通过将化合物1与适宜的无刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡混合来制备,其在环境温度下为固体,但在机体温度下为液体,从而可以在直肠或***腔中熔化以释放出活性化合物。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中,将活性化合物与至少一种惰性的、药学可接受的赋形剂或载体例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或下述物质混合:a)填充剂或增量剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸,b)粘合剂例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和***胶,c)保湿剂例如甘油,d)崩解剂例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠,e)溶解延缓剂例如石蜡,f)吸收促进剂例如季铵化合物,g)润湿剂例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯,h)吸收剂例如高岭土和膨润土,以及i)润滑剂例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情形中,剂型还可以包含缓冲剂。
使用例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂,具有类似类型的固体组合物还可以用作软或硬填充的明胶胶囊中的填充剂。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳例如肠溶衣和药物制剂领域熟知的其它包衣来制备。它们可以任选含有遮光剂,也可以具有任选以延迟方式仅仅或者优选在肠道的某一部分释放出(一种或多种)活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。使用例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂,具有类似类型的固体组合物还可以用作软和硬填充的明胶胶囊中的填充剂。
使用一种或多种上述赋形剂,活性化合物还可以是微囊形式。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以使用包衣和壳例如肠溶衣、控释包衣和药物制剂领域熟知的其它包衣来制备。在这类固体剂型中,可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。在常规实践中,这类剂型除了惰性稀释剂以外,还可以含有其它物质,例如压片润滑剂和其它压片助剂例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情形中,该剂型还可以含有缓冲剂。它们可以任选含有遮光剂,也可以具有任选以延迟方式仅仅或者优选在肠道的某一部分释放出(一种或多种)活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合性物质和蜡。
用于局部或经皮施用化合物1的剂型包括软膏剂、糊剂、乳剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性组分在无菌条件下与药学可接受的载体和根据需要的防腐剂或缓冲剂混合。眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂也涵盖在本发明范围内。此外,本发明涵盖经皮贴剂的使用,其具有向机体控制递送化合物1的附加优势。这类剂型可以通过将化合物1溶解或分散于适宜的介质中制备。还可以使用吸收促进剂以增加化合物1穿过皮肤的流量。通过提供控速膜或将化合物1分散于聚合物基质或凝胶中,可以控制速率。
优选将化合物1配制成方便给药和具有剂量均匀性的剂量单位。本文使用的表述“剂量单位”是指适合待治疗患者的药物的物理离散单元。然而应该理解,化合物1和包含化合物1的组合物的总日用剂量取决于主治医师的合理医学判断。针对任何特定患者或器官的具体有效剂量水平取决于各种因素,包括:待治疗疾病和疾病的严重程度;所用具体化合物的活性;所用的具体组成;患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食;给药时间、给药途径和所用具体化合物的***速率;治疗持续时间;与所用具体化合物联合或同时使用的药物以及医学领域熟知的类似因素。
可与载体材料组合得到单个剂型的组合物的化合物1的量随待治疗的宿主和具体给药模式而变化。优选地,应当将组合物配制成,能够向接受这些组合物的患者施用0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂剂量。在一个实施例中,将组合物配制成,使得化合物1的剂量是5-30mg/kg体重/天。
根据待治疗或预防的特定病症或疾病,通常用于治疗或预防该病症的其它治疗剂也可以存在于本发明的组合物中。本文使用的通常用于治疗或预防某特定疾病或病症的其它治疗剂已知是“适合待治疗的疾病或病症”。下文提供了其它治疗剂的实例。
在本发明组合物中存在的其它治疗剂的量不应当大于正常情况下在含有该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中所施用的量。优选地,其它治疗剂在本文公开的组合物中的量为其正常存在于含有该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中的量的大约50%-100%。
化合物1和包含化合物1的组合物的应用
根据一个实施方案,本发明涉及抑制生物样品中的c-Met蛋白激酶活性的方法,所述方法包括下述步骤:将所述生物样品与化合物1或包含该化合物的组合物接触。本文使用的术语“生物样品”是指在活有机体之外的样品,非限制性地包括:细胞培养物或其提取物;由哺乳动物得到的活组织检查材料或其提取物;以及血液、唾液、尿、粪便、***、泪液或其它体液或其提取物。生物样品中的激酶活性的抑制,可用于本领域技术人员已知的多种目的。这种目的的实例包括但不限于生物标本储存和生物试验。在一个实施方案中,抑制生物样品中的激酶活性的方法限于非治疗性方法。
术语“c-Met”与“c-MET、”“cMet”、“MET”、“Met”或本领域技术人员已知的其它命名同义。
根据另一个实施方案,本发明涉及抑制患者中的c-Met激酶活性的方法,所述方法包括下述步骤:给所述患者施用化合物1或包含该化合物的组合物。
本文使用的术语“c-Met介导的疾病”或“c-Met介导的病症”是指已知c-Met在其中起作用的任何疾病状态或其它有害性病症。术语“c-Met介导的疾病”或“c-Met介导的病症”还指通过用c-Met抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。这类病症非限制性地包括:肾癌、胃癌、结肠癌、脑癌、乳腺癌、***癌、肝癌、胰腺癌或肺癌、胶质母细胞瘤、动脉粥样硬化或肺纤维化。
在一个方面,本发明表征了治疗患者中的增殖性疾病的方法,所述方法包括下述步骤:给所述患者施用治疗有效剂量的化合物1或包含化合物1的组合物。
根据一个实施方案,所述增殖性疾病是癌症,例如,肾癌、胃癌、结肠癌、脑癌、乳腺癌、肝癌、***癌和肺癌、或胶质母细胞瘤。
在另一个实施方案中,本发明涉及治疗有此需要的患者中的肝细胞癌或减轻其严重程度的方法,所述方法包括给所述患者施用化合物1或其组合物。
在另一个实施方案中,所述增殖性疾病是真性红细胞增多症、自发性血小板增多、慢性特发性骨髓纤维化、伴有骨髓纤维变性的髓样化生、慢性髓样白血病(CML)、慢性粒-单核细胞性白血病、慢性嗜酸细胞性白血病、嗜酸细胞增多综合征、全身性肥大细胞疾病、非典型性CML或幼年型粒-单核细胞性白血病。
在另一个实施方案中,所述增殖性疾病是动脉粥样硬化或肺纤维化。
本发明的另一个方面涉及抑制有此需要的患者中的肿瘤转移的方法,所述方法包括给所述患者施用化合物1或其组合物。
根据待治疗的特定病症或疾病,通常用于治疗该病症的其它治疗剂也可以出现在本发明的组合物中。本文使用的通常用于治疗特定疾病或病症的其它治疗剂被认为“适合待治疗的疾病或病症”。
在一个实施方案中,化学治疗剂或其它抗增殖剂可以与化合物1相组合,用于治疗增殖性疾病和癌症。已知的化学治疗剂的实例包括但不限于:烷化剂,例如,环磷酰胺,洛莫司汀,白消安,丙卡巴肼,异环磷酰胺,六甲蜜胺,美法仑,磷酸雌莫司汀,六甲蜜胺,氮芥,塞替派,链佐星,苯丁酸氮芥,替莫唑胺,达卡巴嗪,司莫司汀,或卡莫司汀;铂剂,例如,顺铂,碳铂,奥沙利铂,ZD-0473(AnorMED),顺螺铂,洛铂(Aeterna),羧基酞酸铂(carboxyphthalatoplatinum),沙铂Johnson Matthey),四铂BBR-3464,(Hoffmann-La Roche),奥马铂,SM-11355(Sumitomo),异丙铂,或AP-5280(Access);抗代谢物,例如,氮胞苷,雷替曲塞,吉西他滨,三甲曲沙,卡培他滨,喷司他丁,5-氟尿嘧啶,氟达拉滨,氮尿苷,喷司他丁,2-氯脱氧腺苷,雷替曲塞,6-巯嘌呤,羟基脲,6-硫鸟嘌呤,地西他滨(SuperGen),阿糖胞苷,氯法拉滨(Bioenvision),2-氟脱氧胞苷,伊罗夫文(MGI Pharma),甲氨蝶呤,DMDC (Hoffmann-La Roche),依达曲沙,或乙炔基胞苷(Taiho);拓扑异构酶抑制剂,例如,安吖啶,卢比替康(SuperGen),表柔比星,依沙替康甲磺酸酯(Daiichi),依托泊苷,quinamed(ChemGenex),替尼泊苷,米托蒽醌,吉马替康(Sigma-Tau),伊立替康(CPT-11),二氟替康(Beaufour-Ipsen),7-乙基-10-羟基-喜树碱,TAS-103(Taiho),托泊替康,依沙芦星(Spectrum),右雷佐生(TopoTarget),J-107088(Merck&Co),匹克生琼(Novuspharma),BNP-1350(BioNumerik),若贝霉素类似物(Exelixis),CKD-602(Chong Kun Dang),BBR-3576(Novuspharma),或KW-2170(Kyowa Hakko);抗肿瘤抗生素,例如,更生霉素(放线菌素D),氨萘非特,多柔比星(adriamycin),azonafide,deoxyrubicin,蒽吡唑,戊柔比星,硫蒽唑,柔红霉素(道诺霉素),洛索蒽醌,表柔比星,博来霉素,硫酸盐(博来霉素),吡柔比星,博来霉素酸(bleomycinicacid),伊达比星,博来霉素A,苯甲酰腙柔红霉素,博来霉素B,普卡霉素p,丝裂霉素C,泊非霉素,MEN-10755(Menarini),氰基吗啉代多柔比星,GPX-100(Gem Pharmaceuticals),或米托蒽醌(诺肖林),抗有丝***药,例如,紫杉醇,SB 408075(GlaxoSmithKline),多西他赛,E7010(Abbott),秋水仙碱,PG-TXL(Cell Therapeutics),长春碱,IDN 5109(Bayer),长春新碱A,105972(Abbott),长春瑞滨,A 204197(Abbott),长春地辛,LU 223651(BASF),多拉司他汀10(NCI),D 24851(ASTAMedica),根霉素(Fujisawa),ER-86526(Eisai),米伏布林(Warner-Lambert),考布他汀A4(BMS),西马多丁(BASF),异高软海绵素B(PharmaMar),RPR 109881A(Aventis),ZD 6126(AstraZeneca),TXD 258(Aventis),PEG-紫杉醇(Enzon),埃坡霉素B(Novartis),AZ10992(Asahi),T 900607(Tularik),IDN-5109(Indena),T 138067(Tularik),AVLB(Prescient NeuroPharma),念珠藻环肽52(Eli Lilly),氮杂埃坡霉素B(BMS),长春氟宁(Fabre),BNP-7787(BioNumerik),auristatin PE(Teikoku Hormone),CA-4前药(OXiGENE),BMS
247550(BMS),多拉司他汀-10(NIH),BMS 184476(BMS),CA-4(OXiGENE),BMS 188797(BMS),或二十二碳六烯酸和紫杉醇轭合物(Protarga);芳香酶抑制剂,例如,氨鲁米特,依西美坦,来曲唑,阿他美坦(BioMedicines),阿那曲唑,YM-511(Yamanouchi),或福美坦;胸苷酸合酶抑制剂,例如,培美曲塞(Eli Lilly),诺拉曲塞(Eximias),ZD-9331(BTG),或CoFactoTM(BioKeys);DNA拮抗剂,例如,曲贝替定(PharmaaMar),马磷酰胺(Baxter International),葡磷酰胺(BaxterInternational),阿帕齐醌(Spectrum Pharmaceuticals),白蛋白+32P(同位素溶液),O6苄基鸟嘌呤(Paligent),thymectacin(NewBiotics),或依度曲肽(Novartis);法尼基转移酶抑制剂,例如,arglabin(NuOncologyLabs),替匹法尼(Johnson&Johnson),氯那法尼(Schering-Plough),紫苏子醇(DOR BioPharma),或BAY-43-9006(Bayer);泵抑制剂,例如,CBT-1(CBA Pharma),佐舒喹达三盐酸盐(Eli Lilly),他立喹达(Xenova),比立考达二柠檬酸盐(Vertex),或MS-209(Schering AG);组蛋白乙酰转移酶抑制剂,例如,他地那兰(Pfizer),新戊酰氧基甲基丁酸酯(Titan),SAHA(Aton Pharma),缩酚酸肽(Fujisawa),或MS-275(Schering AG);金属蛋白酶抑制剂,例如,新伐司他(Aeterna Laboratories),CMT-3(CollaGenex),马立马司他(British Biotech),或BMS-275291(Celltech);核糖核苷还原酶抑制剂,例如,麦芽糖镓(Titan),替扎他滨(Aventis),triapine(Vion),或didox(Molecules for Health);TNFα激动剂/拮抗剂,例如,维鲁利秦(Lorus Therapeutics),来那度胺(Celgene),CDC-394(Celgene),依那西普(Immunex Corp.),英夫利昔单抗(Centocor,Inc.),或阿达木单抗(Abbott Laboratories);内皮缩血管肽A受体拮抗剂,例如,阿曲生坦(Abbott)YM-598(Yamanouchi)或ZD-4054(AstraZeneca);视黄酸受体激动剂,例如,芬维A胺(Johnson & Johnson)阿利维A酸(配体)或LGD-1550(配体);免疫调节剂,例如,干扰素dexosome治疗(Anosys),个体化癌症疫苗(Antigenics),pentrix(Australian CancerTechnology),GMK(Progenics),ISF-154(Tragen),腺癌疫苗(Biomira),癌症疫苗(Intercell),CTP-37(AVI BioPharma),norelin(Biostar),IRX-2(Immuno-Rx),BLP-25(Biomira),PEP-005(Peplin Biotech),MGV(Progenics),synchrovax疫苗(CTL Immuno),β-alethine(Dovetail),黑瘤疫苗(CTL Immuno),CLL治疗(Vasogen),或p21RAS疫苗(GemVax);激素剂和抗激素剂,例如,***,***,缀合的***,甲泼尼龙,炔雌醇,***龙,氯烯雌醚,氨鲁米特,己二烯雌酚,亮丙瑞林,己酸羟孕酮,戈舍瑞林,甲羟孕酮,亮丙瑞林,睾酮,比卡鲁胺,丙酸睾酮,氟***,氟他胺,***,奥曲肽,己烯雌酚,尼鲁米特,甲地孕酮,米托坦,他莫昔芬,P-04(Novogen),托瑞米芬,2-甲氧基***(EntreMed),***,或阿佐昔芬(Eli Lilly);光动力剂,例如,他拉泊芬(Light Sciences),Pd-脱镁叶绿酸甲酯(Yeda),Theralux(Theratechnologies),替沙林镥(Pharmacyclics),莫特沙芬钆(Pharmacyclics),或金丝桃素;和酪氨酸激酶抑制剂,例如,伊马替尼(Novartis),海蛞蝓提取物(PharmaMar),来氟米特(Sugen/Pharmacia),CEP-701(Cephalon),ZD1839(AstraZeneca),CEP-751(Cephalon),厄洛替尼(Oncogene Science),MLN518(Millenium),卡拉替尼(Pfizer),PKC412(Novartis),角鲨胺(Genaera),脱氢雌马酚,SU5416(Pharmacia),曲妥珠单抗(Genentech),SU6668(Pharmacia),C225(ImClone),ZD4190(AstraZeneca),rhu-Mab(Genentech),ZD6474(AstraZeneca),MDX-H210(Medarex),瓦他拉尼(Novartis),2C4(Genentech),PKI166(Novartis),MDX-447(Medarex),GW2016(GlaxoSmithKline),ABX-EGF(Abgenix),EKB-509(Wyeth),IMC-1C11(ImClone),或EKB-569(Wyeth)。
那些其它药剂,作为多剂量给药方案的一部分,可以与含有化合物1的组合物分开施用。或者,那些药剂可以是单个剂型的一部分,在单一组合物中与化合物1混合在一起。如果作为多剂量方案的一部分施用,两种活性剂可以同时、先后或彼此间隔一段时间(通常彼此间隔5小时以内)施用。
可与载体材料组合而得到的单个剂型中的化合物1和其它治疗剂(在包含上述其它治疗剂的那些组合物中)的量随待治疗的宿主和具体给药模式而变化。优选地,应当将本发明组合物配制成,可以施用0.01-100mg/kg体重/天的化合物1的剂量。在一个实施例中,将组合物配制成,使得化合物1的剂量是5-30mg/kg体重/天。
在包含其它治疗剂的那些组合物中,该其它治疗剂和化合物1可以协同地起作用。因此,这种组合物中的其它治疗剂的量小于单独使用该治疗剂的单一疗法中所需要的量。在这种组合物中,可以施用0.01-100mg/kg体重/天的其它治疗剂剂的量。
在本发明组合物中存在的其它治疗剂的量不应当大于正常情况下在含有该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选地,其它治疗剂在本文公开的组合物中的量为其正常存在于含有该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中的量的大约50%-100%。
化合物1或其药物组合物也可以掺入用于涂布可植入的医疗装置的组合物中,所述医疗装置例如为假体、人工瓣膜、人造血管、支架和导管。血管支架例如已被用于克服再狭窄(血管壁创伤后再狭窄)。然而,使用支架或其它可植入装置的患者可能会面临血块形成或血小板活化的风险。通过使用含有激酶抑制剂的药学可接受的组合物预涂布所述装置,可以预防或减轻这些不希望的影响。适宜的涂料和被涂布的可植入装置的一般制备方法描述在美国专利6,099,562、5,886,026和5,304,121中。涂料通常是生物相容性的聚合材料,例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯及其混合物。涂层可以任选进一步被适宜的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或者它们的组合物包薄膜衣覆盖,以使组合物具有控释特性。用化合物1涂布的可植入装置是本发明的另一个实施方案。
为了使本文描述的本发明可以得到更充分的理解,给出了下面的实施例。应该理解,这些实施例仅仅用于例证目的,而不能解释为以任何方式限制本发明。
化合物1的制备
下面的定义描述了本文使用的术语和缩写:
本文使用的其它缩写、符号和惯例与在当代科学文献中使用的那些一致。参见,例如,Janet S.Dodd,编,TheACS Style Guide:AManualforAuthors and Editors,第2版,Washington,D.C.:American ChemicalSociety,1997,其通过引用整体并入本文。
本文使用的术语“Rt(min)”表示与化合物有关的HPLC保留时间,按分钟计算。除非另有说明,用于得到报道的保留时间的HPLC方法如下:柱:Zorbax SB C18柱,3.0x 150mm;梯度:10-90%乙腈/水(0.1%TFA),5分钟;流速:1.0mL/分钟;检测:254&214nm。
合成工艺
通过如方案1所示和在实施例1中例证的下述方法,可以制备化合物1。
方案1
实施例1.6-((s)-1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1,2,4]***并[3,4-b][1,3,4]噻二唑-3-基)乙基)喹啉(化合物1)的制备
如方案1的步骤i所示,将浓硫酸(206mL,3.868mol)逐滴加入2-(喹啉-6-基)乙酸(化合物1001,658.2g,3.516mol,Okeanos Tech Co.,目录号OK-J-05024)在6.5升甲醇中的溶液中。在加入过程中,观察到轻度放热。加入结束后,在回流下搅拌反应物4小时。冷却后,在减压下除去挥发物,用4升乙酸乙酯稀释得到的残余物,在冰浴中冷却,用2NNaOH(2.1升,1.2当量)处理,直到达到pH4,然后用饱和碳酸氢钠处理,直到达到pH 8。分离各层,用乙酸乙酯萃取水层2次。用饱和碳酸氢钠洗涤合并的有机相,用水洗涤,用盐水洗涤,经无水MgSO4干燥,过滤,并在减压下蒸发,得到2-(喹啉-6-基)乙酸甲酯,为澄清褐色油状物(化合物1002,696.8g,98%收率):
ESMS(M+1),202.14;1H NMR(300.0MHz,DMSO-d6)δ8.90(1H,dd,J=1.7,4.2Hz),8.14-8.10(1H,m),8.08(1H,d,J=8.7Hz),7.72(1H,d,J=1.4Hz),7.65(1H,dd,J=2.0,8.7Hz),7.40(1H,dd,J=4.2,8.3Hz),3.83(2H,s),3.73(3H,s)。
如方案1的步骤ii所示,将2-(喹啉-6-基)乙酸甲酯(82g,407.5mmol)、低聚甲醛(25.89g,862.1mmol)、K2CO3(101.4g,733.5mmol)、和十六烷基(三甲基)硫酸氢铵(15.55g,40.75mmol)放入甲苯(1.6升)中,并回流2小时,直到原料完全耗尽,这通过HPLC监测。使用冰-水浴冷却反应混合物,并通过硅藻土过滤。用1升水洗涤滤液,有机层经无水硫酸钠干燥,过滤,并在减压下蒸发,得到2-(喹啉-6-基)丙烯酸甲酯,为澄清的无色油状物(75.0g)。该物质不经进一步纯化而立即用于下一反应。
因此,如方案1的步骤iii所示,将2-(喹啉-6-基)丙烯酸甲酯(75.0g)溶于含有氢氧化钠(65.2g,1.63mol)在1.1升四氢呋喃和1.1升水中的溶液中。在室温搅拌反应物过夜。分离出有机层,用500ml甲苯洗涤水层。然后用冰浴冷却水层,并通过逐滴加入浓HCl进行酸化,直到达到pH 4.5(约125ml浓HCl,1.508mol),生成白色沉淀物。加入结束后,在5℃搅拌反应物另外的0.5小时。通过真空过滤来收集沉淀物,用水洗涤,用甲基叔丁基醚洗涤,并在真空下干燥,得到2-(喹啉-6-基)丙烯酸(化合物1003,36.2g):
ESMS(M+1),200.06;1H NMR(300.0MHz,DMSO-d6)δ13.01(1H,s),8.91(1H,dd,J=1.8,4.2Hz),8.40(1H,d,J=7.5Hz),8.07(1H,d,J=1.8Hz),8.01(1H,d,J=8.7Hz),7.84(1H,dd,J=1.9,8.9Hz),7.55(1H,dd,J=1.2,8.4Hz),6.39(1H,d,J=0.9Hz),6.17(1H,d,J=0.9Hz)。
如方案1的步骤iv所示,将2-(喹啉-6-基)丙烯酸(84.5g,424mmol)、甲醇(422mL)和三乙胺(118mL)放入在氮气下的2升玻璃圆筒容器中。通过用氮气流在溶液中鼓泡1小时,使溶液脱氧。将二氯[(S)-(-)-2,2’-二(二苯基膦)-1,1’-二萘基]钌(II)(710mg,0.848mmol)加入溶液中,并将玻璃容器放入不锈钢Parr高压反应器中,并在1000psi氢气下在室温搅拌16小时。该时间之后,去除氢气气氛,加入钌清除剂(-DMT,8.78g,6当量),并在室温搅拌混合物另外的16小时。过滤混合物,在减压下浓缩滤液,得到褐色粘稠的油,将其溶于170ml水中。通过逐滴加入6N HCl,直到达到pH 4-5,由此酸化该水溶液。通过真空过滤,收集得到的沉淀物,用水洗涤,用甲基叔丁基醚洗涤,并在真空干燥箱中在50℃干燥过夜,得到(S)-2-(喹啉-6-基)丙酸(化合物1004,68.6g),为赤褐色固体:
ESMS(M+1),202.19;1H NMR(300.0MHz,DMSO-d6)δ12.42(1H,br.s),8.87(1H,dd,J=1.7,4.2Hz),8.35(1H,d,J=7.6Hz),7.98(1H,d,J=8.7Hz),7.87(1H,d,J=1.7Hz),7.71(1H,dd,J=2.0,8.7Hz),7.52(1H,dd,J=4.2,8.3Hz),3.91(1H,q,J=7.1Hz),1.48(3H,d,J=7.1Hz)。
收集第二批结晶产物(11.5g),总收率为94%。通过超临界流体色谱法(SFC)进行分析,其中使用手性Whelk-柱,用在CO2中的(30%MeOH/0.2%二乙胺)洗脱,结果表明91%对映体过量(ee)的希望的S型-异构体。
如方案1的步骤v所示,将(S)-2-(喹啉-6-基)丙酸(50g,248.5mmol)和1,3-二氨基硫脲(29.02g,273.4mmol)混悬于四氢噻吩砜(环丁砜,38mL)和水(57mL)的混合物中。将甲磺酸(35.5ml,546.7mmol)加入混合物中,则所有固体溶解。将反应温度缓慢地升高至90℃,并在90℃加热反应物40小时,在该时间中,68%的原料被转化成产物,这通过HPLC分析观察到。在冰浴中冷却反应混合物,加入水(75mL),随后小心地加入饱和碳酸氢钠(500mL),直到达到pH 8。通过真空过滤,收集得到的精细的紫色沉淀物,分别用水、饱和碳酸氢钠、水和甲基叔丁基醚洗涤。在真空干燥箱中在55℃干燥产物2天,得到6-((S)-1-(5-巯基-4-氨基-4H-1,2,4-***-3-基)乙基)喹啉(化合物1005,43g):
ESMS(M+1),272.09;1H NMR(300.0MHz,DMSO-d6)δ13.65(1H,br s),8.86(1H,dd,J=1.8,8.4Hz),8.34(1H,d,J=7.5Hz),7.98(1H,d,J=8.7Hz),7.84(1H,dd,J=1.7,13.7Hz),7.82(1H,d,J=1.5Hz),7.70(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),7.50(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),5.44(2H,s),4.57(1H,q,J=7.2Hz),1.65(3H,d,J=7.2Hz)。
通过1H NMR分析,产物为92%的纯度,大部分杂质是化合物1004和环丁砜。手性HPLC分析表明92%ee(AD-H,70%异丙醇/己烷;保留时间:4.98min(对于S-对映异构体),12.33min(对于R-对映异构体)。产物不经进一步纯化而直接用于下一步骤中。
可以如下从水性滤液中回收化合物1004:调节它的pH至5,收集任何沉淀的物质,并用乙酸乙酯萃取剩余的滤液(3次)。合并的有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,并在减压下蒸发,得到黑色油,将其放入90ml乙酸乙酯中,并加热至回流0.5小时。冷却而产生额外的沉淀物,当与先前收集的沉淀物合并时,导致化合物1004的回收,为白色固体(7g)。
如方案1的步骤vi所示,将6-((S)-1-(5-巯基-4-氨基-4H-1,2,4-***-3-基)乙基)喹啉(123.0g,453.3mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸(60.03g,476.0mmol,Aldrich Chemical Co.目录号682063)溶于POCl3(1.23升)和环丁砜(246mL)中,并在83℃搅拌18小时。在减压下蒸发挥发物,并在减压下将残余物与甲苯一起共沸另外2次。将得到的油缓慢地倒入搅拌的冰-水中,并用二氯甲烷萃取水溶液,以除去任何残留的环丁砜。用饱和碳酸氢钠(3.2升)处理水溶液,直到达到pH7。倾析出得到的油,并溶于少量甲醇中,用二氯甲烷萃取剩余的水层(4次)。将合并的有机萃取物和油的甲醇溶液合并,并分别用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机相经无水MgSO4干燥,过滤,并在减压下蒸发,得到粗产物,为浓的褐色油。通过硅胶色谱法纯化产物,用二氯甲烷至在二氯甲烷中的5%甲醇进行梯度洗脱。在减压下蒸发含有产物的级分,得到黄色固体,通过在二氯甲烷(300mL)和甲基叔丁基醚(300mL)中结晶而进行进一步纯化,得到6-((S)-1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1,2,4]***并[3,4-b][1,3,4]噻二唑-3-基)乙基)喹啉(化合物1,62.8g,38%收率),为浅黄色固体:
ESMS(M+1),362.38;1H NMR(300.0MHz,DMSO-d6)δ8.87(1H,dd,J=1.7,4.3Hz);8.54(1H,s);8.36(1H,br.d,J=8.3Hz);8.03(1H,s);8.00(1H,d,J=8.3Hz);7.92(1H,d,J=1.7Hz);7.80(1H,dd,J=1.9,8.8Hz);7.52(1H,dd,J=4.2,8.2Hz);4.90(1H,q,J=7.2Hz);3.90(3H,s);1.86(3H,d,J=7.2Hz)。手性HPLC分析表明99+%ee(AD-H,70%乙醇/己烷)。
实施例2.化合物1的结晶(游离碱)
向化合物1(906mg)中加入40ml乙腈和10ml甲醇。在约90℃在热水浴上溶解固体。滤出溶液,使其在室温缓慢蒸发4小时。结晶逐渐析出。倾析母液,在4mm Hg真空下在室温干燥固体过夜。
将约10mg化合物1结晶的游离碱(FB)装入具有磁力搅拌棒的小瓶中。向每个小瓶中加入约150μL溶剂。如果化合物1完全溶解,将更多的固体加入小瓶中,并继续在室温搅拌得到的料浆。在第4天,使用离心过滤器滤出溶液,并在甲醇中稀释,通过HPLC分析而得到溶解度数据。溶解度研究的结果如表1所示。在4天和14天后,收集料浆中的晶体的X-射线衍射数据。保持为结晶的所有形式表现出包括下述峰(θ标度)的X-射线衍射图:6.2至6.4(例如,约6.3),9.1至9.3(例如,约9.2),11.4至11.6(例如,约11.5),13.2至13.4(例如,约13.3),13.7至13.9(例如,约13.8),14.1至14.3(例如,约14.2),14.7至14.9(例如,约14.8),16.1至16.3(例如,约16.2),18.1至18.3(例如,约18.2),18.6至18.8(例如,约18.7),和19.7至19.9(例如,约19.8)。
表1.通过HPLC测得的化合物1在不同溶剂中的溶解度
选择具有薄长针形尺寸0.5×0.05×0.05mm3的无色晶体用于研究。使用Cu Kα射线,在Bruker APEX II CCD衍射仪上在室温进行单晶衍射。围绕ω轴在角,拍摄振荡照片。使用APEX软件,对数据编索引、整合和标度。对结构进行解析,并用SHELX-TL包细化。晶体学数据如表2所示。
表2.化合物1的晶体数据
实施例3.化合物1的盐形成
将化合物1的游离碱溶于乙醇中,制成0.02mmol/mL浓度的溶液。将碱和酸溶液加入装有该溶液的分开的小瓶中,然后在真空下(4mmHg压力)在室温蒸发溶剂。将2-丙醇(IPA)和乙醇单个地加入分开的小瓶中,以重新溶解固体,并通过在室温缓慢蒸发,使每个小瓶中的固体结晶。通过X-射线衍射研究,表征得到的固体。结果如表3所示。
表3
酸溶液 | IPA盐形式 | 乙醇盐形式 |
盐酸 | 无定形 | 无定形 |
硫酸2∶1摩尔比 | 结晶盐 | 结晶盐 |
对甲苯磺酸 | 无定形 | 无定形 |
游离碱 | 结晶游离碱 | 结晶游离碱 |
甲磺酸 | 无定形 | 无定形 |
苯磺酸 | 结晶盐 | 无定形 |
马来酸 | 无定形 | 无定形 |
L-脯氨酸 | 无定形 | 无定形 |
磷酸 | 结晶盐 | 结晶盐 |
L-天冬氨酸 | 结晶游离碱 | 结晶游离碱 |
L-谷氨酸 | 无定形 | 结晶游离碱 |
L(+)-酒石酸 | 无定形 | 无定形 |
富马酸 | 结晶游离碱 | 结晶游离碱 |
柠檬酸 | 无定形 | 无定形 |
D-葡糖醛酸 | 无定形 | 无定形 |
化合物1的生物试验
实施例4.c-Met激酶抑制试验
使用标准的放射测量试验,筛选化合物1的抑制c-Met激酶的能力。简而言之,在该激酶试验中,研究了33P-ATP中的最终的33p-磷酸盐向底物聚E4Y的转移。在96-孔平板中进行该试验,终体积为100μL/孔,每个孔含有0.5nM c-Met、100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、0.01%BSA、1mM DTT、0.5mg/mL聚E4Y和35μM ATP。因此,将本发明的化合物溶于DMSO中,以制备10mM初始储备液。然后制备在DMSO中的系列稀释液,以得到用于试验的最终溶液。将1.5μL DMSO等分试样或在DMSO中的抑制剂加入每个孔中,然后加入33p-ATP,最后加入c-Met和聚E4Y(购自Sigma)。20min后,用50含有4mM ATP的30%三氯乙酸(TCA)猝灭反应。将反应混合物转移至0.66mm GF滤板(Corning),并用5%TCA洗涤3次。加入50μLUltimate GoldTM高效闪烁剂(Packard Bioscience)后,在PackardTopCount NXT微量培养板闪烁和发光计数器(Packard BioScience)中计数样品。使用Microsoft Excel Solver Macros计算Ki值,以将数据拟合至竞争性紧密结合抑制的动力学模型。化合物1的Ki是0.024±0.008μM。
实施例5.抑制Snu5胃癌细胞中的c-Met活性
还筛选了化合物1的抑制设计化的Snu5细胞系中的萤光素酶-诱导的信号的能力。Snu5[从美国典型培养物保藏中心得到(目录号CRL-5973)]是已知过表达组成活性的c-Met的人胃癌。用逆转录病毒pCLPCX转导该细胞系,所述逆转录病毒pCLPCX含有由6xAP1启动子反应元件和具有C-端PEST序列(来自小、鼠鸟氨酸脱羧酶的蛋白水解信号,其降低萤光素酶的半衰期)的萤光素酶基因组成的遗传构建体。组成活性的c-Met会活化细胞途径(主要是MAP激酶),导致AP-1-诱导的萤光素酶-PEST的转录和向最终产物的翻译,在加入萤光素(来自Promega的Steady-Glo)后,其活性可定量为化学发光读出。残余发光与c-Met的抑制密切相关。通过用嘌呤霉素选择新的细胞系(Snu5-AP1-Luc-Pest),得到稳定的细胞系。在完全培养基[含有10%胎牛血清(FBS,Hyclone)和青霉素/庆大霉素(Invitrogen)的Iscove氏培养基(Invitrogen)]中培养细胞。将本发明的化合物溶于DMSO中,以制备10mM初始储备液。然后制备在DMSO中的系列稀释液,并转移至完全培养基,以制备10x溶液。计数Snu5-AP1-Luc-Pest细胞,并稀释至200,000个细胞/mL溶液。将细胞(90μL)加入96-孔黑色澄明底平板(Costar)的每个孔中。然后,将10μL的10x化合物溶液一式三份地加入细胞中。在37℃/5%CO2培养箱中温育平板。6小时后,将50μLSteady-Glo试剂(Promega)加入每个孔,并放在平板振荡器上5分钟,以确保细胞完全裂解。在1450Microbeta液体闪烁和发光计数器(Perkin-Elmer)上读出平板。使用绘图软件Prism(GraphPad),使用4个参数拟合,计算IC50。化合物1的IC50是0.023±0.012μM。
实施例6.hERG抑制试验
心脏钾通道hERG负责人心室中的快速延迟的整流器电流(IKr)。IKr的抑制是非心源性药物造成心脏动作电位延长的最常见原因。增加动作电位持续时间会造成QT间期的延长,已经将后者与危险的室性心律失常(尖端扭转型室性心动过速)相关联。使用hERG阻塞对比研究测定hERG结合,以评价给定的试验化合物对在哺乳动物细胞中表达的克隆的hERG通道的作用。参见,例如,Brown和Rampe,Pharmaceutical News7,15-20,2000;Rampe等人,FEBS Lett,417,28-32,1997;Weirich和Antoni,Basic Res.Cardiol.93(增刊1),125-132,1998;以及Yap和Cain,Clin.Exp.Allergy,29(增刊3),174-181,1999。
在HEPES-缓冲的生理盐水(HB-PS)+0.3%二甲亚砜(DMSO)中递送试验化合物。将各试验化合物在足以测定IC50的浓度下,应用于表达hERG的人胚胎肾细胞(从ChanTest Corp.,Cleveland OH得到的HEK293)(n≥3,其中n=细胞数)。将细胞暴露于试验化合物达到稳态阻塞所需的时间,但不超过10分钟。将阳性对照(90nM西沙必利)应用于2个细胞(n≥2)。然后将hERG-暴露的细胞转移至记录室,并用HB-PS溶液浇盖。用于全细胞记录的吸量管溶液包括天冬氨酸钾(130mM)、MgCl2(5mM)、EGTA(5mM)、ATP(4mM)和HEPES(10mM),用KOH调节pH至7.2。使用具有固定振幅(去极化:+20mV 2秒;复极化:-50mV 2秒)的脉冲模式,测量由试验化合物引起的hERG电流的起始和稳态阻塞,以10秒间隔重复,从-80mV的保持电位开始。在向-50mV的2秒阶跃期间,测量峰尾电流。维持稳态至少30秒,然后施加试验化合物或阳性对照化合物。测量峰尾电流,直到达到新的稳态。
使用pCLAMP(8.2版)程序包(MDS-AT,Sunnyvale,CA),获取和分析数据。简而言之,使用在应用化合物之前和之后得到的稳态,计算在各浓度下被抑制的电流的百分比。将浓度-响应数据拟合至下述方程:
%抑制={1-1/[1+([Conc]/IC50)N]}*100,其中
[Conc]是试验的各化合物溶液的浓度,IC50是产生半最大抑制的试验化合物的浓度,N是Hill系数,%抑制是在各化合物浓度下被抑制的hERG钾电流的百分比。使用在Microsoft Excel 2000(Microsoft,Redmond WA)中的Solver附加程序,进行非线性最小二乘法拟合。
发现化合物1以110μM的IC50抑制hERG,而化合物2(下面显示)以13μM的IC50抑制hERG。
实施例7.细胞色素P450抑制试验
在cDNA杆状病毒-昆虫细胞-表达的人细胞色素P450(CYP)亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4中,评价了化合物1的稳定性。因此,在含有2.0mM NADPH和1μM和10μM化合物浓度的化合物1的磷酸盐缓冲液(pH7.4)中,温育50pmol CYP/mL终浓度的人重组细胞色素P450亚型。在0和120分钟进行取样,并通过LC/MS/MS分析,评价剩余的化合物的量。结果提供在表4中,并表示为经过120分钟温育期后剩余的化合物相对于在0分钟时存在的化合物的量的百分比(n=3,2个独立的研究)以及每个研究的标准差(SDEV)。如在做成表的结果中所示出的,化合物1被CYP2C19和CYP3A4亚型代谢,而化合物2基本上仅被CYP3A4亚型代谢。用更高浓度(10μM)的化合物1挑战CYP2C19亚型,并没有改变它代谢化合物1的代谢能力,这提示在体内代谢化合物1的相关能力。体外结果表明,化合物1在120分钟内被超过一种细胞色素P450亚型部分代谢,会在体内降低与共同施用的药物之间的药物间相互作用的潜力。
表4.人重组CYP同功酶对化合物1和2的代谢
在此将本说明书中引用的所有出版物和专利通过引用并入本文,就好像每篇单独出版物或专利特别地和单独地通过引用并入本文一样。尽管出于清楚理解的目的,已经通过例证和实施例对前面的发明进行了详细描述,但是对于本领域普通技术人员来说显而易见的是,按照本发明的教导,可以对其做出某些变化和修饰,而不偏离所附权利要求书的主旨或范围。
Claims (6)
2.权利要求1的化合物,其中所述化合物是晶体,其特征在于,在X-射线衍射图中的下述峰:6.3、9.2、11.5、13.3、13.8、14.2、14.8、16.2、18.2、18.7和19.8。
3.一种药物组合物,其包含根据权利要求1或2的化合物或其药学可接受的盐、以及药学可接受的载体、佐剂或赋形剂。
4.根据权利要求3的组合物,还包含化疗剂或抗增殖剂、抗炎剂、用于治疗动脉粥样硬化的药物、或用于治疗肺纤维化的药物。
5.根据权利要求1或2的化合物或包含该化合物的组合物在制备药物中的应用,所述药物用于治疗患者的增殖性疾病或减轻其严重程度,所述疾病是胶质母细胞瘤,胃癌,或选自下述的癌症:结肠癌、乳腺癌、***癌、脑癌、肝癌、胰腺癌或肺癌。
6.根据权利要求5的用途,其中所述疾病是肝细胞癌。
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