CN102210803B - 贝母总生物碱的提取富集方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种贝母总生物碱的提取富集方法，包括：第一步骤，取贝母，用质量分数为0.5％～2％的盐酸提取，提取液浓缩，浓缩液离心，取上清液；第二步骤，将所述上清液调pH至8～11，二氯甲烷萃取，收集二氯甲烷层，回收溶剂至干，得总生物碱粗提物；第三步骤，将所述总生物碱粗提物用质量分数为0.5％～2％的盐酸溶解，调pH至8～11，得上样液，上样液通过HPD100型或HPD722型大孔树脂柱，水洗至洗脱液无色且糖检测反应呈阴性，继续以体积分数为90％～95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性，收集乙醇洗脱液，回收溶剂至干，得总生物碱提取物。本发明的贝母总生物碱的提取富集方法所得贝母总生物碱纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种从贝母中提取富集总生物碱的方法，特别涉及一种浙贝母总生物碱的提取富集方法。
背景技术
浙贝母是百合科贝母属植物浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎，具有清热润肺、化痰止咳、散结等功效，用于风热犯肺、痰火咳嗽、肺痈、乳痈、瘰疬和疮毒等。浙贝母的有效部位为总生物碱，包括贝母甲素、贝母乙素、浙贝宁、浙贝丙素、浙贝酮、贝母新碱、贝母芬碱、贝母定碱、贝母替定碱等。
浙贝母中的总生物碱含量很低，仅含0.12％-0.25％(质量分数)，这给浙贝母的总生物碱提取带来了特殊的困难，当采用文献中记载的其它品种贝母的总生物碱提取富集方法时，浙贝母的总生物碱提取物中生物碱含量低，达不到《药品注册管理办法》的规定，即单体植物药提取物中有效部位的含量应在50％以上。
目前，对浙贝母总生物碱提取富集方法的文献研究不多，且现有文献主要是对浙贝母提取工艺的考察。
苏碧茹等在《中草药》1999年第30卷第1期公开了一种浙贝母提取工艺的优化选择，认为6倍量95％乙醇对浙贝母整粒提取2次、每次1h，所得提取物中总生物碱含量高，约为0.31％。
丁春霞等在《现代中药研究与实践》2004年第18卷第2期发表了“浙贝母中生物碱提取方法以及条件的优化”一文，该文献公开了一种优化的浙贝母总生物碱提取方法，即，用30倍75％的乙醇(乙醇的体积与贝母粉的重量之比)，结合摇床浸提24h，碱化后用乙酸乙酯萃取，萃取液回收溶剂，回收溶剂至干即得浙贝母总生物碱，提取物中生物碱含量最高可达0.244％。该篇文献认为，从萃取溶剂角度，选择氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯，对最终生物碱含量无影响，因此优选使用毒性较低的乙酸乙酯作为萃取溶剂；在提取溶剂方面，95％乙醇、75％乙醇和2％盐酸中，优选75％乙醇，如果用盐酸作提取溶媒，会将贝母里大量的水溶性成分提取出来，使萃取时产生严重的乳化现象，致使萃取不完全，因此，相较于乙醇，当以盐酸作为提取溶媒时，提取出的生物碱含量偏低。
然而用上述文献方法提取浙贝母总生物碱时，提取物中的总生物碱含量达不到《药品注册管理办法》规定的50％以上。因此，本发明要解决的技术问题在于，提供一种浙贝母总生物碱提取富集方法，提高提取物中生物碱含量，使之达到《药品注册管理办法》规定的50％以上。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种贝母总生物碱的提取富集方法，该方法特别适用于浙贝母总生物碱的提取富集，能够提高提取物中的总生物碱含量，使提取物中总生物碱的含量达到《药品注册管理办法》规定的50％以上。
为实现上述目的，本发明采取了如下技术方案：
一种贝母总生物碱的提取富集方法，所述方法包括：第一步骤，取贝母，用质量分数为0.5％～2％的盐酸提取，并将提取液浓缩，离心分离所述浓缩液，取上清液；第二步骤，将所述上清液调pH值至8～11，并用二氯甲烷萃取该上清液，收集二氯甲烷层并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物；第三步骤，将上述所得的总生物碱粗提物溶于质量分数为0.5％～2％的盐酸中，将所得溶液的pH值调至8～11，以得到上样液，将所述上样液通过HPD100型或HPD722型大孔树脂柱，水洗至洗脱液无色且糖检测反应呈阴性，继续以体积分数为90％～95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性，收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物。
进一步地，所述贝母选自浙贝母、湖北贝母、新疆贝母或皖贝母。
进一步地，在第二步骤中进行萃取前，将所述上清液的pH值调至9。
进一步地，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量每次不低于调节pH值后的所述上清液体积的0.5倍量，萃取次数不少于3次。
进一步地，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量为调节pH值后的所述上清液体积的1倍量，萃取次数为4～6次。
进一步地，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量为调节pH值后的所述上清液体积的1倍量，萃取次数为4次。
进一步地，在第一步骤中，所述盐酸的质量分数为2％。
进一步地，在第一步骤中，所述盐酸的用量为每1g贝母使用不少于3mL的盐酸。
进一步地，在第一步骤中，所述盐酸的用量为每1g贝母使用4～6mL的盐酸。
进一步地，所述乙醇的体积分数为95％。
本发明贝母总生物碱的提取富集方法能够使所得总生物碱提取物中的贝母总生物碱含量提高至60％以上，特别是可以使浙贝母总生物碱提取物中总生物碱含量提高至60％以上，从而满足《药品注册管理办法》对单体植物药提取物中有效部位含量的规定。当然，可以轻易地获知，本发明贝母总生物碱的提取富集方法不仅适用于总生物碱含量较低的浙贝母总生物碱的提取，也适用于生物碱含量较高的其他种类贝母总生物碱的提取，如湖北贝母(百合科贝母属植物湖北贝母Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C.Hsia的干燥鳞茎)、新疆贝母(百合科贝母属植物伊犁贝母Fritillaria pallidiflora Schrenk的干燥鳞茎)、皖贝母(百合科贝母属植物安徽贝母Fritillaria anhuiensis S.C.Chen et S.P.Yin的干燥鳞茎)等。
具体实施方式
以下通过具体实施例，对本发明作进一步的详细描述。
实施例1：
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，6倍量(即每1g贝母使用6mL盐酸，以下所述6倍量与此相同)质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至250mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用0.5倍量体积(即调节pH值后的上述上清液体积的0.5倍量，以下所述0.5倍量体积与此相同)的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏189mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏123mg。
实施例2：
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，4倍量(即每1g贝母使用4mL盐酸，以下所述4倍量与此相同)质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至250mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏180mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏118mg。
实施例3：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量(即每1g贝母使用3mL盐酸，以下所述3倍量与此相同)质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏318mg。
实施例4：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏485mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏317mg。
实施例5：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏318mg。
实施例6：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏505mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏329mg。
实施例7：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏470mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g.mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏308mg。
实施例8：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏478mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9.2，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏310mg。
实施例9：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏510mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏333mg。
实施例10：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏318mg。
实施例11：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏500mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏325mg。
实施例12：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏480mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏313mg。
实施例13：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏430mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏280mg。
实施例14：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏450mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏292mg。
实施例15：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏430mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏280mg。
实施例16：
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，6倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至250mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏189mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏118mg。
实施例17：
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，4倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至250mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏180mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏114mg。
实施例18：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至8后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至8，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏313mg。
实施例19：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，回并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏485mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏310mg。
实施例20：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏312mg。
实施例21：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏505mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏324mg。
实施例22：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏470mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏303mg。
实施例23：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2，用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取上述上清液4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏478mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9.2，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏306mg。
实施例24：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏510mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏330mg。
实施例25：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏490mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏314mg。
实施例26：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用等体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏500mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏320mg。
实施例27：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至10后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏480mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至10，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏299mg。
实施例28：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，3倍量质量分数为0.5％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用等体积的二氯甲烷萃取4次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏430mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为0.5％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏274mg。
实施例29：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，4倍量质量分数为1％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏450mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为1％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为90％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏286mg。
实施例30：
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至11后用0.5倍量体积的二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏430mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至11，以得到上样液。将HPD722型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD722型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏274mg。
实施例31：
取湖北贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏550mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏357mg。
实施例32：
取新疆贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9.2后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏560mg。
将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，用质量分数为10％的NaOH溶液将所得溶液的pH值调至9，以得到上样液。将HPD100型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至无醇味，将上述上样液上样于HPD100型大孔树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗大孔树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用体积分数为95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏364mg。
比较例1
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，6倍量体积分数为90％的乙醇提取2次，每次1h，浓缩，减压干燥，得总生物碱粗提物干膏6g。所得干浸膏用质量分数为2％的盐酸100mL溶解，离心，取上清液并用质量分数为2％的盐酸定容至250mL，用质量分数为4％的氢氧化钠试液调pH值至5，得上样液(相当于1g药材·mL-1)。
将D001-CC型大孔阳离子交换树脂500mL浸泡在蒸馏水中1-2天，使其充分膨胀后装在层析柱中，按下列方法预处理：水洗至出水澄清；以2倍柱床体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，流速10cm·min-1，再水洗至中性，流速20cm·min-1；2倍柱床体积的质量分数为4％的氢氧化钠溶液处理树脂，流速10cm·min-1；用6～8倍树脂体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，使其变为氢型，在水洗至中性。
取上述处理成氢型的内径为1.5cm的D001-CC型大孔阳离子交换树脂柱(径高比为1∶7)，取上述上样液上样吸附，吸附流速为0.5mL·min-1，上样完成后水洗至流出液无色且糖显色反应为阴性，继续用氨性乙醇(浓氨水与无水乙醇的体积比为1∶9)以0.5mL·min-1的流速洗脱，收集氨性乙醇洗脱液，回收其中的氨水乙醇，得到总生物碱提取物干膏346mg。
比较例2
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，6倍量体积分数为90％的乙醇提取2次，每次1h，浓缩，减压干燥，得总生物碱粗提物干膏6g。将所得干浸膏用质量分数为2％的盐酸溶解，抽滤，取滤液并用质量分数为2％的盐酸定容至200mL，用质量分数为5％的氢氧化钠调pH值至9.0，即得上样液(相当于原药材1g·mL-1)。
将D101型大孔树脂用95％乙醇泡24h，使之充分溶胀后，用95％乙醇多次洗涤，直至水不溶性物质的检测和不挥发物的检查均符合要求。水不溶性物质的检测方法为：取乙醇洗脱液适量，与同体积的去离子水混合后，溶液应澄清。不挥发物的检查方法为：取乙醇洗脱液适量，在200～600nm波长处进行紫外扫描，在416nm左右应无明显紫外吸收。
经上述处理后的D101型大孔树脂装入内径为1.5cm的层析柱中(径高比为1∶7)，水洗至无醇味。
将上样液加入上述D101型大孔树脂柱，上样完成后水冲洗至糖检测反应成阴性，再用4倍柱体积的体积分数为50％的乙醇以0.5mL·min-1的流速洗脱，收集洗脱液，然后用体积分数为95％的乙醇洗脱至生物碱检测反应呈阴性，收集洗脱液，合并体积分数为50％的乙醇洗脱液和体积分数为95％的乙醇洗脱液，浓缩，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物干膏88mg。
比较例3
取浙贝母药材(豆粒大小)150g，6倍量体积分数为90％的乙醇提取2次，每次1h，浓缩，减压干燥，得总生物碱粗提物干膏6g。将所得干浸膏用质量分数为2％的盐酸溶解，抽滤，取滤液并用质量分数为2％的盐酸定容至200mL，用质量分数为5％的氢氧化钠调pH值至9.0，即得上样液(相当于原药材1g·mL-1)。
将D151型阳离子树脂浸泡在蒸馏水中1-2天，使其充分膨胀后装在层析柱中，按下列方法预处理：水洗至出水澄清；以2倍柱床体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，流速10cm·min-1，再水洗至中性，流速20cm·min-1；2倍柱床体积的质量分数为4％的氢氧化钠溶液处理树脂，流速10cm·min-1；用6～8倍树脂体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，使其变为氢型，在水洗至中性。
经上述处理过的D151型阳离子树脂以1∶5的径高比装入至直径为1.5cm的层析柱中，水洗至中性。
上样液缓缓加入D151型阳离子树脂柱，上样完成后水冲洗至无色，再用氨水乙醇(浓氨水与无水乙醇的体积比为2∶8)洗脱至生物碱检测反应呈阴性，收集氨水乙醇洗脱液，浓缩，回收其中的氨水乙醇至干，得总生物碱提取物干膏194mg。
比较例4
取浙贝母药材(豆粒大小)400g，6倍量质量分数为2％的盐酸溶液提取2次，每次1h，并将提取液浓缩至每mL浓缩液相当于原药材0.5～0.7g，离心分离上述浓缩液，取上清液用水定容至500mL，用质量分数为10％的NaOH溶液调pH值至9后用等体积的二氯甲烷萃取6次，收集二氯甲烷层，并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物干膏510mg。将上述所得的总生物碱粗提物干膏溶于质量分数为2％的盐酸中，得到相当于原药材1g·mL-1的溶液，将所得溶液的pH值调至5.0，得上样液。
将D151型阳离子树脂浸泡在蒸馏水中1-2天，使其充分膨胀后装在层析柱中，按下列方法预处理：水洗至出水澄清；以2倍柱床体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，流速10cm·min-1，再水洗至中性，流速20cm·min-1；2倍柱床体积的质量分数为4％的氢氧化钠溶液处理树脂，流速10cm·min-1；用6～8倍树脂体积的质量分数为4％的盐酸溶液处理树脂，使其变为氢型，在水洗至中性。
经上述处理过的D151型离子树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中，水洗至中性，将上述上样液上样于D151型离子树脂柱，流速为0.5mL·min-1，上样完成后，水冲洗离子树脂柱至洗脱液无色且糖检测反应为阴性，再用氨水乙醇(浓氨水与无水乙醇的体积比为1∶9)洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性。收集氨水乙醇洗脱液，回收其中的氨水乙醇至干，得总生物碱提取物干膏213mg。
实施例33：
取实施例1～32和比较例1～4中所得的浙贝母的总生物碱提取物干膏12mg，用氯仿定容至100mL作为总生物碱提取物干膏中总生物碱含量测定用供试品溶液。
药材中总生物碱含量测定方法：精密称定浙贝母粉末(过4号筛)2g，用氨水1mL润湿15min后，加20mL***-氯仿-无水乙醇(体积比为25∶8∶2.5)，称重，超声处理40min，称重，用提取溶剂补足重量，4000r·min-1离心，精密吸取上清液5mL，蒸干，残渣加氯仿溶解并定容至10mL，摇匀，作为浙贝母药材中总生物碱含量测定用供试品溶液。
精密称取贝母甲素对照品5.52mg，加氯仿溶解定容至50mL，作为对照品溶液。
精密吸取总生物碱提取物干膏中总生物碱含量测定用供试品溶液1.5mL、浙贝母中总生物碱含量测定用供试品溶液1.5mL、对照品溶液1mL、2mL以及空白对照溶液氯仿，分别置于25mL容量瓶中，加入pH值为5.0的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液5mL及0.001mol·L-1的溴麝香草酚蓝试液2mL，氯仿定容至刻度，充分摇匀后移入分液漏斗中，静置40min，分取氯仿层移至预先放有0.20g无水硫酸钠(预先于105℃加热1h)的具塞锥形瓶中，密闭摇匀，取上清液在416nm处测定吸光度，根据标准曲线计算浙贝母药材中总生物碱含量为0.28％，根据以下公式计算总生物碱提取物干膏中的总生物碱含量及总生物碱得率。
实施例1～32和比较例1～4所得总生物碱提取物干膏中总生物碱含量测定结果及总生物碱得率如下表所示。
| 实施例 | 总生物碱含量(质量百分比) | 总生物碱得率(质量百分比) |
| 实施例1 | 61.23％ | 17.86％ |
| 实施例2 | 62.57％ | 17.42％ |
| 实施例3 | 62.45％ | 17.60％ |
| 实施例4 | 63.08％ | 17.78％ |
| 实施例5 | 62.86％ | 17.6％ |
| 实施例6 | 67.25％ | 19.68％ |
| 实施例7 | 62.55％ | 17.05％ |
| 实施例8 | 60.36％ | 16.61％ |
| 实施例9 | 69.59％ | 20.17％ |
| 实施例10 | 61.35％ | 17.32％ |
| 实施例11 | 64.46％ | 18.57％ |
| 实施例12 | 61.52％ | 17.05％ |
| 实施例13 | 60.39％ | 15％ |
| 实施例14 | 60.74％ | 15.64％ |
| 实施例15 | 60.58％ | 15％ |
| 实施例16 | 60.37％ | 16.86％ |
| 实施例17 | 60.96％ | 16.28％ |
| 实施例18 | 61.21％ | 17.05％ |
| 实施例19 | 62.34％ | 17.16％ |
| 实施例20 | 61.82％ | 16.99％ |
| 实施例21 | 62.47％ | 17.93％ |
| 实施例22 | 61.63％ | 16.5％ |
| 实施例23 | 60.75％ | 16.39％ |
| 实施例24 | 62.38％ | 18.61％ |
| 实施例25 | 61.22％ | 17.1％ |
| 实施例26 | 62.16％ | 17.71％ |
| 实施例27 | 61.83％ | 16.28％ |
| 实施例28 | 60.54％ | 14.68％ |
| 实施例29 | 60.66％ | 15.32％ |
| 实施例30 | 60.28％ | 14.68％ |
| 实施例31 | 64.93％ | 19.28％ |
| 实施例32 | 63.10％ | 19.04％ |
| 比较例1 | 23.96％ | 74.02％ |
| 比较例2 | 24.73％ | 51.81％ |
| 比较例3 | 16.61％ | 76.72％ |
| 比较例4 | 43.80％ | 8.33％ |
Claims (10)
1.一种贝母总生物碱的提取富集方法，其特征在于，所述方法包括：
第一步骤，取贝母，用质量分数为0.5％～2％的盐酸提取，并将提取液浓缩，离心分离所述浓缩液，取上清液；
第二步骤，将所述上清液调pH值至8～11，并用二氯甲烷萃取该上清液，收集二氯甲烷层并回收其中的二氯甲烷使所得萃取物干燥，得到总生物碱粗提物；
第三步骤，将上述所得的总生物碱粗提物溶于质量分数为0.5％～2％的盐酸中，将所得溶液的pH值调至8～11，以得到上样液，将所述上样液通过HPD100型或HPD722型大孔树脂柱，水洗至洗脱液无色且糖检测反应呈阴性，继续以体积分数为90％～95％的乙醇洗脱至洗脱液生物碱检测反应呈阴性，收集乙醇洗脱液，回收其中的乙醇至干，得总生物碱提取物。
2.根据权利要求1所述的提取富集方法，其特征在于，所述贝母选自浙贝母、湖北贝母、新疆贝母或皖贝母。
3.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第二步骤中进行萃取前，将所述上清液的pH值调至9。
4.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量每次不低于调节pH值后的所述上清液体积的0.5倍量，萃取次数不少于3次。
5.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量为调节pH值后的所述上清液体积的1倍量，萃取次数为4～6次。
6.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第二步骤中进行萃取时，所述二氯甲烷的用量为调节pH值后的所述上清液体积的1倍量，萃取次数为4次。
7.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第一步骤中，所述盐酸的质量分数为2％。
8.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第一步骤中，所述盐酸的用量为每1g贝母使用不少于3mL的盐酸。
9.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，在第一步骤中，所述盐酸的用量为每1g贝母使用4～6mL的盐酸。
10.根据权利要求1或2所述的提取富集方法，其特征在于，所述乙醇的体积分数为95％。
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