CN102199195A - 一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽及其用作纳米止血材料及疏水性药物载体 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽，其特征在于，其氨基酸序列的通式如下：Ac-Pro-X₁-Phe-X₂-Phe-X₃-Phe-Glu-Pro-NH₂，其中X₁、X₂为极性不带电荷氨基酸，X₃为带正电荷的氨基酸，X₁、X₂、X₃全为L型氨基酸。本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽既可作为疏水性药物的载体材料而提高其水溶性，又可通过自组装形成纳米级纤维屏障，作为出血创面的纳米止血材料。本发明所述的一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽纳米材料生产工艺简单可行、成本相对较低，其应用不仅能丰富现有的纳米医药材料种类，而且对人类生命健康具有重要的现实意义。

Description

一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽及其用作纳米止血材料及疏水性药物载体

技术领域

本发明属于纳米医学材料领域，具体涉及一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽及其在作为疏水性药物载体和止血材料方面的应用。

背景技术

肽分子自组装技术是当今生物纳米技术当中的一朵奇葩，它已成为分子生物学、化学、医学、材料学和工程技术等学科的交汇点，是创造新物质和产生新功能的重要手段。短肽自组装后的纳米尺寸材料在生产生活中具有广泛的潜在用途，并已成功应用于纳米生物领域特别是细胞工程、组织工程、药物控释、再生药物、膜蛋白及能源工程等。临床上有很多疗效虽好但因溶解度的问题而受到使用限制的药物，两亲性自组装短肽材料可以通过与疏水性药物相互作用提高药物的水溶性，有望成为一种新型的疏水性药物载体材料。手术中常见的实质性脏器出血是临床上面临的一大难题，如果用常用止血材料按照常用止血方式有时对出血情况很难控制，而且有的止血药物需要较高的操作技术，止血时间较长，存在不良反应或者并发症，甚至威胁至生命。国内外已有短肽材料与出血点处的血液相互作用快速自组装成纳米纤维水凝胶而起到止血作用的报道，但目前现有技术公开的能自组装形成纳米级水凝胶支架材料的自组装短肽在结构上多具有全程电荷匹配的特点，即使是近两年报道出现了半程电荷匹配的两亲性短肽，但也是仅限于有限的一两条肽序列，本发明设计出了一类半程电荷匹配两亲性短肽，它们的肽链结构与已报道的半程电荷匹配两亲性短肽不同(Ruan LP，Zhang HY，Luo HL，et al.Proc Natl Acad Sci U SA.2009，106(13)：5105-5110；赵晓军，阮丽萍，张航与，罗涵琳.一种半程电荷匹配九肽及其应用.专利号：CN 100543033C)。

发明内容

本发明的目的在于提供一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽，该类短肽自组装后形成纳米纤维网状分枝结构，以增加氨基酸构建的自组装短肽种类，促进自组装短肽的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽，其氨基酸序列的通式如下：

Ac-Pro-X₁-Phe-X₂-Phe-X₃-Phe-Glu-Pro-NH₂

Ac为乙酰化N端，NH₂为氨基化C端，其中X₁、X₂为极性不带电荷氨基酸，X₃为带正电荷的氨基酸，X₁、X₂、X₃全为L型氨基酸，X₁、X₂为相同或不同氨基酸均可。

优选地，所述极性不带电荷氨基酸为Thr、Ser、Cys或Asn。

优选地，所述带正电荷的氨基酸为Arg或His。

其自组装原理是短肽分子间通过非共价键相互作用自发组合形成一种结构明确、构造稳定、具有某种理化性能的分子聚集体或超分子结构，带电荷氨基酸的引入是为了产生电荷匹配形成反平行缠绕。

本发明所述的短肽可采用固相多肽合成方法进行合成和生产：以Fmoc保护的氨基酸为原料，Rink Amide-MBHA Resin(瑞克酰胺-MBHA树脂)为载体，20％哌啶/DMF溶液为脱保护剂，HBTU为肽键缩合剂，50％醋酐/吡啶(V∶V)溶液为氨基末端的乙酰化溶剂，按已知序列从C端到N端的顺序依次偶联合成，氨基末端乙酰化。合成结束取下反应瓶，用甲醇冲洗树脂8次，除去DMF。氮气吹干后用TFA强酸裂解液将合成多肽从树脂上裂解下来，同时脱去所有保护基团。反应结束后收集溶有合成肽的裂解液，然后减压过滤，收集滤液，用冷***沉淀溶解在滤液中的多肽，即得合成肽的粗品。合成肽粗品经高压液相反相层析柱分离纯化，收集主峰，冷冻干燥后，得到目标合成短肽。

本发明所述的半程电荷匹配两亲性自组装短肽应用于疏水性药物载体材料和纳米止血材料中。短肽自组装过程中与疏水性物质相互作用，可提高疏水性物质的水溶性，从而能够成为一种新型的疏水性药物载体。实验还表明将两亲性短肽的冻干粉末或不同质量体积比的肽水溶液作用于受损伤动物软组织切面后，立即形成为水凝胶，封闭出血口，起到快速止血和伤口护理的效果，而且短肽组成为天然氨基酸，在体内易于降解，产物无免疫原性，组织相容性好，因此通过添加药学上可接受的稳定剂或赋形剂可将短肽材料制备成一种适于临床上使用的纳米止血药物。

本发明具有以下有益之处：

1、提供了一类结构新颖的半程电荷匹配两亲性短肽，丰富了自组装短肽纳米材料的种类，所述的两亲性短肽既可作为疏水性药物的载体材料而提高其水溶性，又可通过自组装形成纳米级纤维屏障，作为出血创面的纳米止血材料，能起到快速止血和伤口护理的效果。

2、本发明所述的两亲性自组装短肽材料生产工艺简单可行、成本相对较低，其应用不仅能丰富现有的纳米医药材料种类，而且对人类生命健康具有重要意义。

附图说明

图1是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品的高效液相(HPLC)色谱图，结果显示它的纯度≥95％。

图2是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品的质谱(MS)图，结果显示它的分子量为1195.7，这与它的理论值(1195.3)非常相近。

图3是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品的三维分子结构模型示意图，采用的是MDL ISIS Draw 2.5软件基于能量最低原则绘制。

图4是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品在25℃下的圆二色(CD)光谱图。

图5是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品经过超声后25℃下的圆二色光谱图。

图6是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品超纯水溶液在原子力显微镜下的形貌图。

图7是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品与疏水性药物模型芘超声后在原子力显微镜下的形貌图。

图8是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品超纯水溶液的透射电镜图。用超纯水将其配制成为0.3mg/ml，采用磷钨酸负染法制备样品，图中显示的形貌与原子力显微镜下所观察到的形态结构相吻合。

图9是0.4mg/ml的芘水溶液于磁力搅拌器上搅拌三天后在原子力显微镜下观看到的形貌图。

图10是本发明所述的半程电荷匹配两亲性短肽①样品用于SD大鼠肝切面的止血实验图。将1％(w/v)肽水液注入伤口表面，立即形成一透明的凝胶状物质，封闭出血口，达到迅速止血的目的。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步说明，实施例是对本发明的更进一步的解释，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表示的范围。

实施例1

当X₁为Thr，X₂为Asn，X₃为Arg时，序列如下：

①CH₃CO-Pro-Thr-Phe-Asn-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂

自组装短肽①的合成：

1、材料

Fmoc-Pro-OH(N-芴甲氧羰基-脯氨酸)、Fmoc-Thr(tBu)-OH(芴甲氧羰基-O-叔丁基-苏氨酸)、Fmoc-Phe-OH(N-芴甲氧羰基-苯丙氨酸)、Fmoc-Asn(Trt)-OH(芴甲氧羰基-N-三苯甲基-天冬酰胺)、Fmoc-Glu(OtBu)-OH(芴甲氧羰基-O-叔丁基-谷氨酸)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(N-芴甲氧羰酰基-2，2，4，6，7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰-精氨酸)、Rink Amide-MBHA Resin(树脂)、HBTU(O-苯并***-1-基-N、N、N、N-四甲基尿六氟磷酸脂)和HOBT(1-羟基苯并三氮唑)购自上海吉尔生化有限公司。哌啶、醋酸酐、DMF(N、N-二甲基甲酰胺)、TFA(三氟乙酸)、NMM(N-甲基吗啉)、***、甲醇和DCM(二氯甲烷)购自天津市富宇精细化工有限公司。

2、制备方法

采用Fmoc(芴甲氧羰基)保护的固相合成法，其工艺步骤如下：

(1)称取20g 0.5mmol/g的Rink Amide-MBHA Resin于肽合成器皿中，取200ml DMF溶涨树脂30min，然后抽滤，再取用300ml DMF洗涤树脂，分三次进行，每次的洗涤时间为2min，抽滤干洗涤液后向肽合成器中加入100ml20％哌啶/DMF(V∶V)震荡反应30min，反应结束后，再抽滤出反应液，再用400ml DMF分四次洗涤树脂，洗毕后取少量树脂做茚三酮检测试验，树脂呈阳性，向肽合成器皿中加入以下原料：

上所述原料加完后，震荡反应30min，反应结束后，用300ml DMF分四次洗涤树脂，每次洗涤时间2分钟，取少许树脂做茚三酮试验检测，树脂呈阴性。

(2)向肽合成器皿中加入5ml 20％哌啶/DMF(V∶V)震荡反应30min，反应结束后抽滤出反应液，再用40ml DMF分四次洗涤树脂，洗毕取少许树脂做茚三酮试验检测，结果树脂呈阳性，向反应器皿中加入以下原料：

上述原料加完后，震荡反应40min，反应结束后，用40ml DMF分四次洗涤树脂，每次洗涤时间为2min，取少许树脂做茚三酮检测，树脂呈阴性。

(3)变换步骤(2)中的(a)原料，(b)(c)(d)(e)原料及加入量不变，重复步骤(2)的操作；(a)原料依次替换为Fmoc-Phe-OH(15.48g)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(25.93g)、Fmoc-Phe-OH(15.48g)、Fmoc-Asn(Trt)-OH(23.85g)、Fmoc-Phe-OH(15.48g)、Fmoc-Thr(tBu)-OH(15.89g)、Fmoc-Pro-OH(13.49g)。即每重复一次步骤(2)的操作，变换一种(a)原料，直至将上述7种原料都使用一次为止；

再重复一次(1)(2)(3)步骤的操作，各步骤的原料及所用原料的量均不变；最后一个Pro合成结束后，脱出Fmoc-保护基，加入20％哌啶/DMF(V∶V)反应30min，洗净树脂，加入160ml 50％醋酸酐/DMF(V∶V)反应30min，用40ml DMF洗净树脂，再用甲醇洗涤树脂8次，除去DMF。氮气吹干后，用TFA(三氟乙酸)/DCM强酸裂解液，裂解3小时，将合成多肽从树脂上裂解下来，同时脱去所以保护基团，收集溶有合成肽的裂解液，然后减压过滤，收集滤液，用冷***沉淀溶解在滤液中的多肽，再抽滤得到白色固体，即得合成肽的粗品。合成肽粗品经HPLC(高效液相色谱法)纯化，收集主峰，经过冷冻干燥后，即得到目标短肽。

通过上述相同程序还可以合成以下序列短肽：

X₁为Thr，X₂为Ser，X₃为His时，序列如下：

②CH₃CO-Pro-Thr-Phe-Ser-Phe-His-Phe-Glu-Pro-NH₂

X₁为Asn，X₂为Asn，X₃为His时，序列如下：

③CH₃CO-Pro-Asn-Phe-Asn-Phe-His-Phe-Glu-Pro-NH₂

X₁为Ser，X₂为Ser，X₃为Arg时，序列如下：

④CH₃CO-Pro-Ser-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂

图1是所合成短肽①的纯化HPLC图谱，图2是合成短肽①的MS图谱，图3是短肽①的三维分子模型，碳原子为白色，氧原子为红色，氮原子蓝色，通过此图可知各氨基酸的空间分布。图4是本合成短肽①的0.21mg/ml水溶液的圆二色光谱图。CD光谱采用Applied photophysics CD光谱仪，在25℃下进行扫描采集信号，使用1mm的光程石英比色杯，先扫空白石英比色杯以检查CD信号的基线，并且扫描超纯水石英比色杯的CD信号以作为样品背景信号，所有数据都通过它减去次背景信号进行修正。数据采集的波谱范围是190-260nm，步长为1nm，数据值是以1s在1nm的带宽范围内的平均值记，数据结果以平均残基摩尔椭圆率进行表示。图5是同浓度下的同种短肽溶液在经过连续超声2h后，放置过夜后的CD图谱，从中可以看出其二级结构并没有什么明显变化。

实施例2

短肽①CH₃CO-Pro-Thr-Phe-Asn-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂在水溶液中自组装后的纳米结构及其在制备疏水药物载体中的应用

1)原子力显微镜(AFM)检测

应用原子力显微镜AFM来观察不同浓度下的两亲性短肽溶液①本身及在与适量芘超声混合后的纳米结构。方法：取储存在4℃冰箱中的浓度为1mg/ml的短肽①溶液，用18.2KΩ/cm²超纯水将其稀释配制成0.5mg/ml、0.3mg/ml、0.1mg/ml的肽水溶液，不经任何处理，它们三者在原子力下的形貌如图6中a、b、c所示；取储存在4℃冰箱中的浓度为1mg/ml的短肽①溶液，用18.2KΩ/cm²超纯水将短肽稀释配制成0.5mg/ml、0.3mg/ml、0.1mg/ml的肽水溶液后，将它们分别与同量的芘混合连续超声3h后置黑暗处过夜。不同浓度的短肽溶液与同量的芘超声混合后，在原子力显微镜下的结构形貌不一样，如图7中的a、b、c所示。其中7(a)图是0.5mg/ml的肽水溶液和10^-6M芘超声后在原子力显微镜下的形态图，图中显示的是由球状聚集体连接在一起形成的网状纳米纤维结构。7(b)图是超声后的0.3mg/ml的肽水溶液和10^-6M芘在原子力显微镜下的形态图，图中显示的是纳米纤维网状分枝结构图。7(c)图是超声后 0.1mg/ml的肽水溶液和10^-6M芘在原子力显微镜下的形态图，图中显示的仍是纳米纤维网状分枝结构图，与7(b)图相比纤维分枝结构没有那样密集。我们将图6的a、b、c三图分别与图7的a、b、c三图相比较后可以看出当同浓度的短肽水溶液中加入等量的芘后，它们在原子力纤维下的纳米纤维网状分枝结构的平均宽度要比未加入芘前的要大，且短肽浓度越高，其平均宽度也越大(如下表)。这是由于短肽材料与疏水性药物模型芘通过疏水作用自组装后覆在模型药物芘的表面，从而使其纳米粒径变大。

不同样品溶液	平均宽度(nm)
		0.5mg/ml肽+10-6M芘	103.77±2.63
0.3mg/ml肽+10-6M芘	70.62±2.14
		0.1mg/ml肽+10-6M芘	68.92±1.89
0.5mg/ml肽	81.92±2.85
		0.3mg/ml肽	24.35±1.79
0.1mg/ml肽	25.68±1.36

图9是0.4mg/ml的芘水溶液在磁力搅拌器上搅拌三天后在原子力显微镜下观看到的形貌图。它是一无规则的非纳米纤维网状分枝结构，进一步肯定短肽材料在自组装过程中可与疏水药物模型芘相互作用，载药性较明显，即疏水性药物模型芘的水溶性显著增强。

制备原子力显微镜扫描样品时先在新揭开的云母上用移液枪移取8-10ul的待测溶液液，静置1min后，用200ul的超纯水冲洗此云母片表面上未吸附的溶液，然后用灭菌后的培养皿盖盖住标记好号置室温下过夜干燥。原子力显微镜是在室温下进行扫描，使用的是美国Veeco公司的NanoScope，以轻敲模式进行，图6和图7中的样品扫描的尺寸分别采用5μmx5μm观察，图8为3μmx3μm的观察范围。

2)透射电子显微镜(TEM)检测

应用日本电子公司的Jeol Jem-1400透射电镜在120kv的加速电压下观测短肽①水溶液的纳米结构。将1mg/ml的肽溶液用18.2KΩ/cm²Milli-Q超纯水 稀释到待测浓度0.3mg/ml。制备透射电镜扫描样品时先用移液枪移取10ul的肽水溶液样品于洁净的表面，然后将覆有聚乙烯醇缩甲醛膜(Formvar)的铜网浸入肽溶液两次各10s，再用滤纸吸去铜网周边多余的液体。将pH6.5的1％磷钨酸滴于洁净表面，同时将铜网的擦拭面负染15s，然后立即用滤纸吸去多余液体，室温自然晾干后利用电子显微镜在120kv的加速电压下对用磷钨酸染色的样品进行明场观测。透射电镜下0.3mg/ml的短肽溶液形态图如图8所示，放大倍数是3.3万倍，显示的是此半程电荷匹配两亲性短肽自组装后形成的是纳米纤维网状分枝结构，这结果与同浓度短肽溶液在原子力显微镜下的形态图能够很好地相吻合。

同时，本发明中的其他半程电荷匹配短肽序列②③④都可在水溶液中自组装成纳米纤维网状分枝结构，与短肽①一样都可作为疏水药物的载体材料。

实施例3短肽①、②、③、④在制备止血药物中的应用

根据出血量和止血时间来判断四种短肽的止血效果。在本实施例中，实验动物是290g～310g之间的SPF级SD大鼠，雌雄随机分布，所有实验动物均购自南方医科大学动物实验中心。所有实验动物在手术前禁食24h(自由饮水)，所有动物在试验前按体重注射不同剂量的戊巴比妥钠药液。实验中所用到的棉签为医用棉签，棉纱高压灭菌处理，棉签、棉花分别放置在灭菌干净小瓶中并于实验前称重，在使用棉签棉花后放回小瓶中封好，防止血液中水分流失到空气中去，称量实验后小瓶的总重量，即可得出出血量，记录出血量＝最后称量的小瓶和吸血棉签及棉纱的重量-干燥棉签和棉纱及小瓶的重量。本实验中的所有数据均采用( 

)来表示，数据处理采用Wilks‘sλ检验(SAS 8.0for Windows统计软件包处理)。

实验组中所用的短肽止血材料可为短肽冻干粉末或不同质量体积比的肽水溶液，肽水溶液是用18.2KΩ/cm²Milli-Q超纯水配制成而成，可将此肽水溶液在超声波清洗仪中超声几分钟除去粘性，气泡可通过高速离心去除，4℃保存。

1、将1％(w/v)的短肽

①(CH₃CO-Pro-Thr-Phe-Asn-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂)用于SD大鼠受损伤肝切面止血

按照止血方式分为以下三组：

1)实验用棉纱组(n＝10，空白组)：大鼠麻醉后，小心解剖，用消毒刀片 在其肝叶上划切适当大小伤口，伤口自然流血5s后，用棉签将血擦掉，再用已经剪好大小的灭菌棉纱压住伤口，轻轻按压30s后，期间用棉签吸取周围渗出的血液，移开棉纱观察伤口表面的流血情况，如在10s内伤口继续出血的话，则继续用棉纱按压止血直至止血完成为止。如果总时间超过10min，则视该组止血实验失败。

2)1％(w/V)肽水组(n＝10，实验组)：肽为从本发明中选取的半程电荷匹配两亲性短肽①Ac-Pro-Thr-Phe-Asn-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂样品，大鼠麻醉后，小心解剖，用刀片在其肝叶上划切适当大小伤口，伤口自然流血5s后，用棉签将血擦掉，此时将已准备好的短肽①溶液注入伤口，观察出血情况。发现当肽液与伤口刚接触即在受损伤肝脏表面形成一凝胶状物质，粘附于受损伤表面，如图10所示，快速达到止血效果，期间用棉签吸取周围渗出的血液直至止血实验过程完成。

3)止血明胶组(n＝10，实验对照组)实验过程同上。记录止血时间(完全止血)，用称重法称量纱布和棉签的重量，计算出血量。

表1不同止血材料对SD大鼠受损伤肝切面出血的止血作用

止血方式	大鼠数量(N)	止血时间(s)	出血量(g)
				棉纱	10	125±19	1.49±0.22
1％(w/v)肽水	10	13±3	0.31±0.15
				止血明胶	10	20±2	0.82±0.21

结果表明(见表1)，1％(w/v)肽水组与对照组(棉纱组与止血明胶组)相比产生的止血作用起效快、止血效果确切，能显著减少对大鼠受损伤肝切面出血的失血量，明显缩短止血时间，因此，本发明短肽①可发展为一种适于临床使用的实质性脏器出血的新型止血材料。

2、将短肽②(CH₃CO-Pro-Thr-Phe-Ser-Phe-His-Phe-Glu-Pro-NH₂)的冻干粉末用于SD大鼠受损伤肝切面止血

止血实验操作如上1，将肽水溶液换成了肽的冻干粉末，对照组不变，用秒表记录出血时间(完全止血时间)，在止血过程中用棉签吸取周围渗出的血液直至止血实验过程完成。最后用称重法称量纱布和棉签的重量，计算出血量。

表2不同止血材料对SD大鼠受损伤肝切面出血的止血作用

止血方式	大鼠数量(N)	止血时间(s)	出血量(g)
				棉纱	10	128±17	1.51±0.21
短肽冻干粉末	10	10±2	0.28±0.11
				止血明胶	10	21±2	0.83±0.20

结果表明(见表2)，短肽②冻干粉末与对照组(普通棉纱组和止血明胶组)相比产生的止血作用起效快、止血效果确切，能显著减少对大鼠受损伤肝切面出血的失血量，明显缩短止血时间，因此，本发明短肽②可发展为一种适于临床使用的实质性脏器出血的新型止血材料。

3、将0.7％(w/V)的短肽③(CH₃CO-Pro-Asn-Phe-Asn-Phe-His-Phe-Glu-Pro-NH₂)用于SD大鼠受损伤肝切面出血的止血

止血实验操作如1中所示，将1％(w/v)的①肽水溶液换成了0.7％(w/v)的③肽水溶液，对照组不变，用秒表记录出血时间(完全止血时间)，在止血过程中用棉签吸取周围渗出的血液直至止血实验过程完成。最后用称重法称量纱布和棉签的重量，计算出血量。

表3不同止血材料对SD大鼠受损伤肝切面出血的止血作用

止血方式	大鼠数量(N)	止血时间(s)	出血量(g)
				棉纱	10	125±19	1.49±0.22
0.7％(w/V)肽水	10	16±2	0.42±0.15
				止血明胶	10	19±2	0.82±0.21

结果表明(见表3)，0.7％(w/V)肽水组与对照组(棉纱组与止血明胶组)相比产生的止血作用起效快、止血效果确切，能显著减少对大鼠受损伤肝切面出血的失血量，明显缩短止血时间，因此，本发明短肽③可发展为一种适于临床使用的实质性脏器出血的新型止血材料。

4、将2％(w/V)的短肽④(CH₃CO-Pro-Ser-Phe-Ser-Phe-Arg-Phe-Glu-Pro-NH₂)用于SD大鼠受损伤肝切面出血的止血

止血实验操作如1中所示，将1％(w/v)的①肽水溶液换成了2％(w/v)的④肽水溶液，对照组不变，用秒表记录出血时间(完全止血时间)，在止血过程中用棉签吸取周围渗出的血液直至止血实验过程完成。最后用称重法称量 纱布和棉签的重量，计算出血量。

表4不同止血材料对SD大鼠受损伤肝切面出血的止血作用

止血方式	大鼠数量(N)	止血时间(s)	出血量(g)
				棉纱	10	124±18	1.48±0.19
2％(w/V)短肽	10	10±2	0.27±0.12
				止血明胶	10	21±2	0.81±0.22

结果表明(见表4)，2％(w/V)短肽④与对照组(棉纱组和止血明胶组)相比产生的止血作用起效快、止血效果确切，能显著减少对大鼠受损伤肝切面出血的失血量，明显缩短止血时间，因此，本发明短肽④可发展为一种适于临床使用的实质性脏器出血的新型止血材料。

由以上的四组止血实验可知，四种短肽材料都可作为有效用于SD大鼠受损伤肝切面出血的新型止血材料，其中肽水的浓度越高其止血效果越好，短肽材料的冻干粉末在一定程度上比肽水溶液的止血效果更好。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一类半程电荷匹配两亲性自组装短肽，其特征在于，其氨基酸序列的通式如下：

Ac-Pro-X₁-Phe-X₂-Phe-X₃-Phe-Glu-Pro-NH₂

其中X₁、X₂为极性不带电荷氨基酸，X₃为带正电荷的氨基酸，X₁、X₂、X₃全为L型氨基酸。

2.根据权利要求1所述短肽，其特征在于，所述极性不带电荷氨基酸为Thr、Ser、Cys或Asn。

3.根据权利要求1或2所述短肽，其特征在于，所述带正电荷的氨基酸为Arg或His。

4.权利要求1～3任意一项中所述短肽在作为疏水性药物载体材料中的应用。

5.权利要求1～3任意一项中所述短肽在作为纳米止血材料中的应用。

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