CN102198163B - 一种小白菊提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种小白菊提取物的制备方法，其以小白菊植物为原料提取方法如下：1）将小白菊粉碎用水浸渍，组合酶酶解，过滤，滤渣用亲水溶剂提取，制提取液；2）提取液回收溶剂，制浓缩液，浓缩液加水制沉淀物Ⅰ；3）沉淀物Ⅰ用碱性溶液溶解，再加酸性溶液，沉淀，制沉淀物Ⅱ；沉淀物Ⅱ干燥回收为产品。采用酶解以及醇提方式工艺简单，提取成本低，适用于工业化生产，废液易回收,环保无污染。

Description

一种小白菊提取物的制备方法

技术领域：本发明涉及中药有效成分分离技术领域，特别是一种小白菊提取物的制备方法。

背景技术：小白菊是菊科蒿属植物小白菊的干燥花卉，在我国多有栽培，具一定的观赏价值，可入药，中药用于减轻肾痛、头晕、胃胀、呕吐等症状，也可改善感冒、发烧时的不适症状。

小白菊的提取物含有许多组分。尽管不是所有的组分都被分离并鉴定，已知的小白菊组分含有很多生物活性组分。如今，整个小白菊提取物的化学组分包括但不限于芹黄素-7-葡糖苷、芹黄素-7-葡糖苷酸、1-β-hydroxyarbusculin、6-山奈黄素-3，7-二甲醚、8-β-reynosin、10-epicanin、抗坏血酸、β-胡萝卜素、钙、铬、野菊花苷、chrysanthemomin、chrysarten-A、chrysarten-C、金圣草黄素-7-葡糖苷酸、钴、大波斯菊苷、epoxyartemorin、木犀草素-7-葡糖苷、木犀草素-7-葡糖苷酸、mangnoliolide、小白菊内酯、槲皮万寿菊苷-3，7，3^，-三甲醚、槲皮万寿菊苷-3^，7-二甲醚、reynosin、tanaparthin、tanaparthin-1α，4α-环氧化物、tanaparthin-1β，4β-环氧化物、β-广木香内酯、3-β-羟基-小白菊内酯，以及3，7，3^，-三甲氧基槲皮万寿菊苷。

现代药理学研究表明，小白菊的主要生物活性成分为倍半萜类物质，具有抗炎、抗氧化以及抗肿瘤等作用，其中研究较多物质为小白菊内酯，是一种倍半萜内酯物质。美相关研究人员最近发现，小白菊内酯具有治疗白血病的功效，研究表明其机理为：小白菊内酯能够针对性地消灭引发急性和慢性骨髓性白血病的干细胞，可从根本上遏制这种疾病的发生，这对开发白血病新药提供了一个较好的方向。

目前关于小白菊的研究主要是对其药理方面，涉及到小白菊提取物制备的工艺较少，真正应用于生产的也鲜见报道。美国专利US7537791以小白菊为原料，除杂，水洗后，软浸、压榨得汁液，经离心后，调酸、微波处理，再次离心后，干燥得成品，此工艺简单，无污染，但由于压榨过程中有效物质的损失，最终的得率不理想。美国专利US7229650专利通过超临界CO₂流体提取小白菊，从而制备出高得率、较高含量的小白菊提取物，由于超临界设备昂贵，不利于处理大批原料的规模生产。

中国专利公告号为CN101190258是以玉兰为原料，通过水浸泡后，醇提，石油醚萃取，醇液反萃，有机溶剂浸提，硅胶柱除杂，反相柱分离，经干燥后得高含量小白菊内酯产品，纯度达80-100%，此工艺路线复杂，使用硅胶除杂，不利于工业生产；国内专利CN101270102，通过化学合成方式制备了小白菊内酯的衍生物，其副作用等尚未研究。目前国内直接关于以小白菊为原料，制备其提取物的研究尚未报道。

发明内容：本发明就是要提供一种小白菊提取物的制备方法，其以小白菊植物为原料生产小白菊提取物，采用酶解以及醇提方式工艺简单，提取成本低，适用于工业化生产，废液易回收,环保无污染。

本发明技术方案是一种小白菊提取物的制备方法，以小白菊为原料，提取方法如下：

    1）将小白菊粉碎用水浸渍，组合酶酶解，过滤，滤渣用亲水溶剂提取，制提取液；

2）提取液回收溶剂，制浓缩液，浓缩液加水制沉淀物Ⅰ；

3）沉淀物Ⅰ用碱性溶液溶解，再加酸性溶液，沉淀，制沉淀物Ⅱ;沉淀物Ⅱ干燥回收为产品。

本发明小白菊提取物的制备方法，优选是按如下方法进行：

1）原料处理及酶解：

将小白菊原料粉碎，并加入占原料重8-12倍去离子水，浸渍12-36小时，加热升温至40-60℃，同时加入占原料重0.6-1.2%的组合酶酶解处理2-6小时，过滤除滤液得滤渣；

2）提取、分离回收：

向滤渣中加入占原料重6-10倍的浓度60-80wt%亲水溶剂回流提取，过滤得提取液；将提取液降温至5-20℃，静置4-8小时，离心分离得上清液，回收溶剂，得浓缩液；

3）静置沉淀、碱液溶解：

向浓缩液中加入其重量1-3倍的水，冷却，静置8-72小时，过滤得沉淀物Ⅰ；向沉淀物Ⅰ中加入占其重量10-20倍浓度为0.1-0.2wt%的碱性溶液，搅拌10-20分钟，静置过滤收集过滤液；

4）调酸沉淀、干燥产品

向3）步过滤液中加入浓度为0.2-0.8wt%酸性溶液,搅拌,调节过滤液溶液的PH值为1-3,并加热，反应完成后降温至10-20℃,静置10-20小时,过滤收集沉淀物Ⅱ；将沉淀物Ⅱ于50-60℃温度下真空干燥,即得小白菊提取物产品。

本发明所述组合酶是纤维素酶和果胶酶按质量比2-1:1的比例混合。

本发明所述亲水溶剂为C₁-C₄的醇溶液,回流提取至少2次,所述的C₁-C的醇溶液为甲醇,乙醇,丙醇或丁醇。

本发明是所述碱性溶液为浓度0.1-0.2wt%的氢氧化钙、氢氧化钠或碳酸钠；所述酸性溶液为浓度0.2-0.8 wt﹪的盐酸、硫酸或磷酸溶液。

本发明所述小白菊粉碎至10-50目。

本发明提取液采用离心分离回收，控制离心机转速为10000-15000r/min。

本发明步骤（3）搅拌为机械搅拌后，静置50-90min。步骤4）控制加热反应温度为40-50℃，反应时间10-50min。

本发明所述干燥为真空干燥，真空度为-0.08～-0.06MPa。

利用本发明方法制备的小白菊提取物的产品，经HPLC高效液相色谱法检测产品中小白菊内酯含量达2.5%以上，得率为10%左右。

本发明提供了一种小白菊提取物的制备方法，具有如下优点：

本发明过程中，采用了酶解以及醇提方式，提高了有效物质的浸出效率，提高了得率；

本发明过程工艺简约，操作简便，适应工厂的生产；

本发明过程能耗较少，使用溶剂与试剂廉价，生产成本低；

本发明过程使用物质以及废液易回收、处理，环保安全。

具体实施方式:实施例中涉及浓度为质量比浓度,采用HPLC和 TLC跟踪检测。

实施例1

本发明实施例提供的一种小白菊提取物的制备方法，通过以下步骤实现：

（1）原料处理：将10kg干燥小白菊原料除杂，粉碎过10-30目；

（2）酶解：向粉碎后的10kg原料中加入80kg的去离子水，浸渍18小时，缓慢加热至50℃后，向其中加入60g的组合酶，其组成为质量比纤维素酶：果胶酶为1：1，W/w处理3小时后，过滤，滤液弃去，甩干滤渣备用；

（3）提取：向滤渣中加入60kg浓度60wt%乙醇回流提取2次，过滤，得提取液；

（4）离心、回收：将提取液冷却至15℃，静置4-8小时，离心分离，离心速度为15000r/min，得离心上清液，然后回收溶剂至无醇味为止，得浓缩液8.75kg；

（5）静置、过滤：向8.75kg的浓缩液中加入10kg的水后，冷却至20℃，静置8小时，过滤，收集沉淀物Ⅰ约0.45 kg；

（6）碱液溶解：向沉淀物Ⅰ中加入约4.6kg的质量比浓度0.1wt%氢氧化钙溶液，机械搅拌约10分钟后，静置80分钟，过滤，收集滤液；

（7）调酸沉淀：向（6）步滤液中缓慢加入0.2wt%的盐酸溶液质量比浓度，边加边搅拌，调节PH至2.5，同时加热至50℃，保持此温度10分钟后，缓慢冷却至20℃，静置10小时后，过滤，收集沉淀为沉淀物Ⅱ；

（8）干燥：将所得沉淀物Ⅱ置于真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为60℃，真空度为-0.08MPa，干燥后用HPLC跟踪检测干燥后收集的提取物产品，产品得率为9.9%，小白菊内酯含量为2.81%。

实施例2

小白菊提取物的制备方法如下：

（1）原料前处理：将干燥小白菊原料除杂，粉碎过10-30目得原料10kg；

（2）酶解：向粉碎后的10kg原料中加入120kg的去离子水，浸渍24小时，缓慢加热至50℃后，向其中加入120g的组合酶，组合酶组成为质量比纤维素酶：果胶酶为2：1，W/w处理4小时后，过滤，滤液弃去，甩干滤渣备用；

（3）提取：向滤渣中加入100kg浓度80wt%丙醇逆流提取2次，过滤，得提取液；

（4）离心、回收：冷却提取液至5℃，静置8小时，离心，分离离心速度为15000r/min，得离心上清液，然后回收溶剂至无醇味为止，得浓缩液15.8kg；

（5）静置、过滤：向浓缩液中加入45kg的水后，冷却至10℃，静置12小时，过滤，收集沉淀物Ⅰ约0.51 kg；

（6）碱液溶解：向沉淀物Ⅰ中加入约5.5kg的质量比浓度0.1wt%氢氧化钙溶液，机械搅拌约20分钟后，静置50分钟，过滤，收集滤液；

（7）调酸沉淀：向（6）步滤液中缓慢加入0.2wt%的硫酸溶液，边加边搅拌，调节PH至2.5，同时加热至50℃，保持此温度10分钟后，缓慢冷却至10℃，静置20小时后，过滤，得沉淀物Ⅱ；

（8）干燥：将沉淀物Ⅱ用冷冻干燥方法进行干燥后，产品用HPLC高效液相色谱法检测，小白菊内酯含量为2.92%，产品得率12.2%。

实施例3

（1）原料前处理：将10kg干燥小白菊原料除杂，粉碎过40目；

（2）酶解：向粉碎后的10kg原料中加入100kg的去离子水，浸渍30小时，缓慢加温至40℃后，向其中加入100g的组合酶，组成为纤维素酶：果胶酶为2：1，W/w处理3小时后，过滤，滤液弃去，甩干滤渣备用；

（3）提取：向滤渣中加入80kg70wt%乙醇回流提取2次，过滤，得提取液；

（4）离心、回收：冷却提取液至10℃，静置6小时，离心分离，离心速度为15000r/min，得离心上清液，然后回收溶剂至无醇味为止，得浓缩液10.8kg;

（5）静置、过滤：向浓缩液中加入25kg的水后，冷却至15℃，静置10小时，过滤，收集沉淀物Ⅰ约4.8kg；

（6）碱液溶解：向沉淀物Ⅰ中加入约7.5 kg的0.15wt%氢氧化钠溶液，机械搅拌约15分钟后，静置40分钟，过滤，收集滤液；

（7）调酸沉淀：向滤液中缓慢加入0.6wt%的盐酸溶液，边加边搅拌，调节PH至2.5，同时加温至50℃，保持此温度20分钟后，缓慢冷却至15℃，静置15小时后，过滤，收集沉淀物Ⅱ；

（8）干燥：将沉淀物Ⅱ用喷雾干燥方法进行干燥，干燥温度为60℃，干燥后，产品使用HPLC跟踪检测，产品得率为10.6%，小白菊内酯含量为2.79%。

实施例4

（1）原料前处理：将干燥小白菊原料除杂，粉碎过10-30目；

（2）酶解：向粉碎后的10kg原料中加入100kg的去离子水，浸渍24小时，缓慢加温至50℃后，向其中加入100g的组合酶（纤维素酶：果胶酶为1：1，W/w）处理3小时后，过滤，滤液弃去，甩干滤渣备用；

（3）提取：向滤渣中加入100kg 80wt%乙醇回流提取2次，过滤，得提取液；

（4）离心、回收：将提取液冷却至10℃，静置8小时，离心，分离离心速度为15000r/min，得离心上清液，然后回收溶剂至无醇味为止，得浓缩液14.9kg；

（5）静置、过滤：向浓缩液中加入35kg的水后，冷却至20℃，静置12小时，过滤，收集沉淀物Ⅰ约0.46kg；

（6）碱液溶解：向沉淀物Ⅰ中加入约9kg的质量比浓度0.2wt%氢氧化钙溶液，机械搅拌约10分钟后，静置60分钟，过滤，收集滤液；

（7）调酸沉淀：向滤液中缓慢加入0.4wt%的磷酸溶液，边加边搅拌，调节PH至2.5，同时加温至45℃，保持此温度30分钟后，缓慢冷却至20℃，静置20小时后，过滤，收集沉淀物Ⅱ；

（8）干燥：将沉淀物Ⅱ置于真空干燥箱中进行干燥，干燥温度为60℃，真空度为-0.08MPa，干燥后，得产品。用HPLC跟踪检测，小白菊内酯含量为2.82%，产品得率为11.3%。

Claims (7)

1.一种小白菊提取物的制备方法，以小白菊为原料，其提取方法如下：

1）原料处理及酶解：

将小白菊粉碎,并加入占原料重8-12倍去离子水，浸渍12-36小时，加热升温至40-60℃，同时加入占原料重0.6-1.2%的组合酶酶解处理2-6小时，过滤除滤液得滤渣；

2）提取、分离回收：

即向滤渣中加入占原料重6-10倍的浓度60-80wt%亲水溶剂回流提取，过滤得提取液；将提取液降温至5-20℃，静置4-8小时，离心分离得上清液，回收溶剂，得浓缩液；

3）静置碱液溶解：

向浓缩液中加入其重量1-3倍的水，冷却，静置8-72小时，过滤得沉淀物Ⅰ；向沉淀物Ⅰ中加入占其重量10-20倍浓度为0.1-0.2wt%的碱性溶液，搅拌10-20分钟，静置过滤收集过滤液；

4）调酸沉淀干燥产品：

向3）步过滤液中加入浓度为0.2-0.8wt%酸性溶液,搅拌,调节过滤液溶液的pH值为1-3,并加热，反应完成后降温至10-20℃,静置10-20小时,过滤收集沉淀物Ⅱ；将沉淀物Ⅱ于50-60℃温度下真空干燥,即得小白菊提取物产品；

其中所述组合酶是纤维素酶和果胶酶按质量比2-1:1的比例混合；

其中所述亲水溶剂为C₁-C₄的醇溶液,回流提取至少2次,所述的C₁-C₄ 的醇溶液为甲醇,乙醇,丙醇或丁醇。

2.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法,其特征是所述碱性溶液为浓度0.1-0.3wt%的氢氧化钙、氢氧化钠或碳酸钠；所述酸性溶液为浓度0.2-0.8 wt﹪的盐酸、硫酸或磷酸溶液。

3.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法,其特征是所述小白菊粉碎至10-50目。

4.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法,其特征是提取液离心分离回收，控制离心机转速为10000-15000r/min。

5.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法，其特征是步骤（3）搅拌为机械搅拌，后静置50-90min。

6.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法，其特征是4）步控制加热反应温度为40-50℃，反应时间10-50min。

7.依据权利要求1所述的小白菊提取物的制备方法，其特征是所述真空干燥的真空度为-0.08～-0.06MPa。