CN102134566B - 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 - Google Patents
一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102134566B CN102134566B CN2010106124067A CN201010612406A CN102134566B CN 102134566 B CN102134566 B CN 102134566B CN 2010106124067 A CN2010106124067 A CN 2010106124067A CN 201010612406 A CN201010612406 A CN 201010612406A CN 102134566 B CN102134566 B CN 102134566B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- double
- cdna
- strand cdna
- genomic dna
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 title claims abstract description 97
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 49
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000007667 floating Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 12
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 claims description 7
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 claims description 6
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 claims description 5
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 claims 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 40
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 abstract 3
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 abstract 2
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 abstract 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 5
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法。所述方法包括:构建含有稀有限制性内切酶I-SceI识别位点的OligodT引物I-SceIdT,利用该引物对样品RNA进行逆转录合成第一链cDNA;往第一链cDNA中加入RNAseH酶和DNA Polymerase I酶,合成双链cDNA,然后抹平双链cDNA末端(基因组DNA扩增从此步骤开始做),接着使双链cDNA(或基因组DNA)的3‘末端加上碱基A,最后在双链两端都加上接头Zip T,使双链DNA可以变性成单链环状结构,在phi29DNA聚合酶作用下进行滚环扩增,产生大量双链cDNA或基因组DNA。本发明方法能够高效并切无差别的扩增各种cDNA及基因组DNA,对珍稀样本的基因组DNA和cDNA有扩大保存的作用,并能高效的扩增高GC含量以及复杂二级结构的DNA。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法。
(二)背景技术
当样品比较小、稀少以及珍贵时,要往往要先对其RNA进行逆转录和扩增,才能得到足够的cDNA用于构建cDNA文库、基因克隆及表达情况分析等实验。目前扩增的方法主要有三种:①在逆转录过程中加入T7、T3或SP6等RNA聚合酶的启动子序列,合成双链cDNA后再利用这些RNA聚合酶转录RNA,进而使其得到扩增;②逆转录过程中加入其它接头序列,然后利用与接头序列相匹配的引物通过PCR扩增cDNA;③逆转录后,将单链cDNA用Circligase(Epicentre Biotechnologies)连接成环状,然后滚环扩增。这些方法都有各自的缺点,由于逆转录过程中长链和GC含量高的cDNA本身就不容易合成到头,方法①中转录出来的RNA还需要再重新逆转录成cDNA才能用于其它用途,长链和GC含量高的cDNA在所有cDNA中的丰度会成倍降低,同时RNA也不易于保存;方法②则因为PCR对长链和GC含量高的cDNA的扩增效率远低于普通的短链cDNA,容易丢失长链和GC含量高的cDNA,抑制性PCR只能部分解决长链cDNA扩增不足的问题;方法③则由于长链cDNA的两个末端碰撞的概率比短链的低很多,不容易形成环状,造成其扩增比例大幅下降。因此需要一种等效的cDNA扩增方法,这种方法既能够高效扩增长链cDNA,也能够高效扩增GC含量高的cDNA。另外,稀有样品的基因组等效扩增也存在相似的问题。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法,能够高效并切无差别的扩增各种cDNA及基因组DNA,对珍稀样本的基因组DNA和cDNA有扩大保存的作用,并能高效的扩增高GC含量以及复杂二级结构的cDNA。
本发明采用的技术方案是:
一种无差别扩增DNA的方法,所述DNA可以是直接从样品中提取获得的基因组DNA,也可以是对样品RNA进行逆转录获得的cDNA,所述方法包括:
(1)往DNA片段中加入T4DNA polymerase抹平末端;
(2)步骤(1)产物加入Taq DNA polymerase使DNA片段的3‘末端加上碱基A;
(3)步骤(2)产物在T4DNAligase和T4polynucleotide kinase的作用下在DNA片段两端都加上接头Zip T;
(4)步骤(3)产物在phi29DNA聚合酶作用下进行滚环扩增,产生大量DNA。
一种所述DNA为基因组DNA时,所述方法如下:
(1)提取待测样品基因组DNA;
(2)往基因组DNA片段中加入T4DNA polymerase抹平末端;
(3)步骤(2)产物加入Taq DNA polymerase使基因组DNA的3‘末端加上碱基A;
(4)步骤(3)产物在T4DNA ligase和T4polynucleotide kinase的作用下在基因组DNA两端都加上接头Zip T;
(5)步骤(4)产物在phi29DNA聚合酶作用下进行滚环扩增,产生大量基因组DNA。
所述DNA为双链cDNA时,所述方法如下:
(1)构建含有稀有限制性内切酶I-SceI识别位点的Oligo dT引物I-SceIdT,利用该引物对样品RNA进行逆转录合成第一链cDNA;
(2)往第一链cDNA中加入RNaseH酶和DNAPolymerase I酶,合成双链cDNA;
(3)往双链cDNA中加入T4DNApolymerase抹平双链cDNA末端;
(4)步骤(3)产物加入Taq DNA polymerase使双链cDNA的3‘末端加上碱基A;
(5)步骤(4)产物在T4DNA ligase和T4polynucleotide kinase的作用下在双链cDNA两端都加上接头Zip T;
(6)步骤(5)产物在phi29DNA聚合酶作用下进行滚环扩增,产生大量双链cDNA。
本发明关键在于操作路线的涉及和酶的选择,其各步骤具体操作过程可按本领域常规方法进行选择。本发明方法原理参见图1,首先,利用一个含有识别序列为非回文序列的稀有限制性内切酶I-SceI识别位点位点的Oligo dT引物(I-SceIdT)先成第一链cDNA,在Oligo dT中引用此位点为接下来全长cDNA的定向克隆提供基础。第一链cDNA合成完成后,加入RNAse H使和第一链cDNA结合的RNA出现切割,这些断掉的RNA被DNAPolymerase I利用合成第二链cDNA。接着,利用T4DNApolymerase的3’→5’外切核酸酶活性使双链cDNA变成平末端,基因组DNA可直接进行该步骤。然后,加入Taq DNA polymerase使双链cDNA的3‘末端加上碱基A。结果以上处理后,合成的双链cDNA就可以在T4DNA ligase以及T4polynucleotide kinase的作用下两端都加上接头Zip T。ZipT是一个含有I-SceI限制性酶切位点的发夹型的寡核苷酸,其3’末端有个突出的碱基T。加上Zip T之后,双链cDNA经变性会形成一个单链的环状DNA,然后在phi29等具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下进行滚环扩增,产生大量的双链cDNA。这些cDNA经过I-Sce I酶切,可以进行定向克隆。
所述引物I-SceIdT带有识别序列为非回文结构的稀有限制性内切酶I-SceI的位点,可以用于定向克隆,序列包括但不限于如下:
GACGCTAGGGATAACAGGGTAATTTTTTTTTTTTTTTTVN
下划线部分为内切酶I-SceI识别位点,V表示碱基A、C或G的简并碱基,N表示碱基A、T、C或G的简并碱基。
所述接头Zip T序列可形成3‘末端有个突出碱基T的发夹结构,并带有识别序列为非回文结构的稀有限制性内切酶I-SceI的位点,序列包括但不限于如下:
GCGGCCGCACGCTAGGGATAACAGGGTAATGCGGCCGCT
下划线部分为内切酶I-SceI识别位点。
本发明的有益效果主要体现在:(a)本发明方法利用一个接头ZipT使cDNA或基因组DNA成环,因此对不同cDNA及基因组DNA环化效率相同,因此可以无差别的扩增双链cDNA及基因组DNA,这与利用连接酶使自身环化的方法相比更具有“无差别扩增“的优势;(b)与PCR方法扩增双链cDNA及基因组DNA相比,这种方法对长片段以及高GC含量的DNA的扩增效率不会受到影响。
(四)附图说明
图1为本发明方法原理示意图;
图2为使用原始双链cDNA和稀释不同倍数的扩增后双链cDNA做模板,扩增GC含量正常的产物电泳结果图;
图3为使用原始双链cDNA和稀释不同倍数的扩增后双链cDNA做模板,进行PCR扩增高GC含量基因的产物电泳结果图。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1:扩增小鼠的脊髓双链cDNA
步骤如下:
一、第一链cDNA合成
1.在冰上加入
5μl Total RNA(约2μg)
4μl 5×RT buffer(Takara)
1μl 10mM dNTPs (Takara)
0.5μl I-SceIdT(50M,as OligodT primer)
0.5μl RNase Inhibitor(40u/μl)(NEB)
1μl PrimeScriptII(200u/μl)(Takara)
8μl DEPC-treated H2O
总体积20μl;
I-SceIdT序列如下:GACGCTAGGGATAACAGGGTAATTTTTTTTTTTTTTTTVN,下划线部分为内切酶I-SceI识别位点;
2.轻柔混匀后短暂离心,42℃孵育1小时、接着45℃30分钟,再在50℃10分钟。
二、双链cDNA的合成
1.加入20μl第一链cDNA合成反应产物至以下体系(冰上操作):
8μl 10×RNase H buffer(NEB)
1.5μl 10mM dNTPs
0.2μl RNase H(5u/μl)(NEB)
1μl DNAPolymerase I(10u/μl)(NEB)
69.3μl H2O
总体积100μl
2.轻柔混匀后短暂离心,15℃孵育2小时,避免温度超过15℃。
3.加入0.5μl(5u/μl)T4DNA Polymerase(NEB)后15℃孵育10分钟,使末端平滑。
4.加入1μl Taq DNA Polymerase(5u/μl),72℃孵育20分钟,使T4DNAPolymerase失活并在双链cDNA末端加3′-A。
5.加入250μl的乙醇,混匀-20℃沉淀1小时。
6.12,000X×g离心10分钟,轻轻倒掉上清,加入1ml的75%乙醇。
7.12,000×g离心5分钟,轻轻倒掉上清,小心吸干残留乙醇。
8.加入4μl 10μM ZipT(adaptor)溶解。
Zip T序列如下:GCGGCCGCACGCTAGGGATAACAGG GTAATGCGGCCGCT,下划线部分为内切酶I-SceI识别位点;
三、接头连接
1.加入以下反应液至上述溶解的双链cDNA中:
1μl 10×Ligation buffer
1μl 50%PEG4000
0.25μl T4Polynucleotide Kinase(10u/μl)(NEB)
1μl T4DNA Ligase(NEB)
2.75μl H2O
总体积10μl
2.轻柔混匀后短暂离心,16℃孵育过夜。
四、滚环扩增
1.加入如下:
2μl 连接了接头的双链cDNA
2μl 250μM exonuclease resistant random octamer(NNNNNNSNSN)
2μl 10mM dNTPs
11μl H2O
将混合物在95℃孵育5分钟,使变性,冰上迅速冷却
2.在上述样品中加入下列试剂:
2μl 10×Phi29Buffer
0.5μl BSA(10mg/ml)
0.5μl Phi29DNA Polymerase(10u/μl)
总体积20μl
3.轻柔混匀后短暂离心,30℃孵育过夜。65℃孵育10分钟使Phi29DNAPolymerase失活终止反应,即可获得大量小鼠脊髓双链cDNA。
实施例2:使用扩增完成的小鼠脊髓双链cDNA对GC含量正常的目的片段的扩增:
根据Genbank的中目的基因Gpr178的序列设计引物,扩增一段583bp的片段,其GC含量为53.69%。
引物序列如下:
正向引物:TGCTTGGCTTCCCTGGTGGCTC
反向引物:ATGGGCTGGTTCAGGTGC
PCR反应体系组成如下:
17.25μl H2O
2.5μl 10×Taq Buffer(Fermentas)
1.5μl MgCl2(25mM,Fermentas)
0.5μl dNTPs(10mM,NEB)
1μl 正向引物(10μM)
1μl 反向引物(10μM)
1μl 模板cDNA
0.25μl Taq DNA Polymerrase(Fermentas)
总体积25μl每管。
PCR条件如下:
94℃预变性4min
72℃10min
扩增后的产物如图2所示。箭头表示目的基因的扩增产物,M表示marker,泳道1为使用扩增前cDNA进行扩增,泳道2到4将扩增后的cDNA稀释到不同倍数作为模板进行扩增。其他泳道为扩增后产物稀释105到108做PCR模板的产物结果显示,结果显示稀释到100~10000倍的扩增后产物均可以顺利扩增出目的片段。可见,扩增的cDNA稀释1000倍作为模板扩增的产物亮度和扩增前cDNA相同,说明使用这种cDNA扩增方法进行扩增,至少将cDNA扩增了1000倍以上。10000倍稀释的扩增后cDNA做模板的PCR产物经连接、转化、测序证实是Gpr178片段,说明这种方法是可行的。
实施例3:使用扩增完成的小鼠脊髓双链cDNA对扩增高GC含量的基因进行扩增:
目的基因为Wnt10B,其开放式阅读框(ORF)区域GC含量高达62.22%,长度为1170bp,扩增Wnt10B的ORF区域。
引物序列如下:
正向引物:ATGCTGGAGGAGCCCCGG
反向引物:TCATTTACACACATTGAC
PCR反应体系组成如下:
17.25μl H2O
2.5μl 10×Taq Buffer(Fermentas)
1.5μl MgCl2(25mM,Fermentas)
0.5μl dNTPs(10mM,NEB)
1μl 正向引物(10μM)
1μl 反向引物(10μM)
1μl 模板cDNA
0.25μl Taq DNA Polymerrase(Fermentas)
总体积25μl每管
PCR条件如下:
94℃预变性4min
72℃10min
扩增后的产物如图3。箭头表示目的基因的扩增产物,M表示marker,泳道1为使用扩增前cDNA进行扩增,泳道2到4将扩增后的cDNA稀释到不同倍数作为模板进行扩增。结果显示,在扩增前cDNA中没有Wnt10B特异性的片段,扩增的cDNA稀释100、1000倍后可以得到目的大小的条带,但是产物中也有其他一些杂带(因为GC含量高的片段扩增十分容易产生杂带),扩增后产物稀释10000倍做PCR模板,得到的PCR产物只有一条杂带,十分适合克隆。结果显示,cDNA经扩增后,Wnt10B目的条带出现,并且扩增后cDNA稀释到10000时,更能减少非特异性扩增,说明这种扩增方法不但能增加双链cDNA的量,而且对GC含量高的cDNA扩增也很有效。
SEQUENCE LISTING
<110> 杭州师范大学
<120> 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法
<130>
<160> 2
<170> PatentIn version 3.4
<210> 1
<211> 40
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 1
gacgctaggg ataacagggt aatttttttt ttttttttvn 40
<210> 2
<211> 39
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> 人工序列
<400> 2
gcggccgcac gctagggata acagggtaat gcggccgct 39
Claims (1)
1.一种无差别扩增双链cDNA的方法,其特征在于所述方法如下:
(1)构建含有稀有限制性内切酶I-SceI识别位点的Oligo dT引物I-SceIdT,利用该引物对样品RNA进行逆转录合成第一链cDNA;
所述引物I-SceIdT序列如下:
GACGCTAGGGATAACAGGGTAATTTTTTTTTTTTTTTTVN;
下划线部分为内切酶I-SceI识别位点,V表示碱基A、C或G,N表示碱基A、T、C或G;
(2)往第一链cDNA中加入RNaseH酶和DNA Polymerase I酶,合成双链cDNA;
(3)往双链cDNA中加入T4 DNA polymerase抹平双链cDNA末端;
(4)步骤(3)产物加入Taq DNA polymerase使双链cDNA的3‘末端加上碱基A;
(5)步骤(4)产物在T4 DNA ligase和T4 polynucleotide kinase的作用下在双链cDNA两端都加上接头Zip T;
所述接头Zip T序列如下:
GCGGCCGCACGCTAGGGATAACAGGGTAATGCGGCCGCT;
下划线部分为内切酶I-SceI识别位点;
(6)步骤(5)产物在phi29 DNA聚合酶作用下进行滚环扩增,产生大量双链cDNA。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2010106124067A CN102134566B (zh) | 2010-12-30 | 2010-12-30 | 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2010106124067A CN102134566B (zh) | 2010-12-30 | 2010-12-30 | 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102134566A CN102134566A (zh) | 2011-07-27 |
CN102134566B true CN102134566B (zh) | 2012-05-16 |
Family
ID=44294494
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2010106124067A Expired - Fee Related CN102134566B (zh) | 2010-12-30 | 2010-12-30 | 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102134566B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017108728A1 (en) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of rnase h for the selective amplification of viral dna |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109971825B (zh) * | 2017-12-28 | 2020-11-10 | 南京金斯瑞生物科技有限公司 | 快速制备桑格测序模板的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060014154A1 (en) * | 2004-07-14 | 2006-01-19 | Eshoo Mark W | Methods for repairing degraded DNA |
US20080118917A1 (en) * | 2006-11-21 | 2008-05-22 | Applera Corporation | Isothermal SNP Detection Method |
CN101260431A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-10 | 华南师范大学 | 基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法 |
-
2010
- 2010-12-30 CN CN2010106124067A patent/CN102134566B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060014154A1 (en) * | 2004-07-14 | 2006-01-19 | Eshoo Mark W | Methods for repairing degraded DNA |
US20080118917A1 (en) * | 2006-11-21 | 2008-05-22 | Applera Corporation | Isothermal SNP Detection Method |
CN101260431A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-10 | 华南师范大学 | 基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017108728A1 (en) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of rnase h for the selective amplification of viral dna |
CN108474031A (zh) * | 2015-12-21 | 2018-08-31 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Rna酶h用于选择性扩增病毒dna的用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102134566A (zh) | 2011-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210189382A1 (en) | Barcoding Nucleic Acids | |
US20140213485A1 (en) | Methods For Preparing cDNA From Low Quantities of Cells | |
WO2018196763A1 (zh) | 一种去除rna样本中非目标rna的方法 | |
US20100297643A1 (en) | Terminus-Specific DNA Modification Using Random-Sequence Template Oligonucleotides | |
JP2009508495A (ja) | cDNAライブラリー調製 | |
KR102119431B1 (ko) | 5' 보호 의존형 증폭 | |
CA2344599A1 (en) | Selective polymerase chain reaction of dna of which base sequence is completely unknown | |
CA2948951A1 (en) | Synthesis of double-stranded nucleic acids | |
IL272171A (en) | Compositions for the analysis of the interaction between RNA and chromatin, and their uses | |
RU2013148935A (ru) | Высокопроизводительный анализ трансгенных границ | |
CN102134566B (zh) | 一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法 | |
JP2023002557A (ja) | シングルプライマーからデュアルプライマーのアンプリコンへのスイッチング | |
CN110607353A (zh) | 一种利用高效地连接技术快速制备dna测序文库的方法和试剂盒 | |
CN105420225A (zh) | 基于硫代修饰的碘酒裂解型基因克隆方法 | |
EP3198064B1 (en) | Methods for sample preparation | |
CN101177697B (zh) | 一种制备核酸分子量标的方法 | |
US20110159548A1 (en) | Method for amplifying monomorphic-tailed nucleic acids | |
US20230220434A1 (en) | Composistions and methods for crispr enabled dna synthesis | |
JP5129498B2 (ja) | 核酸クローニング法 | |
EP3208344A1 (en) | Primer for nucleic acid random fragmentation and nucleic acid random fragmentation method | |
CN115667511A (zh) | 多核苷酸序列的按需合成 | |
CN109266670A (zh) | 利用dI碱基进行基因克隆与点突变的方法 | |
CN102943100B (zh) | 高效RNA逆转录合成cDNA的方法 | |
WO2005071111A1 (en) | Improving polynucleotide ligation reactions | |
US20230174973A1 (en) | Use of dna:rna duplex fragmentation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120516 Termination date: 20161230 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |