CN102133258A

CN102133258A - 水黄皮黄酮类成分的提取纯化工艺

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Publication number: CN102133258A
Application number: CN2010101106185A
Authority: CN
Inventors: 朱毅; 赵映淑
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-01-21
Filing date: 2010-01-21
Publication date: 2011-07-27

Abstract

一种水黄皮黄酮类成分的提取纯化工艺，其提取步骤为：①取水黄皮根、茎、叶粗粉，按药材重量8～15倍的比例(质量体积比)加入50～70％乙醇溶液，于60～80℃回流提取3次，每次0.5～2.0h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，得水黄皮药材提取液；②将步骤①得到的水黄皮药材提取液静置，取上清液应用大孔吸附树脂进行纯化，乙醇洗脱；③收集步骤②的乙醇洗脱液，减压回收乙醇浓缩，50～65℃真空干燥，得提取物纯化产品。本发明的水黄皮药材提取物产品中总黄酮质量含量为50％～70％，其水黄皮总黄酮转移率为75～80％。与现有技术相比，本发明具有工艺简化，活性成分损失减少，安全性较高等优点。

Description

水黄皮黄酮类成分的提取纯化工艺

技术领域

本发明涉及一种药用植物药效部位的提取纯化方法，具体涉及水黄皮药材的提取纯化方法及其提取物，属于中药、天然药物领域。

背景技术

水黄皮(Pongamia pinnata(L.)Merr)为豆科水黄皮属半红树植物，别名水流豆、水流兵、水刀豆等。文献资料显示，其全植物均可入药。“治疥癞，烧灰亦可擦癣”(《生草药性备要》)；“种子榨出之油，可治疥癣、脓疮及风湿症”，“水流豆全植物可为催吐剂”(《广州植物志》)。水黄皮的化学成分比较复杂，目前，国内外学者从中主要分离得到黄酮、三萜、生物碱、氨基酸及β-谷甾醇等化合物。据文献报道，黄酮类成分为其主要活性部位，，有

水黄皮总黄酮主要成分为呋喃黄酮类，包括水黄皮素(Karanjin)、水黄皮黄素、水黄皮根素(Pinnatin)及水黄皮异黄酮素(Gamatin)等，其中Karanjin为水黄皮总黄酮中含量较高的成分。

药理研究表明水黄皮醇提物具有抗炎镇痛、抗菌、抗消化性溃疡、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、降糖以及镇静等作用，且主要活性成分为黄酮类化合物，显示该植物具有很好的药用开发前景。

当前，单味中药提取物作为一种新兴的产品正日益收到重视，它以现代提取分离技术为依托。本发明所述的水黄皮药材黄酮类的提取纯化工艺，尚未见文献报道和专利公开。

发明内容

本发明的目的是提供一种水黄皮药材的药效部位提取纯化和提取物的干燥方法。

本发明的目的还在于提供了采用上述方法获得的水黄皮提取物。

本发明提供的一种水黄皮药材提取物提取方法由以下步骤组成：水黄皮药材乙醇回流提取，提取液减压回收乙醇后取上清，过大孔吸附树脂，先用纯化水洗脱除杂，再用乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。

水黄皮药材提取物的具体提取方法为：

①取水黄皮根、茎、叶粗粉，按药材质量8～15倍的比例加入50～70％乙醇溶液，于60～80℃回流提取3次，每次1.0～2.0h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇静置后取上清液，得水黄皮药材提取液。

②将步骤①得到的水黄皮药材提取液静置后取上清液，应用大孔吸附树脂进行纯化，工艺条件为：调节水黄皮药材提取液总黄酮浓度为0.5～1.0mg·mL^-1，调pH为3～5，以1.0～2.0mL·min^-1的速率上样，以相同速率用适量纯化水洗脱(molish反应阴性)后，再用数倍树脂柱体积的低浓度乙醇溶液除杂洗脱，最后用50～70％乙醇作为洗脱剂进行洗脱。

③收集步骤②的乙醇洗脱液，减压回收乙醇浓缩，再经50～65℃减压干燥，得提取物产品，提取物中总黄酮质量含量按水黄皮素计为50～70％。收集干燥提取物，粉碎，称重，装瓶，置干燥处保存。

本发明中所述乙醇浓度％是指100体积乙醇水溶液中乙醇体积分数。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1、有效成分转移率高。本发明采用合适浓度的乙醇回流提取，减少了黄酮成分的损失，提高了转移率。同时，本发明将乙醇提取液减压回收乙醇，将其浓缩到一定含醇量后静置取上清，过大孔吸附树脂进行纯化，即可保证有效成分的溶解，又有利于有效成分的吸附，还可防止树脂柱的堵塞，保证大生产工艺的可行。

2、采用减压干燥可以提高干燥效率，又可避免活性成分受热损失。

3、本发明采用大孔吸附树脂进行分离纯化。树脂价格较低，而且安全性较高，备受国内药品行业广泛使用。

附图说明：

图1工艺过程流程图

图2水黄皮药材提取液上大孔树脂吸附的泄露曲线

图3以70％的乙醇作为洗脱剂洗脱水黄皮总黄酮的洗脱曲线

图1工艺过程说明：

水黄皮药材用乙醇回流提取，提取液减压回收乙醇，浓缩液静置后取上清液上大孔树脂纯化，水和低浓度乙醇洗去糖等杂质后用50～70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩后减压干燥，粉碎，得产品。

具体实施方式

下面结合实施实例对本发明方法作进一步的说明。

实施例1

(1)使用乙醇回流提取法进行实验，采用L₉(3⁴)正交设计试验对乙醇浓度、溶媒量、提取时间和提取温度等条件进行了优化选择，以水黄皮素为对照，采用紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含量，并以此为指标进行比较分析。结果见表1、表2、表3、表4。

表1 乙醇回流提取工艺因素水平表

表2 L₉(3⁴)正交试验设计及结果分析

表3 方差分析结果

注：F_0.1(2，2)＝19.00，F_0.05(2，2)＝9.0

上述正交试验结果的直观分析和方差分析表明，影响水黄皮药材总黄酮提取效果的因素顺序为：B＞A＞D＞C，A、B、D三因素的影响具有显著性，C不具显著性。得最佳工艺组合为B₃A₂D₂C₁，即每g药材粗粉加入15倍量体积60％乙醇提取3次，每次0.5h。

(2)验证试验：按最佳按最佳工艺条件平行操作进行验证试验，结果见表4。

表4最佳工艺验证结果

实施例2

用前述优选条件提取得到的水黄皮提取液进行如下实验：

(1)大孔树脂的筛选实验

树脂筛选结果见表5、图1和图2。

表5不同大孔吸附树脂对水黄皮黄酮类静态吸附与解吸结果表

D-101、AB8、X-5树脂均为安徽三星树脂科技有限公司产品，上述结果表明D101和AB-8两种树脂优于X-5树脂。

对D101和AB-8进行了吸附量的考察，以0.6071mg.ml^-1的浓度，以2ml.min的流速上样，流出液每5ml接收1管，连续接取。对流出液进行紫外检测，以流出液树脂体积倍数为横坐标，以流出液中总黄酮浓度为纵坐标绘制泄露曲线，结果见图1。

由泄露曲线可知，D101大孔树脂饱和吸附量大于AB-8大孔树脂，当上样药液到125ml时D101树脂达到饱和吸附，确定D101树脂上样量约为每ml树脂可吸附水黄皮黄酮类15mg。

对D101和AB-8两种树脂的解吸曲线进行了考察，在其它条件完全相同的情况下，分别取相同体积的D101和AB-8大孔树脂装柱，将水黄皮药材上样液进行上柱、吸附和除杂后用70％乙醇液进行洗脱，分段收集洗脱液，测定每份洗脱液中总黄酮浓度，绘制解吸曲线，见图3。

由解吸曲线可知，D101大孔吸附树脂动态解吸量明显大于AB-8，可减少洗脱溶剂的用量。

(2)D101树脂纯化工艺

①上样原液pH对吸附率的影响

精密量取25mL水黄皮提取液(总黄酮浓度为0.5663mg·mL^-1)6份，置于具塞三角瓶中，分别调pH为2、3、4、5、6、7，按“2.4项下”进行静态吸附试验，计算吸附率，结果见表6。

表6 PH对吸附率的影响结果

②上样液浓度对吸附率的影响

取预处理好的D101大孔吸附树脂3份，每份5mL，分别装于1cm×20cm的层析柱内；取上样原液20mL(总黄酮浓度1.2141mg·mL^-1)3份，分别加水0mL、20mL和40mL稀释后调PH＝3，加于柱顶，以2mL·min^-1的流速通过层析柱吸附。流出液每5mL收集一管，测吸光度，计算吸附率，结果见表7。

表7 上样液总黄酮浓度对吸附率的影响结果

结果表明，当上样液总黄酮浓度为0.6071mg·mL^-1时，总黄酮吸附率最大，产物纯度最高。

③上样流速对吸附率的影响

取预处理好的D101的大孔吸附树脂3份，每份5mL，分别装于1cm×20cm的层析柱内；取上样原液20mL(总黄酮含量1.2141mg·mL^-1)3份，分别以1mL·min^-1、2mL·min^-1和3mL·min^-1的流速通过3个层析柱吸附，收集流出残液，每5mL收集一管，测吸光度，计算吸附率，结果见表8。

表8 上样流速对吸附率的影响结果

结果表明，上样流速越小，总黄酮吸附率越大。但上样流速为1mL·min^-1和2mL·min^-1时，结果相差不大，为了提高工作效率，选择2mL·min^-1作为上样流速。

④洗脱溶剂的选择

取预处理好的D101的大孔吸附树脂4份，每份5mL，分别装于1cm×20cm的层析柱内；取上样原液20mL(总黄酮含量0.6071mg·mL^-1)4份，调PH＝3，以2mL·min^-1的流速通过4个层析柱吸附，以相同速率用适量纯化水洗脱(molish反应阴性)后，各层析柱分别用30％、50％、70％和90％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，用旋转蒸发仪回收乙醇后浓缩，浓缩物干燥至恒重后测含量，并计算产物纯度。结果见表9。

表9 洗脱溶剂对产物纯度的影响结果

结果表明，随着乙醇浓度的升高，产物纯度也随之升高，但用90％乙醇洗脱时产物纯度反而降低，说明90％乙醇洗脱能力最强，但杂质随之增多，故选择70％乙醇作为洗脱溶剂。

实施例3中试放大试验

取水黄皮药材10kg，60％乙醇回流提取3次，每次用乙醇150L，提取0.5h，合并3次提取液，滤过，回收乙醇，放置过夜，取上清液备用。

取药用级D101型大孔树脂用适量乙醇浸泡，湿法上柱，处理后备用。

将上述提取药液加入树脂柱，上样流速为2ml.min-1，pH＝3，上样后以相同流速用纯化水冲洗至molish反应阴性，再用3倍柱体积20％乙醇洗脱，最后用70％乙醇洗脱，以薄层鉴别法确定洗脱终点，收集洗脱液，回收乙醇浓缩，60℃真空干燥。收集干燥提取物，放冷，粉碎，封口，称重，置干燥处保存。采用紫外-可见分光光度法测定提取物中总黄酮的含量(以水黄皮素计)，计算转移率(转移率＝提取物中总黄酮含量/原药材中总黄酮的含量×100％)和收膏率(收膏率＝提取物总重量/原药材总重量×100％)。试验结果见表10。

表10中试实验结果

三批中试放大研究结果表明：水黄皮总黄酮转移率达78.5％，提取物中总黄酮含量以水黄皮素计为58.1％。表明本研究的工艺参数可行，工艺条件稳定，可望过渡到产业化生产。

Claims

1.一种水黄皮药材提取物，其特征是所述提取物中总黄酮质量含量为50～70％。

2.权利要求1所述的水黄皮药材提取物的提取纯化方法，其特征是：提取步骤为：

①取水黄皮根、茎、叶粗粉，按药材质量和提取溶剂体积1∶8～1∶15的比例加入50～70％乙醇溶液，于60～80℃回流提取3次，每次0.5～2.0h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，静置后取上清，得水黄皮药材提取液。

②将步骤①得到的水黄皮药材提取液静置后取上清液，应用大孔吸附树脂进行纯化，工艺条件为：调节水黄皮药材提取液总黄酮浓度为0.5～1.0mg·mL^-1，调节pH，以1.0～3.0mL·min^-1的流速上样，以相同速率用适量纯化水洗脱(molish反应阴性)后，再用数倍树脂柱体积10～20％乙醇溶液除杂洗脱，最后用50～70％乙醇作为洗脱剂进行洗脱。

③收集步骤②的乙醇洗脱液，减压回收乙醇浓缩，再经50～65℃真空干燥，得提取物产品，提取物中总黄酮质量含量按水黄皮素计为50～70％。

3.权利要求2所述的水黄皮药材提取物的提取方法，其特征是所述步骤①中以药材质量8～15倍量的50～70％乙醇在60～80℃进行回流提取。

4.权利要求2所述的水黄皮药材提取物的提取方法，其特征是所述步骤②中提取液应用大孔吸附树脂进行纯化时，提取液中总黄酮浓度为0.5～1.0mg·mL^-1，pH为3～5，上样流速和洗脱流速均为1.0～2.0mL·min^-1，纯化水和低浓度乙醇溶液为除杂洗脱剂，50～70％乙醇为提取物洗脱剂。

5.权利要求2所述的水黄皮药材提取物的提取方法，其特征是所述步骤③中减压干燥温度为50～65℃。