CN102119997A - 川麦冬hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种川麦冬药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，色谱条件的选择，并用高效液相色谱仪进行测定，得到川麦冬药材的指纹图谱。通过对16批次川麦冬药材HPLC指纹图谱的对比，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。本发明具有方法简便、重现性好、特征峰多、准确可靠等特点。所建立的标准指纹图谱能有效地表征川麦冬药材的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是川麦冬药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。
背景技术
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特征的图谱或图像。中药指纹图谱作为一种综合的、可量化的质量控制手段，目前，已被众多国际性医药机构所承认，已成为中成药、天然药物质量控制最有效的方法之一。美国食品药品管理局在1996年制定的《FDA关于植物制品的指南》中，要求对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的指纹图谱。英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会也接受色谱指纹图谱。中国国家药品监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，明确要求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。
中药指纹图谱经过了数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同功酶分析法、分子生物学技术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此，为中药材建立相应的HPLC指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段。
麦冬为百合科沿阶草属多年生草本植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根，四川是其最大的主产区之一。中医临床上常用于肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、内热消渴、肠燥便秘等病症。麦冬含多种化学成分，自1936年报道麦冬块根中含维生素A类化合物以来，先后从麦冬中分离出糖类、皂苷、黄酮等化合物；目前，《中国药典》对麦冬的质量评价方式单一，不足以***、完整地表明麦冬药材的整体质量，亟需探索更先进、更有效的质量控制手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种川麦冬药材指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的川麦冬药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种更好的川麦冬药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使川麦冬药材的质量控制更加完善和科学。
本发明的川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：精密称取药材粉末称量麦冬样品3g至具塞容器中，加入95％乙醇水溶液50ml，超声震荡(20℃，90min)，滤膜过滤，滤液旋转蒸发至2-3ml(50℃，80r/min)用40ml水溶解，转移至离心管内，***萃取4次，每次20ml，将***层旋转蒸发至3～5ml，甲醇定容至10ml，过0.45μm一次性滤膜，滤液作为供试品溶液。
(2)高效液相色谱分析：色谱分离柱为Symmetry-C18(250×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.2％醋酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序为：0min→20min→38min→67min→90min，甲醇15％→32％→67％→74％→100％；流速：1.0mL/min，检测波长：280nm，进样量：15μL，柱温：30℃。在此条件下分析供试品溶液，得到川麦冬药材的指纹图谱。
按照本发明提供的方法，对16批川麦冬药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了25个共有特征峰。
特征峰的保留时间分别为：5.2min、17.2min、18.1min、23.4min、32.4min、36.5min、41.4min、48.6min、51.2min、52.7min、55.6min、57.0min、64.4min、67.1min、68.0min、69.6min、76.7min、77.2min、78.1min、78.7min、79.3min、80.0min、80.9min、83.3min、87.0min，这些共有特征峰构成了川麦冬药材的指纹特征，可作为川麦冬药材的标准指纹图谱。
本发明具有如下显著的优点和用途：
(1)将川麦冬药材作为一个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细微差异；
(2)供试品制作简便，色谱条件容易实现；
(3)方法的稳定性和重现性都比较好；
(4)适于对川麦冬药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
附图说明
图1是本发明提供的川麦冬药材的标准指纹图谱。图中从左到右分别标出了其共有特征峰1至25号。
具体实施方式
本发明的优选实施例如下：
(1)仪器和药品：使用安捷伦1101高效液相色谱仪；川麦冬药材共16批，均采集于川麦冬地道产区四川省绵阳市三台县；其它试剂为色谱纯或分析纯。
(2)精密称取药材粉末称量麦冬样品3g至具塞容器中，加入95％乙醇水溶液50ml，超声震荡(20℃，90min)，滤膜过滤，滤液旋转蒸发至2-3ml(50℃，80r/min)用40ml水溶解，转移至离心管内，***萃取4次，每次20ml，将***层旋转蒸发至3～5ml，甲醇定容至10ml，过0.45μm一次性滤膜，滤液作为供试品溶液。
(3)高效液相色谱分析：色谱分离柱填料为5μm Symmetry-C18(250×4.6mm，)；流动相为甲醇-0.2％醋酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序为：0min→20min→38min→67min→90min，甲醇15％→32％→67％→74％→100％；流速：1.0mL/min，检测波长：280nm，进样量：15μL，柱温：30℃。在此条件下分析供试品溶液，得到川麦冬药材的指纹图谱。
(4)按照本发明提供的方法，对16批川麦冬药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了25个共有特征峰，其保留时间分别为：5.2min、17.2min、18.1min、23.4min、32.4min、36.5min、41.4min、48.6min、51.2min、52.7min、55.6min、57.0min、64.4min、67.1min、68.0min、69.6min、76.7min、77.2min、78.1min、78.7min、79.3min、80.0min、80.9min、83.3min、87.0min，这些共有特征峰构成了川麦冬药材的指纹特征，可作为川麦冬药材的标准指纹图谱。
Claims (4)
1.一种川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征包括供试品溶液的制备、指纹图谱的制作和标准指纹图谱的确定。
2.根据权利要求1所述的川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是所述的供试品溶液的制备方法是：精密称取药材粉末称量麦冬样品3g至具塞容器中，加入95％乙醇水溶液50ml，超声震荡(20℃，90min)，滤膜过滤，滤液旋转蒸发至2-3ml(50℃，80r/min)用40ml水溶解，转移至离心管内，***萃取4次，每次20ml，将***层旋转蒸发至3～5ml，甲醇定容至10ml，过0.45μm一次性滤膜，滤液作为供试品溶液。
3.根据权利要求1、2所述的川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是所述的指纹图谱的制作过程为：色谱分离柱为Symmetry-C18(250×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.2％醋酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序为：0min→20min→38min→67min→90min，甲醇15％→32％→67％→74％→100％；流速：1.0mL/min，检测波长：280nm，进样量：15μL，柱温：30℃。在此条件下分析供试品溶液，得到川麦冬药材的指纹图谱。
4.根据权利要求1、2、3所述的川麦冬药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是所述的标准指纹图谱的确定方法是：按照本发明提供的方法，对16批川麦冬药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了25个共有特征峰，保留时间分别为：5.2min、17.2min、18.1min、23.4min、32.4min、36.5min、41.4min、48.6min、51.2min、52.7min、55.6min、57.0min、64.4min、67.1min、68.0min、69.6min、76.7min、77.2min、78.1min、78.7min、79.3min、80.0min、80.9min、83.3min、87.0min，这些共有特征峰构成了川麦冬药材的指纹特征，可作为川麦冬药材的标准指纹图谱。
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