CN102071244B - 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法，包括：将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养，然后将得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中进行培养；取含发光菌的液体培养基，进行离心分离，然后用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.4-0.9的菌悬液；将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验，测定待测水样的发光菌抑制率。本发明对发光菌进行了处理，使有机毒性物质和无机毒性物质均能够抑制发光菌的发光强度，从而提高了采用发光菌毒性试验检测水质毒性的准确性，解决了发光菌不能正确反应水质综合毒性的问题。本方法费时较少、灵敏度高、操作简便、结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种水质毒性的检测方法，具体涉及一种采用发光菌毒性试验准确检测水中有机物质和无机物质的毒性的方法。
背景技术
为了保障饮水安全，降低环境恶化给饮用水水质带来的威胁，人们常采用各种方法对水质进行评价，以有效的掌握饮用水引起的健康风险。
发光菌毒性试验是经典的综合生物毒性评价方法之一，因细菌生长周期短，对环境变化敏感等特点，其发光强度的变化程度与毒物质量浓度在理论上呈线性相关。以发光菌为代表的细菌类试验在国内外得到广泛的应用，许多国家已将发光菌方法作为标准的毒性测试方法。目前也有发光菌毒性仪应用在了水质预警检测上，作为水质安全的有力屏障之一。但已有研究表明，不论是海洋发光菌还是淡水发光菌，在检测水质中的无机物时非常灵敏、准确，但是在检测有机物时却表现出不同的效果。用发光菌对有机物进行检测时，相对于阴性对照，有机物不但不抑制发光菌的发光性，反而促进其发光性。由于水中可能含有有机和无机的多种物质，如果用传统的发光菌毒性试验进行水质综合毒性评价的话势必会使结果产生很大的偏差。由于这种原因，发光菌毒性试验在检测水中综合毒性时受到了很大的阻碍。
发明内容
本发明针对上述发光菌毒性试验存在的不足，提供了一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法，该方法对发光菌进行了处理，使有机物也同样的抑制其发光性，从而能同时检测水质中无机物质和有机物质的综合毒性，使检测结果更加准确。
本发明是通过以下措施实现的：
发明人在进行发光菌毒性试验时发现，有机毒物不但不会抑制发光菌的发光性，还具有促进作用，这样在测定含有有机和无机毒性物质的水样使会使测量结果发生错误，偏离真实数据，发明人经创造性实验，发现在将发光菌用于检测毒性物质前，先对其进行一定的培养，则可使发光菌对有机物质也同样具有发光抑制性，使检测水质毒性时结果更加准确。其具体技术方案如下：
一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法，包括用发光菌对待测水样进行发光菌毒性试验，以检测其水质综合毒性，其特征是：在试验前对发光菌进行以下处理：
（1） 固体培养：将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养，培养条件为：温度20-25℃，时间20-24h；
（2） 液体培养：将固体培养得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中，在20-25℃下振荡培养16-24h；
（3） 制备菌悬液：取上述步骤（2）的含发光菌的液体培养基，进行离心分离，然后用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.4-0.9的菌悬液；
（4） 将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验，测定待测水样的发光菌抑制率。
本发明所用的发光菌为青海弧菌。
本发明中，发光菌毒性试验的条件为：菌悬液与待测水样的体积比为1:1，反应时间为10-15min。
上述方法中，液体培养时发光菌的接种量满足所得发光菌的发光量在105-106的要求。
上述方法中，步骤（3）中离心分离的转速为3000-4000r/min。
进一步的，步骤（1）的培养条件为：温度22℃，时间24h；步骤（2）的培养条件为：温度22℃，时间22h。
有机毒性物质对发光菌起增强发光的原因可能是原先发光菌处于贫营养的状态，一开始接触有机毒物时将其作为碳源，本发明对发光菌进行了处理，发光菌就不处于原始的贫营养状态，使有机毒性物质和无机毒性物质均能够抑制发光菌的发光强度，从而提高了采用发光菌毒性试验检测水质毒性的准确性，解决了发光菌不能正确反应水质综合毒性的问题。本方法费时较少、灵敏度高、操作简便、结果准确，能够对水质污染状况做出判断，为突发性水质污染和水厂的水处理技术提供支持，降低由于饮用水暴露导致的风险。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
本发明所用的LB固体培养基的配方如下: 胰蛋白胨10g/L 、酵母提取物5g/L 、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L。
本发明所用的LB液体培养基的配方如下: 胰蛋白胨10g/L 、酵母提取物5g/L 、氯化钠10g/L。
实施例1
以青海弧菌为例，检测其进行前处理和不进行处理时对同一种物质的发光抑制率情况：
采用本发明的方法制备青海弧菌菌悬液：将青海弧菌在LB固体培养基上于22℃培养24h，将30个单菌落菌种接种到150ml液体LB培养基中，22℃振荡培养20h；取含有青海弧菌的液体培养基在4000r/min的离心条件下进行离心分离，再用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.9的菌悬液；
未经处理的青海弧菌直接配成OD为0.9的菌悬液。
将三氯甲烷0.1mg/L、溴氰菊酯0.02mg/L、四氯化碳0.02mg/L、铁0.25 mg/L分别于菌悬液按1:1的体积比混合，曝光10min后检测发光抑制率，其结果见表1。
从上表可以看出，经本发明方法处理后的发光菌其检测结果比未经处理的准确。
实施例2
本具体实施例采用如下步骤：
（1）将青海弧菌在LB固体培养基上于22℃培养24h，将30个单菌落菌种接种到150ml液体LB培养基中，22℃振荡培养20h；
（2）将含有发光菌的液体培养基在4000r/min的离心条件下进行离心分离，再用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.9的菌悬液；
（3）采集日常城市水厂的出厂水，设3个平行，将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合，菌种的曝光反应时间统一控制在10min，反应10min后进行发光量的测定，测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为31.2%、29%、30.7%，平均发光抑制率为30.3%。
采用没有经过处理的青海弧菌对日常城市水厂的出厂水进行发光菌毒性试验，所得的发光菌抑制率为9.1%，由此可以，未经处理的发光菌在检测水质综合毒性时存在很大的偏差。
实施例3
本具体实施例采用如下步骤：
（1）将青海弧菌在LB固体培养基上于20℃培养22h，将单菌落菌种接种到液体LB培养基中，25℃振荡培养16h，接种时满足所得的发光菌的发光量在105-106之间；
（2）将含有发光菌的液体培养基在3500r/min的离心条件下进行离心分离，再用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.7的菌悬液；
（3）采集日常饮用水，设3个平行，将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合，菌种的曝光反应时间统一控制在15min，反应15min后进行发光量的测定，测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为42.4%、43.5%、42.2%，平均发光抑制率为42.7%。
实施例4
本具体实施例采用如下步骤：
（1）将青海弧菌在LB固体培养基上于25℃培养20h，将单菌落菌种接种到液体LB培养基中，20℃振荡培养24h，接种时满足所得的发光菌的发光量在105-106之间；
（2）将含有发光菌的液体培养基在3000r/min的离心条件下进行离心分离，再用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.4的菌悬液；
（3）采集某水库存水，设3个平行，将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合，菌种的曝光反应时间统一控制在12min，反应12min后进行发光量的测定，测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为43.7%、45.8%、44.9%，平均发光抑制率为44.8%。
Claims (4)
1.一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法，包括用发光菌对待测水样进行发光菌毒性试验，以检测其水质综合毒性，其特征是：所述发光菌为青海弧菌，在试验前对发光菌进行以下处理：
（1）固体培养：将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养，培养条件为：温度20-25℃，时间20-24h；
（2）液体培养：将固体培养得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中，在20-25℃下振荡培养16-24h；
（3）制备菌悬液：取上述步骤（2）的含发光菌的液体培养基，进行离心分离，然后用无菌生理盐水进行悬浮，得OD值为0.4-0.9的菌悬液；
（4）将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验，测定待测水样的发光菌抑制率，菌悬液与待测水样的体积比为1:1，反应时间为10-15min。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：液体培养时发光菌的接种量满足所得发光菌的发光量在105-106的要求。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（3）中离心分离的转速为3000-4000r/min。
4.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征是：步骤（1）的培养条件为：温度22℃，时间24h；步骤（2）的培养条件为：温度22℃，时间22h。
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120905 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |