CN102071244B - 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 - Google Patents
一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102071244B CN102071244B CN201010580823A CN201010580823A CN102071244B CN 102071244 B CN102071244 B CN 102071244B CN 201010580823 A CN201010580823 A CN 201010580823A CN 201010580823 A CN201010580823 A CN 201010580823A CN 102071244 B CN102071244 B CN 102071244B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- photobacterium
- toxicity
- bacteria
- luminescent bacteria
- luminescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 title claims abstract description 21
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 title claims abstract description 20
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 241000607568 Photobacterium Species 0.000 title abstract 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 85
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 8
- 238000009987 spinning Methods 0.000 claims description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 abstract description 5
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 230000028744 lysogeny Effects 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012250 organic toxicant Substances 0.000 description 2
- 231100001119 organic toxicant Toxicity 0.000 description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 2
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 2
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005892 Deltamethrin Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 229960002483 decamethrin Drugs 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- OWZREIFADZCYQD-NSHGMRRFSA-N deltamethrin Chemical compound CC1(C)[C@@H](C=C(Br)Br)[C@H]1C(=O)O[C@H](C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 OWZREIFADZCYQD-NSHGMRRFSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法,包括:将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养,然后将得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中进行培养;取含发光菌的液体培养基,进行离心分离,然后用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.4-0.9的菌悬液;将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验,测定待测水样的发光菌抑制率。本发明对发光菌进行了处理,使有机毒性物质和无机毒性物质均能够抑制发光菌的发光强度,从而提高了采用发光菌毒性试验检测水质毒性的准确性,解决了发光菌不能正确反应水质综合毒性的问题。本方法费时较少、灵敏度高、操作简便、结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种水质毒性的检测方法,具体涉及一种采用发光菌毒性试验准确检测水中有机物质和无机物质的毒性的方法。
背景技术
为了保障饮水安全,降低环境恶化给饮用水水质带来的威胁,人们常采用各种方法对水质进行评价,以有效的掌握饮用水引起的健康风险。
发光菌毒性试验是经典的综合生物毒性评价方法之一,因细菌生长周期短,对环境变化敏感等特点,其发光强度的变化程度与毒物质量浓度在理论上呈线性相关。以发光菌为代表的细菌类试验在国内外得到广泛的应用,许多国家已将发光菌方法作为标准的毒性测试方法。目前也有发光菌毒性仪应用在了水质预警检测上,作为水质安全的有力屏障之一。但已有研究表明,不论是海洋发光菌还是淡水发光菌,在检测水质中的无机物时非常灵敏、准确,但是在检测有机物时却表现出不同的效果。用发光菌对有机物进行检测时,相对于阴性对照,有机物不但不抑制发光菌的发光性,反而促进其发光性。由于水中可能含有有机和无机的多种物质,如果用传统的发光菌毒性试验进行水质综合毒性评价的话势必会使结果产生很大的偏差。由于这种原因,发光菌毒性试验在检测水中综合毒性时受到了很大的阻碍。
发明内容
本发明针对上述发光菌毒性试验存在的不足,提供了一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法,该方法对发光菌进行了处理,使有机物也同样的抑制其发光性,从而能同时检测水质中无机物质和有机物质的综合毒性,使检测结果更加准确。
本发明是通过以下措施实现的:
发明人在进行发光菌毒性试验时发现,有机毒物不但不会抑制发光菌的发光性,还具有促进作用,这样在测定含有有机和无机毒性物质的水样使会使测量结果发生错误,偏离真实数据,发明人经创造性实验,发现在将发光菌用于检测毒性物质前,先对其进行一定的培养,则可使发光菌对有机物质也同样具有发光抑制性,使检测水质毒性时结果更加准确。其具体技术方案如下:
一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法,包括用发光菌对待测水样进行发光菌毒性试验,以检测其水质综合毒性,其特征是:在试验前对发光菌进行以下处理:
(1) 固体培养:将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养,培养条件为:温度20-25℃,时间20-24h;
(2) 液体培养:将固体培养得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中,在20-25℃下振荡培养16-24h;
(3) 制备菌悬液:取上述步骤(2)的含发光菌的液体培养基,进行离心分离,然后用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.4-0.9的菌悬液;
(4) 将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验,测定待测水样的发光菌抑制率。
本发明所用的发光菌为青海弧菌。
本发明中,发光菌毒性试验的条件为:菌悬液与待测水样的体积比为1:1,反应时间为10-15min。
上述方法中,液体培养时发光菌的接种量满足所得发光菌的发光量在105-106的要求。
上述方法中,步骤(3)中离心分离的转速为3000-4000r/min。
进一步的,步骤(1)的培养条件为:温度22℃,时间24h;步骤(2)的培养条件为:温度22℃,时间22h。
有机毒性物质对发光菌起增强发光的原因可能是原先发光菌处于贫营养的状态,一开始接触有机毒物时将其作为碳源,本发明对发光菌进行了处理,发光菌就不处于原始的贫营养状态,使有机毒性物质和无机毒性物质均能够抑制发光菌的发光强度,从而提高了采用发光菌毒性试验检测水质毒性的准确性,解决了发光菌不能正确反应水质综合毒性的问题。本方法费时较少、灵敏度高、操作简便、结果准确,能够对水质污染状况做出判断,为突发性水质污染和水厂的水处理技术提供支持,降低由于饮用水暴露导致的风险。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述,应该明白的是,下述说明仅是为了解释本发明,并不对其内容进行限定。
本发明所用的LB固体培养基的配方如下: 胰蛋白胨10g/L 、酵母提取物5g/L 、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L。
本发明所用的LB液体培养基的配方如下: 胰蛋白胨10g/L 、酵母提取物5g/L 、氯化钠10g/L。
实施例1
以青海弧菌为例,检测其进行前处理和不进行处理时对同一种物质的发光抑制率情况:
采用本发明的方法制备青海弧菌菌悬液:将青海弧菌在LB固体培养基上于22℃培养24h,将30个单菌落菌种接种到150ml液体LB培养基中,22℃振荡培养20h;取含有青海弧菌的液体培养基在4000r/min的离心条件下进行离心分离,再用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.9的菌悬液;
未经处理的青海弧菌直接配成OD为0.9的菌悬液。
将三氯甲烷0.1mg/L、溴氰菊酯0.02mg/L、四氯化碳0.02mg/L、铁0.25 mg/L分别于菌悬液按1:1的体积比混合,曝光10min后检测发光抑制率,其结果见表1。
从上表可以看出,经本发明方法处理后的发光菌其检测结果比未经处理的准确。
实施例2
本具体实施例采用如下步骤:
(1)将青海弧菌在LB固体培养基上于22℃培养24h,将30个单菌落菌种接种到150ml液体LB培养基中,22℃振荡培养20h;
(2)将含有发光菌的液体培养基在4000r/min的离心条件下进行离心分离,再用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.9的菌悬液;
(3)采集日常城市水厂的出厂水,设3个平行,将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合,菌种的曝光反应时间统一控制在10min,反应10min后进行发光量的测定,测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为31.2%、29%、30.7%,平均发光抑制率为30.3%。
采用没有经过处理的青海弧菌对日常城市水厂的出厂水进行发光菌毒性试验,所得的发光菌抑制率为9.1%,由此可以,未经处理的发光菌在检测水质综合毒性时存在很大的偏差。
实施例3
本具体实施例采用如下步骤:
(1)将青海弧菌在LB固体培养基上于20℃培养22h,将单菌落菌种接种到液体LB培养基中,25℃振荡培养16h,接种时满足所得的发光菌的发光量在105-106之间;
(2)将含有发光菌的液体培养基在3500r/min的离心条件下进行离心分离,再用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.7的菌悬液;
(3)采集日常饮用水,设3个平行,将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合,菌种的曝光反应时间统一控制在15min,反应15min后进行发光量的测定,测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为42.4%、43.5%、42.2%,平均发光抑制率为42.7%。
实施例4
本具体实施例采用如下步骤:
(1)将青海弧菌在LB固体培养基上于25℃培养20h,将单菌落菌种接种到液体LB培养基中,20℃振荡培养24h,接种时满足所得的发光菌的发光量在105-106之间;
(2)将含有发光菌的液体培养基在3000r/min的离心条件下进行离心分离,再用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.4的菌悬液;
(3)采集某水库存水,设3个平行,将菌悬液与水样以1:1的比例进行混合,菌种的曝光反应时间统一控制在12min,反应12min后进行发光量的测定,测得待测水样三个平行样的发光抑制率分别为43.7%、45.8%、44.9%,平均发光抑制率为44.8%。
Claims (4)
1.一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法,包括用发光菌对待测水样进行发光菌毒性试验,以检测其水质综合毒性,其特征是:所述发光菌为青海弧菌,在试验前对发光菌进行以下处理:
(1)固体培养:将发光菌在LB固体培养基中进行固体培养,培养条件为:温度20-25℃,时间20-24h;
(2)液体培养:将固体培养得到的发光菌菌种接种到液体LB培养基中,在20-25℃下振荡培养16-24h;
(3)制备菌悬液:取上述步骤(2)的含发光菌的液体培养基,进行离心分离,然后用无菌生理盐水进行悬浮,得OD值为0.4-0.9的菌悬液;
(4)将待测水样与菌悬液混合进行发光菌毒性试验,测定待测水样的发光菌抑制率,菌悬液与待测水样的体积比为1:1,反应时间为10-15min。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征是:液体培养时发光菌的接种量满足所得发光菌的发光量在105-106的要求。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征是:步骤(3)中离心分离的转速为3000-4000r/min。
4.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其特征是:步骤(1)的培养条件为:温度22℃,时间24h;步骤(2)的培养条件为:温度22℃,时间22h。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010580823A CN102071244B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010580823A CN102071244B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102071244A CN102071244A (zh) | 2011-05-25 |
CN102071244B true CN102071244B (zh) | 2012-09-05 |
Family
ID=44030002
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201010580823A Expired - Fee Related CN102071244B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102071244B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103091272A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-05-08 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种利用大肠杆菌生长od值检测污水中锰含量的方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102507447B (zh) * | 2011-10-25 | 2013-12-18 | 中国科学院华南植物园 | 一种利用青海弧菌q67检测真菌毒素萎蔫酸的方法 |
CN103149199B (zh) * | 2012-12-25 | 2015-05-27 | 北京城市排水集团有限责任公司 | 水质急性毒性高通量快速测定试剂盒制作及使用方法 |
CN106596525B (zh) * | 2016-12-30 | 2020-01-21 | 深圳市世纪天源环保技术有限公司 | 一种水质生物毒性检测方法及装置 |
CN112540162A (zh) * | 2020-11-25 | 2021-03-23 | 江苏雅信昆成检测科技有限公司 | 一种水质生物毒性检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101131384A (zh) * | 2007-09-27 | 2008-02-27 | 上海交通大学 | 利用发光细菌检测水中急性生物毒性的方法 |
CN101551336A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-10-07 | 国家海洋环境监测中心 | 一种海洋溢油生物毒性快速检测方法 |
-
2010
- 2010-12-09 CN CN201010580823A patent/CN102071244B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101131384A (zh) * | 2007-09-27 | 2008-02-27 | 上海交通大学 | 利用发光细菌检测水中急性生物毒性的方法 |
CN101551336A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-10-07 | 国家海洋环境监测中心 | 一种海洋溢油生物毒性快速检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
马勇,等.《发光细菌急性毒性测试方法的优化研究》.《环境污染与防治》.2010,第32卷(第11期),48-52. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103091272A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-05-08 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种利用大肠杆菌生长od值检测污水中锰含量的方法 |
CN103091272B (zh) * | 2013-01-16 | 2015-01-14 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种利用大肠杆菌生长od值检测污水中锰含量的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102071244A (zh) | 2011-05-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102071244B (zh) | 一种采用发光菌毒性试验准确检测水质毒性的方法 | |
Anza et al. | Eutrophication and bacterial pathogens as risk factors for avian botulism outbreaks in wetlands receiving effluents from urban wastewater treatment plants | |
Degerman et al. | Effect of resource availability on bacterial community responses to increased temperature | |
Wikner et al. | Differences in consumption of allochthonous DOC under limnic and estuarine conditions in a watershed | |
La Rosa et al. | Benthic microbial indicators of fish farm impact in a coastal area of the Tyrrhenian Sea | |
Wang-Ngarm et al. | Physicochemical factors affecting the growth of Burkholderia pseudomallei in soil microcosm | |
CN101131384A (zh) | 利用发光细菌检测水中急性生物毒性的方法 | |
Mannas et al. | Occurrence of Vibrio and Salmonella species in mussels (Mytilus galloprovincialis) collected along the Moroccan Atlantic coast | |
CN102943113B (zh) | 大肠杆菌o157的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和试剂盒 | |
CN102864204B (zh) | 一种用于禽蛋中沙门氏菌检测的增菌培养液 | |
CN102329744B (zh) | 异养型硝化细菌、包含其的生物传感器、及检测水体毒性的方法 | |
Pianetti et al. | Determination of the viability of Aeromonas hydrophila in different types of water by flow cytometry, and comparison with classical methods | |
CN104145863A (zh) | 牡蛎养殖的生态净化方法 | |
CN102127588B (zh) | 一种定量检测水质毒性的方法 | |
Bomo et al. | Removal of fish pathogenic bacteria in biological sand filters | |
CN104673876B (zh) | 一种用于微生物检测的透明吸水凝胶及检测板 | |
CN103614452B (zh) | 一种复合培养基及其用于快速检测菌落总数的方法 | |
Rodríguez et al. | Macronutrients requirements of the dinoflagellate Protoceratium reticulatum | |
CN102146429B (zh) | 溶藻弧菌选择性鉴别培养基 | |
CN103525730B (zh) | 一种耳炎假单胞菌株及其应用 | |
CN102818801A (zh) | 一种测定atp的方法 | |
CN103157381A (zh) | 一种反渗透膜微生物污染的判定方法及应用 | |
CN103320353B (zh) | 一株指示菌株及其应用 | |
CN104561234A (zh) | 一种抗生素残留检测试剂盒及其应用 | |
CN108690863A (zh) | 一种利用便携式血糖仪测定污泥重金属微生物毒性的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120905 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |