CN102062768A

CN102062768A - 食品中4-甲基咪唑的快速检测方法

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Publication number: CN102062768A
Application number: CN2009102285387A
Authority: CN
Inventors: 赵丽; 陈树生; 刘玉花; 常青
Original assignee: TIANJIN FOOD RESEARCH INSTITUTE Co Ltd
Current assignee: TIANJIN FOOD RESEARCH INSTITUTE Co Ltd
Priority date: 2009-11-13
Filing date: 2009-11-13
Publication date: 2011-05-18

Abstract

一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，1、首先采用固相萃取方法对样品进行预处理：选用XTR固相萃取柱作为预处理的固相萃取柱，然后依次进行：预处理萃取柱、加入样品、冲洗填料和洗脱感兴趣的化合物；2、采用薄层色谱简化技术对洗脱物进行测定：展开剂将***、氯仿和甲醇按照比例混合。本发明的优点是：1、检测速度快。2、检测的精密度和准确度高。3、分析物的回收率高。4、有机溶剂的消耗低，降低了检测成本。5、不会出现乳化现象，可获得较为纯净的样品。6、操作简单，可同时处理多个样品，易于实现自动化。

Description

食品中4-甲基咪唑的快速检测方法

技术领域：

本发明涉及一种食品中物质的检测方法，特别涉及一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法。

背景技术：

4-甲基咪唑，英文名称：4-methylimidazole，简称4-MI，分子式：C4H6N2，分子量：82.11，熔点：52～56℃，沸点：263℃，具有碱性，能和无机酸生成稳定的盐，易溶于水、甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷，微溶于苯，不溶于烃类。

4-甲基咪唑是氨(铵)法生产的焦糖色的副产物。焦糖色又称酱色，是食用色素中的一种，它是一种世界范围内广泛使用的色素，其产销量是所有食用色素中最大的，全世界每年耗量约20万吨，其中90％以上是用在食品和饮料中。从消费区域看，在美国，约95％的焦糖色用于饮料；而在亚洲，酱油和食醋是焦糖色应用得较多的两类食品，在国家质检总局公布的酱油制假典型案例中，就有直接用焦糖色、水、工业食盐勾兑的酱油，而焦糖色中可能存在的4-甲基咪唑就引发了相关的食品安全问题。因此准确、快速地测定其中4-甲基咪唑的含量对于加强食品质量安全监督具有重要的意义。

4-甲基咪唑的分析方法主要包括样品预处理和测定两个部分。

1、样品预处理方法

液-液萃取是一种传统的样品预处理技术，它利用分析组分与样品中的干扰物质在互不相溶的两种溶剂中的分配系数不同而实现分离。萃取分离使用的有机溶剂易挥发，浓缩蒸干后，将残渣溶于小体积溶剂中，能提高测定试样的浓度。目前关于样品中4-甲基咪唑的提取方法以液液萃取为主，萃取溶剂有三氯甲烷-无水乙醇(80∶20)和三氯甲烷。也有文献报道用柱层析的预处理方法，洗脱剂为二氯甲烷。

2、测定方法

(1)比色法

比色法的仪器设备和操作都比较简单，而且费用少，分析速度较快，但是其相对误差较大。4-甲基咪唑与重氮化的苯磺酸起偶合反应，生成桔黄色偶合物，通过比色进行定量。

(2)纸色谱法

纸色谱法是利用滤纸作为载体，根据被分离物质在固定相和流动相之间的分配系数不同而得到分离。纸色谱法作为一种分离手段具有设备简单，操作方便、实验条件易于一致的特点，但是分离效果受固定相的影响较大。

冯彩群探讨了焦糖色中4-甲基咪唑的纸色谱分离检测方法，检测限为0.2μg。宋慧坚用纸色谱法测定了15种焦糖色中4-甲基咪唑的含量，方法的回收率为87-90％。

(3)薄层色谱法

薄层色谱法是一种重要的分离手段，经薄层色谱分离后的有效成分斑点与标准样品斑点进行面积比以求得样品中有效成分的含量。薄层色谱法的优点是设备简单、操作方便、分离速度较快，可以分析热不稳定化合物，应用范围广。

薄层色谱法是国家标准GB8817-88测定4-甲基咪唑的方法。样品在微碱性中用有机溶剂提取，经硫酸酸化后浓缩，在碱性硅胶板上点样展开，在展开剂(***∶氯仿∶甲醇(8∶2∶2))中展开后，用重氮化试剂显色，斑点呈桔黄色，根据斑点大小与颜色的深浅进行定量。

(4)气相色谱法

气相色谱法具有高柱效、高选择性，高灵敏度、用样量少、分析速度快等优点，目前已广泛应用于石油化学、化工、医药、农业、食品、环境等方面的科学研究和生产分析。它是分析复杂组分混合物的有利工具，已成为一种重要的分析手段。气相色谱法仍是最常用的4-甲基咪唑测定方法。

气相色谱常用的检测器有：热导检测器，火焰离子化检测器，电子捕获检测器，火焰光度检测器，质谱。其中常用于4-甲基咪唑的有以下两种：

(a)氢火焰离子化检测器

氢火焰离子化检测器是目前应用最广泛的色谱检测器之一，对含碳氢的有机化合物非常灵敏，能检测出10^-9g级的化合物，

Fuschs G和Sundell S用3％OV-1作为固定液，Chromosorb W作为担体制备填充色谱柱，用氢火焰离子化检测器对焦糖色中的4-甲基咪唑进行分析，方法的回收率为92-96％，相对标准偏差为2.0-2.9％，检测限为20ug/L。

Wilks RA等用7.5％Carbowax 20M和2％氢氧化钾作为固定液，Anakrom ABS作为担体制备填充色谱柱，以2-甲基咪唑作为内标物，用氢火焰离子化检测器对焦糖色中的4-甲基咪唑进行分析，方法的回收率为98-102％，相对标准偏差为1.4-1.9％，检测限为2ug/L。

邓贤勇^[27]用内装涂渍混合固定相(三份10％SE-30的102硅烷化白色担体与二份20％OV-210和1.0％PEG-20M的102硅烷化白色担体)的不锈钢色谱柱，以苯甲醇为内标物，用氢火焰离子化检测器测定了4-甲基咪唑合成产物中4-甲基咪唑的含量，方法的回收率为95-97％，标准偏差为0.27％。

(b)质谱

质谱法是先将分子离解成不同的带电荷的离子，然后对离子的质量和强度进行检测，从而获得分子结构信息的方法。虽然质谱具有很强的结构鉴定能力，却不具备分离能力，因而不能直接用于复杂混合物的鉴定。而把气相色谱色谱和质谱有机结合起来的联用技术，由于结合了二者的长处，因而是复杂混合物分析的有效手段，但是仪器的价格比较昂贵。

由于样品的微量性与复杂性，气相色谱-质谱联用仪因其较高的灵敏度和选择性及其特有的定性功能，也被应用于4-甲基咪唑的分析。Fernandes JO用气相色谱-质谱联用仪测定了焦糖色中的4-甲基咪唑，回收率为95-102％，相对标准偏差为1.4-1.8％。为了对4-甲基咪唑粗品和成品中各组分进行定量测定，刘仲能等用气相色谱-质谱联用仪对4-甲基咪唑进行了定性与定量的分析。

(5)液相色谱法

液相色谱也是一种常用的分析测定方法。现在一般采用色谱柱为C₁₈或C₈的反相液相色谱。欧洲药品标准实验室用反相液相色谱测定了焦糖色素中4-甲基咪唑的含量，色谱柱为C₁₈填充柱，回收率为100-104％，标准偏差为1.2-2.3％，检测限为40ug/L。Karangwa E等用高压液相色谱法分析羊的乳汁及氨化糖液的饲料中的4-甲基咪唑，色谱柱为Bonddapak C₁₈柱，回收率为83-100％，相对标准偏差在0.1-1.5％，检测限20ug/L。

Manda T等高压液相色谱法对氨化饲料中的4-甲基咪唑进行分析，色谱柱为C₈填充柱，回收率为89-96％，相对标准偏差在1.6-2.6％，检测限为10ug/L。还有文献报道用高压液相色谱-质谱联用对4-甲基咪唑进行分析，色谱柱为MetaChem Polaris C₁₈柱，检测限达到0.147ng。

(6)毛细管电泳法

毛细管电泳技术具有高效、快速、多模式、样品对象广、自动化程度高等特点。Kvasnicka F用毛细管等速电泳法测定了焦糖色中的4-甲基咪唑，方法的回收率为92.3-98.7％，相对标准偏差为1.3-2.8％。但是毛细管电泳技术作为一种现代分析技术，其测定结果的重现性比较差，所以此技术仍需进一步完善和发展。

发明内容：

本发明的目的就在于客服上述现有技术中存在的不足，而提供一种食品中4-甲基咪唑快速检测方法，该方法的设备简单、操作方便、检测周期短。

本发明的技术方案是：一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：1、首先采用固相萃取方法对样品进行预处理：选用XTR固相萃取柱作为预处理的固相萃取柱，然后依次进行：预处理萃取柱、加入样品、冲洗填料和洗脱感兴趣的化合物；2、采用薄层色谱简化技术对洗脱物进行测定：展开剂将***、氯仿和甲醇按照比例混合。

上述固相萃取的洗脱条件是：4mL四氯化碳淋洗柱子，5mL三氯甲烷洗脱柱子。

上述***、氯仿和甲醇的混合比例是：8∶2∶2.

上述薄层色谱简化技术采用充满碘蒸气的密闭玻璃容器作为薄层色谱简化装置。

上述薄层色谱简化技术采用聚酰胺作为薄层板固定相。

本发明的优点是：1、检测速度快。2、检测的精密度和准确度高。3、分析物的回收率高。4、有机溶剂的消耗低，降低了检测成本。5、不会出现乳化现象，可获得较为纯净的样品。6、操作简单，可同时处理多个样品，易于实现自动化。

具体实施方式：

一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，依次是：

1、首先采用固相萃取方法对样品进行预处理：选用XTR固相萃取柱作为预处理的固相萃取柱，然后依次进行：预处理萃取柱、加入样品、冲洗填料和洗脱感兴趣的化合物。洗脱条件是：4mL四氯化碳淋洗柱子，5mL三氯甲烷洗脱柱子。

2、采用薄层色谱简化技术对洗脱物进行测定：展开剂将***、氯仿和甲醇按照8∶2∶2的比例混合。采用充满碘蒸气的密闭玻璃容器作为薄层色谱简化装置。采用聚酰胺作为薄层板固定相。

Claims

1.一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：1、首先采用固相萃取方法对样品进行预处理：选用XTR固相萃取柱作为预处理的固相萃取柱，然后依次进行：预处理萃取柱、加入样品、冲洗填料和洗脱感兴趣的化合物；2、采用薄层色谱简化技术对洗脱物进行测定：展开剂将***、氯仿和甲醇按照比例混合。

2.根据权利要求1所述的食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：上述固相萃取的洗脱条件是：4mL四氯化碳淋洗柱子，5mL三氯甲烷洗脱柱子。

3.根据权利要求1所述的食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：上述***、氯仿和甲醇的混合比例是：8∶2∶2.

4.根据权利要求1所述的食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：上述薄层色谱简化技术采用充满碘蒸气的密闭玻璃容器作为薄层色谱简化装置。

5.根据权利要求1所述的食品中4-甲基咪唑的快速检测方法，其特征在于：上述薄层色谱简化技术采用聚酰胺作为薄层板固定相。