CN102036691A

CN102036691A - 消毒制剂

Info

Publication number: CN102036691A
Application number: CN2009801187239A
Authority: CN
Inventors: 皮特·劳伦斯·史蒂夫; 史蒂夫·克雷奇·弗兰克
Original assignee: Sunnywipes Pty Ltd
Current assignee: Sunnywipes Pty Ltd
Priority date: 2008-04-24
Filing date: 2009-04-24
Publication date: 2011-04-27
Also published as: US20120276217A1; AU2009240797A1; WO2009129585A1; CA2726196A1; EP2296713A4; EP2296713A1; NZ589519A

Abstract

本发明提供一种消毒制剂，该消毒制剂用于清洗及消毒人或动物的身体部位，尤其用于人手。典型地，该制剂包括乙醇、一种或多种包括桉油脑的精油、凝胶剂和水。本发明还提供人及动物身体部位的消毒方法以及该制剂的制备方法。

Description

消毒制剂

技术领域

本发明提供一种消毒制剂，该消毒制剂用于清洗及消毒人或动物的身体部位，尤其用于消毒人手。本发明还提供人及动物身体部位的消毒方法以及该制剂的制备方法。

背景技术

对于人及动物的身体部位尤其是对人手进行清洗或消毒的改进的方法和产品存在日益增大的需求。除了对于个人保持手清洁且消毒以降低病原体的转移可能性的一般需求以外，很多职业也需要在其正常工作期间清洗其手部。例如，那些提供人类健康保健的人、制备食品和饮料的人、处理动物的人、护理儿童及老人的人以及管理废物的人，这些领域的人都需要保证其手部定期清洗以避免可能给其自身或他人造成疾病病原体的传播。手部清洗的常规方法为使用肥皂及水以及在高级卫生工作场所中，采用洗手液或基于变性醇的擦手液(凝胶或泡沫)，其中很多可以包含抗菌活性试剂，诸如异丙醇、氯己定、三氯沙、季铵化合物、碘化物等等。很多这些抗微生物剂具有的问题是其对皮肤刺激且很多微生物产生突变以对抗菌剂产生抵抗力。因此，需要开发出作用快速的手清洗剂，该手清洗剂能表现出高效的杀死或灭活病原体作用，同时对皮肤相对柔和，以便可以定期使用(不仅受过训练专业人员而且普通大众也可使用)且不对皮肤产生如同过敏反应(尤其在手术前或手术后的患者)的刺激、炎症、干燥、龟裂、发红等等。由于在通常的手清洗剂中使用了一些添加剂，也有必要包含护肤脂和/或皮肤调节剂以保护和/或使皮肤补水。如果不要求额外使用这种护肤脂和皮肤调节剂将更好。理想的是，手清洗剂应当既不使皮肤脱水也不会对皮肤造成类似于过敏反应的刺激、炎症、干燥、龟裂、发红等等。

人们也希望在设置的范围内使使用的清洗用水减少到最小。目前在世界上部分地区，由于气候和降雨条件正在发生变化且缺水越发严重，日常手部清洗成为了一个特殊的议题。例如，在澳大利亚的部分地区，由于在至少一些地区的家庭限制水消耗，水的可利用率越发重要。人们也希望获得能够用于军事用途或诸如户外劳动、露营、丛林旅行等活动的情况的有效清洗方式，在这些地方仅可获得限量的水，且任何获得的水将用于消费，而非洗涤。

在本发明的上下文中，本发明人构思了无需用水即可使用的消毒剂。本发明人采用对于广谱病原微生物表现出意外效力的基本为天然的产品，且这些天然产物在人体和动物皮肤上反复使用不会产生任何严重的类似过敏反应的刺激、炎症、干燥、龟裂、发红等等的过敏反应。在根据本发明的制剂的主要成分包括一种或多种含有桉树脑的精油、醇、胶凝剂和水。

第202007002978号德国专利申请公开了一种凝胶组合物，其包括规定量的醇、增稠剂、至少一种选自镇静剂、治疗促进剂和/或抗炎剂的活性剂以及水。为了具有有效的消毒活性，该制剂似乎需要双胍类化合物、酚类化合物、碘化物等等，但在本发明的消毒中不需要这些。在本发明的优选的实施方案中，这些化合物都被排除在根据本发明的制剂之外，因此，消毒活性是由精油和醇以及水产生的，与有水存在的精油和醇的制剂相比，其令人吃惊地改善了消毒活性。

第2005/084717号国际专利申请公开了一种含有乙醇和含有定量桉叶脑的精油。尽管人们了解醇类诸如乙醇以及含有定量桉叶脑的精油具有清洁和消毒特性，但是仍不能够预想这些试剂可以结合到一种制剂中(如凝胶制剂)，因为诸如精油的试剂、乙醇、诸如蜡和树胶的胶凝剂、以及水一般被认为是不互溶的。此外，与无水的挥发油和醇的制剂相比，无法预想将水与这样的制剂相结合会有助于提高对抗病原微生物的活性。

发明内容

在一个实施方案中，本发明涉及一种消毒剂，包括：

(a)醇类；

(b)含有桉树脑的一种或多种精油；

(c)凝胶剂；以及

(d)水。

优选地，该制剂包括一种或多种C₁至C₁₀的醇，优选地为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种。尤其优选的是醇类含有分析级(A.R.)的乙醇。

优选地，该一种或多种精油选自桉树、茶树、月季叶、绿薄荷和迷迭香油，优选地是桉树油，以及最优选地为B.P.(英国药典)级的桉树油。在一个优选的实施方案中，该制剂进一步包括丁香油和/或甜橙油。

优选地，胶凝剂选自下组的一种或多种：植物、动物、矿物、石油或合成蜡、植物胶、淀粉、果胶、明胶、甲壳素、壳聚糖、胶原蛋白、硅胶、玉米淀粉、二醇类(glycols)和卡波姆(聚丙烯酸)。例如，植物胶包括刺槐豆胶、瓜尔豆胶、黄原胶、藻酸盐、琼脂、角叉菜胶(carageenan)、β-葡聚糖、结冷胶、***树胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、刺槐豆胶、乳香胶、亚麻车前籽胶、云杉树脂汁、印度树胶和葡甘露聚糖以及植物、动物、矿物、石油或合成蜡包括蜂蜡、虫胶蜡、鲸蜡、羊毛脂、杨梅蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、蓖麻蜡、梧牙草蜡、霍霍巴油、小冠巴西棕榈蜡、米糠蜡、大豆蜡、纯白地蜡、褐煤蜡、地蜡、固体石蜡、微晶蜡、聚乙烯蜡、化学改性蜡、费托蜡、取代酰胺蜡和聚合α-烯烃。

尤其优选地，凝胶剂为“安海达诺蜡(Anhydro Wax)”。

在另一个优选的实施方案中，水与精油的体积比高至约1.5∶1。

在优选的实施方案中，制剂包括(体积比)从约0.1％到约5％的胶凝剂，约30％至约85％的醇以及5％至约30％的精油，优选是从约0.5％至约3％的胶凝剂、约60％至约80％的醇以及10％至25％的精油，并且尤其优选地是从约1％至约2％的胶凝剂、约70％至约75％的醇以及约10％至15％的精油。

在优选的实施方案中，本制剂还包括一种或多种润肤剂，诸如羊毛脂、矿物、植物和合成油脂和润湿剂中的一种或多种。例如，润湿剂可以包括甘油、丙二醇、三醋酸甘油酯、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇(melitol)和葡聚糖，且植物油可包括椰子油、霍霍巴油、乳木果、芒果乳油和棕榈油。

在一个实施方案中，制剂包括(按体积)约1％至约2％的凝胶剂、约72％的醇、约11％的精油、约1％至约2％的润肤剂和约14％的水。

在本发明的另一个实施方案中，还提供一种消毒剂，包括(按体积)：

(a)约65％至约75％的乙醇；

(b)约10％至约15％的桉树油；

(c)约0.5％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约4％的甘油；以及

(e)水。

优选地，水和精油的体积比达到约1.5∶1。

在一个优选的实施方案中，该制剂包括(按体积)：

(a)约72％的乙醇；

(b)约11％的桉树油；

(c)约1％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约2％的甘油；以及

(e)约14％的水。

在另一个优选的实施方案中，该制剂包括(按体积)：

(a)约73％的乙醇；

(b)约10％的桉树油；

(c)约1.5％的“安海达诺蜡”；

(d)约4％的甘油；以及

(e)约11.5％的水。

本发明还包括对人或动物身体部位进行消毒的方法，包括将按上述定义的制剂应用于身体的一部分。

在一个实施方案中，提供一种对人或动物身体部位进行消毒的方法，包括将制剂应用于身体部位，该制剂包括(按体积)：

(a)约65％至约75％的乙醇；

(b)约10％至约15％的桉树油；

(c)约0.5％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约4％的甘油；以及

(e)水。

在一个优选的实施方案中，在该方法中所使用的制剂包括(按体积)：

(a)约72％的乙醇；

(b)约11％的桉树油；

(c)约1％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约2％的甘油；以及

(e)约14％的水。

在另一个优选的实施方案中，在该方法中所使用的制剂包括(按体积)：

(a)约73％的乙醇；

(b)约10％的桉树油；

(c)约1.5％的“安海达诺蜡”；

(d)约4％的甘油；以及

(e)约11.5％的水。

优选地，该方法用于清洗人的手部。

在本发明的另一本实施方案中，提供了一种制备消毒制剂的方法，其包括将“安海达诺蜡”和桉树油结合以形成分散液，然后将其添加到乙醇、甘油和水的化合物中，缓慢混合以制得消毒制剂。

发明详述

在本说明书中的对于任何现有技术的引用不能，也不应该被视为在澳洲现有技术形成部分公知常识的承认或任何形式的建议。

在本说明书通篇和权利要求书中，除非文意另有所指外，否则术语“包括”，以及诸如“包含”和“含有”，应该理解为是指包括一个整数或步骤的设定的整数或步骤或组，而不是排除整数或步骤的任何其它整数或步骤或组。

在优选的实施方案中，消毒剂包括诸如C1到C10的醇，优选地选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种。该醇在皮肤接触时对于动物且尤其是人类应该是无毒的，因为该制剂的正常使用将接触到皮肤。优选地，该醇是分析纯(A.R.)的乙醇。优选地，该制剂包括醇，其体积含量为约30％至约85％，优选地约60％至约80％，更优选地约70％至约75％，最优选地约72％或约73％。

该制剂包括一种或多种含有桉树脑的精油和/或其馏分，其一般都是由新鲜、干燥或部分干燥的植物或植物源性材料的蒸馏物。精油可从诸如树叶、树枝、芽、茎、树皮、种子、果实、根、坚果或来自从一种或多种的植物等的成分获得。精油馏分可从精油或其组分的蒸馏、提纯、精炼等而获得。优选地精油和/或馏分选自以下的组：桉树、茶树、月季叶、绿薄荷和迷迭香油，尽管其它植物物种也可能会产生含有桉树脑化合物的精油，、优选地含有1，8-桉树脑、优选地油含量为20％至100％。在一个更为优选的实施方案中，使用BP级(在此其符合英国药典的要求)的桉树油。优选地精油中的桉树脑、优选地桉树油的重量含量为至少约60％，优选地为约75％至约85％。在优选的实施方案中，该制剂中的精油、优选地桉树油体积含量最好是约5％至约30％，优选地约10％至25％，更优选地约10％至约15％，最优选地约10％或约11％。

该制剂也包括一种或多种胶凝剂以使该制剂具备某些特性——即形成胶体，该胶体具有一定的固化度且表现出固体或半固体的特性。胶凝剂，其用以对该制剂进行增厚或构造一定程度的构造形态，诸如植物、动物、矿物、石油或合成蜡、植物胶、淀粉、果胶、明胶、甲壳素、壳聚糖、胶原蛋白、硅胶、玉米淀粉、二醇类和卡波姆(聚丙烯酸)都可以使用。例如，植物胶包括刺槐豆胶、瓜尔豆胶、黄原胶、藻酸盐、琼脂、角叉菜胶、β-葡聚糖、结冷胶、***树胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、刺槐豆胶、乳香胶、亚麻籽胶、云杉口香糖、印度树胶和葡甘聚糖以及植物、动物、矿物、石油或合成蜡，其包括蜂蜡、虫胶蜡、鲸蜡、羊毛脂、杨梅蜡、烛蜡、巴西棕榈蜡、蓖麻蜡、茅草蜡、霍霍巴油、小冠巴西棕榈蜡、米糠蜡、大豆蜡、蜡纯地蜡、褐煤蜡、地蜡、石蜡、微晶蜡、聚乙烯蜡、化学改性蜡、费托蜡、取代的酰胺蜡和聚合α-烯烃。为了用于本发明的制剂，凝胶剂在真皮使用中应无毒、基本上无刺激性和无过敏性。胶凝剂的体积含量为约0.1％至约5％，优选地约0.5％至约3％以及更优选地约1％至约2％。

尤其优选地，胶凝剂是石油蜡，其实例包括固体石蜡和微晶蜡。优选的石油蜡为一种名为“安海达诺蜡”的专利制剂，其从Intelisol Pty Ltd(1/57莫尔文街，贝斯沃特，维多利亚，3153，澳大利亚(电话号码+61(0)3 9729 4260))可以商购获得。如果本制剂中含有“安海达诺蜡”，其优选地的体积用量为约0.5％至约2％，优选地约1％至约2％，或优选地约1.5％。

本发明的制剂还包括水。优选地但非必要地，水与精油的体积比例为高至约1.5∶1。也就是说，在该制剂中含有一定含量的水，且其优选的上限，当按照体积计算时，不大于在该制剂中的精油体积的一倍半。典型地，如果消毒制剂含有水，当以体积计算时，水与精油的体积比为约0.5∶1。因此，无法预期高至约1.5∶1的比例可以用于本发明以制备均质化制剂。优选地，最好通过诸如微细过滤和/或蒸馏来去除病原体以将水纯化。

虽然并非必要，本制剂优选地包括一种或多种润肤剂，其通常通过改善皮肤水化性(即滋润皮肤)而有助于软化皮肤。合适的润肤剂的示例有羊毛脂、矿物油、植物油、合成油和润湿剂。润湿剂是吸湿剂，其能够形成氢键并吸水从而具有润湿的效果。例如，润湿剂可以包括甘油、丙二醇、三醋酸甘油酯、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇(melitol)和葡聚糖。植物油的示例包括椰子油、霍霍巴油、乳木果、芒果乳油和棕榈油。应用的润肤剂在皮肤上应用时均应无毒性，基本上无刺激性和无过敏性。

优选地，本制剂所含有的润肤剂的体积含量约0.1％至约5％，优选地约0.5％至约3％，更优选地约1％至约2％。在尤其优选的实施方案中，润肤剂是甘油，优选更易于商购的植物甘油，例如其体积含量约1％至约4％，优选地约1％至约2％或者优选地约4％。然而，应该理解的是，根据所选凝胶剂的性质，单一试剂或试剂组可能共同形成凝胶和润肤剂成分两者的功能。在添加的单个成分发挥两种功能的情况下，其在制剂中的体积含量可为约1％至约10％，优选地约2％至约8％，更优选地约3％至约5％。

在本发明的另一个优选的实施方案中，除非未另作说明的，制剂还含有另外的诸如精油的成分，其不包括大量的桉树脑(如丁香油、甜橙油)、其它抗微生物活性试剂、芳香剂、稳定剂等等在皮肤制剂中常规使用的试剂，其在皮肤使用中应该是无毒的，基本上无刺激性且非过敏性。

该制剂是消毒剂，其具有抗微生物活性，因此能够抑制微生物和其它病原菌的缓慢生长和/或细胞***，诸如细菌(革兰氏阳性和革兰氏阴性菌)、病毒、真菌、原虫、螨虫、藻类、线虫等等(统称为“植物群”)。应用于皮肤的溶液将杀死或灭活优选地为至少90％，更优选地为至少95％、尤其优选地为至少98％或99％、以及最优选地为至少99.5％或99.9％的皮肤上的植物群。本发明的优选制剂(包括乙醇、桉树油、“安海达诺蜡”、甘油和水)的优良的消毒特性有助于延长乙醇在皮肤上的存在。也就是说，应用本制剂后，桉树油和甘油组分延缓了乙醇成分的蒸发，从而使乙醇成分杀死存在于皮肤上的任何植物群并且在更长的时期内防止其再生长。常规消毒制剂含有有害化学品(如洗必泰)以获得这种持久的抗微生物活性。

本制剂与皮肤在生理上相容。除了消毒外，本制剂可以协助清洁皮肤(通过去除死皮细胞、油脂、污垢等)和/或处理小伤口及皮肤病(如，割伤、刮伤、擦伤、湿疹、皮炎)。本制剂可通过泵容器、罐或管来分装，或者可以以密封铂或层压塑料(聚丙烯)袋提供单一剂量的本发明制剂。在皮肤上使用足够量的制剂以使覆盖预清洗的手或皮肤。该制剂为“留置”应用和自然干燥。然而，过量的制剂可能会被用纸巾或干布(应在医疗/外科手术应用中应当是无菌的)擦除。

本发明的消毒制剂可通过以下方法制备，将胶凝剂和含有桉树脑的精油结合以形成分散剂，然后将其添加到醇、润肤剂(如果有的话)和水的混合物中，优选地缓慢地且轻轻搅拌以保证均匀且无曝气，实际上优选地以避免在制剂中混入空气。例如，可以使用真空混合技术来进行混合操作以尽量减少曝气。

本发明的优选的制剂可通过以下来制备：将“安海达诺蜡”和桉树油结合以形成分散剂，然后将其添加到醇、甘油和水的混合物中，轻轻搅拌。各组分可以按照上述量加入。

参考以下非限制性的实施例来对本发明进一步说明：

具体实施方式

实施例1 消毒凝胶制剂的制备

按照表1中所列的成分来制备制剂，其体积百分比表示如下。

表1

72％A.R.级乙醇

11％B.P.级桉树油

1.5％“安海达诺蜡”

1.5％甘油

14％的蒸馏水

凝胶的制备方法如下：将“安海达诺蜡”和桉树油混合以形成分散剂，然后将其加入到乙醇、甘油和水的混合物中，轻轻搅拌一小时以上。

实施例2 抗病毒活性检测(单纯性疱疹)

目的

为了在悬浮实验中，确定消毒产品、消毒手液对于抗单纯疱疹病毒1型是否为真实的，采用作出真实评价的公认标准。

材料与方法

A.病毒株

检测所使用的病毒是从ATCC获得的疱疹病毒1型。该病毒在使用前保存在液氮中。

B.细胞基质

该Vero细胞从ATCC获得。该Vero在使用前保存在液氮中。细胞在DMEM细胞生长培养基中解冻并进行亚培养。

C.检测产品

检测根据实施例1制备的产品。该样品所分配的实验室参考号为0802451。未稀释(neat)情况下检测样品。

D.实验设计

该设计可以概括为由进入检测产品的检测病毒的应用组成。

使用Vero和病毒细胞病变效应(CPE)观察法来分析检测或对照条件下的任何存活病毒。

E.试剂和供应商

1.DMEM培养基，由sigma提供

2.L-谷氨酰胺，由Sigma提供

3.胎牛血清(FBS)，由Sigma提供

4.胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(TEDTA)，由Sigma提供

5.平底微滴定板，由Crown Scientific提供

6.赫佩斯缓冲液，由sigma提供

7.磷酸盐缓冲液(PBS)，由ams Labs提供。

F.细胞基底的制备

1.所有工作在生物安全柜中进行。

2.通过将5毫升胎牛血清无菌混合至100毫升DMEM培养基中来制备Vero细胞生长培养基。

3.将Vero细胞***内容物倾倒入500毫升废液罐，并使用无菌技术，将大约2毫升TEDTA引入到该烧瓶中并用TEDTA彻底冲洗单层。随后将其抛弃并重复该过程。

4.将该烧瓶在37℃培养约3分钟，并每分钟检查该瓶，观察细胞是否从塑料中长出。用倒置显微镜对进展进行检查。

5.当所有的细胞分离，加入40毫升生长培养基并轻摇烧瓶以使细胞在培养基中悬浮。

6.无菌状态下，将烧瓶中的内容物倾倒入无菌培养皿的底部。

7 采用多通道移液管，将100微升的细胞悬液分配至每个孔中。

8.在温度37℃±1℃下，将平板在充有含5％CO₂的空气的CO₂培养箱中培养24小时。

G.葡聚糖凝胶柱的制备

1.通过将5克葡聚糖粉末与100毫升无菌蒸馏水混合来无菌制备葡聚糖凝胶的浆料。

2.将该混合物在4℃下放置过夜，然后在高压锅中在121℃下灭菌15分钟

3.无菌移出3毫升无菌凝胶，并将其放置于5ml注射器腔中。用PBS来平衡凝胶并在应用检测样品前排出。

H.进行病毒/消毒剂检测

1.从液态氮中移出病毒并在37℃±2℃下解冻。将0.2毫升的病毒悬浮液加入至1.8毫升准备的各个样品，接触5和10分钟的时间。

2.然后在5和10分钟，将0.6毫升的样品加入到凝胶柱。收集洗脱液并作为1∶10稀释液。在维持培养基中进一步系列稀释到10^-7。

I.无菌试验对照的制备

1.将0.2毫升病毒悬液加入1.8毫升维持培养基来制备阳性对照，按照产品检测同样的方法来进行进一步系列稀释。

2.将0.1毫升阳性病毒对照的10^-2稀释液加入到0.9毫升、产品细胞毒性对照的10^-2、10^-3稀释液中。然后该原料被用来检测病毒。

J.细胞毒性对照的制备

将0.2毫升维持培养基加入到1.8ml各个样品制备中。将0.6毫升混合物过凝胶柱。然后收集洗脱液并进一步在维持培养基中进行10^-2和10^-3稀释。

K.中性对照的制备

将病毒对照的0.1毫升的10^-3稀释液加入到细胞毒性对照的0.9毫升的10^-3和10^-4稀释液中。

L.病毒检测

1.通过将培养上清液倾析到微量滴定板培养抛弃盘来获得96孔板中汇合成片的单层Vero。

2.用PBS清洗平板一次。从检测样品的最高稀释倍数开始，将每100微升的稀释液分散至指定的4个孔。在37±2℃的湿润二氧化碳培养箱中培养1小时，用PBS洗涤一次该板并向各个孔中加入200μl维持培养基。该板培养过程遵循允许所有的检测和对照材料和所有检测对照。当所有的孔满了，将在96孔微滴定板更换，并将该板在37±2℃下在5％CO₂湿润培养器培养6天。

M.读取病毒滴定结果

1.培养期后，用显微镜检测板的病毒细胞病变效应(CPE)。

2.采用病毒滴定工作表来记录各个稀释的阳性孔和阴性孔。

N.病毒滴度的计算

用Reed & Muench LD50方法来测定病毒滴度的终结点。

结果

未处理的疱疹对照具有5.5的log₁₀滴定度(参见表2)。

在本研究中通过在室温下5和10分钟的接触时间来使所用病毒完全灭活(见表3和表4)。

在10^-2稀释下样品显示细胞毒性(见表5)。

产品在10^-3稀释下显示完全中和的迹象(表6)。

表2 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^5.5TCID₅₀(5.5log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表3 用产品处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

表4 用产品处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

表5 细胞毒性检测结果

计算病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C细胞毒性响应记录为“C”

表6 产品中和的结果

表7 处理后的病毒的Log₁₀下降

处理	滴度(Log₁₀)	下降(Log₁₀)
			病毒对照	5.5	-
5分钟处理	2.5	3.0
			10分钟处理	2.5	3.0

结论

这项研究清楚地表明，未稀释浓度(neat concentration)下的测试产品能够在室温下杀死1型单纯疱疹病毒，其在悬浮测试模型中的接触时间为5和10分钟(表7)。5和10分钟的接触时间后的病毒完全中和的证据(病毒滴度下降3.0log)表明，该5和10分钟接触时间测试符合TGO的54和54A条关于消毒剂的功效的规定。

实施例3 抗病毒活性检测(腺病毒)

使用在实施例2中所采用的方案，但是不同的是检测的是从实施例1的凝胶的ATCC抗病毒活性所获得的腺病毒2型。在这种情况下，从ATCC获得的MRC5细胞被用作细胞基质。对细胞进行解冻并在EMEM细胞生长介质中亚培养。

结果

未处理的腺病毒2型对照具有5.5的log₁₀滴度(参见表8)。

在本研究中通过在室温下的5和10分钟的接触时间的测试过程，使用的病毒被完全灭活(见表9和表10)。

样品在10^-2的稀释下表现出细胞毒性(表11)。

产物在10^-3稀释下表现出完全中和(表12)。

表8 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^5.5TCID₅₀(5.5log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表9 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

表10 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

表11 细胞毒性检测的结果

计算的病毒滴度＝10^2.5TCID₅₀(2.5log₁₀)

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C细胞毒性响应记录为“C”

表12 产物中和的结果

表13 处理后的病毒的log₁₀下降

结论

该项研究清楚地表明，未稀释浓度下的测试产品能够在室温下的悬浮测试模型的5和10分钟的接触时间下杀死腺病毒2型(表13)。5和10分钟的接触时间后病毒中和证据(病毒滴度下降3.0log)表明，该5和10分钟接触时间测试符合TGO的54和54A条关于消毒剂的功效的规定。

实施例4 抗病毒活性检测(人流感病毒)

目的

为了测定在悬浮检测中实施例1的凝胶制剂是否真实对抗人流感病毒A型，使用作出真实评价的公认标准。

材料与方法

A.病毒株

本研究中所使用的检测病毒为从ICPMR获得的人流感病毒A型(PR8株)。

B.细胞基质

MDCK细胞是从CSL Bioscience获得。在使用前MDCK细胞被保存在液氮中。解冻细胞且在DMEM细胞生长培养基中亚培养。

C.检测产品

检测根据实施例1制备的产品。该样品所分配的实验室参考号为0805139。未稀释(neat)情况下检测样品。

D.实验设计

该设计可以概括为由进入检测产品的检测病毒的应用组成。

使用Vero和病毒细胞病变效应(CPE)观测法来分析检测或对照条件下的任何存活病毒。

E.试剂和供应商

1.PBS被用于滴定血细胞凝集活性。其由Oxoid Australia Pty Ltd以预制的片剂形式提供，并按照生产商的指令制造。在使用前加入0.5％FBS。

2.在Alsever’s Solution(ams Labs制备)中的鸡红血细胞由IMVSVeterinary services提供。其在使用前用PBS洗涤三次并调节至0.8％v/v。

3.制备维持培养基的基质EMEM和所有所需补充物由Sigma Aldrich公司提供。

F.细胞培养基的制备

1.所有工作在生物安全柜中进行。

2.MDCK细胞培养物在EMEM培养基中生长。

3.将MDCK***内容物倾倒入500毫升废液罐，并使用无菌技术，将大约2毫升TEDTA加入到MDCK烧瓶中。轻轻转动该烧瓶以保证所有单层表面被TEDTA覆盖。

4.该烧瓶在37℃培养约30分钟，且每几分钟检查该瓶，观察细胞是否从塑料中长出。用倒置显微镜对进展进行检查。

5.当所有的细胞分离，加入40毫升MDCK生长培养基并轻轻摇晃烧瓶以使细胞在培养基中悬浮。

6.将等量的细胞悬浮液转移至两个无菌McCartney瓶。

8.在温度37℃±2℃下，将平板在充有含5％CO₂的空气的CO₂培养箱中培养24小时。

G.葡聚糖凝胶柱的制备

1.通过将5克葡聚糖粉与100毫升无菌蒸馏水混合来无菌地制备葡聚糖凝胶的浆料。

2.这种混合物被遗留在4℃下将该混合物放置过夜，然后在高压锅中在121℃下灭菌15分钟。

3.将3毫升消毒凝胶无菌移出，并将其放置于5ml注射器腔中。用PBS来平衡凝胶并在应用检测样品前排出。

H.病毒/消毒剂检测的进行

1.从液态氮中移出该病毒并在37℃±2℃下解冻。将0.2毫升的病毒悬浮液加入至1.8毫升的各个样品，准备1和3分钟的接触时间。

2.然后在1和3分钟，将0.6毫升的样品加入到凝胶柱。收集洗脱液并作为1∶10稀释液。在维持培养基中进一步系列稀释到10^-7。

I.无菌试验对照的制备

将0.2毫升病毒悬液加入1.8毫升维持培养基来制备阳性对照，进一步按照产品检测的同样的方法来进行系列稀释。

J.细胞毒性对照的制备

K.中性对照的制备

将病毒对照的0.1毫升的10^-3稀释液加入到细胞毒性对照的0.9毫升的10^-2和10^-3稀释液中。

L.病毒检测

1.通过将培养上清液倾析到微量滴定板培养抛弃盘来获得96孔板中汇合成片的单层MDCK。

2.用PBS清洗该平板一次。从检测样品的最高稀释开始，将每100微升的稀释液分散至指定的4个孔。在37±2℃的湿润二氧化碳培养箱中培养1小时，用PBS洗涤一次该板并向各个孔中加入200μl维持培养基。该板培养过程遵循允许所有的检测和对照材料和所有检测对照。当所有的孔满了，将在96孔微滴定板更换，并将该板在37±2℃下在5％CO₂湿润培养器培养6天。

3.使用血细胞凝集分析来检测实验中的任何存活的病毒。

4.为了检查血凝素活性，将另外0.1毫升的0.8％的洗鸡红血细胞加入到每个含有0.1ml测试上清液的孔。轻轻搅拌该板以混合红血细胞并在室温下放置45分钟。

M.读取病毒滴定结果

通过观测在孔底的红细胞(-)“底部”，为未产生血细胞凝集的孔计数，或通过观测在平板(+)底上均匀散布的红细胞层，为存在血细胞凝集的孔计数，以及通过观测病毒未生长(C)，为对MDCK细胞有细胞毒性的孔计数。血细胞凝集的存在看作是宿主中病毒复制的证据并相应地记录下来。记录各个稀释的阳性和阴性孔。

N.病毒滴度的计算

用Reed & Muench LD50方法来测定病毒滴定的终结点。

结果

未处理的人流感A型(PR8)病毒对照具有5.7的log₁₀滴度(参见表14)。

在本研究中通过在室温下1和3分钟的接触时间来使所用病毒完全灭活(见表15和表16)。

在10^-2稀释下样品未显示细胞毒性(见表17)。

产品在10^-2稀释下显示完全中和的迹象(表18)。

在不存在病毒的情况下洗涤的0.8％鸡红细胞固定并形成正常的“底部”。

表14 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^5.7TCID₅₀(5.7log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表15 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＜10^1.5TCID₅₀(＜1.5log₁₀)

表16 用产品处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＜10^1.5TCID₅₀(＜1.5log₁₀)

表17 细胞毒性检测结果

计算病毒滴度＜10^1.5TCID₅₀(＜1.5log₁₀)

表18 产品中和的结果

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C表示细胞毒性响应

表19 处理后的病毒LOG₁₀下降

处理	滴度(Log₁₀)	下降(Log₁₀)
			病毒对照	5.7	-
1分钟处理	＜1.5	＞4.2
			3分钟处理	＜1.5	＞4.2

结论

这项研究清楚地表明，未稀释浓度下的测试产品在室温下能够完全杀死人流感病毒A，其在悬浮测试模型中的接触时间为1和3分钟(表19)。1和3分钟的接触时间后的病毒中和的证据(病毒滴度下降大于4.20log)表明该1和3分钟的接触时间的测试显示了真实的性质。

实施例5 抗菌活性激发试验(TM110)

目的

为确定实施例1的凝胶制剂是否表现出对抗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的抗肠球菌的活性。

条件

试验菌：1.耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)

2.耐肠球菌的万古霉素(VRE)

测试浓度：未稀释

接触时间：30秒和1分钟

试验温度：环境温度

结果

表20 与凝胶制剂接触后存活的MRSA

CFU＝菌落形成单位

表21 与凝胶制剂接触后存活的VRE

CFU＝菌落形成单位

结论

当在上述条件下进行未稀释检测时，通过在30秒和1分钟的接触时间后4.8log的下降(杀死比率＞99.998％)，该样品成功地显示出对抗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的抗肠球菌的活性。

实施例6 抗菌活性激发检测(EN 1040：2006)

目的

为了测定实施例1的凝胶制剂是否表现出根据EN 1040：2006标准杀菌活性。

条件

试验菌：1.金黄色葡萄球菌ATCC6538

2.绿脓杆菌ATCC15442

接种物水平：约1-5×10⁸菌落形成单位(CFU)/mL

检测浓度：未稀释

接触时间：5分钟

检测温度：环境温度

结果

表22 与凝胶制剂接触5分钟后存活的菌

说明：

1.产品中和——对于两种检测菌有效的中和剂为T6(胰蛋白大豆培养基、软磷脂和吐温80的混合物)。

2.所有的对照和验证是符合要求的。

结论

本样品成功地显示出根据EN 1040：2006标准的杀菌活性。当在上述条件的未稀释检测中，该样品在对抗金黄色葡萄球菌ATCC6538时显示出大于5.66log的下降以及在对抗绿脓杆菌ATCC15442时显示出大于5.76log的下降。该样品需要5分钟的接触时间以符合可接受的根据EN 1040：2006标准所规定的杀菌要求的标准。

实施例7 抗菌活性激发检测(prEN 12054)

目的

为了测定实施例1的凝胶制剂是否表现出根据prEN 12054标准的杀菌活性。

条件

试验菌：1.绿脓杆菌ATCC15442

2.大肠杆菌NCTC10538

3.金黄色葡萄球菌ATCC6538

4.肠球菌ATCC10541

接种水平：约1-3×10⁸菌落形成单位(CFU)/mL

检测浓度：未稀释

接触时间：30秒和1分钟

检测温度：环境温度

表23 与凝胶制剂接触30秒和1分钟后存活的绿脓杆菌

表24 与凝胶制剂接触30秒和1分钟后存活的大肠杆菌

表25 与凝胶制剂接触30秒和1分钟后存活的金黄色葡萄球菌

表26 与凝胶制剂接触30秒和1分钟后存活的肠球菌

结论

本样品成功地表现出根据prEN 12054标准的杀菌活性。在上述条件的未稀释检测中，该样品在对抗绿脓杆菌ATCC15442、大肠杆菌NCTC10538、金黄色葡萄球菌ATCC6538以及肠球菌ATCC10541时，表现出大于5log的下降。该样品需要30秒的接触时间以符合可接受的根据prEN 12054标准所规定的杀菌要求的标准。

实施例8 消毒液体制剂的制备

采用与实施例1相同的方案来制备消毒液制剂，其含有如以下的表27中所列出的体积百分含量的组分。

表27

73％A.R.级乙醇

10％B.P.级桉树油

1.5％“安海达诺蜡”

4％甘油

11.5％的蒸馏水

实施例9 抗病毒活性检测(单纯性疱疹)

采用与实施例2中的相同的方案来测定实施例8的液体制剂对抗单纯性疱疹1型是否真实，不同的是细胞生长介质是M199(由sigma提供)。

结果

未处理的疱疹对照具有5.7的log₁₀滴度(参见表28)。

在本研究中通过在环境温度下5和10分钟的接触时间来使所用病毒完全灭活(见表29和表30)。

在10^-2稀释下样品未显示细胞毒性(见表31)。

产品在10^-2稀释下显示完全中和的迹象(表32)。

表28 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^5.7TCID₅₀(5.7log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表29 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(5.7log₁₀)

表30 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表31 细胞毒性检测的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表32 产品中和结果

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C细胞毒性响应

表33 处理后病毒的LOG₁₀下降

处理	滴度(Log₁₀)	下降(Log₁₀)
			病毒对照	5.7	-
5分钟处理	1.5	4.2
			10分钟处理	1.5	4.2

结论

该项研究清楚地表明，未稀释浓度下的测试产品能够在室温下的悬浮测试模型的5和10分钟的接触时间下杀死单纯疱疹病毒1型(表33)。5和10分钟的暴露时间后病毒中和证据(病毒滴度下降4.2log)表明，该5和10分钟接触时间测试符合TGO的54和54A条关于消毒剂的功效的规定。

实施例10 抗病毒活性检测(腺病毒)

采用与实施例3中的相同的方案来测定实施例8的液体制剂对抗腺病毒2型是否真实。

结果

未处理的疱疹对照具有4.5的log₁₀滴度(参见表34)。

在本研究中通过在室温下5和10分钟的接触时间来使所用病毒完全灭活(见表35和表36)。

在10^-2稀释下样品未显示细胞毒性(见表37)。

产品在10^-2稀释下显示完全中和的迹象(表38)。

表34 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^4.5TCID₅₀(4.5log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表35 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表36 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表37 细胞毒性检测的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表38 产品中和结果

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C细胞毒性响应

表39 处理后病毒的LOG₁₀下降

处理	滴度(Log₁₀)	下降(Log₁₀)
			病毒对照	4.5	-
5分钟处理	1.5	3.0
			10分钟处理	1.5	3.0

结论

该项研究清楚地表明，未稀释浓度下的测试产品能够在室温下的悬浮测试模型的5和10分钟的接触时间下杀死腺病毒2型(表39)。5和10分钟的暴露时间后病毒中和证据(病毒滴度下降3.0log)表明，该5和10分钟接触时间测试符合TGO的54和54A条关于消毒剂的功效的规定。

实施例11 抗病毒活性检测(人流感病毒)

采用与实施例4中的相同的方案来测定实施例8的液体制剂对抗人流感病毒A型是否真实，不同的是使用的接触时间为5和10分钟。

结果

未处理的人流感A(PR8)病毒对照具有5.0的log₁₀滴度(参见表40)。

在本研究中通过在环境温度下5和10分钟的接触时间来使所用病毒完全灭活(见表41和表42)。

在10^-2稀释下样品未显示细胞毒性(见表43)。

产品在10^-2稀释下显示完全中和的迹象(表44)。

表40 病毒对照结果

计算的病毒滴度＝10^5.0TCID₅₀(5.0log₁₀)

说明：在各个反应中病毒的存在记录为“+”

在各个反应中不存在病毒记录为“-”

细胞毒性响应记录为“C”

表41 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表42 用产物处理的病毒的结果

计算的病毒滴度＝10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表43 细胞毒性检测的结果

计算的病毒滴度＜10^1.5TCID₅₀(1.5log₁₀)

表44 产品中和结果

说明：+表示表现血细胞凝集的感染的宿主

-表示未表现血细胞凝集的感染的宿主

C细胞毒性响应

表45 处理后病毒的LOG₁₀下降

处理	滴度(Log₁₀)	下降(Log₁₀)
			病毒对照	5.0	-
5分钟处理	≤1.5	≥3.5

10分钟处理

≤1.5

≥3.5

结论

该项研究清楚地表明，未稀释浓度下的测试产品能够在室温下的悬浮测试模型的5和10分钟的接触时间下杀死人流感病毒A(表45)。5和10分钟的暴露时间后病毒中和证据(病毒滴度下降3.5log以上)表明，该5和10分钟接触时间表现出真实的性质。

实施例12 抗微生物活性激发检测(TM110)

目的

为了测定实施例8的液体制剂是否表现出对抗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的抗肠球菌的抗微生物活性。

试验菌：1.耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)

2.耐万古霉素的抗肠球菌(VRE)

检测浓度：未稀释

接触时间：30秒、1分钟及2分钟

检测温度：环境温度

结果

表46 与液体制剂接触后存活的MRSA

CFU＝菌落形成单位

表47 与液体制剂接触后存活的VER

CFU＝菌落形成单位

结论

当在上述条件下进行未稀释检测时，通过在30秒、1分钟和2分钟的接触时间后4log的下降(杀死比率＞99.99％)，该样品成功地显示出对抗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的抗肠球菌的抗微生物活性。

实施例13 抗微生物活性激发试验(EN 1040：2006)

目的

为了测定实施例8的凝胶制剂是否表现出根据EN 1040：2006标准杀菌活性。

条件

试验菌：1.金黄色葡萄球菌ATCC6538

2.绿脓杆菌ATCC15442

接种物水平：约1-5×10⁸菌落形成单位(CFU)/mL

检测浓度：未稀释

接触时间：5分钟

检测温度：环境温度

结果

表48 与凝胶制剂接触5分钟后存活的菌

说明：

1.产品中和——对于两种检测菌有效的中和剂是T6(胰蛋白大豆培养基、软磷脂和吐温80的混合物)。

2.所有的对照和验证是符合要求的。

结论

本样品成功地显示出根据EN 1040：2006标准的杀菌活性。在上述条件的未稀释检测中，该样品在对抗金黄色葡萄球菌ATCC6538时表现出大于5.48log的下降以及在对抗绿脓杆菌ATCC15442时表现出大于5.23log的下降。该样品需要5分钟的接触时间以符合可接受的根据EN 1040：2006标准所规定的杀菌要求的标准。

实施例14 经皮失水量评价

目的

在30分钟、2天、4天和7天，使用TEWA仪来评价实施例8的液体制剂对于皮肤含水量的影响并且与相同的受试者的未处理的皮肤相比较。

纳入本研究的标准

1.个体介于18岁至70岁。

2.在开始测试前一个月及测试期间，个体不得服用药物或就医。

3.个体已完成了由Dermatest托管的初步医疗史。

4.个体已经阅读、理解并签署了知情同意书。知情同意书存档并且可供在Dermatest的处所内进行测试。

5.个体理解使用说明书并愿意与该项目合作。

6.按照研究者的意愿，个人无任何干扰实验结果的皮肤病或全身性疾病。

7.个体能够与研究及调查人员配合并愿意完成本研究的全部项目。

排除在研究外的标准

1.正在就医的个体。

2.个体正在服用研究者认为将会掩盖或干扰实验结果的药物。

3.个体有任何对一般化妆品尤其是保湿剂的过敏史。

4.个体患有皮肤癌、黑色素瘤、红斑狼疮、牛皮癣、红斑、迟发性皮肤卟啉、***疾病，以及任何影响本实验结果的疾病。

5.个体被诊断为慢性皮肤过敏。

6.怀孕或哺乳期的女性志愿者。

7.个体在试验区有过多毛发。

8.个体已知对化妆品过敏。

知情同意书

每个受试者需要签署知情同意书，然后开始研究本研究项目的所叙述的原因、可能的不利反应、相关的风险和潜在治疗效果及其责任限制。每个受试者被分配一个永久的识别号码并完成了广泛的病历表。这些病历表连同已签署知情同意书，这些表格在Dermatest的档案室中可以查阅。

学会伦理委员会(IEC)

Dermatest Pty Ltd的IEC由5或更多个体组成，系根据ICH方针的药品优良临床试验规范来选择。IEC的名单在Dermatest Pty Ltd存档并在正常的办公时间内可从楼内调档。

方法学

评价程序采用独特的方法。生物物理测量，是预应用的(t＝0时)且在30分钟后进行单一应用。在2天、4天、7天还要进行读数。在每批次测量前，要求受试者在恒温的封闭环境(20℃+/-2℃)保持平衡。

湿度测量——Corneo仪

TM 210TEWA型号仪-Courage+Khazala

参考书目

Tewameter TM 210 Information and Operating Instructions(manual).

Trans epidermal Water Loss，Bioengineering of the Skin：Methods and Instrumentation，CRC Press 1995.

Dermatest SOP DESOP-030 Procedure for Determining Transepidermal Water Loss(TEWL).

研究设计

5名42至60岁之间的健康受试者入选本研究。为了对测试区进行预处理并为所有受试者维持一个稳定的局部治疗，受试者被要求在本研究开始前一周以及在本研究期间避免在试验区域使用除臭剂肥皂、保湿香皂或化妆品润肤霜。在一周的“冲洗”期间完成后，受试者被要求在规定的时间归还试验设备，由指定的研究人员开始进行研究。在研究日内，通过施用到手背将试验材料递送到测试区；充分洗净双手，然后在水下冲洗。每天重复10次，重复7天，白天为一小时的间隔。受试者不知晓所使用的材料的特性。生物物理测定采用t＝0的TEWA仪测定(预应用)。为了重复生物物理测量，受试者需要在随后的每个指定的时间返回实验室。

结果

从t＝0(预应用)至t＝30分钟(第一次洗涤)TEWL变化：5％

从t＝0(预应用)至t＝7天(第一次洗涤)TEWL变化：7％

结论

经过7天严格的重复应用，经皮失水量的下降达至最低，并且在试验条件下也没有皮肤刺激性的发病率。在初次洗涤的初期损失和7天损失之间无显着差异。没有任何迹象表明经常使用能减小皮肤的完整性。未在任何受试者上观测到不良影响或任何形式的不明原因的反应。

实施例15 皮肤刺激检测

1.0 目的

为长期使用设计的消费产品或原料可在适当条件下，证明是某些个体的接触致敏剂或刺激物。这正是重复损害皮肤过敏试验(RIPT)的目的以提供用以评价该刺激/致敏的评价的基础，如果其存在的话。

2.0 参考

实验对该方法进行了修改，受试者的数量为50而不是文献(Appraisal of the Safety of Chemicals in Food，Drugs and Cosmetics，由Association of Food and Drug Officials of The United States出版)所引用的200。在半封闭贴片条件下，本方法也采用9个诱导贴片而不是文献所引用的10个。

3.0 试验材料

3.1 试验材料描述

检测包括乙醇和桉树油的管(分配的CR实验室号E0730-A)。

4.0 小组选择(Panel Selection)

4.1 纳入本研究的标准

-个体目前未就医。

-个体没有在研究者的处理下会干扰实验结果的皮肤或全身疾病。

-个体没有任何会干扰或增加研究参与风险的急性或慢性疾病。

-个体将完成预备的病历表且身体状况良好。

-个体阅读、理解并签署与其所签署的特定类型有关的知情同意书文件。

-个体能够与研究及调查人员配合，愿意使用根据本方案所应用的试验材料，并完成本研究的全部项目。

4.2 排除在研究外的标准

-18周岁以下的个体。

-正在就医的个体。

-个体正在服用研究者认为将会掩盖或干扰实验结果的药物(局部或全身性)。

-个体患有可能干扰或增加研究参与风险的任何急性或慢性疾病。

-个体被诊断为慢性皮肤过敏。

-怀孕或哺乳期的女性志愿者

4.3 人员招募

小组选择是通过在当地报刊打广告、社区公告栏、电话邀约、电子媒体或其任何组合的方式完成。

4.4 知情同意书和病历

每个受试者需要签署知情同意书，然后开始研究本研究项目的所叙述的原因、可能的不利反应、相关的风险和潜在治疗效果及其责任限制。受试者签署知情同意书并署日期以表明其授权开始并确认理解所述内容。每个受试者被分配一个永久的识别号码并完成了广泛的病历表。

5.0 人口统计资料

6.0 设备

贴片描述：Parke-Davis Hypoallergenic Readi绷带(20×20毫米Webril贴在与40×40毫米胶布绷带的中心)或等同的，与贴片的纸背面的孔成对边直角修剪，让空气流通。

没有针的1mL容积的注射器。

7.0 步骤

-受试者被要求如到来受试组之前一样洗澡或洗漱。

-0.2毫升的试验材料被分配到一个半封闭、低过敏性贴片上。

-随后将贴片直接贴到肩胛下区皮肤的背面、中性线的右边或左边，并指示受试者不要弄湿或使试验区域被阳光直射。

-24小时后由受试者在家里将贴片去除。

-重复该程序，直到一系列的9次连续24小时的接触完成，每周一，周三和周五进行，连续三周。

-如果发生不良反应，测定红斑和水肿的区域。估计水肿是根据正常皮肤的轮廓来评价的。在应用二至九前仅记录反应且，下次检测日期采用应用九。如果发生不良反应立即通知委托方，如果必要的话确定处理方法。

-受试者则给予10-14天的休息时间之后，进行一次激发或重复剂量至先前未接触的试验区域。复测剂量相当于原来的九次接触中的任何一个。在应用后记录24和48小时反应。

-在九个致敏量和再测量间作比较。

-在研究结束时，皮肤科咨询医生修订该数据并证实所述结论。

8.0 结果

9.观察

在本研究过程中未注意到任何类型的不良反应。

10.结论

如本文所述，在半封闭条件下进行测试，根据参考资料，本试验材料可以被视为对皮肤的非主要刺激物和非主要致敏剂。

实施例16 比较例

样品描述

进行硬面带菌体试验以比较加水的试验溶液(A)和未加水的试验溶液(B)的抗菌活性。

“溶液A”，73∶18∶9(乙醇、桉树油(BP级)∶水 v/v/v)

按原样检测样品。

检测

硬面带菌体试验稀释度：未稀释

方法

AOAC方法991.47，991.48和991.49(猪霍乱沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌)

条件

温度：20±2.0℃

浓度：未稀释

土壤：有机(5％马血清)

接触时间：10min

结果

^*带菌体的最大允许数表示接种总数外的生长

对照结果

带菌体的菌回收率

cfu＝菌落形成单位

这些带菌体回收率符合方法要求

产品中和

有效的中和剂是T6(胰蛋白大豆培养基、软磷脂和吐温80的混合物)。这在实际检测前确认。

样品描述

“溶液B”，80∶20(乙醇∶桉树油(BP级))

按原样检测样品。

检测

硬表面带菌体试验稀释度：未稀释

条件

温度：20±2.0℃

浓度：未稀释

土壤：有机(5％马血清)

接触时间：10min

结果

^*带菌体的最大允许数表示接种总数外的生长

对照结果

带菌体的菌回收率

cfu＝菌落形成单位

产品中和

结论

根据本文所述条件检测，对于所有这三种检测有机体即猪霍乱沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌，“溶液A”符合AOAC硬表面带菌体试验要求。然而，对于这三种试验菌，不加水的“溶液B”不符合ACOC硬表面带菌体试验要求，表明水的加入对于抗菌活性具有显著的影响。

应该理解的是，本发明仅以实施例的方式描述，不偏离本发明的范围所作出的改变及增加在所附权利要求的限定之内。

Claims

1.一种消毒制剂，包括：

(a)醇类；

(b)一种或多种含有桉树油的精油；

(c)凝胶剂；以及

(d)水。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述醇类包括C₁至C₁₀醇中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的制剂，其中所述醇类包括甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的制剂，其中所述醇类包括分析级(A.R.)的乙醇。

5.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，其中所述一种或多种精油选自桉树油、茶树油、月季叶油、绿薄荷油和迷迭香油。

6.根据权利要求5所述的制剂，其中所述一种或多种精油含有桉树油。

7.根据权利要求6所述的制剂，其中所述桉树油为B.P.(英国药典)级。

8.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，进一步含有丁香油和/或甜橙油。

9.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，其中所述凝胶剂选自植物、动物、矿物、石油或合成蜡、植物胶、淀粉、果胶、明胶、甲壳素、壳聚糖、胶原蛋白、硅胶、玉米淀粉、二醇类和卡波姆(聚丙烯酸)中的一种或多种。

10.根据权利要求9所述的制剂，其中所述植物胶选自刺槐豆胶、瓜尔豆胶、黄原胶、藻酸盐、琼脂、角叉菜胶、β-葡聚糖、结冷胶、***树胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、刺槐豆胶、乳香胶、亚麻车前籽胶、云杉树脂汁、印度树胶和葡甘露聚糖。

11.根据权利要求9所述的制剂，其中所述植物、动物、矿物、石油或合成蜡选自蜂蜡、虫胶蜡、鲸蜡、羊毛脂、杨梅蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、蓖麻蜡、梧牙草蜡、霍霍巴油、小冠巴西棕榈蜡、米糠蜡、大豆蜡、纯白地蜡、褐煤蜡、地蜡、固体石蜡、微晶蜡、聚乙烯蜡、化学改性蜡、费托蜡、取代酰胺蜡和聚合α-烯烃。

12.根据权利要求9所述的制剂，其中所述凝胶剂为石油蜡。

13.根据权利要求12所述的制剂，其中所述凝胶剂为“安海达诺蜡”。

14.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，其中水和精油的体积比达到约1.5∶1。

15.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，含有体积比为约0.1％至约5％凝胶剂、约30％至约85％醇以及约5％至约30％精油。

16.根据权利要求15所述的制剂，含有体积比为约0.5％至约3％的凝胶剂、约60％至约80％的醇以及约10％至约25％的精油。

17.根据权利要求16所述的制剂，含有积比为约1％至约2％的凝胶剂、约70％至约75％的醇以及约10％至约15％的精油。

18.根据前述任意一项权利要求所述的制剂，进一步含有一种或多种润肤剂。

19.根据权利要求18所述的制剂，其中所述一种或多种润肤剂选自羊毛脂、矿物油、植物油、合成油和润湿剂。

20.根据权利要求19所述的制剂，其中所述植物油选自椰子油、霍霍巴油、乳木果油、芒果乳油和棕榈油。

21.根据权利要求19所述的制剂，其中所述润湿剂选自甘油、丙二醇、三醋酸甘油酯、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇(melitol)和葡聚糖。

22.根据权利要求18-21的任意一项所述的制剂，含有体积比为约1％至约2％的凝胶剂、约72％的醇、约11％的精油、约1％至约2％的润肤剂和约14％的水。

23.一种消毒制剂，含有如下体积比的成分：

(a)约65％至约75％的乙醇；

(b)约10％至约15％的桉树油；

(c)约0.5％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约4％的甘油；以及

(e)水。

24.根据权利要求23所述的制剂，其中水和桉树油的体积比达到约1.5∶1。

25.根据权利要求23或24所述的制剂，含有如下体积比的成分：

(a)约72％的乙醇；

(b)约11％的桉树油；

(c)约1％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约2％的甘油；以及

(e)约14％的水。

26.根据权利要求23或24所述的制剂，含有如下体积比的成分：

(a)约73％的乙醇；

(b)约10％的桉树油；

(c)约1.5％的“安海达诺蜡”；

(d)约4％的甘油；以及

(e)约11.5％的水。

27.一种对人或动物身体部位进行消毒的方法，包括将根据上述任意一项权利要求的制剂应用于所述身体部位。

28.一种对人或动物身体部位进行消毒的方法，包括将含有以下体积比成分的制剂应用于身体部位：

(a)约65％至约75％的乙醇；

(b)约10％至约15％的桉树油；

(c)约0.5％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约4％的甘油；以及

(e)水。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述制剂含有如下体积比的成分：

(a)约72％的乙醇；

(b)约11％的桉树油；

(c)约1％至约2％的“安海达诺蜡”；

(d)约1％至约2％的甘油；以及

(e)约14％的水。

30.根据权利要求28所述的方法，其中所述制剂含有如下体积比的成分：

(a)约73％的乙醇；

(b)约10％的桉树油；

(c)约1.5％的“安海达诺蜡”；

(d)约4％的甘油；以及

(e)约11.5％的水。

31.根据权利要求27-30的任意一项的方法，其用于对人手进行消毒。

32.一种制备根据权利要求23-26的任意一项的消毒制剂的方法，其包括将所述“安海达诺蜡”和桉树油结合以形成分散剂，然后将所述分散剂加入到所述乙醇、甘油和水的混合物中，同时轻微搅拌以制得所述消毒制剂。