CN102026650A - 预防早产的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及在人类女性中减少早产和流产风险的方法。特别地，本发明提供了通过施用松弛素降低***和提前分娩的方法。

Description

预防早产的方法

相关申请

本申请根据35U.S.C.119(e)要求2008年5月16日提交的美国临时专利申请No.61/127,888的权利，其通过引用以全部目的整体并入本文。

技术领域

本发明涉及通过施用松弛素在人类女性中降低***(cervicaldilation)和早产的方法。松弛素治疗特别适于倾向于早产的对象。

背景技术

松弛素是二硫键桥连的多肽激素，约6000道尔顿，在许多物种怀孕期间显示浓度显著增加。一些研究显示，松弛素在怀孕和分娩过程中通过重塑生殖道起到重要作用。

在怀孕和非怀孕女性(female)中，松弛素主要由黄体产生，也存在于男性的***中(Bryant-Greenwood(1982)，Endocrine Reviews 3，62-90；Weisse(1984)，Ann.Rev.Physiol. 46，43-52)。在女性中，其外周血中水平在促***的周期中突增后7到10天达到峰值，如果蜕膜产生另外的松弛素确实发生的话则继续上升(Stewart等人(1990)，J.Clin.Endo.Metab.70，1771-1773)。在怀孕过程中，如同源放射免疫测定所测量地，松弛素的血浆浓度在约第十周最高，随后渐渐减少，在怀孕剩余期间保持在约500pg/ml(Bell等人，(1987)，Obstet.Gynecol.69，585-589)。已使用来自猪松弛素基因的探针通过基因组克隆鉴定到人的松弛素基因形式(Hudson等人，(1983)，Nature 301，628；Hudson等人(1984)，EMBO J.3，2333；和美国专利No.4,758,516和4,871,670)。仅仅发现这些基因形式中的一种，称为H2，在卵巢的黄体中转录和表达，表明这是直接涉及怀孕生理的序列。

在动物中，已有描述称松弛素重塑生殖道使得利于生产过程，包括子宫颈成熟，妊娠子宫的子宫内膜增厚，以及增加该区域的血管形式和调节胶原合成(Sherwood(1994)The physiology of reproduction第二版)。其也已与泌乳相关联，一些报告显示松弛素对乳腺组织具有生长促进作用(Wright和Anderson(1982)，Adv.Exp.Med.Biol.143，341)。

怀孕过程中人松弛素的作用尚不清楚。人松弛素作用的体外研究表明，其抑制非怀孕子宫的子宫肌层收缩，但是不影响怀孕的子宫肌层(MacLennan(1991)，J.Reprod.Med.36，630-34)。迄今为止，没有报道人松弛素对子宫肌层的刺激作用。值得注意地，猪松弛素已显示出在人体中的作用，表明松弛素功能是物种特异性的。Evans等人在随机双盲带对照临床试验中利用猪松弛素作为子宫颈管内药丸，在松弛素组中观察到更多的颈管消失(effacement，变薄)和更短的分娩时间(Evans等人，(1983)，Am J.Obstet.Gynecol.147，410-414)。使用类似的研究设计，MacLennan等人将猪松弛素或安慰剂作为子宫颈管内凝胶施用(MacLennan(1986)，Obstet.Gynecol.68，595-601)。松弛素治疗组更可能进入自然分娩，随着松弛素的剂量增加子宫颈成熟有更大的变化。这些研究表明，猪松弛素可用于女性的引产。但是，猪松弛素在女性中可能具有免疫原性。

已经在对非怀孕女性的I期安全性研究中试验了***内施用的人松弛素，但是没有显示对子宫颈成熟有任何作用。该研究证明，人松弛素的施用安全且不良副作用极小。重要地是，用松弛素处理的女性中松弛素血清水平没有增加，表明松弛素对子宫颈没有作用可由剂量不够或方法不当来解释(Bell等人(1993)，Obstet.Gynecol.82：328-333；Brennand等人(1995)第二版International congress on the hormone relaxin，380-388)。根据松弛素在动物中的功能以及所观察到的猪松弛素能够在人体中促进子宫颈成熟，已经表明施用松弛素可用于在人体中促进分娩。

从末次经期日期算起(LMP)，大多数怀孕持续约40周的妊娠。在孕龄约37至42周时出生的婴儿认为是足月的。美国约有12.5％的婴儿(一年大于50万)在妊娠37周完成之前过早出生。早产是严重的健康问题，在美国占到新生儿发病率和死亡率的约85％。其占据了大部分的新生儿医疗保健成本，大部分是由于2％的美国女性产下非常早产的婴儿，其在妊娠32周完成前出生。

早产婴儿在其身体和器官***完全发育之前出生。这些婴儿经常很小，出生体重很低(小于2500克或5.5磅)，它们可能需要辅助呼吸、进食、与感染作斗争以及保持温暖。它们患新生儿健康综合征和永久性残疾的风险增加，例如智力迟钝、脑性麻痹、肺和胃肠问题、视力和听力丧失以及甚至死亡。早产婴儿比足月婴儿更可能出现的常见并发症包括但不限于呼吸窘迫综合征(RDS)、呼吸暂停、脑室内出血(IVH)、动脉导管未闭、坏死性小肠结肠炎(NEC)、早产儿视网膜病、黄疸、贫血、慢性肺病和感染。较晚的早产儿通常问题较少或轻微，但是约32至34周妊娠之前出生的婴儿可能具有很多并发症，从轻微的到严重的。早在24到27周出生的婴儿有可能存活，但是这些婴儿可能面对终生的健康问题。

由于尚未完全了解的原因，美国早产率在最近25年里增加了30％以上。这一增加大部分是由于辅助生殖技术产生的多胎妊娠的增加。根据这些方法怀孕的所有妊娠中约20％至25％导致双胞胎妊娠，其处于特别增加的早产风险中。约50％的双胞胎较早生产，导致37周的平均妊娠期，而单胎妊娠为40周的平均妊娠期。

迄今为止，没有可靠且安全的预防早产或提前分娩的处理。目前的方法包括自我照顾的方法，以减少感染以及营养学和心理学介入。此外，这些方法包括加强且频繁的出生前随访，以及控制早产风险因素。但是，这些方法无法显示出早产的明显减少。就早产子宫收缩来说，通常进行保胎(tocolytic)治疗。已描述了具有不同成功率和副作用的多种试剂例如硫酸镁、硝苯地平和特布他林。一些药物不是特别由食品与药品管理局(FDA)批准用于停止提前分娩中子宫收缩的，而是不按标签注明使用的。收缩抑制经常仅仅是部分的，安胎(tocolytics)仅可依赖于将出生延迟几天。该方法可用于为施用糖皮质激素药物例如倍他米松争取时间，其大大加速了胎儿肺成熟以降低呼吸窘迫综合征、脑室内出血、坏死性小肠结肠炎、感染和婴儿死亡的风险。糖皮质激素药物需要一到两天来发挥作用。也已经研究了抗生素通过抵抗感染预防早产的能力，但是没有证明有效。此外，已测试了***孕酮的使用以及孕酮的天然代谢物17α-己酸羟孕酮的注射(Fonseca等人(2007)，NEJM，357(5)，462-469；Romero(2007)，UltrasoundObstet.Gynecol.，30，675-686)。该方法基于以下发现，分娩发作与孕酮的生理性撤退有关。两种处理都有效停止子宫收缩，但是，由于相关的流产和死胎的增加，17α-己酸羟孕酮的安全性最近受到了FDA及其专家组的质疑(Meis等人，(2003)，NEJM 348(24)，2379-85；和FDA advisorycommittees：CDER 2006)。

因此，需要预防早产的安全有效的方法。本发明提供了这一方法以及额外的益处。

优选实施方案简述

本发明提供了与通过施用松弛素降低***相关的方法。这些方法可应用于降低早产和流产的风险以及延长妊娠期，其可导致婴儿的出生体重增加。在过去的十年中美国的医院里早产的数目显著增加。尽管预防这些早产进行了努力，但是迄今为止尚未发现无消极副作用的安全且有效的治疗。一些方法集中在自我护理方法，其可能在一些情况下有帮助，但是在另一些情况下不适用。因此，希望能提供安全有效的预防早产的新方法，本发明满足这一要求。因而，本发明提供了通过施用松弛素预防早产以及降低其风险的方法。本发明的一个优点是在倾向于早产的女性中施用松弛素很少或没有不良副作用。另一个优点是松弛素可与其他药物联合施用，例如安胎剂或孕酮，以提供更有效的预防胎儿早产的方法。因为安胎剂和孕酮影响子宫收缩，而松弛素预防***，这些治疗的组合提供了相比于已知方法更显著的改善。

在一个方面中，本发明提供了降低***的方法，其包括选择倾向于早产的女性，向该女性施用药学上有活性的松弛素的药物制剂。在一个优选实施方案中，本发明提供了降低***率的方法，其包括向怀孕人类女性施用包含药学上有活性的松弛素的药物制剂，以降低***率。另一个方面中，本发明涉及降低早产风险的方法，其包括选择倾向于早产的人类女性，和向该女性施用包含药学上有活性的松弛素的药物制剂。在优选实施方案中，本发明提供了降低早产风险的方法，其包括向怀孕人类女性施用包含药学上有活性的松弛素的药物制剂，以减少早产的风险。本发明还涵盖了降低流产风险的方法，其通过选择倾向于流产的人类女性，和向该女性施用包含药学上有活性的松弛素的药物制剂进行。在本方法的一个优选实施方案中，人类女性是怀孕女性。在本方法的另一个实施方案中，松弛素也可施用给妊娠前倾向于早产的女性。值得注意地，在本文所述方法中，松弛素可施用给表现出症状的怀孕女性，该症状包括但不限于小腹收缩、痛性痉挛；下腰钝痛(low dull pain in her back)；骨盆腔区域压力；胃痉挛；有***排出物；***出血和***水样液体泄漏。

在另一个方面，本发明提供了增加妊娠期长度的方法，其包括选择倾向于早产的怀孕女性，和施用药学上有活性的松弛素的药物制剂，其减少了早产的风险。本发明还涉及增加婴儿出生体重的方法，其包括选择倾向于早产的怀孕女性，和施用药学上有活性的松弛素的药物制剂给该女性从而通过增加妊娠期提高出生率。在本发明的一个实施方案中，松弛素可施用给表现出以下症状的怀孕女性，该症状包括但不限于小腹收缩、痛性痉挛；下腰钝痛；骨盆腔区域压力；胃痉挛；有***排出物，***出血和***水样液体泄漏。

用于本发明药物制剂的松弛素可以是，例如，纯化的、合成的或重组的松弛素。在本发明的一个实施方案中，松弛素是H2人松弛素。在另一些实施方案中，松弛素是H1人松弛素、H3人松弛素或松弛素激动剂。在另一个实施方案中，松弛素是合成的或重组的H2人松弛素。因此，可用合成或重组人松弛素的药物制剂治疗对象。在本发明的一个实施方案中，对象用合成H2人松弛素治疗。在另一个实施方案中，对象用重组H2人松弛素治疗。松弛素可通过许多不同途径施用给对象，包括但不限于静脉内、皮下、肌内或局部。在一个优选实施方案中，松弛素通过静脉内施用。在另一个优选实施方案中，松弛素通过皮下施用。在另一个实施方案中，通过脊椎注射施用松弛素。更具体地说，松弛素的药物制剂可以约0.1至500μg/kg对象体重/天的量施用给对象。因而，松弛素施用给对象使得保持约0.5至50ng/ml的血清松弛素浓度。

施用本发明方法所述的松弛素在具有提前分娩或早产风险迹象的女性中预防提前分娩或早产。此外，施用松弛素可导致出生时婴儿体重增加和/或出生时正常的婴儿体重。在本发明方法的一个实施方案中，松弛素从妊娠首三个月开始时施用直到分娩发作。在另一个实施方案中，松弛素从妊娠中三个月或妊娠末三个月开始时施用，直到分娩发作。在这些时间段内，松弛素可每天、每周或每月施用。

本发明还提供了用于在倾向于早产的人类女性中降低***速率的松弛素；用于在倾向于早产或流产的人类女性中降低早产和流产风险的松弛素；以及用于在倾向于早产的人类女性中延长妊娠期长度和增加婴儿出生体重的松弛素。

附图说明

在结合用于举例说明优选实施方案的附图进行阅读时能很好地理解本发明。但是，应了解本发明不限于附图中所公开的具体实施方案。

图1A显示大小与形状类似于胰岛素的肽类激素H2松弛素。图1B提供了人松弛素2(H2)的B链(SEQ ID NO：1)和A链(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列，X代表谷氨酸[E]或谷氨酰胺[Q]。

图2显示了汇集的松弛素和汇集的安慰剂组中随时间的平均血清松弛素浓度。

图3显示了汇集的松弛素和汇集的安慰剂组中所示时间点的平均总Bishop得分。

图4显示了汇集的松弛素和汇集的安慰剂组中随时间的***变化。

具体实施方式

概述

本发明是基于对怀孕女性静脉内施用人松弛素导致***速率显著降低的观察结果。***代表判定女性为做好身体准备进入***分娩的重要参数。出人意料地，本发明人发现，施用松弛素可用于在人类女性中抑制***。该发现与动物研究中得到的结果完全相反，在动物研究中施用松弛素增强了子宫颈成熟和扩张。值得注意地，过早地增加扩张增加了早产的风险。因此，抑制子宫颈的扩张提供了预防在妊娠足月到达前早产的方法，以及在妊娠早期阶段中预防流产的方法。通过预防早产，可延长妊娠期，以确保婴儿全面发育或者至少发育到婴儿器官的成熟水平，其足以使得婴儿在子宫外存活。

早产对于婴儿和母亲都有健康的风险，并且是昂贵的健康问题。早产儿需要特别的照顾，经常患有严重的疾病，并且可能经历终生的健康影响。除了这些身体上的限制外，早产还可能对婴儿和母亲有强烈的心理影响。尽管生产和新生儿医学上已有许多技术进步增加早产儿医学并发症存活和复原的机会，但是早产仍然是婴儿在其一岁之内死亡的首要原因之一。定义

术语“松弛素”表示本领域中公知的肽类激素(参见图1)。本文使用的术语“松弛素”涵盖人松弛素，包含完整的全长人松弛素或者保留生物活性的松弛素分子的一部分。术语“松弛素”还考虑了合成人松弛素和重组人松弛素，其包括合成H2人松弛素和重组H2人松弛素。该术语还涵盖了具有松弛素样活性的活性物质，例如保留生物活性的松弛素类似物以及其部分，以及竞争性取代松弛素受体例如LGR7或LGR8受体上结合的松弛素的物质。另外，本文使用的人松弛素的核酸序列不一定100％等同于人松弛素H2，而可以是与人松弛素H2有至少约40％、50％、60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。本文使用的松弛素可通过本领域技术人员已知的任何方法制备。这些方法的实例在例如美国专利No.5,759,807以及Büllesbach等人(1991)The Journal of Biological Chemistry 266(17)：10754-10761中描述。松弛素分子以及类似物的实例在例如美国专利No.5,166,191中有举例说明。

术语“***”表示子宫颈口(开口)和子宫颈管宽度从小于约一厘米加宽到约10cm的过程，其使得胎儿通过。

术语“子宫颈成熟”表示子宫颈准备好分娩的过程，例如使得子宫颈柔软变薄(即宫管消失)。

术语“早产”、“成熟前出生”、“提前出生”和“提前生产”表示在妊娠约37周完成之前出生，并且在说明书通篇可互换地使用。

术语“提前分娩”或者“过早分娩”表示在妊娠约37周完成前分娩发作，其特征在于子宫收缩或子宫应激性增加。术语“提前分娩”或“过早分娩”在说明书通篇中可互换地使用。

术语“流产”或“自发流产”表示在妊娠阶段天然或自发地终止妊娠，其中胚胎或胎儿不能存活，一般在人体中定义为妊娠约20周之前。这些术语在说明书通篇可互换地使用。

术语“婴儿”或“婴孩”表示生命最幼年期的人类孩子，特别是它们可以走路之前，通常为一岁以前。这些术语在说明书通篇可互换地使用。

术语“新生儿”或“新生婴儿”表示小于约一个月的人类婴儿。这些术语在说明书通篇中可互换地使用，包括早产儿、过熟婴儿和足月婴儿。

术语“约”在用于所陈述的值背景中时，涵盖超过或低于所陈述的值最多10％的范围(例如所陈述值的90-110％)。例如，约30mcg/kg/天的静脉内(IV)输注速率涵盖27mcg/kg/天至33mcg/kg/天的IV输注速率。

“治疗有效的”表示，与患者基线状态，或者未治疗或安慰剂治疗(例如不用松弛素治疗)对象的状态相比，会对患者导致可测得预期医学或临床益处的药学上有活性的松弛素的量。松弛素

松弛素是大小与形状类似于胰岛素的肽类激素(参见图1)。更具体地说，松弛素是属于胰岛素基因超家族的内分泌和自分泌/旁分泌激素。编码蛋白的活性形式由A链和B链组成，其由二硫键连接，两个链间二硫键和一个链内二硫键。因此，在二硫键的配置上，结构类似于胰岛素。对于人类，有三个非等位松弛素基因，松弛素-1(RLN-1或H1)、松弛素-2(RLN-2或H2)和松弛素-3(RLN-3或H3)。H1和H2具有高序列同源性。对于该基因，描述有编码不同同工型的两个选择性剪接转录变体。人体中H1的表达是不确定的。H2在生殖器官中表达，而H3主要在脑中表达。松弛素肽家族与其受体的进化是本领域公知的(参见Wilkinson等人(2005)BMC Evolutionary Biology 5(14)：1-17；和Wilkinson与Bathgate(2007)Chapter 1，Relaxin and Related Peptides，Landes Bioscience andSpringer Science+Business Media)。

松弛素激活两个特异性松弛素受体，即LGR7(RXFP1)和LGR8(RXFP2)。LGR7和LGR8是含有富亮氨酸重复的G蛋白偶联受体(LGR)，其代表独特的G蛋白偶联受体亚群。它们含有七螺旋跨膜结构域和大糖基化胞外结构域，与糖蛋白激素受体(glycoproteohormone)例如LH受体或FSH受体有远的亲缘关系。这些松弛素受体在心脏、平滑肌、***以及中枢和自主神经***中发现。有效的松弛素例如H1、H2，猪和鲸松弛素具有某些共有序列，即Arg-Glu-Leu-Val-Arg-X-X-Ile(SEQID NO：3)序列或结合盒。偏离该序列同源性的松弛素，例如大鼠、鲨鱼、狗和马松弛素显示通过LGR7和LGR8受体的生物活性减少(参见Bathgate等人(2005)Ann.N.Y.Acad.Sci.1041：61-76；Receptors for RelaxinFamily Peptides)。

松弛素在女性和男性中都有发现(参见Tregear等人；Relaxin 2000，Proceedings of the Third International Conference on Relaxin & RelatedPeptides(2000年10月22-27日，Broome，Australia)。在女性中，松弛素由卵巢的黄体、***产生，妊娠期间也由胎盘、绒毛膜和蜕膜产生。在男性中，松弛素由睾丸产生。***之后，由于由黄体产生，松弛素水平上升，在妊娠首三个月期间而不是妊娠结束时达到峰值。没有妊娠时，其水平下降。在人类中，松弛素在妊娠中起到下列作用：提高***活力、调节血压、控制心率和释放缩宫素和加压素。在动物中，松弛素扩宽耻骨，便于分娩，软化子宫颈(子宫颈成熟)和松弛子宫肌肉***。在动物中，松弛素还影响胶原代谢，抑制胶原合成以及通过增加基质金属蛋白酶提高其断裂。其还增加血管生成，并且是肾血管扩张剂。

松弛素具有生长因子的一般性能，能够改变***的性质和影响平滑肌收缩。已知在动物中H2主要在生殖组织中表达(参见美国专利No.5,023,321)并且涉及***。但是，本发明人发现，在人体中，松弛素导致相反的效果，事实上降低***速率。松弛素激动剂

在一些实施方式中，本发明提供了包括松弛素激动剂施用的方法。在一些方法中，松弛素激动剂活化一种或多种松弛素相关G蛋白偶联受体(GPCR)，其选自但不限于RXFP1、RXFP2、RXFP3、RXFP4、FSHR(LGR1)、LHCGR(LGR2)、TSHR(LGR3)、LGR4、LGR5、LGR6LGR7(RXFP1)和LGR8(RXFP2)。在一些实施方式中，松弛素激动剂包括Compugen的WO 2009/007848中式I氨基酸序列(通过引用并入本文，用于教导松弛素激动剂的序列)。

式I的肽优选7至100个氨基酸长，包含氨基酸序列：X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33；其中X1空缺或者是G或者是小天然或非天然氨基酸；X2空缺或者是Q或者是极性天然或非天然氨基酸；X3空缺或者是K或者碱性天然或非天然氨基酸；X4空缺或者是G或者小天然或非天然氨基酸；X5空缺或者是Q或S或者极性天然或非天然氨基酸；X6空缺或者是V或A或P或M或者疏水天然或非天然氨基酸；X7空缺或者是G或者小天然或非天然氨基酸；X8空缺或者是P或L或A或天然或非天然氨基酸；X9空缺或者是P或Q或天然或非天然氨基酸；X10空缺或G或天然或小非天然氨基酸；X11空缺或者是A或H或E或D或疏水或小或酸性天然或非天然氨基酸；X12空缺或者是A或P或Q或S或R或H或疏水或小天然或非天然氨基酸；X13空缺或是C或V或疏水天然或非天然氨基酸；X14空缺或是R或K或Q或P或碱性或极性天然或非天然氨基酸；X15空缺或是R或Q或S或碱性或极性天然或非天然氨基酸；X16空缺或是A或L或H或Q或疏水或小天然或非天然氨基酸；X17空缺或是Y或疏水或芳香天然或非天然氨基酸；X18空缺或是A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X19空缺或是A或疏水小天然或非天然氨基酸；X20空缺或是F或疏水或芳香天然或非天然氨基酸；X21空缺或是S或T或极性天然或非天然氨基酸；X22空缺或是V或疏水天然或非天然氨基酸；X23空缺或是G或疏水或小非天然氨基酸或由酰胺取代；X24空缺或是R或碱性天然或非天然氨基酸；X25空缺或是R或碱性天然或非天然氨基酸；X26是A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X27是Y或疏水或芳香天然或非天然氨基酸；X28是A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X29是A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X30是F或疏水天然或非天然氨基酸；X31是S或T或极性天然或非天然氨基酸；X32是V或疏水天然或非天然氨基酸；X33空缺或是G或疏水或小天然或非天然氨基酸或由酰胺取代；或者其可药用盐(SEQ ID NO：4)。在一些优选实施方案中，松弛素激动剂包括肽P59C13V(游离酸)的序列GQKGQVGPPGAAVRRAY AAFSV(SEQ ID NO：5)。在另一个优选实施方案中，松弛素激动剂包括肽P74C13V(游离酸)GQKGQVGPPGAA VRRA Y AAFS VGRRAY AAFS V(SEQ DD NO：6)的序列。人补体C1Q肿瘤坏死因子相关蛋白8(CTRP8或C1QT8)的其他衍生物，例如肽P59-G(游离酸Gly)GQKGQVGPPGAACRRA Y AAFSVG(SEQ ID NO：7)也考虑适用于本发明的方法。C1QT8的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示MAAPALLLLALLLPVGAWPGLPRRPCVHCCRPAWPPGPYARVSDRDLWRGDLWRGLPRVRPTIDIEILKGEKGEAGVRGRAGRSGKEGPPGARGLQGRRGQKGQVGPPGAACRRAYAAFSVGRRAYAAFSVGRREGLHSSDHFQAVPFDTELVNLDGAFDLAAGRFLCTVPGVYFLSLNVHTWNYKETYLHIMLNRRPAAVLYAQPSERSVMQAQSLMLLLAAGDAVWVRMFQRDRDNAIYGEHGDLYITFSGHLVKPAAEL.

本发明还涵盖了这些多肽的同源物，这些同源物可以是与示例性松弛素激动剂(例如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6)的氨基酸序列有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少85％、至少90％、至少95％或者更多直至100％同一性，如使用国家生物技术信息中心(NCBI)的BlastP软件使用缺省参数所确定的，任选地和优选地包括下列项：过滤开启(此选项使用Seg(蛋白)程序从查询中过滤重复或低复杂度序列)，评分矩阵为针对蛋白质的BLOSUM62，字长是3，E值为10，缺口成本为11，1(初始和(初始和扩展)。任选地和优选地，使用国家生物技术信息中心(NCBI)的BlastP软件使用缺省参数确定核酸序列同一性/同源性，参数优选包括使用DUST过滤程序，还优选包括E值为10，过滤低复杂度序列以及字长为11。最后，本发明还涵盖上述多肽的片段和具有突变的多肽，例如一个或多个氨基酸的缺失、***或取代，其为天然或人工诱导的，随机或靶向形式的。松弛素治疗导致***速率的降低

缺乏有力子宫收缩以及闭合完全的子宫颈维持妊娠。子宫颈用作防护侵入微生物的防护屏障以及用作分娩胎儿的结构屏障。子宫颈能力的缺乏导致早产，甚至是在没有分娩子宫收缩的情况下。但是，当子宫颈很硬时，有力的子宫收缩无法带来分娩。因此，子宫颈功能在妊娠期间随时间的变化对于成功的妊娠是决定性的。在分娩期间以及之后，子宫颈经历***重塑的显著过程，其分四个阶段：软化、成熟、扩张和修复(Word等人，2007 Semin.Reprod.Med.25(1)：69-79)。最初的软化阶段是缓慢的渐进过程，其特征为胶原合成和子宫颈生长的增加，并导致胶原原纤网络的重构。这一过程在妊娠的早期阶段提供了软化子宫颈的拉伸强度。在子宫颈成熟过程中，胶原浓度主要由于亲水糖胺聚糖合成增加而降低。在此阶段，拉伸强度降低，子宫颈开始消失(变薄)和扩张。分娩过程中的扩张不同于成熟期间的这一初始扩张过程，它是由于不同机制导致，其包括白细胞将蛋白酶和胶原酶释放进入细胞外基质。子宫颈重塑的最后阶段、修复在分娩后发生。

值得注意地，子宫颈成熟是***所必需的，已知两个过程都是按期成功分娩所需的。子宫颈成熟的标准度量是Bishop得分。其显示了子宫颈是如何***、开放和消失的(扩张和消失)，以及骨盆中子宫颈和婴儿位置有多低的等级，从而评估对***分娩的准备。子宫颈成熟通常在子宫收缩开始前几周就开始，表明女性早产和按期分娩是长的持续过程，而且分娩的子宫收缩是分娩过程中的晚期事件(Word等人，见上文)。松弛素已涉及在动物中通过促进子宫颈成熟和扩张促进生产过程。意外地，本发明人发现施用松弛素在人类女性中具有相反的作用，提供了降低子宫颈扩增速率的方法。基于此发现，松弛素(例如，人松弛素的或人H2松弛素)可施用给倾向于早产的怀孕女性，以降低***速率。松弛素可通过几种施用途径来施用，包括但不限于静脉内、皮下、肌内或局部施用或者通过脊椎注射。使用松弛素的治疗可早在妊娠首三个月开始直到分娩发作，或者，治疗可从妊娠中三个月或妊娠末三个月开始时开始直到分娩发作。松弛素治疗提供了预防早产或流产的方法

目前预防早产的方法是预防的策略和排除提前分娩的处理，早产的特征在于子宫收缩或增加的分娩前子宫应激性。引发早产的实际生理机制尚未清楚地确定，但是已显示受到例如下列因素的影响，***素合成、缩宫素释放、激素比(孕酮水平下降、***水平上升)、子宫组织的机械拉伸和子宫血流变化。在大多数情况下，提前分娩导致早产，因为迄今为止不存在停止分娩的高效且可靠的方法。因此，减少提前分娩的发生被认为是降低早产风险的决定性因素。所以，策略集中在教育医生和患者有关提前分娩的风险以及其早期检测的方法。这些包括注意提前分娩的典型症状，例如每小时发生超过六次的收缩，下腰钝痛，感觉到骨盆压力，腹泻，***小量出血或流血或水样***排出物。另外，对于具有提前分娩和生产高风险的女性，建议每周子宫颈评估，经***超声波检查，胎儿纤连蛋白检测(作为胎盘组织破坏的指示物)以及在家子宫活动监测(Weissmiller(1999)，American Academy of Family Physicians)。目前，对提前分娩的处理包括卧床休息、减少身体活动和使用安胎剂，以防止收缩，其在一些情况下有帮助，但是在另一些情况下不是充分的。

本发明提供了通过降低***速率而不是影响子宫收缩降低早产风险的新方法。值得注意地，子宫颈成熟和扩张被认为到期之前的子宫收缩，以及在提前分娩的生产之前(Word等人，见上文)。因此，施用松弛素特别适于预防***非常重要的情况。在另一些情况中，提前分娩过程中的子宫收缩导致***。施用松弛素也可适于降低扩张速率，从而防止出生。本发明中，松弛素可单独或者与改变收缩性的物质(例如安胎剂或孕酮)一起使用，提供了预防早产的更有效方法。

值得注意地，卵巢高刺激或者体外受精导致具有与正常妊娠相比提高的循环松弛素水平的妊娠，其由于存在增加的黄体组织。因为这些妊娠与高发生率的早产相关，建议松弛素血清水平的提高与早期分娩发作相关联(Weiss等人，(1993)Obstet Gynecol 82，821-828)。但是，这些妊娠中多个因素可在胎儿早熟风险增加中起作用。重要地是，如本发明方法中所述施用松弛素导致松弛素血清水平比这些妊娠中所观察到的水平高数倍。本发明人显示，在这些显著更高的水平下，松弛素减少了***，其为***分娩的必要条件，因此预防了早产。

本发明还涵盖了降低流产风险的方法。流产，在妊娠约20周之前没有明显原因的妊娠失败，是早期妊娠的最常见并发症。根据美国妇产科医师学会(ACOG)，约15％的已知妊娠以流产终结。但是，实际数量可能高得多，因为许多流产发生在妊娠的非常早期，以至于女性甚至不知道自己怀孕。大多数流产在妊娠12周之前发生，有时是由于胚胎的遗传问题，其通常与母亲无关。早期自发性流产的另一个原因可能是孕酮不足。在这些情况下，给予孕酮补充剂的处方，但是没有研究显示它们能够降低流产的风险。流产的其他原因，尤其是在妊娠的晚期，包括但不限于子宫畸形、子宫中的生长、子宫颈问题以及脐带或者胎盘的问题。尽管在多数情况下，流产与胎儿异常有关，但是妊娠约20周之前妊娠产物的丧失是病因学不明的病症。

目前，通过卧床休息处理孕妇中流产的高风险。流产经常表现出腹部痉挛或者***流血。其他症状包括但不限于，下腰痛或腹钝痛或刺痛，有或无腹部痉挛的***小量出血，从***流出的液体、组织或结块样物质，发烧和呕吐。减少流产风险的策略主要集中于减少身体活动和卧床休息，其经常使得预期的母亲变得虚弱。另外，在本发明所述的松弛素治疗之前尚不存在可靠的预防流产的方法。然而，本发明提供了通过施用松弛素预防流产以及降低流产风险的可靠方法。流产经常伴随子宫颈的变化例如***。因此，施用松弛素非常适合这些情况，因为其显著降低了***的速率，如本文所证明的。

由于通过施用松弛素预防提前分娩或流产，可增加妊娠期的长度。在有些情况下，施用松弛素可延长妊娠至足月，其是优选的，因为足月的婴儿具有较低的许多新生儿并发症的风险。由于母亲或婴儿的医学状况，例如先兆子痫、***流血或胎儿窘迫，足月之前的分娩有时是需要的。在这些情况下，可施用松弛素将妊娠延长到婴儿器官发育到足以确保婴儿存活的阶段。

新生儿存活机会的一个重要因素是出生体重。足月新生儿的平均出生体重为约7.5磅(3.2kg)，通常在约5.5-10磅范围内(2.7-4.6kg)。早产儿的出生体重分类如下：出生体重低于5lb 8oz(2500g)定义为低出生体重(LBW)；低于3lb 5oz(1500g)的体重是极低出生体重(VLBW)；和低于2lb 3oz(1000g)的体重是超低出生体重(ELBW)。LBW、VLBW和ELBW与婴儿中多个问题的较高风险相关，该问题包括但不限于脑瘫、败血症、慢性肺病和死亡。这些婴儿也具有较高的低体温风险，其可以是危险的。低于均值的出生体重经常在早产新生儿中观察到。因此，使用松弛素预防早产提供了增加新生儿出生体重的方法。值得注意地，有时也在足月婴儿中观察到低于均值的出生体重。在某些情况下，施用松弛素可用于延长怀孕至足月，以增加出生体重和存活机会。

本发明提供了通过施用松弛素减少早产和流产风险的方法以及增加怀孕期和婴儿出生体重的方法。松弛素(例如人H2松弛素)可通过多种施用途径施用给倾向于早产的女性，该施用途径包括但不限于静脉内、皮下、肌内、局部施用或者通过脊椎注射。使用松弛素治疗可早在妊娠首三个月开始直至分娩发作，或者，治疗可从妊娠中三个月或妊娠末三个月初开始直至分娩发作。具有早产或流产风险的女性

具有提前分娩、早产或流产史的女性，以及怀有双胞胎或多胞胎的女性，或者体外受精(IVF)后怀有单个胎儿的女性具有较高的早产风险。此外，非白人类女性，以及低于18岁或者高于35岁的女性具有较高的提前分娩风险。营养不良、肥胖、怀孕前体重不足以及身高低于5英尺是增加这一风险的其他因素。另一个重要的方面是怀孕之间的时间，出生和下一次怀孕之间6至9个月的短时间与早产高发生率相关。此外，具有某些子宫或子宫颈异常的女性经常提前分娩。例如，子宫颈功能不全的女性，即在怀孕到达足月之前子宫颈在没有痛或子宫收缩的情况下开始开放(扩张)和变薄(消失)的病症。这些事件由于子宫颈虚弱而发生，其随着怀孕的发展在子宫压力增加下而开放。另外，某些生活方式因素，包括但不限于：产前护理晚或没有、吸烟、酒精消费、使用非法药物、家庭暴力、缺少社会支持、长时间处于极高的压力下和长工作时间，可能也增加早产的风险。怀孕期间的某些医学情况也可增加女性在足月前生产的可能性。这些包括异常胎盘形成、***、***炎、性传播传染病，以及可能其他感染、糖尿病、高血压、凝血疾病(血栓形成倾向)、***出血、婴儿的某些先天缺陷以及暴露于DES(己烯雌酚，用于治疗***不足情况的合成***)。

具有较高流产风险的女性包括大于35岁的女性，或者具有流产史的女性，以及多胞胎妊娠的女性。另外，激素缺乏或失衡，子宫或子宫颈异常，麻疹、衣原体或其他性传播传染病的感染，细菌性***炎，未控制的糖尿病，甲状腺问题、免疫***疾病、严重肾病和先天性心脏病可能增加了流产的风险。另外，生活方式的因素例如抽烟、喝酒或使用非法药物，以及某些药物例如粉刺药物易维甲酸、严重营养不良和暴露于环境和工作危险例如高水平辐射或毒性物质增加了自发性流产的可能性。松弛素组合物和制剂

松弛素和松弛素类似物配制成用于本发明方法的药物。可激活生物学上或药学上有活性的松弛素(例如合成松弛素、重组松弛素)或松弛素激动剂(例如松弛素类似物或松弛素样调节剂)与松弛素受体结合相关的生物学反应的任何组合物或化合物可用作本发明中的药物。关于配制和施用技术的综合细节在科学文献中有充分描述(参见Remington′sPharmaceutical Sciences，Maack Publishing Co，Easton Pa.)。可以根据本领域中已知的药品生产方法来制备含有药学上有活性的松弛素的药物制剂。含有本发明方法中所用的药学上有活性的松弛素或松弛素激动剂的制剂可配制用于以任何常规可接受途径施用，包括但不限于静脉内、皮下、肌内、局部或通过脊椎注射。下文给出了说明性的实例。在一个优选的实施方案中，静脉内施用松弛素。

当药物通过静脉内注射递送时，含有药学上有活性的松弛素或药学上有效的松弛素激动剂的制剂可以是无菌注射制剂的形式，如无菌的注射用含水或含油混悬剂。该混悬剂可以根据已知技术使用上文已提到的那些适当的分散剂或湿润剂和助悬剂进行配制。所述无菌注射制剂也可以是在无毒性的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液。在能使用的可接受的赋形剂和溶剂中，尤其是水和林格氏液(一种等张氯化钠)。另外，可方便地用无菌不挥发性油作为溶剂或混悬媒介。对于该目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯和甘油二酯。另外，脂肪酸如油酸也可用于制备注射剂。

用于局部施用的药物制剂含有药学上可接受的局部载体和适于局部施用的药物，并且可以是任何适于施用到身体表面的形式。制剂包括例如霜剂、洗剂、溶液剂、凝胶剂、软膏剂、糊剂等等。本领域技术人员已知的多种添加剂可包含在局部制剂中。例如，可使用溶剂，包括相对少量的醇类，来使得某些制剂组分可溶。在制剂中包含加入的透过增强剂也可以是所希望的。透过增强剂是局部药物递送领域技术人员已知的，和/或在相关教科书和文献中有述。参见例如Percutaneous Penetration Enhancers，Smith等人编著(CRC Press，1995)。局部制剂还可包含常规添加剂，例如遮光剂、抗氧化剂、香味剂、着色剂、胶凝剂、稠化剂、稀释剂、稳定剂、表面活性剂等等。还可添加其他试剂，例如抗微生物剂，以防止保存中的腐败变质，即，抑制微生物例如酵母和霉菌的生长。该制剂还可含有缓和刺激的添加剂，以减少或消除组合物的药学上有活性的成分或其他成分造成的皮肤刺激或表皮损伤的可能性。

可以使用本领域中熟知的药学上可接受的载体以适于口服施用的剂量配制用于口服施用的药物制剂。这类载体能将药物制剂配制成适合患者摄入的单位剂型，如片剂、丸剂、散剂、胶囊、液体制剂(liquids)、锭剂、凝胶剂、糖浆、膏剂(slurries)、混悬剂等。通过以下方法可以获得用于口服使用的药物制剂：将松弛素化合物与固体辅料混合，任选将所得的混合物粉碎，和在加入适合的另外的化合物(如果需要的话)后加工颗粒混合物以获得片剂或丸剂。适合的固体赋形剂是碳水化合物或蛋白质填充剂，其包括但不限于：糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来源于玉米、小麦、米、马铃薯或其它植物的淀粉；纤维素如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括***胶和西黄蓍胶；以及蛋白质，如明胶和胶原。如果需要的话，可以加入崩解剂或增溶剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐如海藻酸钠。也可以口服使用的本公开物的药物制剂是例如由明胶制成的推入契合胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和包衣如甘油或山梨醇制成的密封的软胶囊。推入契合胶囊能含有与填充剂或粘合剂如乳糖或淀粉、润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合的松弛素。在软胶囊中，松弛素化合物可以在存在或存在稳定剂的情况下溶解或混悬在适合的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。

本公开物的含水混悬剂含有与适于生产含水混悬剂的赋形剂混合的松弛素。这类赋形剂包括助悬剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和***胶、以及分散剂或湿润剂如天然存在的磷脂如卵磷脂、烯化氧(alkylnene oxide)与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，heptadecaethylene oxycetanol)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸或己糖醇的部分酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与衍生自脂肪酸或己糖醇酐的部分酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。含水混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂、一种或多种甜味剂如蔗糖、阿司帕坦或糖精。还可以调整制剂的容积渗克分子浓度。

油混悬剂可以通过将松弛素混悬在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或混悬在矿物油如液体石蜡中来配制。油混悬剂可以含有增稠剂如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂以提供可口的口服制剂。这些制剂可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来保护。

适合用于通过加入水来制备含水混悬剂的本公开物的可分散的粉末和颗粒能由松弛素以及分散剂、助悬剂和/或湿润剂和一种或多种防腐剂来配制。也可以存在另外的赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。

本公开物的药物制剂还可以是水包油型乳剂的形式。油相可以是植物油如橄榄油或花生油、矿物油如液体石蜡或它们的混合物。适合的乳化剂包括天然存在的树胶如***胶和西黄蓍胶、天然存在的磷脂如大豆卵磷脂、衍生自脂肪酸或己糖醇酐的酯或部分酯如失水山梨醇单油酸酯和这些部分酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。乳剂还含有甜味剂和矫味剂。糖浆和酏剂可以用甜味剂如甘油、山梨醇或蔗糖配制。此类制剂还可以含有缓和剂、防腐剂、矫味剂或着色剂。施用和给药方案

含有本发明方法中所用的药学上有活性的松弛素的制剂可以任何常规可接受途径施用，包括但不限于静脉内、皮下、肌内、局部或通过脊椎注射。施用将随着药物的药代动力学及其他性质和患者健康状况的不同而不同。下文给出了一般性指导。

本发明的方法在倾向于早产的人类女性中减少了***。另外，本发明的方法在倾向于早产或流产的女性中减少了早产和流产的风险，以及在这些对象中增加了怀孕期的长度和增加了婴儿出生体重。能够完成此目的的松弛素单独或者与其他药品或药物(例如孕酮或安胎剂)组合的量被认为是治疗有效剂量。对于此用途有效的给药时间安排和量，即“给药方案”依赖于多种因素，包括怀孕阶段，提前***的程度，提前分娩的严重性，不良副作用的严重性，患者健康的一般性状态，患者的身体状况，年龄等等。在为患者计算给药方案时，也考虑到施用的模式。给药方案必须还考虑药代动力学，即，吸收速率、生物利用率、代谢率、清除率等。根据这些原则，松弛素可用于在人类女性中降低***，优选倾向于早产的怀孕女性。

现有技术允许医生针对每个患者个体确定松弛素给药方案。例如，下文为松弛素提供的指导可用作确定在实施本发明方法时施用的含有药学上有活性的松弛素的制剂的给药方案的指导，即，给药时间安排和剂量水平。按照一般性原则，预期药学上有活性的H2人松弛素(例如合成的、重组的)的日剂量通常为约0.1至500μg/kg对象体重/天的量，更通常为约1至500μg/kg对象体重/天的量。对象也可接受约10至1000μg/kg对象体重/天的量的药学上有活性的H2人松弛素(例如合成的、重组的)。在一个实施方案中，松弛素的剂量是10、30、100和250μg/kg/天。在另一个实施方案中，这些剂量导致松弛素的血清浓度分别为约3、10、30和75ng/ml。在另一个实施方案中，继续松弛素的施用以维持松弛素血清浓度为约0.5至约500ng/ml，更有约0.5至约300ng/ml最优选约3至约75ng/ml。在另一个实施方案中，根据对象和病症，继续松弛素的施用以维持松弛素血清浓度为约0.1至约50ng/ml，更有约0.1至约30ng/ml，最优选约1至约20ng/ml。松弛素施用维持一段特定时间，或者只要需要抑制***和早产的一段时间。例如，根据患者，根据需要一次或多次任选重复治疗，松弛素治疗持续时间可维持约4小时至约96小时。或者，松弛素可施用数周。例如，可使用用于皮下施用的便携式输液泵来治疗具有早产风险的女性达数周以上，而不要求其留在医院。

松弛素制剂的单次或多次施用可根据需要的剂量和频率以及具有早产风险的女性对其的耐受来施用。该制剂应提供足以有效降低***的松弛素量。用于静脉内施用松弛素的典型药物制剂依赖于具体的治疗。例如，松弛素可通过单治疗(即没有伴随其他药物)或者与另一种药物(medication)例如孕酮、安胎剂或其他药品(drug)的联合治疗施用给患者。值得注意地，施用给患者的松弛素剂量可根据年龄、怀孕阶段、药物耐受性和伴随的药物和条件进行变化。实验

下列具体实施例旨在说明本发明，不应视为对所要求保护的范围的限制。实施例1评估人松弛素的安全性以及对子宫颈成熟作用的临床研究

临床研究概述。本研究设计成具有两个目的。第一个是确定在女性体内静脉内施用重组人松弛素24小时的安全性。第二个目的是确定通过该方法施用的高剂量的松弛素24小时是否可使得子宫颈成熟或者诱导分娩。主要效力终点为相比Bishop得分(其为复合的广泛接受的子宫颈得分度量(Bishop，1964))中基线的变化，。该得分具有5个成员，其全都对婴儿***分娩所需的子宫颈变化有贡献：子***、消失(effacement)、产位(station)、一致性(consistency)和胎位(position)。出人意料地，松弛素不促进子宫颈成熟或分娩发生，相反却在这些对象中降低***。

研究对象。研究对象是进入医院接受预定引产的妊娠≥40周健康的初产女性。研究对象的加入和排除标准在表1至列出。该研究遵照方案、国际协调会议(International Conference on Harmonization，ICH)、临床实践标准(GCP)、FDA、当地规章制度和BAS Medical，Inc.，的标准操作程序(SOP)进行。本发明人负责获得参与该研究的每个患者的知情同意。在签署知情同意表之前，向患者解释该研究的所有相关方面。知情同意书由当地伦理委员会批准，并且在进行除常规护理一部分之外的任何活动或治疗之前从患者处获得。这包括但不限于诊断或治疗程序的性能以及所研究药物第一剂量的施用。表1  研究对象

研究设计：研究分两部分进行：

部分A是多通道随机化双盲安慰剂对照剂量增加研究，其为18个≥40周妊娠预定引产的对象。测试7.5、25和75mcg/kg/天的松弛素的剂量。以6个为一群处理对象，分别随机分配为4∶2比例的接受松弛素或安慰剂。一旦复查了安全性数据，则将剂量增加到下一个剂量水平。

合格的患者在预定引产前至少24小时进入医院。在引产前24小时，通过连续静脉内输注施用松弛素或匹配的安慰剂。在所研究药物的整个施用过程中监测对象的血压和心率以及子宫收缩和分娩发作。进行胎儿无应激试验和心率监测，用于评价胎儿的状态。在基线、给药12小时和24小时，以及在产后第2天、第1周和第4周时抽取血样进行血清化学和血液学检测。在给药的基线、30分钟、1、4、6、12和24小时时提取样品评测血清松弛素水平，也抽取脐带血样品用于松弛素测量。在产后第2天也从研究对象抽取样品。在给药前和产后1和4周时抽取样品用于抗松弛素抗体产生的测量。在第2天评价新生儿的松弛素水平以及在第1和4周时评价其抗松弛素抗体的存在。

研究的部分B是多中心随机双盲安慰剂对照平行组研究50个≥40周妊娠并且预定引产的对象。以1∶1的比例将对象随机分配于部分A所确定的最适宜剂量松弛素或者安慰剂。同部分A，在引产前24小时，合格的对象以静脉内输注施用松弛素或者安慰剂。对于所有的评定，以与部分A中相同的形式评价对象和新生儿。

主要效力终点是在6、12和24小时(或者所研究药物施用结束时)时Bishop得分相对于基线的变化。得分为从0(没有任何子宫颈变化)到最大13，表示子宫颈完全扩张(＞5cm)、消失(＞80％)、软化、+1或+2位以及位置靠前(Bishop，1964)。也研究了许多次要效力终点：完全扩张的时间；Bishop得分变化＞3的对象比例；Bishop得分＞5的对象比较；Bishop得分＞8的对象比例；主动分娩的时间；分娩的时间(***或剖宫)；子宫收缩的频率；需要特布他林治疗或停止所研究药物(松弛素或安慰剂)输注的子宫过度刺激的发生率；自然分娩发生率；剖宫的比例；异常胎儿心率追踪的发生率；收缩血压和舒张血压相对基线值的变化；血清肌酸酐和根据Cockroft-Gault公式确定的预计肌酸酐清除率相对基线值的变化。

安全性。通过所报告和观察的不良事件、身体检查和12-铅ECG结果、生命指征测量以及临床实验室评估的结果评估安全性。在给药前，给药开始后12小时和24小时，分娩后2天、1周和4周时，获取血清临床化学样品。母亲生命特征包括体温、心率和血压。这些评估在筛选时，给药前，给药期间，给药后24-48小时和分娩后2天，1周和4周时进行。在给药后24-48小时期间的测量发生在28、32、36、40、44和48小时时。新生儿生命特征包括体温、脉搏、呼吸和血压。所有生命特征测量在分娩时、分娩后2天、1周和4周进行。

研究对象中的不良事件按照发作的时间记录，即，给药时期(0-24小时)，输注后24小时(24-48小时)和随后(＞48小时)。胎儿和新生儿中报告的不良事件也由处理组进行总结。对于实验室检验(血液学、血清化学、尿分析)、生命特征、身体检查和ECG主要统计指标，处由理组提供基线值与每个预定时间相对于基线值的变化。还进行收缩压和舒张压的后检定重复测定分析。

在安慰剂组中对象报道了一例严重的不良事件，头盆不称。该事件在给药后随访时期发生(＞给药后48小时)。不需要行动或药物，对象恢复。在3个胎儿中报告了严重的不良事件。汇集松弛素组中报告了两个事件(中等严重的胎儿缺氧)。两种情况都不需要行动或药物，不良事件与所研究药物无关。安慰剂组中有一例报告中等严重的急性胎儿窘迫。施用药物，胎儿从该事件中恢复。在8个新生儿中报告了严重的不良事件；7.5mcg/kg/天剂量组中一例，汇集的松弛素中4例，安慰剂组中3例。都与所研究药物无关，所有新生儿都从不良事件中恢复。这些事件包括2例报告溶血疾病，一例报告严重新生儿窒息、体重增加不足、颊横裂、高胆红素血症、脑缺血、缺少足够的自主呼吸、先天性心脏病、胎粪吸入综合征和结膜炎。

统计分析。对打算处理(Intent-to-treat，ITT)的群体进行分析，其全部由随机化对象组成，以及对符合方案(Per-protocol，PP)的群体进行分析，其全部由接受研究药物至少18小时(75％符合度)并且进行了Bishop得分基线评估和24小时(或处理结束)评估的随机化对象组成。对于效力的比较，来自接受B部分中所施用活性剂量的A部分的患者与来自B部分的患者汇集(汇集松弛素组)，来自A部分和B部分的全部安慰剂患者同上(汇集安慰剂组)。

松弛素ELISA  血清松弛素浓度的测量是基于酶免疫测定方法，其使用亲和纯化的山羊抗松弛素抗体涂覆的96孔微量滴定板。将稀释前对照和未知样品吸入微量滴定板的孔中，在2-8摄氏度下孵育，使所存在的任何松弛素与抗松弛素抗体结合。在过夜孵育后，清洗平板以除去任何非反应性血清成分。添加亲和纯化的兔抗松弛素过氧化物酶缀合物，使之在室温下摇动孵育3小时。所添加的缀合物识别任何结合的松弛素。用另一个清洗步骤除去未结合的蛋白质和试剂，然后向孔中添加底物四甲基联苯胺(TMB)溶液用以显色。20分钟孵育之后，添加2M硫酸等分试样，以停止显色反应，使用平板分光光度计在450nm测定吸光率(参考值650nm)。所产生的颜色强度与样品中松弛素的浓度成正比。利用四参数曲线拟合等式，根据测量20％人血清介质中纯化重组松弛素产生的标准曲线对松弛素水平定量。该测定具有96pg/ml的工作灵敏度。在该ELISA中分析以低、中和高水平掺入松弛素的对照，具有可接受的批次间精度，变异系数(CV)为7.21％至9.16％。该研究遵照食品和药物管理局(FDA)良好实验室操作标准(GLP)规定21CFR，58部分进行。

抗松弛素抗体检测  该测定是基于使用涂覆有松弛素分子的96孔微量滴定板的酶免疫测定方法。将稀释前对照和未知样品吸入微量滴定板的孔中，在室温下摇动孵育，使所存在的任何抗松弛素抗体与松弛素结合。在三小时孵育后，清洗平板以除去任何非反应性血清成分。识别任何IgG或IgM抗体的物种特异性抗IgG/IgM辣根过氧化酶缀合物与松弛素固相结合。用另一个清洗步骤除去未结合的蛋白质和试剂，然后添加底物四甲基联苯胺(TMB)溶液。十分钟孵育之后，添加2M硫酸等分试样，使用平板分光光度计在450nm测定吸光率(参考值630nm)。所产生的颜色强度与样品中抗松弛素抗体的浓度成正比。通过将光密度与预定截留光密度(cutoff optical density)值进行比较确定抗体阳性样品

结果。本研究中总共72个对象(A部分22个，B部分50个)，其中40个接受松弛素处理，32个接受安慰剂。所研究群体的平均年龄为24岁(范围：18-32岁)。大多数对象是白种人(85％，n＝61)。对象的平均怀孕前体重为60kg(范围：45-80kg)，40周妊娠。随机分配到A部分3个剂量水平和B部分2个剂量组中的对象之间人口分布类似。在筛选和预处理评估中，所有对象的Bishop得分均＜4。在筛选和给药前基线测定中，所有对象中的平均Bishop得分为2.1+1.5(均值+SD)。

部分A：A部分的第一人群中七个对象接受7.5/天的松弛素，3个对象接受安慰剂。来自这些对象的安全性数据以盲性的方式评价，认为是可接受的，因此将六个对象随机化为第2人群，用于接受25mcg/kg/天松弛素或安慰剂。一旦确认这些对象的安全性，就列入第三人群，分别对四个和两个对象给予75mcg/kg/天的松弛素和安慰剂。根据来自A部分22个对象的数据，选择75mcg/kg/天的松弛素剂量作为B部分中研究的剂量。

部分B：研究的这一部分总共招募50个患者，相等分布于75mcg/kg/天组和安慰剂组。72个对象中总共9个接受小于18小时的所研究药物输注。在4个对象中由于输液泵输送***的技术问题输注短时间间断，16个对象由于分娩发作(n＝12)或胎膜破裂(n＝4)而中止。汇集松弛素组中平均处理暴露为22.3+4.2hr(n＝29)，汇集安慰剂组中平均处理暴露为21.4+6.1hr(n＝32)。松弛素和安慰剂组中基线平均血清浓度为0.293和0.561ng/ml，反映出内源松弛素水平。松弛素组中松弛素浓度很快在给药的12小时时达到13.0ng/ml的峰值，而安慰剂中的水平保持不变。产后2天后，两个组的浓度都降至仅仅高于检测限(参见图2)。

汇集松弛素和安慰剂组中基线和所研究药物治疗第6、12和24小时时的平均Bishop得分显示于图3。基线处，汇集松弛素和安慰剂组的平均Bishop得分分别为2.2和1.9。下文表2总结了汇集安慰剂和汇集松弛素组中基线的Bishop得分，以及第6、12和24小时相对于基线的变化。两个处理组都显示在所研究药物输注第6、12和24小时时，Bishop得分相对于基线增加。汇集松弛素组平均增加1.55至3.26，安慰剂组为1.77至4.19。

在所观测的任何时间，汇集松弛素和安慰剂组之间没有统计上显著的差异。汇集松弛素和汇集安慰剂组之间的Bishop得分的各个成员也是类似的，一个参数(***)除外。

汇集安慰剂和汇集松弛素组从相同程度的***开始，测定扩张随时间的变化(图4)。安慰剂组显示***连续增加，从最初扩张到24小时时间点变化1.39cm。相反，松弛素组显示仅仅在松弛素施用的第一个小时轻微增加，随着时间恢复稳定。在24小时时间点，该组中的***仅从最初的扩张增加0.69cm。因此，与安慰剂组相比，在松弛素组中***显著降低(p＜0.024，t检验)，表明松弛素抑制***。部分A中所测试的较低的松弛素剂量组(7.5和25μg/kg/天)中总Bishop得分也与汇集安慰剂组中所见的没有差异(数据未显示)。与分娩相关的次要终点显示于表3。松弛素输注不显著影响***分娩的发生率或者时间、自然分娩的发生率或者分娩发作的时间。松弛素治疗对胎儿心率没有影响。表2  总Bishop得分-相比基线的变化

表2的备注。1)汇集松弛素组(75μg/kg/天)将部分A和B中相同活性剂量的对象组合在一起。汇集安慰剂组将部分A和B中施用安慰剂的对象组合在一起。2)研究中随机化的对象(ITT群体)包含在此表中。3)该表中使用针对CRF的总Bishop得分。如果总Bishop得分＞13，则使用‘13’。4)基线值定义为给药前的总bishop得分。如果给药前的值不可用，则使用筛选值。5)最后一次观察定义为最后一个可用的基线后值。6)变化计算为访问减基线。^＊获得P-值仅用以评估汇集松弛素组和汇集安慰剂组之间的差异。表3  汇集的松弛素和安慰剂组中与分娩相关的次要效力终点

结论。本发明人本研究的目的在于确定重组人松弛素在静脉内施用给怀孕人类女性时的安全性以及研究人松弛素对子宫颈成熟的作用。本研究报告了首先使用静脉内施用的人松弛素用于此适应症，并且证明在整个剂量范围内，松弛素显示没有相应的副作用。与松弛素在动物中的作用相反，在怀孕女性中，松弛素不导致作为子宫颈成熟标准度量的Bishop得分增加。反之，本研究显示，施用松弛素在这些女性中减少了***的速率。因此，松弛素可用于减少早熟***，表明其非常适于作为减少早产或流产风险的治疗。实施例2确定松弛素在具有早产风险的女性中效力的临床研究

研究概述和设计。进行随机化双盲安慰剂对照研究，以评估在具有早产***的女性中人松弛素在抑制子宫颈进一步扩张中的效力。具有此适应症的女性通常进入医院，并给予卧床休息。研究将招募这些个体，通过在医院静脉内输注或者通过使用不要求住院的皮下施用的输液泵施用松弛素。主要效力终点是早熟***开始和松弛素或安慰剂施用到分娩的时间延长。这一时间段比较松弛素治疗和对照组，进行统计分析。

在不脱离本发明范围和精神的情况下，本发明的多种修改和变化对本领域技术人员来说是显而易见的。尽管已经连同具体优选实施方案描述了本发明，但应了解，所要求权利的内容不应受到此具体实施方案过度的限制。事实上，本领域技术人员所理解的对所描述的用于实施本发明的方式的多种修改在权利要求的范围内。

Claims (33)

1.降低***速率的方法，其包括：将包含药学上有活性的松弛素的药物制剂施用给怀孕的人类女性，以降低***的速率。

2.根据权利要求1的方法，其中所述怀孕人类女性具有选自下列的症状：早期收缩、其小腹痉挛、其下腰钝痛、其骨盆腔区域有压力、胃痉挛、***排出物质、***出血和***水样液体泄漏。

3.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素是人H2松弛素。

4.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素以约0.1至500μg/kg对象体重的量施用给所述女性。

5.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素施用给所述女性以维持约0.5至50ng/ml的松弛素血清浓度。

6.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠首三个月开始时施用。

7.根据权利要求6的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

8.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠中三个月开始时施用。

9.根据权利要求8的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

10.根据权利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠末三个月开始时施用。

11.根据权利要求10的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

12.降低早产风险的方法，其包括：将包含药学上有活性的松弛素的药物制剂施用给怀孕的人类女性，以减少早产的风险。

13.根据权利要求12的方法，其中所述怀孕人类女性具有选自下列的症状：早期收缩、其小腹痉挛、其下腰钝痛、其骨盆腔区域有压力、胃痉挛、***排出物质、***出血和***水样液体泄漏。

14.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素是人H2松弛素。

15.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素以约0.1至500μg/kg对象体重的量施用给所述女性。

16.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素施用给所述女性以维持约0.5至50ng/ml的松弛素血清浓度。

17.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠首三个月开始时施用。

18.根据权利要求17的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

19.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠中三个月开始时施用。

20.根据权利要求19的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

21.根据权利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠末三个月开始时施用。

22.根据权利要求21的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

23.增加婴儿出生体重的方法，其包括：

a)选择具有早产风险的怀孕人类女性；和

b)向所述女性施用包含药学上有活性的松弛素的药物制剂，从而通过延长妊娠期来增加婴儿的出生体重。

24.根据权利要求23的方法，其中所述怀孕人类女性具有选自下列的症状：早期收缩、其小腹痉挛、其下腰钝痛、其骨盆腔区域有压力、胃痉挛、***排出物质、***出血和***水样液体泄漏。

25.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素是人H2松弛素。

26.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素以约0.1至500μg/kg对象体重的量施用给所述女性。

27.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素施用给所述女性以维持约0.5至50ng/ml的松弛素血清浓度。

28.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素在妊娠首三个月开始时施用。

29.根据权利要求28的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

30.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素在妊娠中三个月开始时施用。

31.根据权利要求30的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

32.根据权利要求23的方法，其中所述松弛素在妊娠末三个月开始时施用。

33.根据权利要求32的方法，其中所述松弛素施用直至分娩发作。

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