CN102015639A

CN102015639A - 用于稳定p53突变体的化合物

Info

Publication number: CN102015639A
Application number: CN2009801159648A
Authority: CN
Inventors: 艾伦·费尔斯特; 弗兰克·伯克勒; 安德烈亚斯·约尔格尔
Original assignee: Medical Research Council
Current assignee: Medical Research Council
Priority date: 2008-05-07
Filing date: 2009-05-07
Publication date: 2011-04-13
Also published as: WO2009136175A1; US20110059953A1; JP2011519908A; GB0808282D0; EP2274282A1

Abstract

本发明提供了用于稳定携带Y220C突变的p53蛋白的式(I)的化合物：其中X选自CRX和N；RN1选自H和C1-4烷基，其可以被SH或卤素取代；RC1选自H和SH；RC2选自H和可选取代的C1-7烷基；RC3选自H和可选取代的C1-7烷基；RX选自H，OH和NH2；RC4选自：(i)可选取代的C3-12含N杂环基；(ii)C(＝O)NRN5RN6，其中RN5和RN6独立地选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基，或RN5和RN6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C5-7杂环基；(iii)C(＝O)ORO1，其中RO1选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基；(iv)C(＝O)NHNHSO2RS1，其中RS1选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基；(v)OC(＝O)RC8，其中RC8选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基；(vi)OC(＝O)NRN7RN8，其中RN7和RN8独立地选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基，或RN7和RN8与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C5-7杂环基；和(vii)C(＝O)CH2NH2，C(＝O)NHNH2，CHC(CN)2，CHC(CN)C(＝O)NH2和羧基；RC5选自H，OH和NH2；或RC4和RC5与它们键接的碳原子一起形成式(II)的含5个或6个环原子的可选取代芳环：其中Q表示O，N或CRQ1＝CRQ2，其中RQ1和RQ2独立地选自H，OH和NH2；RC6选自H，OH和NH2；而RC7选自可选取代的C3-12含N杂环基，NHC(＝O)RC9，CH2NRN2RN3和NHC(＝S)NHRN4，其中RC9选自可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基，RN2和RN3独立地选自H，可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基，或RN2和RN3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C5-7杂环基，而RN4选自可选取代的C1-7烷基，可选取代的C3-20杂环基和可选取代的C5-20芳基，并当RC4和RC5没有键接在一起时，RC3可以另外地选自ORO2，其中RO2是C1-4烷基基团，和C(＝O)ORO3，其中RO3是C1-4烷基基团，而RC2可以另外地选自卤素。

Description

用于稳定p53突变体的化合物

技术领域

本发明涉及具有结合至p53蛋白分子的能力的化合物，以及这样的化合物的用途。

背景技术

肿瘤抑制蛋白p53是一种393个氨基酸的转录因子，其调节细胞周期并在癌症发展中起关键作用。响应于细胞应力，如UV照射、缺氧和DNA损伤，P53诱导与G1和G2细胞周期停滞和凋亡相关的许多基因的转录(参考文献1～3)。在约50％的人类癌症中，p53由于p53基因中的错义突变而被失活(参考文献4，5)。

p53的多功能性在其结构复杂性中反映。在p53四聚体中的每一个链由若干结构域构成。存在良好限定的DNA-结合和四聚合结构域以及高度活动的、很大程度上未形成结构的区域(参考文献6～11)。大多数p53癌症突变定位于该蛋白的DNA-结合核心结构域(DNA-binding core domain)(参考文献4)。这个结构域在结构上的特征在于，通过X-射线晶体学与其同族DNA复合(参考文献6)以及通过NMR在溶液中的其游离形式(参考文献12)。它由两个反平行β-折叠的中央β-夹心结构(β-sandwich)构成用作用于DNA-结合表面的基本支架。DNA-结合表面由两个通过锌离子稳定的β-转角环(β-turn loop)(L2和L3)和一个环-折叠-螺旋基序构成。这些结构元件一起形成富含带正电荷的氨基酸并与各种p53响应元件形成特异性接触的延伸DNA-结合表面。在人体癌症中最经常突变的6个氨基酸残基位于或靠近该DNA-结合表面(参见，在www-p53.iarc.fr上的p53突变数据库的释放R10)(参考文献4)。这些残基已被分类为“接触”残基(Arg248，Arg273)或“结构”残基(Arg175，Gly245，Arg249，Arg282)，取决于它们是否直接接触DNA或在维持该DNA-结合表面的结构完整性方面起的作用(参考文献6)。

然而，癌症相关的突变并不限于DNA-结合表面，而也发现于该蛋白的β-夹心区域。在DNA-结合表面外，最常见的突变是Y220C。它位于连接β-链S7和S8的转角起始处的β-夹心的远端。Tyr220的苯部分形成该β-夹心的疏水核心的一部分，而羟基基团指向溶剂。

越来越多的证据表明，在体温下仅边界地稳定的p53，已经演化为高度动态的和本质上不稳定的(参考文献12)。

已经使用p53的功能热稳定性合成变体，称之为“T-p53C”。这种变体具有取代M133L、V203A、N239Y和N268D。这种变体，其在其他方面具有基本上野生型的特性，已经用作载体以在形式上允许通过X-射线晶体学确定它们的结构的p53的各种已知的致癌突变。

具有Y220C突变的T-p53C的结构已经描述过(参考文献13)。在位置220处具有酪氨酸，Tyr220的苯部分形成β-夹心的疏水核心的一部分，而羟基指向溶剂。在突变体中，当存在半胱氨酸时，突变产生溶剂进入裂缝(cleft)，其在指定位置处用水分子填充，而使核心结构域的整个结构保持完整。突变后的结构变化连接两个相当浅的表面裂缝(预先存在于野生型中)，从而在T-p53C-Y220C中形成长的延长裂缝，其在突变位点具有最深的点。位于β-夹心的核心中的相邻疏水侧链的位置并未显著移动。然而，突变导致疏水相互作用丧失以及这些疏水核心残基的次最佳包装。然而，在整个结构中，不存在大于0.9

的Cα位移。

发明内容

本发明的发明人已经发现，许多含有吲哚、咔唑或相关支架的化合物结合至T-p53C-Y220C并稳定该蛋白，从而提高其熔化温度。

因此，在一个方面，本发明提供了一种用于稳定携带Y220C突变的p53蛋白的方法，该方法包括使该p53与式(I)的化合物(及其异构体、盐、溶剂化物、受保护形式和前药)接触：

其中X选自CR^X和N；

R^N1选自H和C_1-4烷基，其可以被SH或卤素取代；

R^C1选自H和SH；

R^C2选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^C3选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^X选自H，OH和NH₂；

R^C4选自：

(i)可选取代的C_3-12含N杂环基；

(ii)C(＝O)NR^N5R^N6，其中R^N5和R^N6独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基；

(iii)C(＝O)OR^O1，其中R^O1选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(iv)C(＝O)NHNHSO₂R^S1，其中R^S1选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(v)OC(＝O)R^C8，其中R^C8选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(vi)OC(＝O)NR^N7R^N8，其中R^N7和R^N8独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N7和R^N8与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基；和

(vii)C(＝O)CH₂NH₂，C(＝O)NHNH₂，CHC(CN)₂，CHC(CN)C(＝O)NH₂和羧基；

R^C5选自H，OH和NH₂；

或R^C4和R^C5与它们键接的碳原子一起形成下式的含5个或6个环原子的可选取代芳环：

其中Q表示O，N或CR^Q1＝CR^Q2，其中R^Q1和R^Q2独立地选自H，OH和NH₂；

R^C6选自H，OH和NH₂；而

R^C7选自可选取代的C_3-12含N杂环基，NHC(＝O)R^C9，CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，R^N2和R^N3独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基，而R^N4选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，

而当R^C4和R^C5没有键接在一起时，R^C3可以另外地选自OR^O2，其中R^O2是C_1-4烷基基团，和C(＝O)OR^O3，其中R^O3是C_1-4烷基基团，并且R^C2可以另外地选自卤素。

在另一方面，本发明提供了一种用于处理其中p53携带Y220C突变的细胞的方法，该方法包括使该细胞与式(I)的化合物接触。

以上方面可以在体内或在体外实现。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗具有其中p53携带Y220C突变的病变或肿瘤的主体(对象，subject)的方法，该方法包括向该主体给予式(I)的化合物。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗具有其中p53携带Y220C突变的病变或肿瘤的主体的方法中的式(I)化合物。

本发明进一步提供了一种确定一个分子与携带Y220C突变的p53的结合的方法，该方法包括在与式(I)的化合物竞争的情况下使该分子与所述p53接触，并测定所述化合物中的一种或另一种(其他，other)的结合或位移(displacement)。在本发明的这方面，所述化合物中的一种或两种可以携带标记，如放射标记、发色团(chromophore)、荧光团(fluorophore)或用于采用核磁共振技术进行竞争基¹⁹F-筛选的氟官能团。

本发明的另一方面提供了一种包含式(I)的化合物以及药用载体的药物组合物。

本发明另一方面提供了一种用于治疗方法中的式(I)的化合物。

本发明另一方面涉及式(I)中的新化合物。

附图说明

图1示出了在与本发明化合物PK083的复合体中的T-p53C-Y220C的晶体结构的各种图示。

具体实施方式

定义

烷基：如本文中使用的，术语“烷基”涉及(属于，pertain to)通过从具有1～20个碳原子(除非另外指出)的烃化合物的一个碳原子上去除一个氢原子获得的单价部分，其可以是脂芳族的或脂环族的，且其可以是饱和的或不饱和的(例如，部分饱和的，完全饱和的)。因此，术语“烷基”包括以下讨论的子类烯基，炔基，环烷基，环烯基，环炔基等。

在烷基基团方面，前缀(例如，C_1-4，C_1-7，C_2-7，C_3-7等)表示碳原子数，或碳原子数的范围。例如，如本文中所用的，术语“C_1-4烷基”，涉及具有1～4个碳原子的烷基基团。烷基基团的实例包括C_1-4烷基(“低级烷基”)和C_1-7烷基。注意，第一个前缀可以根据其他限制而变化；例如，对于不饱和烷基基团，第一个前缀必须是至少为2；对于环状烷基基团，第一个前缀必须至少为3；等等。

(未取代的)饱和烷基基团的实例包括但不限于，甲基(C₁)，乙基(C₂)，丙基(C₃)，丁基(C₄)，戊基(C₅)，己基(C₆)，庚基(C₇)，辛基(C₈)，壬基(C₉)，癸基(C₁₀)，十一烷基(C₁₁)和十二烷基(C₁₂)。

(未取代的)饱和直链烷基基团的实例包括但不限于，甲基(C₁)，乙基(C₂)，正丙基(C₃)，正丁基(C₄)，正戊基(戊烷基)(C₅)，正己基(C₆)和正庚基(C₇)。

(未取代的)饱和支链烷基基团的实例包括异丙基(C₃)，异丁基(C₄)，仲丁基(C₄)，叔丁基(C₄)，异戊基(C₅)和新戊基(C₅)。

烯基：如本文所用的，术语“烯基”涉及具有一个或多个碳碳双键的烷基基团。烯基的实例包括C_2-4烯基，C_2-7烯基和C_2-12烯基。

(未取代的)不饱和烯基基团的实例包括但不限于，乙烯基(-CH＝CH₂)，1-丙烯基(-CH＝CH-CH₃)，2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH₂)，异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH₃)＝CH₂)，丁烯基(C₄)，戊烯基(C₅)和己烯基(C₆)。

炔基：如本文所用的，术语“炔基”涉及具有一个或多个碳碳三键的烷基基团。炔基的实例包括C_2-4炔基，C_2-7炔基和C_2-12炔基。

(未取代的)不饱和炔基基团的实例包括但不限于，乙炔基(-C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH₂-C≡CH)。

环烷基：如本文中所用的，术语“环烷基”涉及也是一个环状基团的烷基基团；即，通过从碳环化合物的碳环上的一个脂环原子去除一个氢而获得的单价部分，该碳环可以是饱和的或不饱和的(例如，部分不饱和的，完全不饱和的)，该部分具有3～7个碳原子(除非另外指出)，包括3～7个环原子。因此，术语“环烷基”包括子类环烯基和环炔基。优选地，每个环具有3～7个环原子。环烷基基团的实例包括C_3-7环烷基和C_3-12环烷基。

环烷基基团的实例包括但不限于，衍生自以下的那些：

饱和的单环烃化合物：

环丙烷(C₃)，环丁烷(C₄)，环戊烷(C₅)，环己烷(C₆)，环庚烷(C₇)，甲基环丙烷(C₄)，二甲基环丙烷(C₅)，甲基环丁烷(C₅)，二甲基环丁烷(C₆)，甲基环戊烷(C₆)，二甲基环戊烷(C₇)，甲基环己烷(C₇)，二甲基环己烷(C₈)和薄荷烷(menthane)(C₁₀)；

不饱和的单环烃化合物：

环丙烯(C₃)，环丁烯(C₄)，环戊烯(C₅)，环己烯(C₆)，甲基环丙烯(C₄)，二甲基环丙烯(C₅)，甲基环丁烯(C₅)，二甲基环丁烯(C₆)，甲基环戊烯(C₆)，二甲基环戊烯(C₇)，甲基环己烯(C₇)和二甲基环己烯(C₈)；

饱和的多环烃化合物：

桧烷(thujane)(C₁₀)，蒈烷(carane)(C₁₀)，蒎烷(pinane)(C₁₀)，莰烷(bornane)(C₁₀)，降蒈烷(norcarane)(C₇)，降蒎烷(norpinane)(C₇)，降莰烷(norbornane)(C₇)，金刚烷(C₁₀)和萘烷(十氢化萘)(C₁₀)；和

不饱和的多环烃化合物：

莰烯(camphene)(C₁₀)，苎烯(柠檬烃，limonene)(C₁₀)和蒎烯(pinene)(C₁₀)。

杂环基：如本文中所用，术语“杂环基”涉及通过从杂环化合物环原子去除一个氢而获得的单价部分，该部分具有具有3～7个环原子(除非另外指出)，其中1～4个是环杂原子。优选地，每一个环具有3～7个环原子，其中1～4个是环杂原子。

在本发明上下文中，前缀(例如，C_3-7，C_5-6等)表示环原子的数目或环原子数目的范围，是碳原子或杂原子。例如，如本文中所用的，术语“C_5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。杂环基基团的实例包括C_3-7杂环基，C_5-7杂环基和C_5-6杂环基。

单环杂环基的实例包括但不限于，衍生自以下的那些：

N₁：氮杂环丙烷(aziridine)(C₃)，氮杂环丁烷(oxetane)(C₄)，吡咯烷(四氢吡咯)(C₅)，吡咯啉(例如，3-吡咯啉，2，5-二氢吡咯)(C₅)，2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯，异噁唑(isoazole))(C₅)，哌啶(C₆)，二氢吡啶(C₆)，四氢吡啶(C₆)，氮杂草(azepine)(C₇)；

O₁：环氧乙烷(oxirane)(C₃)，氧杂环丁烷(oxetane)(C₄)，氧杂环戊烷(oxolane)(四氢呋喃)(C₅)，氧杂环戊烯(oxole)(二氢呋喃)(C₅)，氧杂环己烷(oxane)(四氢吡喃)(C₆)，二氢吡喃(C₆)，吡喃(C₆)，噁庚英(氧杂庚烷，oxepin)(C₇)；

S₁：硫杂环丙烷(thiirane)(C₃)，硫杂环丁烷(thietane)(C₄)，硫杂环戊烷(thiolane)(四氢噻吩)(C₅)，硫杂环己烷(thiane)(四氢噻喃)(C₆)，硫杂环庚烷(thiepane)(C₇)；

O₂：二氧戊环(C₅)，二氧六环(C₆)和二氧七环(C₇)；

O₃：三氧杂环己烷(trioxane)(C₆)；

N₂：四氢咪唑(imidazolidine)(C₅)，吡唑烷(二氮杂环戊烷(diazolidine))(C₅)，咪唑啉(C₅)，吡唑啉(二氢吡唑)(C₅)，哌嗪(C₆)；

N₁O₁：四氢噁唑(tetrahydrooxazole)(C₅)，二氢噁唑(C₅)，四氢异噁唑(C₅)，二氢异噁唑(C₅)，吗啉(C₆)，四氢噁嗪(C₆)，二氢噁嗪(C₆)，噁嗪(C₆)；

N₁S₁：噻唑啉(C₅)，噻唑烷(C₅)，硫代吗啉(C₆)；

N₂O₁：噁二嗪(C₆)；

O₁S₁：氧硫杂环戊二烯(oxathiole)(C₅)和氧硫杂环己烷(噻噁烷，thioxane)(C₆)；和，

N₁O₁S₁：噁噻嗪(oxathiazine)(C₆)。

取代的(非芳香)单环杂环基的实例包括衍生自环形式的糖类，例如，呋喃糖(C₅)，如***呋喃糖，赤式戊呋喃糖(lyxofuranose)，呋喃核糖和呋喃木糖，和吡喃糖(C₆)，如别吡喃糖(allopyranose)，吡喃阿卓糖(altropyranose)，吡喃葡萄糖(glucopyranose)，吡喃甘露糖(mannopyranose)，吡喃葡糖(gulopyranose)，吡喃艾杜糖(idopyranose)，吡喃半乳糖(galactopyranose)和塔罗吡喃糖(talopyranose)中的那些。

含N的杂环基：如本文中所用的，术语“含N的杂环基”涉及通过从含有氮环原子的杂环化合物的环原子去除一个氢原子而获得的单价部分，该部分可以具有3～7个环原子(除非另外指出)，其中1～4个是环杂原子。优选地，每一个环具有3～7个环原子，其中1～4个是环杂原子。实例如以上提供的。

C_5-20芳基：如本文中使用的，术语“C_5-20芳基”涉及通过从C_5-20芳香化合物的芳环原子去除一个氢原子而获得的单价部分，所述化合物具有一个、或两个、或多个环(例如，稠合的)，并具有5～20环原子，并且其中至少一个所述环(多个环)是芳环。优选地，每个环具有5～7环原子。

环原子可以都是碳原子，如在“碳芳基基团”中，在此情况下该基团可以方便地称之为“C_5-20碳芳基”基团。

不具有环杂原子的C_5-20芳基基团的实例(即，C_5-20碳芳基基团)包括但不限于，衍生自苯(即，苯基)(C₆)、萘(C₁₀)、蒽(C₁₄)、菲(C₁₄)和芘(C₁₆)的那些基团。

可替换地，环原子可以包括一个或多个杂原子，包括但不限于氧、氮和硫，如在“杂芳基基团”中。在此情况下，该基团可以方便地称之为“C_5-20杂芳基”基团，其中“C_5-20”表示环原子，碳原子或杂原子。优选，每个环具有5～7环原子，其中0～4个是环杂原子。

C_5-20杂芳基基团的实例包括但不限于，衍生自呋喃(氧杂茂(oxole))、噻吩(硫杂茂(thiole))、吡咯(氮杂茂(azole))、咪唑(1，3-二唑)、吡唑(1，2-二唑)、***、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噁二唑、四唑和噁***的C₅杂芳基基团；和衍生自异噁嗪、吡啶(吖嗪(azine))、哒嗪(1，2-二嗪)、嘧啶(1，3-二嗪；例如，胞嘧啶，胸腺嘧啶，尿嘧啶)、吡嗪(1，4-二嗪)和三嗪的C₆杂芳基基团。

杂芳基基团可以经由碳或杂环原子进行键接。

不包含稠环的C_5-20杂芳基基团的实例，包括但不限于，衍生自苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、异吲哚的C₉杂芳基；衍生自喹啉、异喹啉、苯并二嗪、萘啶(pyridopyridine)的C₁₀杂芳基基团；衍生自吖啶和呫吨(xanthene)的C₁₄杂芳基。

以上的烷基、杂环基和芳基基团，无论是单独的还是另一取代基的部分，它们自身可以被一个或多个选自它们自身和以下所列的其他取代基可选取代。

卤素：-F，-Cl，-Br和-I。

羟基：-OH。

醚基(ester)：-OR，其中R是醚取代基，例如，C_1-7烷基基团(也称为C_1-7烷氧基基团)，C_3-20杂环基(也称为C_3-20杂环氧基基团)，或C_5-20芳基基团(也称为C_5-20芳氧基基团)，优选C_1-7烷基基团。

硝基：-NO₂。

氰基(腈)：-CN。

酰基(酮)：-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如，H，C_1-7烷基基团(也称为C_1-7烷基酰基或C_1-7烷酰基)，C_3-20杂环基(也称为C_3-20杂环氧基)，或C_5-20芳基基团(也称为C_5-20芳酰基)，优选C_1-7烷基基团。酰基基团的实例包括但不限于，-C(＝O)CH₃(乙酰基)，-C(＝O)CH₂CH₃(丙酰基)，-C(＝O)C(CH₃)₃(丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基，苯酮)。

羧基(羧酸)：-COOH。

酯基(ester)(羧酸酯，羧酸酯基，氧羰基)：-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团(C_1-7烷基酯)。酯基团的实例包括但不限于，-C(＝O)OCH₃，-C(＝O)OCH₂CH₃，-C(＝O)OC(CH₃)₃和-C(＝O)Oph。

酰胺基(氨基甲酰基，甲氨酰基，氨基羰基，羧酰胺)：-C(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如对于氨基定义的。酰胺基基团的实例包括，但不限于，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)NHCH₃，-C(＝O)N(CH₃)₂，-C(＝O)NHCH₂CH₃和-C(＝O)N(CH₂CH₃)₂，以及其中R¹和R²连同与它们连接的氮原子一起形成杂环结构的酰胺基基团，如在例如，哌啶代羰基(piperidinocarbony)，吗啉代羰基，硫代吗啉代羰基和哌嗪基羰基。

胺基：-NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，例如，氢，C_1-7烷基基团(也称为C_1-7烷基氨基或二-C_1-7烷基氨基)，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选H或C_1-7烷基基团，或，在“环状”氨基基团的情况下，R¹和R²连同与它们相连的氮原子一起形成具有4～8个环原子的杂环环。氨基基团的实例包括但不限于，-NH₂，-NHCH₃，-NHCH(CH₃)₂，-N(CH₃)₂，-N(CH₂CH₃)₂和-NHPh。环状氨基基团的实例包括但不限于，吖啶基(aziridinyl)，氮杂环丁基(azetidinyl)，吡咯烷基，哌啶基，哌嗪基，全氢二吖庚英基(perhydrodiazepinyl)，吗啉基和硫代吗啉基。环状氨基基团在其环上可以被本文中定义的任何取代基，例如，羧基，羧酸酯基和酰胺基取代。

酰基酰胺基(acylamido)(酰基氨基)：-NR¹C(＝O)R²，其中R¹是酰胺取代基，例如，氢，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选H或C_1-7烷基基团，最优选H，而R²是酰基取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。酰基酰胺基团的实例包括但不限于，-NHC(＝O)CH₃，-NHC(＝O)CH₂CH₃和-NHC(＝O)Ph。R¹和R²可以一起形成环结构，如，例如，琥珀酰亚胺基，马来酰亚胺基和酞内酰胺基：

琥珀酰亚胺基马来酰亚胺基酞内酰胺基

脲基(ureido)：-N(R¹)CONR²R³，其中R²和R³独立地是氨基取代基，如对于氨基基团定义的，而R¹是脲基取代基，例如，氢，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基基团或C_5-20芳基基团，优选氢或C_1-7烷基基团。脲基基团的实例包括但不限于，-NHCONH₂，-NHCONHMe，-NHCONHEt，-NHCONMe₂，-NHCONEt₂，-NMeCONH₂，-NMeCONHMe，-NMeCONHEt，-NMeCONMe₂，-NMeCONEt₂和-NHC(＝O)NHPh。

酰氧基(反酯(reverse ester))：-OC(＝O)R，其中R是酰氧基(的)取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。酰氧基基团的实例包括但不限于，-OC(＝O)CH₃(乙酰基)，-OC(＝O)CH₂CH₃，-OC(＝O)C(CH₃)₃，-OC(＝O)Ph，-OC(＝O)C₆H₄F和-OC(＝O)CH₂Ph。

硫羟基：-SH。

硫醚基(硫化物)：-SR，其中R是硫醚取代基，例如，C_1-7烷基基团(也称为C_1-7烷硫基基团)，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。C_1-7烷硫基基团的实例包括但不限于，-SCH₃和-SCH₂CH₃。

亚砜基(亚磺酰基)：-S(＝O)R，其中R是亚砜的取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。亚砜基团的实例包括但不限于，-S(＝O)CH₃和-S(＝O)CH₂CH₃。

磺酰基(砜)：-S(＝O)₂R，其中R是砜的取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。砜基团的实例包括但不限于，-S(＝O)₂CH₃(甲磺酰基，甲基磺酰基)，-S(＝O)₂CF₃，-S(＝O)₂CH₂CH₃和4-甲基苯基磺酰基(对甲苯磺酰基).砜的取代基在某些情况下可以是氨基基团，如上所述。这些基团可以称为“氨磺酰基”基团。

硫代酰胺基(硫代氨甲酰基)：-C(＝S)NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如对于氨基基团的定义。(硫代)酰胺基基团的实例包括但不限于，-C(＝S)NH₂，-C(＝S)NHCH₃，-C(＝S)N(CH₃)₂和-C(＝S)NHCH₂CH₃。

磺胺基：-NR¹S(＝O)₂R，其中R¹是氨基取代基，如对于氨基基团定义的，而R是磺胺基的取代基，例如，C_1-7烷基基团，C_3-20杂环基基团或C_5-20芳基基团，优选C_1-7烷基基团。磺胺基基团的实例包括但不限于，-NHS(＝O)₂CH₃，-NHS(＝O)₂Ph和-N(CH₃)S(＝O)₂C₆H₅。

甲硅烷氧基(甲硅烷基醚)：-OSiR₃，其中R是H或C_1-7烷基基团。甲硅烷氧基基团的实例包括但不限于，-OSiH₃，-OSiH₂(CH₃)，-OSiH(CH₃)₂，-OSi(CH₃)₃，-OSi(Et)₃，-OSi(iPr)₃，-OSi(tBu)(CH₃)₂和-OSi(tBu)₃。

如以上所提及的，构成以上列出的取代基基团的基团，例如，C_1-7烷基，C_3-20杂环基和C_5-20芳基，可以自身就被取代。因此，以上的定义涵盖了被取代的取代基基团。

异构体、盐、溶剂化物、受保护形式和前药

某些化合物可以以一种或多种特定的几何、光学、对映异构、非对映异构、差向异构、立体异构、互变异构、构象异构或端基(差向)异构(anomeric)的形式存在，包括但不限于，顺式和反式形式；E-和Z-形式；c-，t-和r-形式；内-和外-形式；R-，S-和中位-形式；D-和L-形式；d-和l-形式；(+)和(-)形式；酮-，烯醇-和烯醇化物-形式；同式-和逆式-形式；向斜式-和背斜式-形式；α-和β-形式；立式和平伏形式；船式-，椅式-，螺旋式-，套封式-和半椅式-形式；及其组合，下文总称为“异构体”(或“异构体形式”)。

如果化合物是以晶体形式，则其可以以许多不同的多晶型形式存在。

注意，除了如以下对于互变异构形式讨论的，明确从本文中所用的术语“异构体”中排除的有结构(或构造)异构体(即，在原子之间的连接不同，而不仅仅是原子空间位置上不同)。例如，提及的甲氧基基团，-OCH₃，不应该解释成是指其结构异构体羟基甲基基团，-CH₂OH。类似地，提及的邻氯苯基不应该解释成是指其结构异构体，间氯苯基。然而，提及的一类结构可以明确包括结构上落入这类结构中的异构体形式(例如，C_1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正，异，仲和叔-丁基；甲氧基苯基包括邻-，间-和对-甲氧基苯基)。

以上排出的并不涉及互变异构形式，例如，酮-，烯醇-和烯醇化物-形式，例如，如在以下的互变异构体对中：酮/烯醇，亚胺/烯胺，酰胺/亚胺醇，脒/脒，亚硝基/肟，硫代酮/烯硫醇，N-亚硝基/羟基氮，以及硝基/酸硝基(aci-nitro)。

注意，明确包括在术语“异构体”中的是具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可以是任何同位素形式，包括¹H，²H(D)和³H(T)；C可以是任何同位素形式，包括¹²C，¹³C和¹⁴C；O可以是任何同位素形式，包括¹⁶O和¹⁸O；等等。

除非另外指出，所提及的具体化合物包括所有的这样的异构体形式，包括其(全部或部分地)外消旋体及其他混合物。用于制备(例如，不对称合成)和分离(例如，分级结晶和色谱法)这样的异构体形式的方法，要么是本领域内已知的，要么是通过采用本文中所教导的方法，或已知的方法，按照已知的模式易于获得的。

除非另外指出，所提及的具体化合物也包括其离子和盐形式，例如如以下讨论的。

除非另外指出，所提及的具体化合物也包括其溶剂化物，例如如以下讨论的。

除非另外指出，所提及的具体化合物也包括其前药，例如如以下讨论的。

除非另外指出，所提及的具体化合物也包括其保护形式，例如如以下讨论的。

除非另外指出，所提及的具体化合物也包括其不同的多晶型形式，例如如以下讨论的。

制备、纯化和/或处理活性化合物的对应盐，例如，药用盐，可以是方便的或期望的。药用盐的实例在Berge，et al.，“Pharmaceutically Acceptable salts”，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)中论及。

例如，如果化合物是阴离子的，或具有可以是阴离子的官能团(例如，-COOH可以是-COO^-)，则这种盐可以与合适的阳离子形成。合适的无机阳离子的实例包括但不限于，碱金属离子如Na⁺和K⁺，碱土金属阳离子如Ca²⁺和Mg²⁺，以及其他阳离子如Al³⁺。合适的有机阳离子的实例包括但不限于，铵离子(即，NH₄ ⁺)和取代的铵离子(例如，NH₃R⁺，NH₂R₂ ⁺，NHR₃ ⁺，NR₄ ⁺)。一些合适的取代铵离子的实例是衍生自以下化合物的那些：乙胺，二乙胺，二环己基胺，三乙胺，丁胺，乙二胺，乙醇胺，二乙醇胺，哌嗪，苄胺，苯基苄胺，胆碱，葡甲胺(meglumine)和缓血酸胺(tromethamine)，以及氨基酸，如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的实例是N(CH₃)₄ ⁺。

如果化合物是阳离子的，或具有可以是阳离子的官能团(例如，-NH₂可以是-NH₃ ⁺)，则该盐可以与合适的阴离子形成。合适的无机阴离子的实例包括但不限于，衍生自以下无机酸的那些：盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，亚硫酸，硝酸，亚硝酸，磷酸和亚磷酸。合适的有机阴离子的实例包括但不限于，衍生自以下有机酸的那些：乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，棕榈酸，乳酸，苹果酸，扑酸，酒石酸，柠檬酸，葡糖酸，抗坏血酸，马来酸，羟基马来酸，苯乙酸，谷氨酸，天门冬氨酸，苯甲酸，肉桂酸，丙酮酸，水杨酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富马酸，甲苯磺酸，甲磺酸，乙磺酸，乙烷二磺酸，草酸，羟乙磺酸(isethionic acid)，戊酸和葡糖酸。合适的聚合物阴离子的实例包括但不限于，衍生自以下聚合物酸的那些：单宁酸，羧甲基纤维素。

制备、纯化和/或处理活性化合物的对应溶剂化物是方便的或期望的。本文所用的术语“溶剂化物”按照传统意义是指溶质(例如，活性化合物，活性化合物的盐)和溶剂的络合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以很方便地称为水合物，例如，一水合物，二水合物，三水合物等。

制备、纯化和/或处理以化学保护形式的活性化合物，是方便的或期望的。如本文中所用的术语“化学保护形式”属于其中一个或多个反应活性官能团经过保护而防止发生不期望的化学反应，即，以受保护的或保护基团(也称为受掩蔽或掩蔽基团或受阻或阻碍基团)形式的化合物。通过保护反应活性官能团，涉及其他未受保护的反应官能团的反应就能够进行，而不会影响受保护的基团；通常在随后的步骤中就可以去除保护基团，而基本上不会影响分子的其余部分。参见，例如，文献“Protective groups in Organic Synthesis”(T.Green and P.Wuts；3rd Edition；John Wiley and Sons，1999)。

例如，羟基基团可以作为醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)进行保护，例如，作为：叔丁基醚；苄基，二苯甲基(双苯基甲基)，或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酸酯(-OC(＝O)CH₃，-OAc)。

例如，醛或酮基团可以分别作为缩醛或缩酮进行保护，其中羰基(＞C＝O)通过与，例如，伯醇反应而转化成二醚(＞C(OR)₂)。醛或酮基团易于通过在酸存在下采用大量过量的水进行水解而再生。

例如，胺基团可以，例如，作为酰胺或脲烷进行保护，例如，作为：甲酰胺(-NHCO-CH₃)；苯甲氧基甲酰胺(-NHCO-OCH₂C₆H₅，-NH-Cbz)；作为叔丁氧基甲酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₃，-NH-Boc)；2-联苯基-2-丙氧基甲酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₂C₆H₄C₆H₅，-NH-Bpoc)；作为9-芴基甲氧基甲酰胺(-NH-Fmoc)；作为6-硝基藜芦氧基甲酰胺(-NH-Nvoc)；作为2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲酰胺(-NH-Teoc)，作为2，2，2-三氯乙氧基甲酰胺(-NH-Troc)；作为烯丙氧基甲酰胺(-NH-Alloc)；作为2(-苯磺酰基)乙氧基甲酰胺(-NH-Psec)；或，在合适的情况下，作为N-氧化物(＞NO·)。

例如，羧酸基团可以作为酯进行保护，例如，作为：C_1-7烷基酯(例如，甲基酯；叔丁基酯)；C_1-7卤代烷基酯(例如，C_1-7三卤代烷基酯)；三C_1-7烷基甲硅烷基-C_1-7烷基酯；或C_5-20芳基-C_1-7烷基酯(例如，苄基酯；硝基苄基酯)；或作为酰胺，例如，作为甲酰胺。

例如，硫羟基基团可以作为硫醚(-SR)进行保护，例如，作为：苄基硫醚；乙酰胺基甲基醚(-S-CH₂NHC(＝O)CH₃)。

制备、纯化和/或处理前药形式的活性化合物，是方便的或期望的。如本文中所用的术语“前药”，属于当其代谢(例如，体内)时产生所期望活性化合物的化合物。典型地，前药是惰性的，或活性比活性化合物低，但是可以提供有利的处理、给药或代谢性质。

例如，一些前药是活性化合物的酯(例如，生理上可接受的代谢易分解酯)。在代谢期间，酯基团(-C(＝O)OR)分解而产生活性药物。这样的酯可以通过，例如，在适宜情况下预先保护母体化合物中任何其他反应活性基团下，母体化合物中的任何羧酸基团(-C(＝O)OH)的酯化而形成，接着如果需要实施脱保护。这样的代谢易分解酯的实例包括其中R是C_1-20烷基(例如，-Me，-Et)；C_1-7氨基烷基(例如，氨基乙基；2-(N，N-二乙基氨基)乙基；2-(4-吗啉基)乙基)；和酰氧基-C_1-7烷基(例如，酰氧基甲基；酰氧基乙基；例如，新戊酰氧基甲基；乙酰氧基甲基；1-乙酰氧基乙基；1-(1-甲氧基-1-甲基)乙基-羰酰氧基乙基；1-(苯甲酰氧基)乙基；异丙氧基-羰酰氧基甲基；1-异丙氧基-羰酰氧基乙基；环己基-羰酰氧基甲基；1-环己基-羰酰氧基乙基；环己氧基-羰酰氧基甲基；1-环己氧基-羰酰氧基乙基；(4-四氢吡喃氧基)羰酰氧基甲基；1-(4-四氢吡喃氧基)羰酰氧基乙基；(4-四氢吡喃基)羰酰氧基甲基；和1-(4-四氢吡喃基)羰酰氧基乙基)的那些酯。

另外合适的前药形式包括膦酸盐和乙醇酸盐。具体而言，羟基基团(-OH)，能够通过与氯代二苄基膦反应，接着进行氢化而形成膦酸酯基团-O-P(＝O)(OH)₂，从而制成膦酸酯前药。这样的基团能够在代谢期间通过磷酸酯酶清除，而产生具有羟基基团的活性药物。

而且，一些前药经过酶活化而产生活性化合物，或进过进一步发生化学反应后而产生活性化合物的化合物。例如，前药可以是蔗糖衍生物或其他糖苷阿赫物，或可以是氨基酸酯衍生物。

其他实施方式

R^N1

在一些实施方式中，R^N1选自H和未取代的C_1-4烷基。具体而言，R^N1可以选自H，乙基和丙基(例如，异丙基)。在其他实施方式中，R^N1可以选自甲基和环丙基。

R^C1

在一些实施方式中，R^C1是H。

R^C2

在一些实施方式中，R^C2是H。

在其他实施方式中，R^C2是可选取代的C_1-7烷基，其中的可选取代基(optional substituent)可以选自C_1-7烷基，C_3-7杂环基，C_5-7芳基，卤素，羟基，醚基，硝基，氰基，酰基，羧基，酯基，酰胺基，氨基，酰基酰胺基，脲基，酰氧基和硫羟基。

其中R^C2能够是卤素，其可以是溴。

R^C3

在一些实施方式中，R^C3是H。

在其他实施方式中，R^C3是可选取代的C_1-7烷基，其中的可选取代基可以选自C_1-7烷基，C_3-7杂环基，C_5-7芳基，卤素，羟基，醚基，硝基，氰基，酰基，羧基，酯基，酰胺基，氨基，酰基酰胺基，脲基，酰氧基和硫羟基。

其中R^C3能够是OR^O2，R^O2可以是甲基基团。

R^X

在一些实施方式中，R^X是H。

R^C4知R^C5

在一些实施方式中，R^C4是可选取代的C_3-12含N杂环基而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。

在这些实施方式中，R^C4可以经由氮环原子或碳环原子结合。如果R^C4经由碳原子结合，其可以是单环，双环或三环，如果是单环，则可以是5-或6-员环，例如，吡咯烷，哌啶，哌嗪。尤其感兴趣的基团是基于吡咯啉-2，5-二酮，其中氮环原子可以被取代，例如，被C_5-6芳基基团(例如，4-羟基苯基)取代。如果R^C4是三环，则可以是六氢-2，5a-二氮杂-环戊[c]并环戊二烯-1-酮。

在其他实施方式中，R^C4是C(＝O)NR^N5R^N6而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。R^N5和R^N6可以独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基。在这些实施方式的一些中，R^N5选自H和C_1-4烷基(例如，甲基，乙基，丙基)，而R^N6选自：H，可选取代的C_1-4烷基(例如，甲基，乙基，丙基，丁基)，其中的可选取代基可以选自羟基，氨基(例如，二甲基氨基)和C_5-9芳基(例如，苯基，吲哚基)；和可选取代的C_5-6杂环基(例如，哌啶基)，其中的可选取代基可以包括C_1-4烷基(例如，甲基)。在这些实施方式中的其他实施方式中，R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基，其能够是哌啶基和哌嗪基，其可以是一个或多个(例如，两个)可选的取代基。这些可选取代基可以选自C_1-7烷基(例如，甲基，羟基乙基)，羟基，C_5-7杂环基(例如，吗啉基，羟基哌啶基，哌啶基，羟乙基哌嗪基，哌嗪基)，C_5-7芳基(例如，***基，苯基)，氨基(吡啶乙基-，甲基-氨基)和酰基(例如，硫代苯基甲酰基)。

在其他实施方式中，R^C4是C(＝O)OR^O1而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。R^O1可以是可选取代的C_1-7烷基，而优选可选取代的C_1-4烷基，例如，可选取代的甲基和乙基。这些可选取代基可以选自醚基，氧脲基(oxyureido)(-CON(R¹)CONR²R³)，C_5-6芳基和酰胺基。如果烷基可选取代基是醚基，则其可以是C_5-6芳氧基，例如，苯氧基。芳氧基基团自身可以是进一步被取代的，例如，被酰基(例如，甲基羰基)基团取代。如果烷基可选取代基是氧脲基，则脲基取代基(R¹)可以是H而氨基取代基(R²，R³)可以是H和选自H和C_1-7烷基(例如，甲基，乙基，乙烯基，环戊基)的基团。如果烷基可选取代基是C_5-6芳基，则其可以是含有一个或多个氮环原子的C₆芳基基团(例如，吡啶，吡嗪，三嗪)。C_5-6芳基基团自身可以是被取代的，例如，被氨基基团(例如，NH₂，NMe₂)取代。如果烷基可选取代基是酰胺基，则氨基取代基可以是C_1-7烷基基团(例如，CH₂CF₃)或C_5-6芳基基团，例如，C₅芳基基团，如噁唑基。

在其他实施方式中，R^C4是C(＝O)NHNHSO₂R^S1而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。R^S1可以是可选取代的C_5-20芳基基团，而更优选可选取代的C_5-6芳基基团，例如，苯基。这些可选取代基可以包括烷氧基(例如，OCF₃)，醚基(例如，C(＝O)OMe)和C_1-7烷基(例如，CF₃)。

在其他实施方式中，R^C4是OC(＝O)NR^N7R^N8而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。R^N7可以是H，而R^N8可以是可选取代的C_5-20芳基，例如，C_5-6芳基(如苯基)。可选取代基可以包括卤素(例如，Cl)。

在其他实施方式中，R^C4是OC(＝O)R^C8而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。R^C8可以是可选取代的C_3-20杂环基(例如，2，3-二氢-苯并[1，4]二噁英基(dioxinyl))。

在其他实施方式中，R^C4选自C(＝O)CH₂NH₂，C(＝O)NHNH₂，CHC(CN)₂，CHC(CN)C(＝O)NH₂和羧基，而R^C5选自H，OH和NH₂。在这些实施方式的一些中，R^C5是H。

在其他实施方式中，R^C4和R^C5与它们键接的碳原子一起形成下式的含5个或6个环原子的可选取代芳环：

R^C6选自H，OH和NH₂；和

R^C7选自可选取代的C_3-12含N杂环基，NHC(＝O)R^C9，CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4。

因此，芳环可以是苯，呋喃或吡咯。

在一些实施方式中，R^C6是H。

在一些实施方式中，R^C7是可选取代的C_3-12含N杂环基。在这些实施方式中，R^C7可以经由氮环原子或经由碳环原子结合。如果R^C7经由碳原子结合，其可以是单环，双环或三环。如果是单环，可以是5-或6-员环，例如，吡咯烷，哌啶，哌嗪。特别感兴趣的基团基于吡咯啉-2，5-二酮，其中的氮环原子可以是被取代的，例如，被C_5-6芳基基团(例如，4-羟基苯基)取代。如果R^C7是三环，则可以是六氢-2，5a-二氮杂-环戊[c]并环戊二烯-1-酮。

在其他实施方式中，R^C7是NHC(＝O)R^C9，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基。R^C9可以选自可选取代的C_1-7烷基和可选取代的C_5-20芳基。

在这些实施方式的一些中，R^C9是C_1-7烷基基团，而尤其是C_1-4烷基基团(例如，甲基，乙基，正丙基)。可选取代基可以选自C_1-7烷基，C_3-7杂环基，C_5-7芳基，卤素，羟基，醚基，硝基，氰基，酰基，羧基，酯基，酰胺基，氨基，酰基酰胺基，脲基，酰氧基，硫代酯和硫羟基。具体而言，可选取代基选自酰氧基，C_5-7芳基，氨基，硫酯基和C_3-7杂环基。当R^C9取代基是酰氧基时，酰氧基取代基可以选自C_5-6杂环基(例如，吡咯烷酮)和C_5-6芳基(例如，苯基，呋喃基)，其中C_5-6芳基基团可以具有一个或多个选自C_5-6芳基(例如，四唑基)，酰基酰胺基(例如，氰基甲基酰基氨基)，硝基和酯(例如，甲基酯)的取代基(例如，两个取代基)。C_5-6芳基基团的其他可能的取代基包括磺酰胺基。当R^C9取代基是酰氧基时，该酰氧基取代基也可以选自C_1-4烷基(例如，甲基，乙烯基)，其自身可以是被取代的，例如被酯基，酰基酰胺基或C_5-6芳基取代。当R^C9取代基是C_5-7芳基时，这可以是C₅杂芳基基团(例如，硫代苯基)，其可以带有，例如，氨磺酰基基团(例如，氨基基团是吗啉基的情况)，或它可以是C₆芳基基团(例如，嘧啶酮)。当R^C9取代基是氨基时，氨基取代基可以独立地选自C_1-4烷基(例如，甲基，乙基，异丙基)。氨基取代基中的一个或两个自身可以是被取代的，例如，被酰胺基(例如，-C(＝O)NH₂)取代。可替换地，氨基基团可以是环状的，例如，吗啉基或哌嗪基(其自身可以带有N-取代基，例如酰胺基甲基(例如，-CH₂-C(＝O)NH₂)。当R^C9取代基是硫酯基时，酯取代基可以是C₅芳基(例如，噻二唑)或C₆芳基(例如，嘧啶酮)，这些基团可以带有一个氨基(例如，-NH₂)取代基。当R^C9取代基是C_3-7杂环基时，则它可以是二氧-咪唑啉基。

在这些实施方式中的其他实施方式中，R^C9是C_5-20芳基基团，而尤其是C_5-6芳基基团，例如，苯基。可选取代基可以选自C_1-7烷基，C_3-7杂环基，C_5-7芳基，卤素，羟基，醚基，硝基，氰基，酰基，羧基，酯基，酰胺基，氨基，酰基酰胺基，脲基，酰氧基和硫羟基。在一些实施方式中，存在单个的可选取代基，例如，醚基(例如，甲氧基)，其自身可以进一步是被取代的(例如，被酰胺基(例如，-C(＝O)NH₂)取代)。

在这些实施方式中的其他实施方式中，R^C9是C_3-20杂环基，而尤其是C_4-6杂环基，例如，5，6-二氢-[1，4]二氧六环基。

在其他实施方式中，R^C7是CH₂NR^N2R^N3，其中R^N2和R^N3独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基。

在一些实施方式中，R^N2选自H和C_1-4烷基(例如，甲基，乙基，丙基，环丙基，丙烯基)，而R^N3选自：可选取代的C_1-4烷基(例如，甲基，乙基，丙基，丁基)，其中的可选取代基可以选自羟基，氨基(例如，二甲基氨基，乙氧基氨基)和C_5-9芳基(例如，苯基，吲哚基)；和可选取代的C_5-6杂环基(例如，哌啶基)，其中的可选取代基可以包括C_1-4烷基(例如，甲基)。

在其他实施方式中，R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基。在这些实施方式的一些中，含N的C_5-7杂环基可以是哌啶基和哌嗪基，其可以带有一个或多个(例如，两个)可选取代基。可选取代基可以选自C_1-7烷基(例如，甲基，羟基乙基)，羟基，C_5-7杂环基(例如，吗啉基，羟基哌啶基，哌啶基，羟乙基哌嗪基，哌嗪基，咪唑啉基)，C_5-7芳基(例如，***基，苯基)，氨基(吡啶乙基-，甲基-氨基)和酰基(例如，硫代苯基羰基)。可选取代基也可以选自磺酰基，其中砜的取代基可以是C_5-7芳基基团(例如，苯基)。如果可选取代基是C_1-7烷基基团(例如，甲基)，则其可以是被取代的，例如，被C_5-7芳基基团，如苯基取代。在这些实施方式中的其他实施方式中，含N的C_5-7杂环基可以是高哌啶基(homopiperidinyl)和高哌嗪基(homopiperazinyl)，其可以以与哌啶基和哌嗪基类似的方式被取代。

在另外的实施方式中，R^C7是NHC(＝S)NHR^N4，其中R^N4选自可选取代的C_1-7烷基(例如，C_1-4烷基)，可选取代的C_3-20杂环基(例如，C_5-7杂环基)和可选取代的C_5-20芳基(例如，C_5-7芳基)。对于这些基团的可选取代基可以选自C_1-7烷基，C_3-7杂环基，C_5-7芳基，卤素，羟基，醚基，硝基，氰基，酰基，羧基，酯基，酰胺基，氨基，酰基酰胺基，脲基，酰氧基，氨磺酰基和硫羟基。在这些实施方式的一些中，R^N4是可选取代的C_5-6芳基基团，如苯基，其可以带有一个氨磺酰基(例如，二甲基氨磺酰基)和一个C_1-4烷基取代基(例如，甲基)。在这些实施方式中的其他实施方式中，R^N4是C_1-4烷基基团(例如，乙基)，其可以是不饱和的。

在一些实施方式中，Q是CR^Q1＝CR^Q2，其中R^Q1选自H和OH，而R^Q2是H。

某些实施方式的组

在某组实施方式中，本发明的化合物是式I′的化合物：

其中X选自CR^X和N；

R^N1选自H和C_1-4烷基，其可以是被SH取代的；

R^C1选自H和SH；

R^C2选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^C3选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^X选自H，OH和NH₂；

R^C4选自可选取代的C_3-12含N杂环基和C(＝O)NR^N5R^N6，其中R^N5和R^N6独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基；

R^C5选自H，OH和NH₂；

R^C6选自H，OH和NH₂；和

R^C7选自可选取代的C_3-12含N杂环基，NHC(＝O)R^C9，CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，R^N2和R^N3独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基或R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基，而R^N4选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基。

在某组实施方式中，本发明的化合物是式(Ia)的化合物：

(及其异构体，盐，溶剂化物，受保护形式和前药)

其中R^N1选自H和C_1-4烷基；

R^Q1选自H和OH；和

R^C7选自NHC(＝O)R^C9，CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，R^N2和R^N3独立地选自H，可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基或R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基，而R^N4选自可选取代的C_1-7烷基，可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基。

在另一某组实施方式中，本发明的化合物是式(Ib)的化合物：

(及其异构体，盐，溶剂化物，受保护形式和前药)

其中R^N1选自H和C_1-4烷基；而

R^C4是可选取代的C_3-12含N杂环基。

在另一某组实施方式中，本发明的化合物是式(Ib)的化合物：

(及其异构体，盐，溶剂化物，受保护形式和前药)

其中R^N1选自H和C_1-4烷基；而

R^C4选自：

(i)可选取代的C_3-12含N杂环基；

对于以上表述的R^C4，R^C7和R^Q1的上述实施方式也适用于以上化合物。

实施例的化合物是本发明的具体实施方式。

缩写

为了方便起见，许多化学部分采用已知的缩写表示，包括但不限于，甲基(Me)，乙基(Et)，正丙基(nPr)，异丙基(iPr)，正丁基(nBu)，叔丁基(tBu)，正己基(nHex)，环己基(cHex)，苯基(Ph)，联苯基(biPh)，苄基(BN)，萘基(naph)，甲氧基(MeO)，乙氧基(EtO)，苯甲酰基(Bz)和乙酰基(Ac)。

为了方便起见，许多化学化合物采用已知的缩写表示，包括但不限于，甲醇(MeOH)，乙醇(EtOH)，异丙醇(i-PrOH)，甲乙酮(MEK)，***或二乙基醚(Et₂O)，乙酸(AcOH)，二氯甲烷(氯化亚甲基，DCM)，三氟乙酸(TFA)，二甲基甲酰胺(DMF)，四氢呋喃(THF)和二甲基亚砜(DMSO)。

合成

本发明的化合物是商业上可获得的或能够易于合成。

本发明的方法

P53蛋白

在本发明中，携带Y220C突变的p53蛋白，可以是野生型的哺乳动物，尤其是人类的蛋白，或其稳定形式。SEQ ID NO：1(AAC12971)提供了p53的野生型人类序列。优选使用人类p53。

p53蛋白可以是包含DNA-结合结构域的截短p53。这样的结构域一般包含对应于所述人类的残基95～289的区域。这样的结构域的实例可以在Joerger et al(参考文献13)中找到，例如，对应于人类序列的残基94-312的区域或其截短部分，如94-293。

一般而言，在本发明的方法涉及如其中p53在体外或其他模型***中提供的那些方法的情况下，本发明可以使用如上所述的全长或截短的p53蛋白，并且可以结合一个或多个稳定化的改变，例如，一个或多个发现于T-p53C中的替代。关于本发明涉及处理病变或肿瘤的方法，p53对于其存在的细胞是天然的。一般而言，对于其存在的细胞是天然的p53，将会对应于除了在相当于SEQ ID NO：1的残基220的位置处的取代之外的p53野生型序列。然而，该蛋白包含一个或多个其他突变也是可能的。

用于稳定p53的方法

在一方面，本发明提供了一种用于稳定携带Y220C突变的p53蛋白的方法，该方法包括使p53与式(I)的化合物接触。这样的方法可以在体外实施，例如，通过分析离心或示差扫描量热法，如在所附实施例中描述的。

“稳定p53”，是指提高具有Y220C突变的p53蛋白的熔化温度，和/或提高这样的蛋白的半衰期。

本发明的方法也可以在细胞上实施，例如，在哺乳动物，如人细胞的细胞培养基中，其中这些细胞表达携带Y220C突变的p53。在非人类的哺乳动物细胞的情况下，这些细胞可以经过遗传设计成，除了天然p53蛋白之外，或代替天然p53蛋白，表达人p53Y220C蛋白。培养基中的细胞可以是，例如，来源于人或非人哺乳动物主体的肿瘤，的原代细胞、或细胞系。

在一方面，上述方法可以在原代细胞系或具有或疑似具有Y220C p53蛋白的人病变或肿瘤的样本上实施，以便确定式(I)化合物在细胞中恢复或改善p53功能方面的有效性。例如，这样的改善或恢复可以通过相对于未用式(I)的化合物处理的相同细胞的培养物的细胞培养基中细胞凋亡的速率增大而标记。

在另一方面，在上述本发明的方法在细胞系或样本上实施而导致p53功能改善或恢复的情况下，本发明可以进一步包括向获得样本的主体给予式(I)的化合物的步骤。

“病变”是指细胞的非癌性生长，例如，如良性的或癌变前生长。“肿瘤”是指细胞的任何癌性生长，其中失控的细胞***至少部分是由于存在Y220C突变引起的p53功能丧失所致的。在一些情况下，该突变连同一个或多个对该细胞中存在的其他基因的其他突变一起存在，这将会影响癌性细胞的生长和扩散。

在一些方面中，本发明可以给予哺乳动物主体，如人，以便治疗具有p53 Y220C突变的病变或肿瘤。一般而言，本发明包括向该主体给予有效量的式(I)的化合物以便改善或恢复p53功能。

也可以设想，本发明可以在其中存在人p53 Y220C细胞系的非人动物上实施。这可以是异种移植细胞系或非人动物可以是其中它们的p53基因被人Y220C p53基因替代的转基因非人哺乳动物。可选地，该基因可以，例如，以临时方式(即，在发育中的某个点)，以细胞特异性方式或通过被诱导(例如，四环素可诱导的启动子)连接至可活化的启动子。

非人哺乳动物可以是啮齿动物。啮齿动物包括大鼠，小鼠，豚鼠，栗鼠和其他类似大小的实验室研究用的小啮齿动物。

本发明并不局限于任何一种特定类型的细胞，但是针对其中p53功能因为Y220C突变存在而受损的任何病变或肿瘤。这样的突变可以，例如，发现于白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，浆细胞瘤等；以及实体肿瘤中。实体肿瘤的实例包括但不限于结肠癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，***癌，鳞状细胞癌，基底细胞癌，腺癌，肾细胞癌，肝细胞瘤，***，睾丸瘤，肺癌，小细胞肺癌，膀胱癌，上皮细胞癌，黑素瘤，神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。

给药

活性化合物或包含活性化合物的药物组合物可以通过任何方便的给药途径，***/***地火在期望作用位点处给予主体，包括但不限于，口服(例如，通过摄入)；局部(包括例如，经皮，鼻内，眼内，含服和舌下)；肺(例如通过吸入或注气疗法，采用例如气溶胶，例如通过嘴或鼻)；直肠；***；非肠道，例如通过注射，包括皮下，皮内，肌内，静脉内，动脉内，心脏内，鞘内，脊柱内，囊内，囊下，眶内，腹膜内，气管内，表皮下，关节内，蛛网膜下和胸骨内；通过植入储药器(depot)，例如皮下或肌肉内。

主体可以是真核生物，动物，脊椎动物，哺乳动物，啮齿动物(例如，豚鼠，仓鼠，大鼠，小鼠)，鼠类(例如，小鼠)，犬类(例如，狗)，猫类(例如，家猫)，马类(例如，马)，灵长类动物，类人猿(例如，猴子或猿)，猴子(例如，绒猴，狒狒)，猿(例如，大猩猩，黑猩猩，猩猩，长臂猿)，或人。

制剂

尽管对于活性化合物进行单独给药是可能的，但是优选其作为包含至少一种以上定义的活性化合物，连同一种或多种药用载体，佐剂，赋形剂，稀释剂，填料，缓冲剂，稳定剂，防腐剂，润滑剂或其他对于本领域技术人员众所周知的物质，以及可选地其他治疗或预防药物的药物组合物(例如，制剂)提供。

因此，本发明进一步提供了药物组合物，如上所定义的，以及用于制备药物组合物的方法，包括将至少一种如以上定义的活性化合物，连同一种或多种本文中描述的药用载体，赋形剂，缓冲剂，佐剂，稳定剂或其他物质(如上所述的)进行混合。

如本文中使用的，术语“药用的或药学上可接受的”属于化合物，材料，组合物和/或剂量形式，在完好的医疗判断范围内，适用于与主体(例如，人体)组织接触，而不会产生过多的毒性，刺激，过敏反应，或其他问题或并发症，合理的受益/风险比相称。每一载体、赋形剂等也必须是在与制剂的其他成分相容的这个意义上是“可接受的”。

合适的载体，稀释剂，赋形剂等能够在标准药学教科书中找到。参见，例如，“Handbook of Pharmaceutical Additives”，2nd Edition(eds.M.Ash and I.Ash)，2001(Synapse Information Resources，Inc.，Endicott，New York，USA)，“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，20th edition，pub.Lippincott，Williams & Wilkins，2000；and“Handbook of Pharmaceutical Excipients”，2nd edition，1994。

制剂可以很方便地以单位剂量形式提供并可以通过制药领域内的众所周知的任何方法制备。这样的方法包括使活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载体组合的步骤。一般而言，制剂通过均匀和紧密地使活性化合物与液体载体或精细细化的固体载体或这二者组合而制备，然后如果必要成型该产品。

制剂可以是以液体，溶液，悬浮液，乳液，酏剂，糖浆，片剂，锭剂，颗粒，粉末，胶囊，扁囊剂，丸剂，安瓿剂，栓剂，子宫托(***栓，pessaries)，油膏，凝胶，糊剂(软膏剂，paste)，霜剂，喷雾剂，合剂(mist)，泡沫剂，洗剂，油，大丸剂(推注液，boluses)，舐剂或气溶胶的形式。

适用于口服给药(例如，通过摄入)的制剂可以作为离散单位，如胶囊，扁囊剂或片剂，每一种含有预定量的活性化合物；作为粉末或颗粒；作为在含水或非水液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳液或油包水液体乳液；作为大丸剂；作为糖饵剂(electuary)；或作为糊剂提供。

片剂可以通过常规方式制备，例如压缩或模制成型，可选地具有一种或多种辅助成分。压缩片剂可以通过在合适的机器中将自由流动形式如粉末或颗粒的活性化合物，可选地与一种或多种粘结剂(例如，聚维酮，明胶，***树胶，山梨醇，黄芪胶，羟基丙基甲基纤维素)；填料或稀释剂(例如，乳糖，微晶纤维素，磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁，滑石，氧化硅)；崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠，交联的聚维酮，交联的羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)；和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，山梨酸)压缩而制备。模制成型的片剂可以通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物模制成型而制备。片剂可以可选地被涂覆或修整，并可以进行配制以便提供活性化合物的缓释或控释，例如，采用按照不同比例的羟丙基甲基纤维素而提供所期望的释放曲线。片剂可以可选地提供肠溶衣，以在不同于胃的内脏部分中提供释放。

适用于局部给药(例如，经皮肤，鼻内，眼内，口腔和舌下)的制剂可以配制成油膏，霜剂，悬浮液，洗剂，粉末，溶液，糊剂，明胶，喷雾剂，气溶胶或油。可替换地，制剂可以包括药贴或敷料如浸渍活性化合物和可选的一种或多种赋形剂或稀释剂的绷带或橡皮膏(糊状粘着剂，adhesive paste)。

适于口内局部给药的制剂包括包含在调味基础物(flavoredbasis)，通常是蔗糖和***树胶或黄芪胶中的活性化合物的锭剂；包含在惰性基础物如明胶和甘油，或蔗糖和***树胶中的活性化合物的软锭剂；及包含在合适液体载体中的活性化合物的漱口水。

适用于向眼睛局部给药的制剂包括滴眼剂，其中活性化合物溶解或悬浮于合适载体，尤其是用于活性化合物的含水溶剂中。

适用于鼻内给药的制剂，其中载体是固体，包括具有，例如约20～约500μm范围内的粒径的粗粉末，按照其中鼻吸摄取的方式，即，通过从将盛装粉末的容器靠近至鼻子而通过鼻内通道快速吸入粉末。合适的制剂，其中载体是，例如作为鼻内喷雾，鼻内液滴，或通过喷雾器气溶胶给药的给药液体，包括活性化合物的水性或油性溶液。

适用于通过吸入给药的制剂包括采用合适推进剂，如二氯二氟甲烷，三氯氟代甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他合适气体，作为来自压缩容器的气溶胶喷雾提供的那些。

适用于经由皮肤局部给药的制剂包括油膏，霜剂和乳液。当以油膏配制时，活性化合物可以可选地采用含蜡的或水互溶性的油膏基础物。可替换地，活性化合物可以采用水包油霜剂基础物配制成霜剂。如果期望，霜剂基础物的水相可以包括，例如，至少约30w/w％的多羟基醇，即，具有两个或多个羟基基团的醇如丙二醇，1，3-丁二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇及它们的混合物。局部制剂可以期望地包括增强活性化合物通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。这样的皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关的类似物。

当配制成局部用乳液时，油相可以可选地仅包含乳化剂(另外称为利泄剂(emulgent))，或其可以包含至少一种乳化剂与脂或油或同时与脂和油的混合物。优选地，亲水性乳化剂与起稳定剂作用的亲脂性乳化剂一起包含在内。也优选包括脂和油。总之，乳化剂与或不与稳定剂一起制成所谓的乳化蜡，而该蜡连同油和/或脂一起制成所谓的乳化油膏基础物，其形成霜剂制剂的油性分散相。

合适的利泄剂和乳液稳定剂包括吐温60，司盘80，十六十八醇，肉豆寇醇，甘油单硬脂酸酯和十二烷基硫酸钠。用于制剂的合适油或脂的选择基于实现所期望化妆品性质，因为在大多数油中可能要在药物乳液制剂中使用的活性化合物的溶解度都是非常低的。因此，霜剂应该优选是非油脂的，非染色和可冲洗产品，具有合适的稠度以避免从管或其他容器中泄漏。可以使用直链或支链、单或二元烷基酯如二异己二酸酯，硬脂酸异十六烷基酯，椰子脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸异丙酯，油酸癸酯，棕榈酸异丙酯，硬脂酸丁酯，棕榈酸2-乙基己酯或称为Crodamol CAP的支链酯混合物，最后三种是优选的酯。取决于所需的性质，这些可以单独使用或组合使用。可替换地，高熔点脂质如白软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油都能够使用。

适用于直肠给药的制剂可以作为带有包含例如可可油或水杨酸酯(盐)的合适基础物的栓剂提供。

适用于***给药的制剂可以作为含有除了活性化合物之外的这些本领域内已知的合适载体的子宫托，止血棉栓(tampon)，霜剂，凝胶，糊剂，泡沫或喷雾制剂。

适用于非肠道给药(例如，通过注射，包括皮内，皮下，肌肉内，静脉内和真皮内)的制剂，包括含水和非水等渗、无致热源的无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂，缓冲剂，防腐剂，稳定剂，抑菌剂和赋予制剂与所计划受体的血液等渗的溶质；以及含水和非水无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂，以及脂质体或其他设计用于将化合物靶向血液组分或一个或多个器官的微粒***。适用于这样的制剂的合适等渗赋形剂的实例包括氯化钠注射液，林格氏溶液，或乳酸林格氏注射液。典型地，活性化合物在溶液中的浓度为约1ng/mL～约10μg/mL，例如，约10ng/mL～约1μg/mL。该制剂可以以单位剂量或多剂量在密封容器中提供，例如，安瓿瓶和小药瓶，并可以储存在冷冻干燥(冻干)的条件下，使用之前仅仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。制剂可以是以脂质体或其他设计用于将化合物靶向血液组分或一个或多个器官的微粒***的形式。

剂量

应该理解，活性化合物，以及包含活性化合物的组合物的恰当剂量能够随着患者的不同而变化。对于最佳剂量的确定一般涉及治疗疗效水平对本发明治疗的任何风险或有害副作用的平衡。所选择的剂量水平将取决于各种各样的因素，包括但不限于，具体化合物的活性，给药途径，给药时间，化合物的***速率，治疗持续时间，组合使用的其他药物、化合物和/或材料，以及患者的年龄，性别，体重，病状，总体健康和以前的病史。化合物的量和给药途径将最终取决于医师，尽管一般地剂量将会在实现所需疗效的作用位点达到局部浓度，同时不会引起显著伤害或有害副作用。

体内给药能够在整个疗程中以一个剂量，连续或间断地(例如，按照合适的间隔以分开的剂量)实现。确定最有效的方式和给药剂量的方法在本领域内对于那些技术人员而言是众所周知的并且将随着疗法所用的制剂，疗法目的，治疗的靶细胞和治疗的主体而变化。单次或多次给药能够随着治疗医师所选剂量水平和模式实施。

式(I)的化合物可以结合其他抗癌药物给药。给药可以同时、分开或顺序地进行给药。“同时”给药是指式(I)的化合物和第二抗癌药物在单一剂量形式中通过相同的给药途径向主体给药。

“分开”给药，是指式(I)的化合物和第二抗癌药物通过两种不同的给药途径向主体给药，其同时进行。这可以例如在一种药物通过灌注给药而另一种在灌注过程的期间内口服给药情况下出现。

“顺序”给药，是指两种药物在时间上不同的时间点给药，条件是第一种给药的药物的活性存在并在主体中仍发挥疗效的同时进行第二药物的给药。例如，另一抗癌药物可以首先给药，以便损害主体中的肿瘤细胞，接着给药式(I)的化合物以便提供p53功能而诱导细胞凋亡。一般而言，顺序剂量这样出现，使得两种药物中的第二种在第一种药物给药48h，优选24h内，如12，6，4，2或1h内进行给药。

向主体给药的式(I)化合物的量最终取决于主体的特性和待治疗的疾病。

第二药物可以是具有对于要治疗疾病的期望性质的任何已知药物。这样的药物包括紫杉烷类，如

(紫杉醇

)，

(泰索帝

)或其他化疗药物，如顺铂(和其他铂嵌入化合物)，依托泊甙(etoposide)和磷酸依托泊甙，博来霉素(bleomycin)，丝裂霉素C，CCNU，多柔比星，柔红霉素(daunorubicin)，伊达比星(idarubicin)，异环磷酰胺(ifosfamide)等。该药物也可以是生物试剂，如抑制肿瘤生长的蛋白，如但不限于干扰素(IFN)-γ，肿瘤坏死因子(TNF)-α，TNF-β和类似的细胞因子，或抗血管生成因子如血管他丁和内皮他丁，或FGF或VEGF的抑制剂如用于血管生成因子的受体的可溶形式，包括但不限于可溶的VGF/VEGF受体。

本发明通过以下实施例进行举例说明。

实施例

实验程序

蛋白表达和纯化

对于晶体学实验，编码T-p53C残基94-312的DNA，人p53核心结构域突变体M133L/V203A/N239Y/N268D采用Ndel和EcoRl限制位点(13)从pRSET(A)载体亚克隆入pET-24a(+)载体(Novagen)的多接头区域。Y220C的另外的点突变采用QuikChange定点诱变试剂盒(Stratagene)引入，产生“构建体1”。这些突变体表达于大肠杆菌BL21(DE3)或C41(DE3)-BL21的一种衍生物，选择用于改善球蛋白和膜蛋白的可溶性表达(参考文献A1)。

对于所有的其他实验，采用BamHl和EcoRl限制位点，将编码T-p53C的残基94-312的DNA***到修饰的pET24a(+)载体中。编码融合至N-端6x-His标签和C-端TEV蛋白酶切位点ENLYFQG(GS)(参考文献A3)的脂肪嗜热芽孢杆菌(B.stearothermophilus)二氢硫辛酸乙酰基转移酶(dihydrolipoyl acetyltransferase)结构域(硫辛酰结构域，EC 2.1.12，(参考文献(A2))的氨基酸1-85的序列，被***在pET24a(+)的Ndel和BamHl位点之间，而形成这种修饰的载体。Y220C的其他点突变采用QuikChange定点诱变试剂盒(Stratagene)引入，产生“构建体2”。

纯化的质粒DNA提交Lark Technologies，Inc.(Essex)用于测序。两条链都采用标准T7启动子和T7终止子引物进行测序。两个构建体(1和2)都证实具有正确的DNA序列。

所有的载体都被热脉冲转化成能经受冷冻保藏的大肠杆菌细胞(BL21(DE3)或C41(DE3))。新转化的BL21/C41细胞在TYE/Kan/Glu琼脂板上于37℃下生长12～16h。之后，细胞克隆体转移到10～1000mL(依赖于表达培养基的总体积)的含50μg/mL卡那霉素(最终浓度)的2xTY介质中。这种起子培养物在37℃和250rpm下培养约3h，或直至在600nm(OD600)下的光学密度达到约0.5。随后将该培养基用作用于含0.8L 2xTY介质或补充最终浓度50μg/mL的卡拉霉素(根据抗生素耐药性而定)的M9基本培养基的2L***接种物(用于表达¹⁵N和/或¹³C同位素标记的p53，用于NMR研究)。起子培养物的1∶1000稀释液用于接种表达培养物。这些培养物在37℃和250rpm下培养直至OD600达到0.6～0.9。降温至18℃，表达培养物补充100μM ZnSO₄，用1mM异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导并在18℃的诱导温度和250rpm下生长14～18h。细胞通过在冷却至4℃的Sorvall RC 3B Plus转子中于4500rpm下离心30min。如果蛋白纯化并不立即进行实施，则细胞颗粒在液氮中快速冷冻并储存于-20℃下。

对于¹⁵N或¹³C/¹⁵N标记蛋白的表达，使用M9基本培养基代替根据以下配方的2xTY：12.8g Na₂HPO₄(无水)，3.0g NaH₂PO₄，0.5gNaCl，2mL 1M-MgSO₄，2mL溶液Q，1.0g ¹⁵NH₄Cl，30mL 6g/l葡萄糖溶液或30mL 4g/L ¹³C-葡萄糖溶液和10mL维生素混合物。“溶液Q(solution Q)”由以下构成：在1000mLH₂O中的5g FeCl₂×4H₂O，184mg CaCl₂×2H₂O，64mg H₃BO₃，18mg CoCl₂×6H₂O，4mg CuCl₂×2H₂O，340mg ZnCl₂，605mg Na₂MoO₄×2H₂O，40mg MnCl₂×4H₂O，8mL 5M-HCl。“维生素混合物(vitamin mix)”由以下构成：在100mL 1×M9盐溶液中的50mg硫胺，10mg d-生物素，10mg氯化胆碱，10mg叶酸，10mg烟酰胺，10mg D-泛酸，10mg吡哆醛，1mg核黄素。

纯化色谱采用Biocad Vision***和

***实施。所有缓冲液采用0.22μm过滤器在使用前进行过滤。

“构建体1”采用以下方案纯化：

将收获的细胞颗粒首先在50mM Tris-HCl，pH 7.2，5mM DTT，1片/50mL无Complete’(完全’)EDTA的蛋白酶抑制剂以及少量DNA酶和RNA酶的溶胞缓冲液中悬浮并均质化。这在所有的时间内都保持在冰上。每升原始细胞培养物使用25mL溶胞缓冲液。采用Emulsiflex C5高压均质器(Glen Creston)打碎细胞。溶胞产物在冷却至4℃的Sorvall SS34转子中于17,000rpm下离心40min。上清液采用0.22μm StericupTM可抛弃真空过滤器设备(Millipore)进行过滤。这随后加载到用25mM NaPi，pH 7.5+5mM DTT预先平衡的Poros 20HQ阳离子交换柱上，并用超过20柱体积的0-1MNaCl梯度洗脱。汇集部分用预冷却的25mM NaPi，pH 7.5+5mMDTT稀释10倍而至低于50mM的盐浓度。这随后加载到Heparin HP柱上并在通过分两步增加NaCl浓度的10CV冲洗至400mM(5CV)和1M(5CV)之后洗脱。最终纯化步骤采用25mM用NaPi，pH 7.5，150mM NaCl和5mM DTT的缓冲液平衡的

75 26/60Prep Grade HiLoad柱子(Amersham)实施。汇集这些部分并采用Centriprep离心浓缩仪(Ultracel YM-10)浓缩，其中在预冷却至4℃的Megafuge2R(Heraeus)台式离心机中截取10000分子量。蛋白的纯度通过SDS PAGE判断，并且超过95％纯。样品在液氮中快速冷却并在-80℃下储存。

“构建体2”采用以下方案纯化：

将收获的细胞颗粒首先在50mM NaH₂PO₄/Na₂HPO₄-缓冲剂(NaPi)，pH 8.0，300mM NaCl，10mM咪唑，5mM TCEP，1片/50mL无‘Complete’EDTA的蛋白酶抑制剂以及少量的DNA酶和RNA酶的溶胞缓冲液悬浮中并均质化。这在所有的时间内都保持在冰上。每升原始细胞培养物使用25mL溶胞缓冲液。采用EmulsiflexC5高压均质器(Glen Creston)打碎细胞。溶胞产物在冷却至4℃的Sorvall SS34转子中于17,000rpm下离心40min。上清液采用0.22μmStericupTM可抛弃真空过滤器设备(Millipore)进行过滤。随后这加载到用50mM NaPi，pH 8.0，300mM NaCl，10mM咪唑，5mMTCEP预先平衡的4×5mL HisTrap^TM FF粗Ni-柱上，并用超过6柱体积的10-250mM的咪唑梯度洗脱。根据蛋白表达的产率，溶胞产物以多个部分加载和/或流过液重新加载直至大多数T-p53C-Y220C被回收。汇集的部分用烟草蚀纹病毒蛋白酶(Tobacco Etch Virusprotease)(TEV)在4℃下消化过夜，并通过在ENLYFQ和GGS之间的TEV识别位点处切割而从6×HIS+Lipoyl部分切下表达的蛋白。通过MALDI-TOF质谱和SDS-PAGE监控切割程度。在完成酶切之后，用预冷却的25mM NaPi，pH 7.5+5mM DTT稀释10倍至低于30mM的盐浓度。这随后加载到Heparin HP柱上并在通过梯度增加NaCl浓度至400mM的10CV冲洗超过6CV并分两步至1M(5CV)和2M(5CV)之后洗脱。蛋白的纯度通过SDS PAGE判断。如果超过95％纯，该蛋白就直接对25mM NaPi，pH 7.2，150mMNaCl，5mM DTT渗析6～8h并在交换渗析缓冲溶液之后重复至少1次。低于95％纯的蛋白部分采用用25mM NaPi，pH 7.2，150mMNaCl和5mM DTT的缓冲液平衡的

75 26/60 Prep GradeHiLoad柱(Amersham)作为最后的纯化步骤进行凝胶过滤。汇集这些部分并采用Centriprep离心浓缩仪(Ultracel YM-10)浓缩，其中在预冷却至4℃的Megafuge2R(Heraeus)台式离心机中截取10000M_r。蛋白的纯度通过SDS PAGE判断，超过95％纯。样品在液氮中快速冷却并在-80℃下储存。

蛋白浓度按照Gill和von Hippel(参考文献A4)的描述采用分光光度法测定。T-p53C-Y220C在280nm下的摩尔消光系数(²⁸⁰)从其氨基酸序列计算为²⁸⁰＝16590cm^-1M^-1。

样品制备和采用¹H/¹⁵N-HSQC的NMR筛选

统一地，T-p53C-Y220C的¹⁵N-标记核心结构域根据以上描述的方案进行表达和纯化。低分子量化合物溶解于d⁶-DMSO中制成10mM的原液。为了通过化学位移描图筛选化合物混合物，将10μL的4种不同化合物中的每一种混合在一起并将25μL的这种混合物加入至25μL的D₂O和500μL的70μM T-p53C-Y220C(在25mMNaPi，150mM NaCl和5mM DTT，pH 7.2之中)中。每一化合物的最终浓度在4.5％(v/v)d⁶-DMSO浓度下为114μM。新制NMR样品并在通过低压下重复循环泵吸NMR管脱气(同时微微敲击核磁管)之后保持在氩气密封下并采用氩气流恢复至大气压。这用于维持样品稳定性。

使用¹H/¹³C/¹⁵N三重共振反演，低温5mm探针(Bruker)，以以下参数在Bruker AvanceII+700和Avance 800光谱仪上于293K下获取¹H/¹⁵N HSQC谱图：16扫描，在t1内的128复合点，0.95s的循环时间，和在t2内1024总点。采用Bruker’s TopSpin 2.0软件，通过正向复合线性预测倍增t1内的复合点数并将位移的SSB视窗函数在零填充和傅里叶转换之前应用于两维。使用了¹H频率维中2.0Hz/点和¹⁵N频率维中的4.7Hz/点的数字分辨率。光谱采用Sparky 3.113进行分析(A5)。如果平均称重的¹H/¹⁵N化学位移差(Δδ(¹H/¹⁵N)＝|Δδ(¹H)|+|Δδ¹⁵N|)/5)超过0.04ppm，则就认为化学位移显著(Hajduk et al.，1997)。内部脚本用于分析化学位移差并将这些描图到PDB蛋白结构上。

检测到结合时，通过筛选出4个单个化合物的独立样品而完成解卷积(信号简化，deconvolution)，每一个以227μM的最终浓度存在。

对于某些化合物，通过将饱和结合方程(Δδ＝c+a*[L]/(K_D+[L]))拟合至相关位移峰的浓度-依赖性化学位移变化而采用不同浓度阵列推导K_D值(K_D NMR)。

采用毛细DSC的热变性研究

采用差示扫描量热仪(DSC)探测T-p53C-Y220C上配体的稳定化作用。对于可逆的双态***，熔化温度，T_m，是其中折叠或去折叠态同等增加的转变温度。然而，p53随着温度升高并不是可逆变性的，因此所观察的T_m并不是真实的熔化温度，而是表观熔化温度(T_m ^app)，而所推导的数据是半定量的，取决于加热的速率。

DSC实验采用Microcal VP-Capillary DSC装置(Microcal，Amherst，MA)以约125μL的活细胞体积实施。蛋白样品是交换到25mM NaPi，pH 7.2，150mM NaCl，5mM DTT中的缓冲液。该缓冲液+各个浓度的配体/DMSO用于基线扫描，而使样品和参照细胞之间或在测定中的样品细胞和基线扫描中的两种细胞之间的仅有的差是该蛋白的存在。使用最终浓度20μM的T-p53C-Y220C。向细胞施加2.5bar(氮气)压力。以250℃/h的速率扫描了10～85℃的温度，4s过滤周期而反馈增益/模式设置为中等。数据采用ORIGIN软件(Microcal)分析。

采用荧光的热变性研究

这采用了经典的方法和步骤(例如，参考文献A6)。采用Rotor-gene 6000(Corbett Life Science)以270K/h在25mM NaPi，150mM NaCl and 5mM DTT，pH 7.2中蛋白浓度10μM下通过染料Sypro Orange(5x)的结合监控热去折叠。

通过分析超离心(AUC)测定小分子与T-p53C-Y220C的结合

分析离心研究了分子在重量下的分布。在平衡沉淀实验中，溶质浓缩于细胞底部并构成浓度梯度。该梯度的陡度取决于溶质的分子量，分子越重，梯度越陡。小分子具有约500Da的分子量，而p53核心结构域是24.5kDa的大蛋白分子。在所选实验条件下，小分子形成了非常浅的实际上可忽略的梯度，而p53表现出非常明显的沉淀分布曲线。如果小分子结合至p53，其就会显示出p53的沉淀分布曲线。通过经由在300nm的波长上(对该工作运行的该光谱范围下，配体必须吸收光)的吸光度监控小分子的分布，以使信号不受蛋白吸光度(例如，310，340和380nm)的影响，有可能确定小分子是否结合至蛋白，并在许多情况下测定离解常数。这种方法独特地适用于测定弱(10μM～1mM)离解常数，因为其并不要求配体通过蛋白完全结合。当蛋白浓度近似等于离解常数时是最适合的。对于数据分析的详细描述参见文献(文献A7)。

平衡沉淀实验在Beckman XL-I超离心机上采用Ti-50转子和6-扇形池以30,000和40,000rpm的速度在10℃下实施。同时分析了多达21个样品。缓冲条件为25mM NaPi，150mM NaCl，5mMDTT。样品含的配体的浓度为15μM～40μM，在所选的波长之一的吸光度为0.3～0.5，且样品含有100μM的T-p53-Y220C。

时间依赖性荧光研究

去折叠动力学根据Friedler et al.(参考文献A8)的描述在37℃下于50mM Hepes，pH 7.2，1mM Tris-2-羧乙基膦(TCEP)中通过在280nm激发下色氨酸在340nm下的发射，采用由提供的Cary软件控制的Cary Eclipse荧光分光光度计完成。

化合物

所有测试的化合物都获自ENAMINE Ltd.(23 AlexandraMatrosova Street，01103 KIEV，Ukraine)，除了获自Asinex的PK390-392和获自InterBioScreen的PK402、407和408。

结果

以下表格显示了采用毛细DSC的热变性研究结果，其中ΔT_m是加入250μM的测试化合物时T_m增量。所给出的Dunnett显著性检验(P)值是T_m变化不显著的概率计算值。

¹H/¹⁵N-HSQC

化合物PK059：

化合物	KD(@20℃)
		PK059	213μM

PK083

167μM

AUC

化合物	KD(@10℃)
		PK059	300μM
PK083	170μM

变性的热稳定性和动力学

由示差扫描量热仪观察到PK083以浓度依赖模式稳定T-p53C-Y220C。T-p53C-Y220C不可逆地变性并且其表观T_m随着加热速率而变化。在非常快速的加热下，测定的T_m接近其真实值。因为不可逆过程比平衡更慢。2.5mM的PK083使T_m从316K升高了近2℃，并且通过在316～318K下以近似K_D 140±73μM的简单结合将数据拟合于预期用于稳定的方程。

将在310K(37℃)下T-p53C-Y220C的变性动力学拟合至用于PK083的简单结合模型。在没有配体下，蛋白具有3.8min的半衰期。其在PK083饱和浓度下增加至15.7min。

X-射线晶体学方法

在不对称单元中具有两个分子的空间群P2₁2₁2₁中T-p53C-Y220C的晶体，于21℃在先前描述的条件下通过悬挂式蒸汽扩散(sitting drop vapour diffusion)进行生长(参考文献B1)。PK083通过逐滴加入低温缓冲液(19％聚乙二醇4,000，20％甘油，100mM Hepes，pH 7.2，150mM KCl)而渗透到T-p53C-Y220C晶体中，并在2h的时间内增加PhiKan083浓度。在达到10mM的最终浓度之后，渗透继续进行另一个30min，然后晶体在液氮中快速冷冻。设置位1.5-

分辨率的X-射线数据在100K于钻石光源下光束线I04上收集。数据处理采用Mosflm(参考文献B2)和Scala(参考文献B3)实施。结构解析和精修采用CNS实施(参考文献B4)。采用游离T-p53C-Y220C(PDB entry 2J1X)的结构作为初始模型进行首轮刚体精修之后，通过采用CNS的迭代循环精修和采用MAIN的手动模型构建(参考文献B5)精修复合体的结构。采用CNS和手动模型构建中实施的水选选项(water pick option)将水分子加入到结构中。在这个精修阶段，PK083构建到链B的模型中，而该结构进一步进行精修，包括对所选侧链引入替代构象。对于链A中的空腔，观察到显著性差异密度，在与链B中相同的结合模式中具有来自PK083的贡献，但是结合具有较低的占用率和在未结合状态(在最终模型中并不包括的坐标)下的水分子网络。数据收集和精修统计如表1中所示。

在与PK083的复合体中T-p53C-Y220C的晶体结构如图1中所示。图1A是与PK083的复合体中T-p53C-Y220C(链B)整个结构的带状显示。PK083作为具有其分子表面的球棍模型以绿色表示。其结合至远离该蛋白已知的功能界面的蛋白表面上突变诱导的裂缝。突变位点的Cys220的侧链，其采取了两个可替代的构象，以橙色突出显示。图1B是结合至在3.0σ处等高的T-p53C-Y220C的链B的PK083的|F_o-F_c|模拟退火略图。图1C是PhiKan083结合位点的立体视图。配体的5-

距离内所选的p53残基作为灰色球棍模型显示。蛋白表面以半透明灰色加亮。图1D是T-p53C-Y220C以其游离(PDB编码2J1X链B；绿色)和PK083-结合形式(黄色)的重叠，表明一旦配体结合发生的小结构位移。PK083作为灰色的球棍模型描述。小的红球表示无配体结构中一旦配体结合而被替代的水分子。

中心咔唑部分很大程度上嵌埋于裂缝中，其中9-乙基基团占据该疏水袋的最深部分(图1C)。结合看起来具有来自疏水包装相互作用的重要贡献。乙基基团紧密接触突变残基Cys220的硫羟基基团(其采取两种可替代的构象)，和许多疏水侧链(Phe109，Leu145，Val147和Leu257)，由此将配体固定至该袋。平面咔唑环***夹在结合裂缝一侧上的Pro222和Pro223的疏水侧链和另一侧上的Val147和Pro151的疏水侧链之间。环氮位点位于靠近野生型结构((1.0-

距离)中的酪氨酸残基的羟基基团位置。N-甲基六亚甲基四胺部分与Asp228的主链羰基形成氢键(2.8-

距离)。配体一旦结合至突变体，仅出现非常小的结构位移。在PhiKan083的5

内的残基(残基109，145-147，150，151，220-223，228-230和257)以0.3

(所有原子)的均方根偏差发生重叠。对于Thr150侧链，观察到最显著的位移，其一旦结合就被移位高达1.4由此加宽该袋的入口(图1D)。

表1数据采集和精修统计

^a括号内的值用于最高分辨率壳(shell)

^bR_融合＝∑(I_h，i-<I_h>)/∑I_h，i

^e数目包括可替代构象。

^dR_晶体和R_游离＝∑||F_obs|-|F_calc||/∑|F_obs|，其中R_游离在超过随机选择的振幅5％上计算并且在精修中未使用。

^e采用PROCHECK(B6)计算的。

其他结果

吲哚衍生物1H-吲哚-3-甲酰胺

和N-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-2，2，2-三氟-乙酰胺

已通过NMR光谱证实结合至T-p53C-Y220C并提高了其熔化温度。

采用荧光的进一步热变性研究对上述的以下化合物实施，得到的结果如以下表中所列。在列出的情况下，S.E是计算的标准误差。

采用荧光的热变性研究在以下化合物上实施，所得结果如下表所列。在列出的情况下，S.E是计算的标准误差。

用来测定某些化合物的结合的进一步研究采用以上描述的NMR技术实施，其中一些化合物进一步测试而得到修正值。结果以下列出。

化合物	KD(@20℃)μM
		PK226	113
PK214	76
		PK209	97
PK083	114
		PK211	120
PK207	200
		PK328	2941

参考文献

1.Vogelstein，B.，Lane，D.，and Levine，A.J.(2000)Nature 408，307-310

2.Ryan，K.M.，Phillips，A.C.，and Vousden，K.H.(2001)Curr.Opin.Cell Biol.13，332-337

3.Vousden，K.H.，and Lu，X.(2002)Nat.Rev.Cancer 2，594-604

4.Olivier，M.，Eeles，R.，Hollstein，M.，Khan，M.A.，Harris，C.C.，andHainaut，P.(2002)Hum Mutat 19，607-614

5.Beroud，C.，and Soussi，T.(2003)Hum Mutat 21，176-181

6.Cho，Y.，Gorina，S.，Jeffrey，P.D.，and Pavletich，N.P.(1994)Science 265，346-355

7.Clore，G.M.，Ernst，J.，Clubb，R.，Omichinski，J.G.，Kennedy，W.M.，Sakaguchi，K.，Appella，E.，and Gronenborn，A.M.(1995)Nat Struct Biol 2，321-333

8.Jeffrey，P.D.，Gorina，S.，and Pavletich，N.P.(1995)Science 267，1498-1502

9.Bell，S.，Klein，C.，Muller，L.，Hansen，S.，and Buchner，J.(2002)J Mol Biol322，917-927

10.Dawson，R.，Muller，L，Dehner，A.，Klein，C.，Kessler，H.，and Buchner，J.(2003)J Mol Biol 332，1131-1141

11.Veprintsev，D.B.，Freund，S.M.，Andreeva，A.，Rutledge，S.E.，Tidow，H.，Canadillas，J.M.，Blair，C.M.，and Fersht，A.R.(2006)Proc Natl Acad Sci U S A103，2115-2119

12.Canadillas，J.M.，Tidow，H.，Freund，S.M.，Rutherford，T.J.，Ang，H.C.，and Fersht，A.R.(2006)Proc Natl Acad Sci U S A 103，2109-2114

13.Joerger，A.C.，Ang，H.C.，and Fersht，A.R.(2006)Proc Natl Acad Sci U S A103，15056-15061

14.Weinberg RL，Veprintsev DB，Fersht AR.2004.J Mol Biol 341：1145-59

A1.Miroux，B.& Walker，J.E.(1996)J Mol Biol 260，289-98.

A2.Packman，L C.，Borges，A.& Perham，R.N.(1988)Biochem J 252，79-86.

A3.Dougherty，W.G.，Carrington，J.C.，Cary，S.M.& Parks，T.D.(1988)EmboJ 7，1281-7.

A4.Gill，S.C.& von Hippel，P.H.(1989)Anal Biochem 182，319-26.

A5.Goddard，T.D.& Kneller，D.G.SPARKY 3，University of California，SanFrancisco.

A6.Jackson，S.E.& Fersht，A.R.(1991)Biochemistry 30，10436-10433.

A7.Friedler，A.，Veprintsev，D.B.，Freund，S.M.，von Glos，K.I.& Fersht，A.R.(2005)Structure 13，629-36.

A8.Friedler，A.，Hansson，L.O.，Veprintsev，D.B.，Freund，S.M.，Rippin，T.M.，Nikolova，P.V.，Proctor，M.R.，Rudiger，S.，& Fersht，A.R.(2002)ProcNatl Acad Sci U S A 99，937-942.

B1.Joerger AC，Ang HC，Fersht AR.2006.Proc Natl Acad Sci U S A 103：15056-61

B2.Leslie AGW.1992.Joint CCP4 and ESF-EACMB Newsletter on ProteinCrystallography Vol.26：Daresbury Laboratory，Warrington，UK

B3.Collaborative Computational Project N.1994.Acta Crystallogr.D 50：760-63

B4.Brünger AT，Adams PD，Clore GM，DeLano WL，Gros P，et al.1998.ActaCrystallogr.D 54：905-21

B5.Turk D.1992.Weiterentwicklung eines Programms für Molekülgrafik undElektrondichte-Manipulation und seine Anwendung auf verschiedeneProtein-

Technische

München

B6.Laskowski RA，MacArthur MW，Moss DS，Thornton JM.1993.J.Appl.Crystallogr.26：283-91。

序列表

SEQ ID NO：1

Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln

Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu

Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp

Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro

Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Arg Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro

Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser

Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly

Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro

Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln

Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met

Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys

Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln

His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp

Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu

Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser

Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr

Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val

Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn

Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr

Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys

Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu

Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp

Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His

Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met

Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp Ser Asp

Claims

1.一种用于治疗具有其中p53携带Y220C突变的病变或肿瘤的主体的方法中的式(I)的化合物：

其中X选自CR^X和N；

R^N1选自H和C_1-4烷基，其可以被SH或卤素取代；

R^C1选自H和SH；

R^C2选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^C3选自H和可选取代的C_1-7烷基；

R^X选自H、OH和NH₂；

R^C4选自：

(i)可选取代的C_3-12含N杂环基；

(ii)C(＝O)NR^N5R^N6，其中R^N5和R^N6独立地选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或者R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基；

(iii)C(＝O)OR^O1，其中R^O1选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(iv)C(＝O)NHNHSO₂R^S1，其中R^S1选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(v)OC(＝O)R^C8，其中R^C8选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基；

(vi)OC(＝O)NR^N7R^N8，其中R^N7和R^N8独立地选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或者R^N7和R^N8与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基；和

(vii)C(＝O)CH₂NH₂、C(＝O)NHNH₂、CHC(CN)₂、CHC(CN)C(＝O)NH₂和羧基；

R^C5选自H、OH和NH₂；

或者R^C4和R^C5与它们键接的碳原子一起形成下式的含5个或6个环原子的可选取代芳环：

其中Q表示O、N或CR^Q1＝CR^Q2，其中R^Q1和R^Q2独立地选自H、OH和NH₂；

R^C6选自H、OH和NH₂；而

R^C7选自可选取代的C_3-12含N杂环基、NHC(＝O)R^C9、CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，R^N2和R^N3独立地选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或者R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基，而R^N4选自可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，

并且当R^C4和R^C5没有键接在一起时，R^C3可以另外地选自OR^O2，其中R^O2是C_1-4烷基基团，和C(＝O)OR^O3，其中R^O3是C_1-4烷基基团，并且R^C2可以另外地选自卤素。

2.根据权利要求1所述的方法，其中R^N1选自H、乙基、丙基和环丙基。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中R^C1是H。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其中R^C2是H。

5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其中R^C2是可选取代的C_1-7烷基，其中的可选取代基选自C_1-7烷基、C_3-7杂环基、C_5-7芳基、卤素、羟基、醚基、硝基、氰基、酰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基、酰基酰胺基、脲基、酰氧基和硫羟基。

6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其中R^C3是H。

7.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其中R^C3是可选取代的C_1-7烷基，其中的可选取代基可以选自C_1-7烷基、C_3-7杂环基、C_5-7芳基、卤素、羟基、醚基、硝基、氰基、酰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基、酰基酰胺基、脲基、酰氧基和硫羟基。

8.根据权利要求1～7任一项所述的方法，其中R^X是H。

9.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是可选取代的C_3-12含N杂环基，而R^C5是H。

10.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是C(＝O)NR^N5R^N6，而R^C5是H。

11.根据权利要求10所述的方法，其中R^N5选自H和C_1-4烷基，而R^N6选自：H，可选取代的C_1-4烷基，其中的可选取代基选自羟基、氨基和C_5-9芳基；和可选取代的C_5-6杂环基，其中的可选取代基是C_1-4烷基。

12.根据权利要求10所述的方法，其中R^N5和R^N6与它们连接的氮原子形成可选取代的哌啶基或哌嗪基，其中的可选取代基选自C_1-7烷基、羟基、C_5-7杂环基、C_5-7芳基、氨基和酰基。

13.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是C(＝O)OR^O1，而R^C5是H。

14.根据权利要求13所述的方法，其中R^O1是可选取代的C_1-4烷基，其中的可选取代基选自醚基、氧脲基、C_5-6芳基和酰胺基。

15.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是C(＝O)NHNHSO₂R^S1，而R^C5是H。

16.根据权利要求15所述的方法，其中R^S1是可选取代的C_5-6芳基基团，其中的可选取代基选自烷氧基、醚基和C_1-7烷基。

17.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是OC(＝O)NR^N7R^N8，而R^C5是H。

18.根据权利要求17所述的方法，其中R^N7是H，而R^N8是可选取代的C_5-6芳基，其中的可选取代基选自卤素。

19.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4是OC(＝O)R^C8，而R^C5是H。

20.根据权利要求19所述的方法，其中R_C8是可选取代的C_5-7杂环基。

21.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4选自C(＝O)CH₂NH₂、C(＝O)NHNH₂、CHC(CN)₂、CHC(CN)C(＝O)NH₂和羧基，而R^C5是H。

22.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其中R^C4和R^C5与它们键接的碳原子一起形成下式的含5个或6个环原子的可选取代芳环：

其中Q是CR^Q1＝CR^Q2，其中R^Q1选自H和OH，而R^Q2是H；

R^C6选自H、OH和NH₂；而

R^C7选自可选取代的C_3-12含N杂环基、NHC(＝O)R^C9、CH₂NR^N2R^N3和NHC(＝S)NHR^N4。

23.根据权利要求22所述的方法，其中R^C6是H。

24.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中R^C7是可选取代的C_3-12含N杂环基。

25.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中R^C7是NHC(＝O)R^C9，其中R^C9选自可选取代的C_1-7烷基，和可选取代的C_5-20芳基。

26.根据权利要求25所述的方法，其中R^C9是可选取代的C_1-4烷基基团，其中的可选取代基选自酰氧基、C_5-7芳基、氨基、硫代酸酯和C_3-7杂环基。

27.根据权利要求25所述的方法，其中R^C9是可选取代的C_5-6芳基基团，其中的可选取代基可以选自C_1-7烷基、C_3-7杂环基、C_5-7芳基、卤素、羟基、醚基、硝基、氰基、酰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基、酰基酰胺基、脲基、酰氧基和硫羟基。

28.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中R^C7是CH₂NR^N2R^N3，其中R^N2和R^N3独立地选自H、可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基，或者R^N2和R^N3与它们连接的氮原子形成可选取代的含N的C_5-7杂环基。

29.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中R^C7是NHC(＝S)NHR^N4，其中R^N4选自可选取代的C_1-7烷基、可选取代的C_3-20杂环基和可选取代的C_5-20芳基。

30.一种用于处理其中p35携带Y220C突变的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1～29任一项所述的式(I)的化合物接触。

31.一种用于治疗具有其中p35携带Y220C突变的病变或肿瘤的主体的方法，所述方法包括向所述主体给予根据权利要求1～29任一项所述的式(I)的化合物。

32.一种用于稳定携带Y220C突变的p53蛋白的方法，所述方法包括使所述p35与根据权利要求1～29任一项所述的式(I)的化合物接触。

33.一种确定一个分子与携带Y220C突变的p53的结合的方法，所述方法包括在与根据权利要求1～29任一项所述的式(I)的化合物竞争下，使所述分子与所述p53接触，并测定所述化合物中的一种或另一种的结合或位移。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述化合物中的一种或两种携带一个标记，如放射标记、发色团、荧光团或用于采用核磁共振技术的竞争基¹⁹F-筛选的氟官能团。

35.一种药物组合物，包含根据权利要求1～29任一项所述的式(I)的化合物以及药用载体。

36.用于治疗方法中的根据权利要求1～29任一项所述的结构式(I)的化合物。