CN101987117B - 一种治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗畜禽细菌病的中药组合物,特别涉及一种治疗畜禽细菌病口服液及其制备方法;中药组合物按重量比其组成为:茅苍术1-1.5kg;苦参1-4kg;表面活性剂10-40g;乙醇50-150g;防腐剂0.5-2g;添加纯化水至全量1000ml;所述组合物的制备方法步骤包含:①取茅苍术;②取苦参;③加入纯化水、表面活性剂、乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加入防腐剂,加水至全量,即得中药组合物的口服液;本发明获取的组合物临床应用安全,用于治疗畜禽细菌病具有很好的治疗的作用;在与抗菌药物联用能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性,从而增强抗菌药物的抗菌效果。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种治疗畜禽细菌病的中药组合物,特别涉及一种治疗畜禽细菌病口服液及其制备方法。
【背景技术】
目前随着抗生素的滥用,导致耐药菌株和多重交叉耐药菌株的不断增加和扩散,所以细菌的耐药性问题变的越来越突出,越来越严重;病原菌的耐药率呈现逐年上升的趋势。研究表明我国的中草药抑菌成分多而复杂,可作用于细菌的不同部位、靶点及繁殖的不同阶段,并对细菌的多个代谢环节起作用,故中草药不易产生耐药性。而一些中草药具有良好的抗菌活性,并且与其他抗菌药物联合应用时候,可以增强抗菌药物的抗菌活性。因此,中草药在抗感染治疗药物研究中显示了极具吸引力的应用潜力和良好前景,在国际上越来越受到重视。利用中草药开发新的抗菌药物,使其具有良好的抗菌活性,为解决目前日益严重的细菌耐药性问题,与合成抗菌药物联合应用,增强抗菌药物的抗菌活性无疑是一个新的研发方向。
茅苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.的干燥根茎,具有燥湿健脾,祛风散寒,明目之功效。现代药理研究表明苍术对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等均有明显的抑制作用;苍术提取物体外、体内试验表明其具有消除大肠杆菌耐药质粒的作用,体内消除优于体外。苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根,具有清热燥湿之功效,用于湿热泻痢。现代药理表明苦参具有广谱的抗微生物作用,体外实验证明,对痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌有明显的抑制作用;苦参还具有抗炎作用,对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、巴豆油所致小鼠和大鼠耳部水肿、蛋清或角叉菜胶所致大鼠足肿胀及棉球肉芽肿均有明显抑制作用。细菌性疾病常伴有一定的炎症反应,茅苍术与苦参配伍组方,对于治疗畜禽细菌性疾病具有很好的疗效。
【发明内容】
为了克服部分抗生素对耐药菌株耐药性问题,本发明公开了一种治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法,本发明主要由茅苍术、苦参制备而成的口服液,属纯中药组方,不易产生耐药性,临床应用安全;在与其他抗菌药联用能起到抗菌增效的作用。
为了实现所述发明目的,本发明采用如下技术方案:
一种治疗畜禽细菌病的中药组合物,按重量比其组成为:
茅苍术 1-1.5 kg
苦参 1-4 kg
表面活性剂 10-40g
乙醇 50-150 g
防腐剂 0.5-2 g
添加纯化水至全量1000 ml。
本发明制备治疗畜禽细菌病的中药组合物时,所用的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60或吐温-80中的任意一种。
本发明制备治疗畜禽细菌病的中药组合物时,所述的防腐剂为苯甲酸钠、山梨酸钾或苯甲酸中的任意一种。
本发明制备治疗畜禽细菌病的中药组合物时,所用的表面活性剂与乙醇的用量之和不超过18%W/V。
一种治疗畜禽细菌病的中药组合物的制备方法,所述组合物的制备方法步骤如下:
①取茅苍术,过30目筛,6-10倍量加水进行水蒸气蒸馏,收集蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层备用;
②取苦参,加8-10倍量水真空动态提取时间为4~6h,其中真空动态提取温度为60~80℃,真空度为0.08~0.1Mpa;滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达60~75%,4℃冷藏12小时以上,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值9-11,用0.5-1倍量三氯甲烷萃取2-3次,合并三氯甲烷萃取液,利用减压回收装置减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取全量50~70%的纯化水,加入表面活性剂、乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至接近全量,用盐酸调pH 5.0~7.5,加入防腐剂,加水至全量,混匀,滤过,灌装,即得中药组合物的口服液。
本发明用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的应用适用于猪、鸡、羊、牛、鸭、鹅等畜禽。
本发明用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的应用为口服液用量为1~2ml兑1L水。
由于采用了上述技术方案,本发明具有如下有益效果:
本发明所述的治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法,获取的组合物临床应用安全,用于治疗畜禽细菌病具有很好的治疗的作用;在与抗菌药物联用能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性,从而增强抗菌药物的抗菌效果。
本发明中药组合物为水溶性,用户使用起来比较方便,尤其在畜禽生病时饮食下降的情况下,通过饮水给药,能够起到快速起效的作用。
本发明的中药组合获取物与抗菌药联用能起到抗菌增效的作用,所述的抗菌药为喹诺酮类、大环内酯类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类。喹诺酮类包括诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星及其盐;大环内酯类包括泰乐菌素、替米考星、红霉素及其盐;β-内酰胺类包括头孢噻呋、氨苄西林、氯唑西林及其盐;氨基糖苷类包括庆大霉素、新霉素、链霉素、卡那霉素及其盐;氯霉素类包括氟苯尼考、甲砜霉素;四环素类包括多西环素、土霉素及其盐。
【具体实施方式】
为使本发明更加容易理解,下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围,下列实施例中未提及的具体实验方法,通常按照常规实验方法进行。
具体实施例
实施例1 治疗畜禽细菌病的中药组合物制备方法及其药效试验
1. 治疗畜禽细菌病的中药组合物制备方法
茅苍术1.2 kg、苦参2 kg、吐温-80 25g
乙醇80g、苯甲酸钠1g、纯化水补至1000ml
①取茅苍术,过30目筛,加10倍量水进行水蒸气蒸馏,收集6倍量蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层备用;
②取苦参,加8倍量水真空动态提取时间为5h(真空动态提取温度为70℃,真空度为0.08~0.1Mpa),滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达60%,4℃冷藏12小时,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值11,用1倍量三氯甲烷萃取3次,合并三氯甲烷萃取液,减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取600ml纯化水,加入25g吐温-80、80g乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至900ml,用盐酸调pH 6.5,加入苯甲酸钠1g,加水至全量1000ml,混匀,滤过,灌装,即得。
本发明用于治疗畜禽细菌病的中药组合物经临床安全性试验表明:利用实施例1制备的口服液按照临床安全性试验要求进行试验,试验用鸡随机分为4组,每组30只,第1、2、3组分别以1ml兑水1L、3ml兑水1L、5ml兑水1L混饮给药,第4组给予饮用水作为对照组,自由饮水,连续给药5日,每天观察鸡反应情况(精神状态、进食量、行为活动、眼睛和鼻孔分泌物)等,连续观察至第19日,停止给药后和观察结束时,分别从各剂量组中随机挑选6只鸡处死,进行详细的***尸检,记录实质性脏器的色泽、质地、肿块、空腔脏器的黏膜完整性及色泽等。结果各用药组鸡的精神状态、进食量、行为活动、眼睛和鼻孔分泌物、剖检症状与对照组比较未见异常,说明临床按1ml兑水1L混饮给药,对鸡的安全性良好。同法采用实施例1制备的口服液进行猪的安全性实验,选择体重5.0±1.0kg健康猪40头,分4组,每组10头,给药剂量及给药方法同鸡的安全性试验,结果与鸡的临床安全性试验统计结果一致,各用药组猪的精神状态、进食量、行为活动均正常,眼睛和鼻孔未见分泌物,停止给药后及观察结束后剖检症状与对照组比较未见异常,说明临床按1ml兑水1L混饮给药,对猪的安全性良好。
2. 本发明组合物对人工感染大肠杆菌治疗的试验
供试菌:耐药大肠杆菌GXD0129为临床分离。
攻毒剂量:0.2mL,3.2×109CFU/mL。
分组:选用3周龄健康SPF罗曼蛋鸡300只,随机分为6组,每组50只。
试验1组:空白对照组,不染毒,不给药,隔离饲养。
试验2组:阴性对照组,染毒后,不给药,隔离饲养。
试验3~5组:治疗组(本发明药物组合物口服液),剂量分为低、中、高剂量组(具体剂量见表1:1L水用量),混饮,连用5日。
药物对照组:乳酸诺氟沙星可溶性粉组,规格:100g:5g,剂量为1L水本品1g,混饮,连用5日。
给药及观察:待80%以上鸡只出现明显的发病症状时,连用5天,给药结束后继续观察至第19日,每天观察鸡只症状并进行计分,实验结束后,计算各组计分结果,以死亡率、治愈率、有效率、相对增重率判定指标对结果进行统计并评价。
结果:观察并记录各组鸡的临床症状,并对病死鸡进行剖检及细菌分离,按生物统计方法进行数据的显著性检验,其中死亡率、有效率及治愈率用卡方检验,结果见表1。
表1 临床治疗试验结果统计
组别 | 死亡率(%) | 治愈率(%) | 有效率(%) | 相对增重率(%) |
空白对照组 | — | — | — | 100 |
阴性对照组 | 78 | — | — | 40.8 |
低剂量组(实施例1制备口服液0.5ml) | 38* | 40** | 62** | 54.1 |
中剂量组(实施例1制备口服液1ml) | 26 | 66* | 74 | 78.2 |
高剂量组(实施例1制备口服液2ml) | 20 | 74 | 80 | 85.0 |
药物对照组 | 18 | 84 | 88 | 89.4 |
注:*:与药物对照组比较,p<0.05,**:与药物对照组比较p<0.01。
从表1可以看出各给药组鸡的死亡率与阴性对照组相比明显降低(p<0.05),说明实施例1制备的口服液能降低鸡大肠杆菌病的死亡率。以死亡率比较,该口服液中、高剂量组与药物对照组无差异(p>0.05);以治愈率比较,该口服液高量组与药物对照组比,有无差异(p>0.05),中剂量组有显著显著(p<0.05),低剂量组有极显著显著(p<0.01);以有效率比较,该口服液中、高剂量组与药物对照组无差异(p>0.05);各给药组相对增重率高于阴性对照组。说明该口服液具有一定的治疗大肠杆菌病的作用。
3. 本发明药物组合物用于自然患白痢仔猪治疗的试验
试验猪场:河南栾川县某猪场。分别选择10~28日龄,4.0±1.0kg体重,自然患白痢的哺乳仔猪150头,健康哺乳仔猪50头进行试验,试验组给予本发明实施例1制备的口服液,药物对照组给予四黄止痢颗粒,分组及处理见表2。
表2 对自然发病猪的疗效试验分组及处理
组号 | 组别 | 只数 | 处理 | 剂量 |
1 | 空白对照组 | 50 | — | / |
2 | 阴性对照组 | 50 | 不治疗 | / |
3 | 实施例1口服液 | 50 | 治疗 | 1L水口服液1ml |
4 | 药物对照组 | 50 | 治疗 | 1L水四黄止痢颗粒1g |
给药及观察:每天给药一次,自由饮水,连用5天,给药结束后继续观察至第19日,每天观察仔猪症状,实验结束后,以死亡率、治愈率、有效率、相对增重率判定指标对结果进行统计并评价。
疗效判定标准:
治愈:治疗后患猪粪便成型,干稀适度,颜色正常,仔猪活动、精神和食欲恢复正常,观察期内无复发;以治愈头数占整个试验组总数的比,计算治愈率。
有效:治疗后患猪粪便明显变稠,拉稀次数明显减少,仔猪食欲、活动和精神状态有明显改善;以有效头数(包括治愈头数)占整个试验组总数的比,计算有效率。
无效:治疗后患猪精神、食欲无明显改善,甚至加重,属无效。根据无效头数占整个试验组总数的比,计算无效率。
死亡:治疗后患猪精神、食欲、粪便无明显改善,甚至加重或死亡。以死亡数占整个试验组总数的比,计算死亡率。
相对增长率:各试验组与健康对照组的增重比,其中健康对照组设为100%。
试验结果:观察并记录各组仔猪的临床症状,并对病死仔猪进行剖检及细菌分离,按生物统计方法进行数据的显著性检验,其中死亡率、无效率、有效率及治愈率用卡方检验,结果见表4。
表4 临床治疗试验结果统计
组别 | 死亡率(%) | 治愈率(%) | 有效率(%) | 无效率(%) | 相对增重率(%) |
空白对照组 | 0 | — | — | — | 100 |
阴性对照组 | 14 | — | — | — | 63.7 |
实施例1口服液组 | 2 | 72 | 86 | 12 | 89.3 |
药物对照组 | 6 | 62 | 72 | 22 | 80.2 |
从表4可以看出实施例1口服液组主的死亡率较低;以治愈率、有效率为指标,给药组均起到一定的治疗作用,其中实施例1口服液组效果好于药物对照组;给药组相对增重率高于阴性对照组。说明本发明口服液具有较好的治疗猪白痢的作用。
4. 本发明联合抗菌药的抗菌增效试验
试验菌株:耐药大肠杆菌GXD0129、耐药葡萄球菌GXJ0043,由临床分离。
试验药品:乳酸诺氟沙星、氟苯尼考、盐酸多西环素、头孢噻呋钠、乳酸环丙沙星、药物组合物口服液。
试验方法:采用微量倍比稀释法,第1-11孔各加100μl肉汤,第12孔加200μl肉汤。取药液100μl加入第1孔,依次倍比稀释至第10孔,第10孔混匀后弃去100μl,然后除第12孔外每孔加稀释的菌液100μl,使每孔含菌量为2×105CUF/ml,混匀,置37℃培养16 h后观察结果,联合用药时因色深无法判定的可采用平板划线,37℃培养16 h后观察,结果无细菌生长的最低药物浓度即为该药的最低抑菌浓度(MIC)。
表2 抗菌药联合组合物前后MIC比较(耐药菌大肠杆菌GXD0129)
药物 | MIC(μg/ml) | |
单用 | 联用实施例1制备的口服液,32mg生药/ml | |
乳酸诺氟沙星 | 1024 | 256 |
氟苯尼考 | 640 | 160 |
盐酸多西环素 | 640 | 160 |
头孢噻呋钠 | 80 | 40 |
表3 抗菌药联合组合物前后MIC比较(耐药葡萄球菌GXJ0043)
药物 | MIC(μg/ml) | |
单用 | 联用实施例1制备的口服液,32 mg生药/ml | |
乳酸环丙沙星 | 80 | 40 |
盐酸多西环素 | 16 | 8 |
乳酸诺氟沙星 | 256 | 64 |
从表2、表3可以看出在作用于耐药菌株时,实施例1制备的口服液在与乳酸诺氟沙星、氟苯尼考、盐酸多西环素、乳酸环丙沙星、头孢噻吩钠与实施例1制备的口服液联用后MIC均有所降低,降低倍数为2~8倍;说明实施1制备的口服液能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性,从而增强抗菌药物的抗菌效果。
实施例2 治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法
茅苍术1.5kg、苦参4kg、吐温-80 30g
乙醇150g、山梨酸钾2g、纯化水补至1000ml
制备方法:
①取茅苍术,过30目筛,加10倍量水进行水蒸气蒸馏,收集6倍量蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层,备用;
②取苦参,加10倍量水真空动态提取时间为6h(真空动态提取温度为80℃,真空度为0.08~0.1Mpa),滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达75%,4℃冷藏24小时,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值9,用0.5倍量三氯甲烷萃取2次,合并三氯甲烷萃取液,减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取700ml纯化水,加入30g吐温-80、150g乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至950ml,用盐酸调pH 7.5,加入山梨酸钾2g,加水至全量1000ml,混匀,滤过,灌装,即得。
实施例3治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法
茅苍术1.2kg、苦参1kg、吐温-80 40g
乙醇100g、苯甲酸钠2g、纯化水补至1000ml
制备方法:
①取茅苍术,过30目筛,加10倍量水进行水蒸气蒸馏,收集6倍量蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层备用;
②取苦参,加9倍量水真空动态提取时间为4h(真空动态提取温度为60℃,真空度为0.08~0.1Mpa),滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达65%,4℃冷藏12小时,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值10,用0.5倍量三氯甲烷萃取3次,合并三氯甲烷萃取液,减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取500ml纯化水,加入40g吐温-60、100g乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至950ml,用盐酸调pH 7.5,加入苯甲酸钠2g,加水至全量1000ml,混匀,滤过,灌装,即得。
实施例4 治疗畜禽细菌病的中药组合物及其制备方法
茅苍术1kg、苦参2kg、吐温-20 10g
乙醇50g、苯甲酸0.5g、纯化水补至1000ml
制备方法:
①取茅苍术,过30目筛,加10倍量水进行水蒸气蒸馏,收集6倍量蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层备用;
②取苦参,加8倍量水真空动态提取时间为5h(真空动态提取温度为70℃,真空度为0.08~0.1Mpa),滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达60%,4℃冷藏12小时,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值10,用0.5倍量三氯甲烷萃取2次,合并三氯甲烷萃取液,减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取600ml纯化水,加入10g吐温-20、50g乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至900ml,用盐酸调pH 5.0,加入苯甲酸0.5g,加水至全量1000ml,混匀,滤过,灌装,即得。
在实施例2-4中,分别试验了药物组合物其他配比的药物在治疗鸡的大肠杆菌病的疗效,试验参照实施例1,结果药物组合物其他配比的药物对鸡细菌性均有良好的疗效。
实施例2-4,参照实施例1分别用于治疗自然发病的仔猪白痢,均能起到很好的治疗作用。
实施例2-4,参照实施例1分别试验了药物组合物其他配比的药物联合抗菌药的抗菌增效试验,结果药物组合物其他配比的药物联合抗菌药均具有较好的联合抗菌增效作用。
本发明组合物用于治疗畜禽细菌病临床试验见实施例1:采用3周龄健康SPF罗曼蛋鸡,大肠杆菌C83851(血清型O78)攻毒,经胸肌注射接种菌液0.2mL,菌液浓度3.2×109CFU/ml,各给药组80%以上鸡出现明显的发病症状开始给药,药物组采用实施例1制备的口服液加水混饮,高、中、低剂量分别为2ml兑水1L、1ml兑水1L、0.5ml兑水1L,连用5日,给药结束后仍继续观察观察2周;同时设立阴性对照组、空白对照组、药物对照组,试验结束后统计死亡率、治愈率、有效率及相对增重率,并进行生物学统计分析。结果实施例1制备的口服液能有效控制人工感染大肠杆菌鸡的临床症状,明显降低鸡的死亡率。
本发明组合物用于治疗自然发病猪的临床疗效试验见实施例1,结果采用本发明口服液具有较好的治疗猪白痢的作用。
本发明用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的抗菌增效试验见实施例1:结果采用本发明制备的口服液能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性,增强抗菌药物的抗菌效果。
Claims (1)
1.一种治疗畜禽细菌病的中药组合物,其特征在于:按重量比其原料药为:
茅苍术 1-1.5 kg,取其去除水层和油层的蒸馏液
苦参 1-4 kg,取其处理后的浸膏
表面活性剂 10-40g
乙醇 50-150 g
防腐剂 0.5-2 g
添加纯化水至全量1000 ml;
其中,所用的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60或吐温-80中的任意一种;所述的防腐剂为苯甲酸钠、山梨酸钾或苯甲酸中的任意一种;所用的表面活性剂与乙醇的用量之和不超过18%W/V。
2、根据权利要求1所述的一种治疗畜禽细菌病的中药组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物的制备方法步骤如下:
①取茅苍术,过30目筛,6-10倍量加水进行水蒸气蒸馏,收集蒸馏液,4℃冷藏,弃去水层,油层备用;
②取苦参,加8-10倍量水真空动态提取时间为4~6h,其中真空动态提取温度为60~80℃,真空度为0.08~0.1Mpa;滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后,加乙醇使含醇量达60~75%,4℃冷藏12小时以上,上清液回收乙醇,用氢氧化钠溶液调pH值9-11,用0.5-1倍量三氯甲烷萃取2-3次,合并三氯甲烷萃取液,利用减压回收装置减压回收三氯甲烷得浸膏,备用;
③取全量50~70%的纯化水,加入表面活性剂、乙醇,混合均匀后分别加入步骤①及②所制备的挥发油、浸膏,搅拌均匀,加纯化水至接近全量,用盐酸调pH 5.0~7.5,加入防腐剂,加水至全量,混匀,滤过,灌装,即得中药组合物的口服液。
3、根据权利要求1所述的用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的应用,其特征在于:所述中药组合物适用于猪、鸡、羊、牛、鸭、鹅畜禽。
4、根据权利要求1所述的用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的应用,其特征在于:口服液用量为1~2ml兑1L水。
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