CN101985428A - 邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法及其用途 - Google Patents
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本发明提供了邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、及其在制备预防和/或***等机体异常增生疾病的药物或功能食品中的应用、以及其在制备预防和/或治疗机体炎症、痛疼等疾病的药物或功能食品中的应用。
Description
(一)技术领域
本发明涉及邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、及其在制备预防和/或***等机体异常增生疾病的药物或功能食品中的应用、以及其在制备预防和/或治疗机体炎症、痛疼等疾病的药物或功能食品中的应用。
(二)背景技术
恶性肿瘤(癌症)是严重威胁人类健康的常见病和多发病。根据世界卫生组织的报告报道，全球2008年约有1240万人确诊罹患某种类型癌症，其中760万人因此死亡。报告预计，到2010年，癌症致死率将超过心脏病，成为全球头号杀手；到2030年，全球每年可能将有癌症患者2640万人，其中1700万人将因此死亡。在过去的几十年中，为了应对癌症，各国医学科学家和药物科学家一直在不懈地努力，也取得了不俗的成就，但是，截止目前，还没有药物能完全预防或治愈癌症。在相当长一段时期内，细胞毒性药物仍将是肿瘤药物治疗的主体。目前，针对肿瘤形成及增殖机制的多环节作用的新型抗肿瘤药物(对肿瘤细胞具有靶向杀伤作用，而对人体正常组织损伤很小，甚至无)正逐渐成为国内、外研究机构关注的热点。
科学家在很久以前就已注意到炎症、组织损伤与癌症密切相关，在1863年，Rudolf Virchow就指出癌症常常产生于机体的慢性炎症部位。事实上，流性病学调查表明，慢性乙肝、慢性胃肠炎和慢性胰腺炎病人患肝癌、胃肠癌与胰腺癌的风险显著增加；同样地，外伤病人患癌症的风险也会增加。在此过程中，细胞内的环氧合酶(Cyclo-oxygenase，COX)、脂氧合酶(Lipoxygenase，LOX)及其代谢产物起着非常关键的作用。这些可能成为预防和治疗癌症的靶点(参阅：Coussens LM，Werb Z.(2002)Inflammation and cancer.Nature 420：860-7)。
COX及其代谢产物与肿瘤生成、进展、转移及血管的生成密切相关。在人体内，已鉴定与癌症相关的COX至少有二种：COX-1(参阅：Xie W，Chipman JG，Robertson DL，et al.(1991)Expression of a mitogen-responsive gene encoding prostaglandin synthase is regulated by mRNA splicing.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：2692-6)和COX-2(参阅：Hla T，Neilson K.(1992)Human cyclooxygenase-2cDNA.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：7384-8)。COX-1是生理性的，在胃肠道、肾脏、血管平滑肌和血小板中都有表达，参与人体的正常生理机能；然而，COX-2在绝大多数正常组织中无法检测到，但能被各种各样刺激因素(如：生长因子、炎症相关的细胞介质)快速诱导表达(参阅：Morita I.(2002)Distinct functions of COX-1 and COX-2.Prostaglandins Other Lipid Mediat.68-69：165-75)。在许多肿瘤组织(如：胰腺癌、肺癌、结肠癌、胃腺癌、乳癌和***癌等)中，COX-2表达是大量增加的，还伴随着COX-2代谢产物***素的增加(参阅：Molina MA，Sitja-Amau M，Lemoine MG，et al.(1999)Increased cyclooxygenase-2 expression in human pancreatic carcinomas and cell lines：growth inhibition by nonsteroidal anti-inflammatory drugs.Cancer Res.59：4356-62；Wolff H，Saukkonen K，Anttila S，et al.(1998)Expression of cyclooxygenase-2in human lung carcinoma.Cancer Res.58：4997-5001；Uefuji K，Ichikura T，Mochizuki H，et al.(1998)Expression of cyclooxygenase-2protein in gastric adenocarcinoma.J.Surg.Oncol.69：68-72；Hwang D，Scollard D，Byrne J，et al.(1998).Expression of cyclooxygenase-1and cyclooxygenase-2in human breast cancer.J.Natl.Cancer Inst.90：455-60；Kutchera W，Jones DA，Matsunami N，et al.(1996)Prostaglandin Hsynthase 2 is expressed abnormally in human colon cancer：evidence for a transcriptional effect.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：4816-20；Gupta S，Srivastava M，Ahmad N，et al.(2000)Over-expression of cyclooxygenase-2in human prostate adenocarcinoma.Prostate 42：73-78)。过度表达的COX-2及其代谢产物参与肿瘤的生成、发展及血管的增生(参阅：Qiao L，Kozoni V，Tsioulas GJ，et al.(1995)Selected eicosanoids increase the proliferation rate of human colon carcinoma cell lines and mouse colonocytes in vivo.Biochim.Biophys.Acta 128：215-23；Muller-Decker K，Neufang G，Berger I，et al.(2002)Transgenic cyclooxygenase-2overexpression sensitizes mouse skin for carcinogenesis.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：12483-88；Prescott SM.(2000)Is cyclooxygenase-2 the alpha and the omega in cancer？J Clin.Invest.105：1511-94)。基因敲除的实验研究表明，COX-1也与肿瘤的发展密切相关(参阅：Chulada PC，Thompson MB，Mahler JF，et al.(2000)Genetic disruption of Ptgs-1，as well as of Ptgs-2，reduces intestinal tumorigenesis in Min mice.Cancer Res.60：4705-8)。COX-2的抑制剂、COX1/2抑制剂可以抑制肿瘤的生长(参阅：Piazza GA，Rahm AK，Finm TS，et al.(1997)Apoptosis primarily accounts for the growth-inhibitory properties of sulindac metabolites and involves a mechanism that is independent of cyclooxygenase inhibition，cell cycle arrest，and p53 induction.Cancer Res.57：2452-9；Seed MP，Brown JR，Freemantle，et al.(1997)The inhibition of colon-26adenocarcinoma development and angiogenesis by topical diclofenac in 2.5％ hyaluronan.Cancer Res.57：1625-9)。
LOX及其代谢产物与肿瘤生成、进展、转移及血管的生成也密切相关。LOX在催化花生四烯酸代谢的过程中，根据将氧原子***花生四烯酸位置的不同，可分为不同的亚型5-LOX、8-LOX、12-LOX和15-LOX(参阅：Brash AR.(1999)Lipoxygenases：occurrence，functions，catalysis，and acquisition of substrate.J.Biol.Chem.274：23679-82)。越来越多的研究证据表明，5-LOX及其代谢产物参与了肿瘤的进展(参阅：Steele VE，Holmes CA，Hawk ET，et al.(1999)Lipoxygenase inhibitors as potential cancer chemo-preventives.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.8：467-83)、是肿瘤细胞增殖的介质(参阅：Anderson KM，Seed T，Jajeh A，et al.(1996)An in vivo inhibitor of 5-lipoxygenase，MK886，at micromolar concentration induces apoptosis inU937 and CML cells.Anticancer Res.16：2589-99)；5-LOX的抑制剂可以抑制肿瘤的生长(参阅：Gunning WT，Kramer PM，Steele VE et al.(2002)Chemo-prevention by lipoxygenase and leukotriene pathway inhibitors of vinyl carbamate-induced lung tumors in mice.Cancer Res.62：4199-201)。其它8-LOX、12-LOX、15-LOX及其代谢产物也参与了肿瘤的生存和发展，8-LOX和12-LOX及其代谢产物可能促进肿瘤的生成和发展(参阅：Muga SJ，Thuillier P，PavoneA，et al.(2000)8S-lipoxyge-nase products activate peroxisome proliferators-activated receptor alpha and induce differentiation in murine keratino-cytes.Cell Growth Differ.11：447-54；Honn KV，Tang DG，Gao X，et al.(1994)12-lipoxygenases and 12(s)-HETE：role in cancer metastasis.Cancer Metastasis Rev.13：365-96)，而15-LOX及其代谢产物可能抑制肿瘤的发展(参阅：His LC，Wilson LC，Eling TE.(2002)Opposing Effects of 15-Lipoxygenase-1 and-2 Metabolites on MAPK Signaling in Prostate.Alteration in peroxisome proliferatoractivated receptor gamma.J.Biol.Chem.277：40549-56)。
一系列的研究表明，在肿瘤组织中LOX及COX、特别是5-LOX及COX-2表达和活性是增加的，抑制5-LOX和COX-2表达和/或活性可能是预防和治疗癌症的有效途径(参阅：RomanoM，Claria J.(2003)Cyclooxygenase-2 and 5-lipoxygenase converging functions on cell proliferation and tumor angiogenesis：implications for cancer therapy.FASEB J 17：1986-95)。非甾体类抗炎药是一类目前在临床广泛应用的解热镇药，有的是COX的抑制剂，有的是COX和LOX的双重抑制剂。托芬那酸，属于非甾体类解热镇痛药，是COX和LOX的双重抑制剂，最先由丹麦GEA公司研制开发，并首先在丹麦上市，主要用于治疗偏头痛。最近的研究表明，托芬那酸对实验动物的人胰腺癌、结直肠癌具有明显的抑制作用，而且可以增加胰腺癌细胞对放射治疗的敏感性；其作用机制可能与托芬那酸能降解肿瘤细胞内的核转录因子(SP1、SP3、SP4)、抑制表皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)及VEGF受体的产生、抑制生存素(Survivin)生成和激活ESE-1/EGR-1信号通路相关(参阅：Abdelrahim M，Baker CH，Abbruzzese JL，et al.(2006)Tolfenamic acid and pancreatic cancer growth，angiogenesis，and Sp protein degradation.J.Natl.Cancer Inst.98：855-68；Abdelrahim MB，Abbruzzese CH，Sheikh-Hamad JL，et al.(2007)Regulation of vascular endothelial growth factor receptor-1expression by specificity proteins 1，3，and 4 in pancreatic cancer cells.Cancer Res.67：3286-94；Konduri S，Colon J，Baker CH，et al.(2009)Tolfenamic acid enhances pancreatic cancer cell and tumor response to radiation therapy by inhibiting survivin protein expression.Mol.Cancer Ther.8：533-42；Lee SH，Bahn JH，Choi CK，et al.(2008)ESE-1/EGR-1pathway plays a role in tolfenamic acid-induced apoptosis in colorectal cancer cells.Mol.Cancer Ther.7：3739-50.)。然而，托芬那酸的抗肿瘤活性不强(参阅：Abdelrahim M，Baker CH，Abbruzzese JL，et al.(2006)Tolfenamic acid and pancreatic cancer growth，angiogenesis，and Sp protein degradation.J.Natl.Cancer Inst.98：855-68.)。
非甾体类抗炎药在抗肿瘤方面的潜力已引起研究者的重视，早在1999年，就有研究者申请专利，将含羧基的非甾体类抗炎药修饰成肿胺衍生物后，其可选择性抑制COX-2，并具有抗肿瘤活性(参阅：US 6399647B2，Amide derivatives for antiangiogenic and/or antitumorigenic use)。其在评价修饰物时，是用抑制COX的活性为指标的，这可能有一定的局限性，因为最近的研究表明：LOX也参与肿瘤的发展和血管的生成，而且非LOX和COX作用也可能参与抗肿瘤活性。尽管在专利中，也提到了托芬那酸，但没有具体的实施例。
托芬那酸是邻苯胺基苯甲酸的一种。本发明拟以邻苯胺基苯甲酸为先导化合物，修饰合成一系列新的化合物，以增加抗肿瘤活性和改善药物代谢动力学为目标，找到高效(抗肿瘤、解热镇痛等)、低毒的新化合物。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一类具有抗癌和解热镇痛活性的新型低毒化合物及其制备方法。该类化合物对小鼠的急性毒性较低，ICR小鼠，静脉给药，半数致死量(LD50)大于100mg/kg；在一定剂量下，对于人肺癌(NCI-460)、肝癌(SMMC-7721，BEL-7402)、胃癌(BGC-823)、鳞状上皮癌(KB)、***癌(PC-3)、***(HELA)、卵巢癌(HO-8910)、乳腺癌(BT549)、结肠癌(Caco-2)、胰腺癌(ASPC-1，PANC-1)、白血病(HL-60，K562)和胶质细胞瘤(U251)细胞株具有较强的抑制作用；对移植裸鼠的人肿瘤细胞也具有明显的抑制作用；静脉注射后，该类化合物能迅速分布到组织，有较长消除半衰期；对热、化学性刺激引起的疼痛具有明显的抑制作用；而且，该类化合物的制备方法简便，易于操作，成本很低，非常有利于产业化。
本发明采用的技术方案是：
如通式I所示的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐：
I
式中，R1为氢、硝基或氨基；R2为氢、硝基或卤素；R3为氢或卤素；R4为氨基、C1-C10烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C10烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基；若R4是羟基，则R1、R2和R3不同时为氢。
进一步的，本发明提供的通式I所示的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐：式中，R1为氢、硝基或氨基；R2为氢、硝基、氟或氯；R3为氢或氯；R4为氨基、C1-C10烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C5烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基；若R4是羟基，则R1、R2和R3不同时为氢。
再进一步的，本发明提供的通式I所示的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐：式中，R1为氢；R2为硝基或氟；R3为氯；R4为氨基、C1-C5烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C5烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基。
更进一步的，本发明提供的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐，其选自：
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸甲酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸戊酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸苯甲酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸苯酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸单甘油酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰乙胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正辛胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯甲胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯甲氧胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰二乙醇胺、
4-硝基-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
4-硝基-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺、
6-氯-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸、
2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺。
本发明还提供了一种制备通式I所示的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐的方法，其特征是包括以下工艺步骤：
a).将式II化合物
II
与式III化合物反应，
III
得式IV化合物；
b).将式IV化合物
IV
与式V化合物反应，
HR4
V
得式I化合物；其中，R1为氢、硝基或氨基；R2为氢、硝基或卤素；R3为氢或卤素；R4为氨基、C1-C10烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C10烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基；若R4是羟基，则R1、R2和R3不同时为氢。
本发明还涉及该类化合物在制备预防和***等机体异常增生疾病的药物或功能食品中的应用，如：用于制备预防和治疗肺癌、肝癌、胃癌、鳞状上皮癌、***癌、***、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、白血病、胶质细胞瘤等疾病的药物或功能食品；以及在制备治疗和预防机体炎症、痛疼等疾病的药物或功能食品中的应用。
本发明的有益效果主要体现在：该类化合物对小鼠的急性毒性较低，ICR小鼠，静脉给药，半数致死量(LD50)大于100mg/kg；在一定剂量下，对于人肺癌(NCI-460)、肝癌(SMMC-7721，BEL-7402)、胃癌(BGC-823)、鳞状上皮癌(KB)、***癌(PC-3)、***(HELA)、卵巢癌(HO-8910)、乳腺癌(BT549)、结肠癌(Caco-2)、胰腺癌(ASPC-1，PANC-1)、白血病(HL-60，K562)和胶质细胞瘤(U251)细胞株具有较强的抑制作用；对移植裸鼠的人肿瘤细胞也具有明显的抑制作用；静脉注射后，该类化合物能迅速分布到组织，有较长消除半衰期；对热、化学性刺激引起的疼痛具有明显的抑制作用；而且，该类化合物的制备方法简便，易于操作，成本很低，非常有利于产业化。另外，该类化合物作用机制可能比较独特，对肿瘤细胞具有靶向杀伤作用，而对人体正常组织损伤很小。该类化合物有望应用于制备预防和治疗癌症的药物或功能食品中；也有望应用于制备非甾体类解热镇痛药物或功能食品中。
(四)附图说明
化合物对荷瘤裸鼠肿瘤(HO-8910)体积(平均值)的影响
纵坐标：瘤体积，单位mm3；横坐标：时间，单位天
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但本发明的保护范围绝不囿于本实施例所公开的范围。
[实施例1]2-[(2-氯-3-甲基-4-硝基苯基)-氨基]苯甲酸(G-1)的制备
带有电动搅拌、温度计、回流管的250毫升三口烧瓶，加入8.8克(43.5毫摩尔)邻溴苯甲酸、80毫升正丁醇和10.4克无水碳酸钾，搅拌20分钟；通氮气保护，加入0.8克铜粉，8.8克(47.5毫摩尔)4-硝基-3-氯-2-甲基苯胺，加热，90℃保温反应24小时；冷却到60℃强烈搅拌下加入冷水44毫升，真空抽滤，滤液倒入250毫升的烧杯中，冷却到10℃，滴加15％的浓盐酸，pH值调到3.0；析出类淡黄色固体，抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；样品加入145毫升乙醇，水浴加热溶解，活性炭1.6克；趁热过滤，滤液冷却，抽滤烘干得到黄色产物7.2克，收率53.8％。含量98.6％(HPLC面积归一化法)，熔点171-176℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 54.753％，H3.466％；分子式(C14H11N2O4Cl)计算：C 54.812％，H 3.589％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有11个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+306。表明该化合物是G-1。
[实施例2]2-[(2-氯-3-甲基-4-氨基苯基)-氨基]苯甲酸(G-2)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.6克(5.2毫摩尔)G-1(实施例1方法制备的样品)、20毫升水和0.4克铁粉，搅拌，滴加浓盐酸0.4毫升，加热，90℃保温反应24小时；冷却到30℃，强烈搅拌下加入碳酸钾2.2克，真空抽滤，滤液倒入100毫升的烧杯中，冷却到10℃，滴加15％的浓盐酸，pH值调到4.0；析出类淡黄色固体，抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入13毫升乙醇，水浴加热溶解，活性炭0.7克；趁热过滤，滤液冷却，抽滤烘干得到白色产物0.8克，收率55.6％。含量98.3％(HPLC面积归一化法)，熔点136-140℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 60.679％，H4.683％；分子式(C14H13N2O2Cl)计算：C 60.759％，H 4.702％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有13个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+276.5。研究数据表明该化合物是G-2。
[实施例3]4-氟-2-[N-(3-氯--2甲基苯基)氨基]苯甲酸(G-3)的制备
带有电动搅拌、温度计、回流管的500毫升三口烧瓶，加入33克(151毫摩尔)4-氟邻溴苯甲酸，正丁醇250毫升和45克无水碳酸钾，搅拌、加热到60℃保温30分钟；冷却到40℃，通N2保护，加入6克铜粉，40克(283毫摩尔)3-氯-2-甲基苯胺，加热，90℃保温反应24小时；冷却到60℃强烈搅拌下加入冷水150毫升，真空抽滤，滤液倒入500毫升的烧杯中，冷却到10℃，滴加15％的浓盐酸，PH值到3，析出白色固体，抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；300毫升乙醇加热溶解，活性炭5克，热滤，滤液冰水冷却，抽滤烘干得到白色粉末晶体30.3克，收率71.8％。含量99.7％(HPLC面积归一化法)，熔点：85-87℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 60.110％，H 3.929％；分子式(C14H11NO2FCl)计算：C 60.107％，H3.936％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有11个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+279.5。研究数据表明该化合物是G-3。
[实施例4]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸甲酯(G-4)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3(实施例3方法制备样品)，甲醇15毫升，滴加98％硫酸2毫升，加热回流反应12小时；蒸除溶剂，加入甲醇10毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入8毫升甲醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液用冰水冷却，抽滤烘干得到白色结晶体0.8克，收率50.6％。含量99.3％(HPLC面积归一化法)，熔点78-79℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 61.333％，H 4.415％；分子式(C15H13NO2FCl)计算：C 61.329％，H 4.429％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有13个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+293。研究数据表明该化合物是G-4。
[实施例5]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸乙酯(G-5)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3，乙醇15毫升，滴加98％硫酸2毫升，加热回流反应12小时；蒸除溶剂，加入乙醇10毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入8毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液用冰水冷却，抽滤烘干得到白色结晶体1克，收率60.2％。含量99.3％(HPLC面积归一化法)，熔点78-79℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 62.435％，H 4.873％；分子式(C16H15NO2FCl)计算：C 62.439％，H 4.878％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有15个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+307.5。研究数据表明该化合物是G-5。
[实施例6]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸正戊酯(G-6)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3，正戊醇9毫升，滴加98％硫酸1毫升，加热90℃保温反应12小时；真空蒸除溶剂，加入乙醇5毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干，；加入8毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液用冰水冷却，抽滤烘干得到白色产物体0.7克，收率37.1％。HPLC 93.3％(HPLC面积归一化法)，熔点117-120℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 65.189％，H 6.002％；分子式(C19H21NO2FCl)计算：C 65.236％，H 6.009％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有21个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+349.5。研究数据表明该化合物是G-6。
[实施例7]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸苯甲酯(G-7)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3，苯甲醇7毫升，滴加98％硫酸1毫升，加热90℃保温反应12小时；真空蒸除溶剂，加入苯甲醇5毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入8毫升苯甲醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液冰水冷却，抽滤烘干得到白色产物0.9克，收率45.1％。含量97.1％(HPLC面积归一化法)，熔点97-100℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 68.217％，H 4.587％；分子式(C21H17NO2FCl)计算：C 68.200％，H 4.601％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有17个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+369。研究数据表明该化合物是G-7。
[实施例8]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸单α甘油酯(G-8)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3，甘油5克，滴加98％硫酸1毫升，加热90℃保温反应12小时；真空蒸除溶剂，加入乙醇5毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入8毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液冰水冷却，抽滤烘干得到白色产物0.7克，收率36.6％。含量95.3％(HPLC面积归一化法)，熔点197-199℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 57.356％，H 4.677％；分子式(C17H17NO4FCl)计算：C 57.709％，H 4.809％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有17个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+353。研究数据表明该化合物是G-8。
[实施例9]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸苯酚酯(G-9)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3，苯酚3克，滴加98％硫酸1毫升，加热90℃保温反应12小时；加入乙醇5毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入8毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液冰水冷却，抽滤烘干得到类白色产物0.6克，收率31.1％。含量94.1％(HPLC面积归一化法)，熔点152-156℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 67.506％，H 4.265％；分子式(C20H15NO2FCl)计算：C 67.511％，H 4.219％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有15个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+357。研究数据表明该化合物是G-9。
[实施例10]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰胺(G-10)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、10毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃；滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持室温反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，缓缓通入干燥氨气1升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色产物0.5克，收率33.3％。含量98.2％(HPLC面积归一化法)，熔点79-81℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 60.311％，H 4.301％；分子式(C14H12N2OFCl)计算：C 60.323％，H 4.309％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有12个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+278.5。研究数据表明该化合物是G-10。
[实施例11]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰乙胺(G-11)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持室温反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，缓慢加入乙胺2.5毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到类白色产物0.9克，收率48.3％。含量99.0％(HPLC面积归一化法)，熔点88-89℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 62.531％，H 5.173％；分子式(C16H16N2OFCl)计算：C 62.643％，H 5.220％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有16个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+306.5。研究数据表明该化合物是G-11。
[实施例12]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰正丙胺(G-12)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持室温反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，滴加正丙胺3毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色结晶产物1克，收率57.8％。含量99.2％(HPLC面积归一化法)，熔点81-82℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 63.657％，H 5.622％；分子式(C17H18N2OFCl)计算：C 63.651％，H 5.616％。IRvmax(KBr)/cm-1：3262，3075，2966，1633，1588，1568，1519，1428，1267，1154，1015，855，782，754，696，589，553；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：9.61(s，1H，-CO-NH-)，7.41-7.37(m，1H，Ar)，7.21-7.09(m，3H，Ar)，6.56(dd，J1＝2.4Hz，J2＝7.6Hz，1H，Ar)，6.39(dt，J1＝2.4Hz，J2＝7.6Hz，1H，Ar)，6.19(s，1H，Ar-NH-Ar)，3.38(q，J＝6.8Hz，2H，-NH-CH 2 -)，2.34(s，3H，Ar-CH 3 )，1.64(m，2H，J＝7.4Hz，-CH2-CH 2 -CH3)，0.99(t，3H，J＝7.6Hz，-CH2-CH 3 )；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ：169.0，165.4(JC，F＝248.9Hz)，148.8(JC，F＝11.5Hz)，140.3，135.6，130.7，129.3(JC，F＝11.2Hz)，129.20，126.9，125.3，121.6，113.4(JC，F＝2.2Hz)，104.4(JC，F＝22.6Hz)，100.8(JC，F＝26.0Hz)，41.5，22.8，14.9，11.4；EIMS m/z(％)：320(M+，61)，261(83)，247(2)，232(12)，226(100)，198(27)，170(6)，77(4)。ESI-HRMS：[M+H]+320.5。研究数据表明该化合物是G-12。
[实施例13]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰正辛胺(G-13)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，滴加正辛胺6毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色结晶产物0.8克，收率38.0％。含量98.2％(HPLC面积归一化法)，熔点91-92℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 67.681％，H 7.021％；分子式(C22H28N2OFCl)计算：C 67.606％，H 7.170％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有28个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+390。研究数据表明该化合物是G-13。
[实施例14]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰苯甲胺(G-14)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持室温反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，加入苯甲胺3克，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到类白色产物0.7克，收率35.3％。含量96.7％(HPLC面积归一化法)，熔点101-103℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 68.326％，H 4.763％；分子式(C21H18N2OFCl)计算：C 68.385％，H 4.885％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有18个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+368.5。研究数据表明该化合物是G-14。
[实施例15]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰苯胺(G-15)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持室温反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，加入苯胺3克，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色产物0.8克，收率41.9％。含量97.6％(HPLC面积归一化法)，熔点98-101℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 67.678％，H 4.456％；分子式(C20H16N2OFCl)计算：C 67.701％，H 4.513％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有16个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+354。研究数据表明该化合物是G-15。
[实施例16]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰苯甲氧胺(G-16)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，加入苯甲氧胺3.5克，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色产物0.7克，收率33.7％。含量96.4％(HPLC面积归一化法)，熔点198-200℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 65.479％，H 4.512％；分子式(C21H18N2O2FCl)计算：C 65.540％，H 4.681％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有18个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+384。研究数据表明该化合物是G-16。
[实施例17]4-氟-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰二乙醇胺(G-17)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.5克(5.4毫摩尔)G-3、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，滴加二乙醇胺5毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色结晶产物1克，收率50.5％。含量98.9％(HPLC面积归一化法)，熔点78-80℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 58.879％，H 5.436％；分子式(C18H20N2O3FCl)计算：C 58.936％，H 5.457％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有20个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+366.5。研究数据表明该化合物是G-17。
[实施例18]4-硝基-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸的制备(G-18)的制备
带有电动搅拌、温度计、回流管的100毫升三口烧瓶，加入10.2克(33毫摩尔)4-硝基邻溴苯甲酸，正丁醇50毫升和10克无水碳酸钾，搅拌、加热到60℃保温30分钟，然后，冷却到40℃，通N2保护，加入1克铜粉，10克3-氯-2-甲基苯胺，加热，90℃保温反应24小时，冷却到60℃强烈搅拌下加入冷水35毫升，真空抽滤，滤液倒入100毫升的烧杯中，冷却到10℃，滴加15％的浓盐酸，PH值到1-2，析出类土黄色固体，抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；25毫升乙醇加热溶解，活性炭0.2克，热滤；冷却析出结晶，抽滤烘干得到亮橙色柱状晶体5.4克，收率53.4％。含量99.0％(HPLC面积归一化法)，熔点260-263℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 54.801％，H 3.575％；分子式(C14H11N2O4Cl)计算：C 54.812％，H 3.589％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有11个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+306.5。研究数据表明该化合物是G-18。
[实施例19]4-硝基-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸乙酯(G-19)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.7克(5.5毫摩尔)G-18(实施例18方法制备的样品)，乙醇15毫升，滴加98％硫酸2毫升，加热回流反应12小时；蒸除溶剂，加入乙醇10毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；加入10毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.5克，趁热过滤；滤液用冰水冷却，抽滤烘干得到黄色晶体0.8克，收率43.5％。HPLC 97.4％(HPLC面积归一化法)，熔点87-90℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 57.312％，H 4.387％；分子式(C16H15N2O4Cl)计算：C 57.399％，H 4.484％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有15个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+334。研究数据表明该化合物是G-19。
[实施例20]4-硝基-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰正丙胺的制备(G-20)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.7克(5.5毫摩尔)G-18、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，滴加正丙胺3毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色结晶产物1.1克，收率57.6％。含量99.0％(HPLC面积归一化法)，熔点132-136℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 58.702％，H 5.124％；分子式(C17H18N3O3Cl)计算：C 58.705％，H 5.180％。IRvmax(KBr)/cm-1：3343，3079，2965，1640，1588，1571，1525，1351，1288，1018，737，577；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：9.48(s，1H，-CO-NH-)，7.67(d，1H，J＝2.4Hz，Ar)，7.56(d，1H，J＝8.0Hz，Ar)，7.49(dd，J1＝2.4Hz，J2＝8.4Hz，1H，Ar)，7.28-7.15(m，3H，Ar)，6.41(s，1H，Ar-NH-Ar)，3.44(q，J＝6.8Hz，2H，-NH-CH 2 -)，2.34(s，3H，Ar-CH 3 )，1.69(m，2H，J＝7.4Hz，-CH2-CH 2 -CH3)，1.02(t，3H，J＝7.6Hz，-CH2-CH 3 )；13C NMR (CDCl3，100MHz)δ：168.0，150.3，147.3，139.5，135.9，130.9，128.3，127.2，126.0，121.8，121.6，111.2，108.7，41.8，22.7，14.9，11.4；EIMS m/z(％)：347(M+，100)，288(60)，253(91)，242(43)，214(15)，207(33)，179(25)，152(14)。ESI-HRMS：[M+H]+347.5。研究数据表明该化合物是G-20。
[实施例21]6-氯-2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸的制备(G-21)的制备
带有电动搅拌、温度计、回流管的100毫升三口烧瓶，加入4.7克(20毫摩尔)6-氯邻溴苯甲酸，正丁醇25毫升和5克无水碳酸钾，搅拌、加热到60℃保温30分钟，然后，冷却到40℃，通N2保护，加入0.5克铜粉，5克3-氯-2-甲基苯胺，加热，90℃保温反应24小时，冷却到60℃强烈搅拌下加入冷水20毫升，真空抽滤，滤液倒入100毫升的烧杯中，冷却到10℃，滴加15％的浓盐酸，PH值到1-2，析出类白色色固体，抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干；15毫升乙醇加热溶解，活性炭0.2克，热滤；冷却析出结晶，抽滤烘干得到亮橙色柱状晶体3.5克，收率59.1％。含量97.5％(HPLC面积归一化法)，熔点175-177℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 56.689％，H 3.705％；分子式(C14H11NO2Cl2)计算：C 56.757％，H 3.716％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有11个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+296。研究数据表明该化合物是G-21。
[实施例22]2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸乙酯(G-22)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入1.4克(5.4毫摩尔)托酚那酸，乙醇7毫升，滴加98％硫酸1毫升，加热回流反应12小时；蒸除溶剂，加入乙醇5毫升，冷却，析出晶体；抽滤，冷水洗涤，滤饼烘干，；加入8毫升乙醇，加热溶解，加入活性炭0.2克，趁热过滤；滤液用冰水冷却，抽滤烘干得到白色针状晶体1克，收率64.0％。HPLC 99.5％(HPLC面积归一化法)，熔点64-66℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 66.232％，H 5.509％；分子式(C16H16NO2Cl)计算：C 66.321％，H 5.527％。化合物氢核磁共振检测(CDCl3，400MHz)结果：有16个质子信号。ESI-HRMS：[M+H]+289。研究数据表明该化合物是G-22。
[实施例23]2-[N-(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸酰正丙胺(G-23)的制备
带有电磁搅拌、温度计、回流管的50毫升三口烧瓶，加入5.4克(20毫摩尔)托酚那酸、13毫升无水四氢呋喃，冰盐水冷却到-5℃，滴加氯化亚砜0.9克，保持温度小于-2℃，反应0.5小时；缓慢升温到室温，保持反应1小时；冰盐水冷却到0℃以下，滴加正丙胺10毫升，然后室温反应24小时；蒸除溶剂，用乙酸乙酯石油醚混合溶剂重结晶，得到白色结晶产物4克，收率69.1％。含量99.2％(HPLC面积归一化法)，熔点81-82℃。
化合物碳氢元素测定分析(Flash EA-1112，ThermoFingnigan)结果：C 67.422％，H 6.267％；分子式(C17H19N2OCl)计算：C 67.438％，H 6.281％。IR vmax(KBr)/cm-1：3262，3074，2956，1625，1583，1566，1514，1447，1266，1012，768，747，697，519；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：9.32(s，1H，-CO-NH-)，7.43-7.40(m，1H，Ar)，7.26-7.22(m，2H，Ar)，7.12-7.04(m，2H，Ar)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H，Ar)，6.74(t，J＝7.4Hz，1H，Ar)，6.24(s，1H，Ar-NH-Ar)，3.39(q，J＝6.8Hz，2H，-NH-CH 2 -)，2.35(s，3H，Ar-CH 3 )，1.65(m，2H，J＝7.4Hz，-CH2-CH 2 -CH3)，0.99(t，3H，J＝7.6Hz，-CH2-CH 3 )；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ：169.5，145.9，141.3，135.4，132.1，129.6，127.3，126.6，124.1，120.1，118.0，117.7，115.2，41.5，22.8，14.8，11.4；EIMS m/z(％)：302(M+，55)，243(66)，229(3)，214(14)，208(100)，180(28)，152(8)，77(10)。ESI-HRMS：[M+H]+302.5。研究数据表明该化合物是G23。
[实施例24]抗癌活性体外测试
将实施例新化合物G1-G23(化合物分子结构见表1)进行抗人肺癌、肝癌、胃癌、鳞状上皮癌、***癌、***、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、白血病和胶质细胞瘤等人源癌细胞生长的生物活性测试。
测试方法：将处于对数生长期的细胞种植于96孔板，四氮唑盐还原法(MTT法)。
细胞株(来源：上海细胞所)：人肺癌(NCI-460)、肝癌(SMMC-7721，BEL-7402)、胃癌BGC-823、鳞状上皮癌KB、***癌PC-3、***HELA、卵巢癌HO-8910、乳腺癌BT549、结肠癌Caco-2、胰腺癌ASPC-1，PANC-1、白血病HL-60，K562和胶质细胞瘤U251。
作用时间：48小时。
实验结果见表2。结果表明，新化合物的体外抗肿瘤活性明显增强，特别是：G12、G17、G20和G23等。
表1化合物结构
[实施例25]体内代谢动力学测试
以托芬那酸为对照，将实施例新化合物G12、G20和G23进行体内药动学研究。
取大鼠(Sprague-Dawley)16只，雌雄各半，体重220～250g。随机分成4组，每组4只。分组后的大鼠分别尾静脉注射25mg/kg的G12、G20、G23和托芬那酸(水性溶液，5mg/ml，0.5ml/100g)。分别于给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、和24h取血样，血样处理后，用高效液相色谱法(HPLC)测定血样中化合物的量。根据二室静脉注射模型进行拟合，获得最高血药浓度(静脉注射后5分钟，Cmax)和消除半衰期(t1/2)。
从表3可知，与托芬那酸相比，新化合物G12、G20和G23的消除半衰期明显延长(1.5-2.5倍)，表明新化合物在体内的作用时间延长；血药浓度显著减少(1/10-1/20)，表明新化合物很快分布到器官和组织中去了(结合消除半衰期)。这非常有利于新化合物在体内发挥活性作用。
表3G12、G20、G23、托芬那酸的最高血药浓度(Cmax，平均值)和消除半衰期(t1/2，平均值)
| 化合物 | Cmax(μg/ml) | t1/2 |
| G12 | 14.523 | 2.765 |
| G20 | 7.922 | 2.386 |
| G23 | 19.931 | 4.18 |
| 托芬那酸 | 162.28 | 1.654 |
[实施例26]急性毒性测试
体重20～25g的ICR小鼠，1组10只，雌雄各半。经静脉给予100mg/kg的G12、G20和G23(水性溶液，10mg/ml，0.1ml/10g)。连续观察7天，逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。
实验结束后，未发现有实验动物死亡。结果表明，化合物G12、G20和G23静脉给药，半数致死量(LD50)大于100mg/kg。
[实施例27]体内抗肿瘤活性测试
取4-5周龄的雌性裸鼠(BALB/c)50只；剥离荷瘤裸鼠肿瘤(HO-8910瘤株)，剪成1mm3左右的小瘤块，用穿刺针接种于裸鼠右腋下；观察肿瘤生长状态，当肿瘤生长至100-300mm3时，将动物按肿瘤体积随机分为5组，分别为溶剂对照组(control)、G12组、G20组、G23组和托芬那酸组(TA)；经腹腔给予对照溶剂，50mg/kg的G12、G20、G23和TA(水性溶液，5mg/ml，0.1ml/10g)，每周连续给予5天，停2天，连续给予3周；每2-4日称重1次，采用游标卡尺测量肿瘤体积大小。
结果表明，G12、G20和G23的毒性较小，不影响裸鼠体重的增加(正常生长)。从给药后4天开始，化合物G12、G20、G23和TA就显现出一定的抗肿瘤活性，特别是G20表现出显著的抗肿瘤活性(如附图所示)。
[实施例28]体内止痛测试
按醋酸法进行测试。体重20～25g的昆明种雄性小鼠，1组10只。经腹腔给予50mg/kg的G12、G20和G23(水性溶液，5mg/ml，0.1ml/10g)。60min后，腹腔注入0.6％醋酸0.1ml/10g，之后5-20min间记录扭体(stretching，worithing syndromo)次数和发生扭体的动物数。
从表4可知，测试的新化合物都具有抑制醋酸引起的疼痛作用。
表4：G12、G20和G23小鼠扭体法测试结果
按热板法进行测试。体重18-25g的ICR雌性小鼠，将小鼠置于55±1℃的恒热板上，每次1只放在热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间(秒)作为该鼠的痛阈值。选出阈值在5-30s以内的小鼠纳入实验，一组10只。经腹腔给予50mg/kg的G12、G20和G23(水性溶液，5mg/ml，0.1ml/10g)。给药后0.5、1和1.5h后测定各动物的痛阈值。
从表5可知，测试的新化合物都具有抑制热引起的疼痛作用。
表5：G12、G20和G23小鼠热板法测试结果
*表示与对照组相比，P＜0.05。
Claims (8)
1.如通式I所示的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐：
I
式中，R1为氢、硝基或氨基；R2为氢、硝基或卤素；R3为氢或卤素；R4为氨基、C1-C10烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C10烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基；若R4是羟基，则R1、R2和R3不同时为氢。
2.根据权利要求1所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐，其中，R1为氢、硝基或氨基；R2为氢、硝基、氟或氯；R3为氢或氯；R4为氨基、C1-C10烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C5烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基；若R4是羟基，则R1、R2和R3不同时为氢。
3.根据权利要求2所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐，其中，R1为氢；R2为硝基或氟；R3为氯；R4为氨基、C1-C5烷仲胺基、二C1-C5烷叔胺基、苯仲胺基、苯C1-C3烷氧仲胺基、羟基、C1-C5烷氧基、苯氧基、苯C1-C3烷氧基。
4.根据权利要求3所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐，其选自：
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸甲酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸戊酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸苯甲酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸苯酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸单甘油酯、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰乙胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正辛胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯甲胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰苯甲氧胺、
4-氟-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰二乙醇胺、
4-硝基-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
4-硝基-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺、
6-氯-2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸、
2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸乙酯、
2-[(3-氯-2-甲基苯基)-氨基]苯甲酸酰正丙胺。
5.制备如权利要求1所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐的方法，其包括以下步骤：
a).将式II化合物
II
与式III化合物反应，
III
得式IV化合物；
b).将式IV化合物
IV
与式V化合物反应，
HR4
V
得式I化合物；其中，R1、R2、R3和R4如权利要求1中所定义。
6.根据权利要求1-4任一项所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或***疾病的药物或功能食品中的应用。
7.根据权利要求6所述的肿瘤疾病是指肺癌、肝癌、胃癌、鳞状上皮癌、***癌、***、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、白血病或胶质细胞瘤。
8.根据权利要求1-4任一项所述的邻苯胺基苯甲酸衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗机体炎症、痛疼疾病的药物或功能食品中的应用。
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