CN101982089A - 一种兽用微生态制剂及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽用微生态制剂及其制备方法与用途，属于微生态制剂技术领域。该微生态制剂的活性成分为酪酸梭菌CGMCC No.1925菌粉。本发明的兽用微生态制剂活菌含量高；对抗生素有耐受性，对一些抗生素不敏感或敏感性弱；而且，该微生态制剂可替代一些抗生素；可耐胃酸、胆盐、高温等。另外，本发明微生态制剂的制备方法简单，用本发明的制备方法制备出的微生态制剂，酪酸梭菌活菌含量高。本发明的兽用微生态制剂有较好的市场前景。

Description

一种兽用微生态制剂及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种兽用微生态制剂及其制备方法与用途，属于微生态制剂技术领域。

背景技术

兽用微生态制剂是一种绿色、安全的饲料添加剂，具有防病、增强机体免疫力、促进生长、增加体重等多种功能，且无污染，无残留，不产生抗药性。

目前，市场上的微生态制剂存在以下几个方面的问题：(1)活菌含量低，而研究表明，如果一种菌在盲肠内容物中的浓度低于10⁷个/g，则该菌产生的酶及代谢产物不足以影响宿主，难以满足治疗需要；(2)不耐抗生素；(3)对高温、胃酸和胆盐不稳定，致使只有少数菌株进入肠道后仍具有活性，达不到发挥作用所需的活菌数量；(4)不稳定，保存期短。由于微生态制剂存在的这些问题，从而影响了其在动物上的应用效果，限制了微生态制剂的广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对抗生素有耐受性、活菌含量高、稳定、保存期长的兽用微生态制剂。该兽用微生态制剂中主要活性成分是酪酸梭菌CGMCCNo.1925菌粉。

本发明的另一目的是提供该兽用微生态制剂的制备方法和用途。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种兽用微生态制剂，该制剂的活性成分为酪酸梭菌CGMCC No.1925菌粉。

其中，所述的酪酸梭菌(Clostridium butyricum)CGMCC No.1925为申请人从动物肠道中分离、选育得到，经中国工业微生物菌种保藏管理中心鉴定，并于2007年1月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(简称CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.1925。本发明的酪酸梭菌CGMCC No.1925对胆汁的耐受性很高，胆汁处理对酪酸梭菌的活性几乎没有影响；短时间内可耐强酸，如pH 1.0或pH 2.0，在pH 3.0、4.0条件下可长时间耐酸，酪酸梭菌的活性基本不受影响；耐高温，具有较好的热存放稳定性；对一些抗生素不敏感，如对硫酸粘杆菌素不敏感，对诺氟沙星敏感性弱。

本发明的兽用微生态制剂中，酪酸梭菌CGMCC No.1925菌浓度为1×10⁶CFU/g～1×10¹⁰CFU/g。

进一步，酪酸梭菌CGMCC No.1925菌浓度为1×10⁹CFU/g。

本发明的兽用微生态制剂还可进一步包含载体，载体为石粉、硫酸钾铝、玉米芯粉中的任一种或两种。

本发明还提供了该兽用微生态制剂的制备方法，其制备过程如下：

(1)酪酸梭菌CGMCC No.1925的菌种复壮；

菌种的复壮代数可根据实际需要进行，但申请人在发明过程中发现，酪酸梭菌CGMCC No.1925经过4代复壮，第4代发酵液芽孢率高且平板记数较高，因此申请人优选***作为复壮菌种；

(2)酪酸梭菌CGMCC No.1925的培养、发酵：将复壮菌种接种于CBM液体培养基中，37℃恒温箱中培养24小时，芽孢率在75％以上后，接种于发酵罐中，接种量10％，37℃恒温培养24小时，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃；

(3)连续离心收集菌体，将菌泥用保护液和载体调配至固型物浓度5-10％，以进口温度115℃，出口温度80℃的条件进行喷雾干燥，收集菌粉，即得；

菌粉的收集方法可为其它方法，如用45℃左右气流干燥，干燥后制成菌粉，但申请人发现喷雾干燥制备的菌粉活菌含量高，所以本发明优选喷雾干燥。

其中，CBM培养基配方：葡萄糖1.0％、酪蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、牛肉膏0.5％、(NH₄)₂SO₄0.3％、NaCl 0.3％、K₂HPO₄·H₂O 0.4％、MnSO₄·H₂O 0.02％、MgSO₄·7H₂O 0.05％、CaCO₃ 0.2％、琼脂2.0％(固体培养基用)，pH值：7.2，灭菌条件：121℃，30分钟。

其中，所述的保护液为10％的脱脂奶。

本发明还提供了该兽用微生态制剂用于制备饲料添加剂的用途。

本发明的兽用微生态制剂活菌含量高，酪酸梭菌CGMCC No.1925菌浓度可高达1×10¹⁰CFU/g；对抗生素有耐受性，在动物的生长过程中，不可避免的要使用抗菌素对动物疾病进行治疗，为了防止疾病的发生和促进生长，国内的一些饲料生产企业和养殖企业在饲料中添加亚剂量的抗菌素，这种养殖行为对动物肠道微生态会产生很大的影响，很多微生态制剂在此种情况下而不能发挥其原有的作用，但本发明的微生态制剂对某些抗生素不敏感或敏感性弱，如对硫酸粘杆菌素不敏感，对诺氟沙星敏感性弱，因此本发明的微生态制剂在制备及使用过程中，就可不受这些抗生素的影响，即使这些抗生素存在，也能发挥本发明微生态制剂的活性成分——酪酸梭菌CGMCC No.1925增强机体免疫力、促进生长、增加体重等益生作用；而且，微生态制剂因其绿色、环保可替代抗生素而受人类青睐，本发明的微生态制剂在研究中还发现，本发明的微生态制剂可真正替代一些抗生素，如黄霉素，二者抗病能力相当；本发明的微生态制剂耐胃酸、胆盐、高温等，菌株进入肠道后仍具有活性，从而发挥其作用；且该制剂在25℃、40℃温度的保存条件下活性基本稳定，随存放时间的延长，活性虽有下降，但活性损失不大；另外，本发明微生态制剂的制备方法简单，各种实验条件都经过了申请人的实验研究，用本发明的制备方法制备出的微生态制剂，酪酸梭菌活菌含量高，在制备过程中酪酸梭菌CGMCC No.1925表现较好的抗机械加工性，造粒加工后，活性基本没有被破坏，在饲料中的稳定性较好等。

通过下列实施例将更具体的说明本发明，但是应理解所述实施例仅是为了说明本发明，而不是以任何方式限制本发明的范围。

具体实施方式

实施例1酪酸梭菌的分离、鉴定

样品采集：菌种分离的样品来自动物肠道中。

菌体为直或弯曲，端圆，单个或成对、短链偶见长丝状菌体，周生鞭毛，能运动；革兰氏阳性，在老培养物中能变为阴性；菌体中常有圆形或椭圆形芽孢，使菌体中部膨大成梭形，孢子偏心或次端生、无孢子外壁或附属丝；表面菌落圆形或不规则，直径1-3毫米，稍凸，白色至奶油色，表面有光泽至无光泽；该菌为厌氧菌，在合适的培养基中生长良好，并产气。经中国工业微生物菌种保藏管理中心鉴定为酪酸梭菌(Clostridium Butyricum)。

实施例2酪酸梭菌的培养

1.材料与方法

(1)菌种：酪酸梭菌CGMCC No.1925

(2)器材：光学显微镜，厌氧罐，恒温培养箱等。

(3)药品：结晶紫染液，石炭酸复红染液。

(4)培养方式：三角瓶液体深层静置培养(非严格厌氧条件)。平皿固体培养需置于厌氧罐中进行。

(5)检测方法：菌数测定可用平板倾注法和血球记数法。菌体形态用结晶紫染液及石炭酸复红染液染色后于显微镜下观察。

2.结果

(1)碳氮源配比试验

以葡萄糖为碳源，氮源选用蛋白胨、酵母粉及牛肉浸膏组成复合氮源提供菌体生长所需的生长因子。实验中固定培养基其他组分用量，分别以碳氮源为变量进行对比培养，以下是不同碳氮源用量及比例的培养结果。

①碳源用量试验：以葡萄糖为碳源，分为6个用量水平进行培养，结果见表1。

表1.葡萄糖用量对比试验结果

结果表明碳源在1.0％水平时，菌体生长较好，菌数较高。

②氮源配比试验：鉴于酪酸梭菌菌株的生长要求，参考几种现有培养基的组成，试验以酪蛋白胨、酵母浸膏粉和牛肉浸膏为复合氮源，分别做不同配比的培养试验，结果见表2。

表2.氮源配比试验结果

结果表明氮源组成和比例对菌数有明显影响，其中6、7组的培养结果较好。

③碳氮综合试验：结合以上两个试验结果，进行不同碳氮比下菌体得率和芽孢生成率的试验。结果见表3。

表3.碳氮综合试验结果

结果表明2组菌数和芽孢转化率较高。

综合以上试验结果，兼顾菌量和芽孢率，最终确定碳氮源配比：葡萄糖1.0％、酪蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、牛肉浸膏0.5％。

(2)无机盐及微量元素的配比研究

根据酪酸梭菌营养利用特性，分别做了几组不同无机盐及微量元素配比的培养试验，试验中采用(NH₄)₂SO₄作为无机氮源；用K₂HPO₄作为缓冲物及K⁺来源；添加MgSO₄和MnSO₄试验结果见表4。

表4.无机盐及微量元素配比试验结果

结果表明无机盐及微量元素的配比与芽孢形成有密切的关系，尤其是Mg²⁺对芽孢转化率的提高有显著的作用。其中第5组的培养结果较理想，按此可确定无机盐及微量元素的配比。

(3)添加抗氧化剂对菌体生长影响的研究

本实验用Vc和半胱氨酸作为抗氧化剂加入培养基，与空白组做培养对比试验，结果见表5。

表5.厌氧试验

从表5结果可以看出，抗氧化剂添加与否对培养结果并无明显影响，而抗氧化剂灭菌时易失活，且会影响培养基pH。因此培养基中可不必添加抗氧化剂。综合以上试验结果，最终确定培养基配方，见表6。

表6.酪酸菌培养基配方

pH＝7.0灭菌条件：121℃20min。

(4)接种pH

本实验以几种不同的接种pH进行接种培养，培养结果见表7。

表7.接种pH试验

结果表明酪酸梭菌适宜接种pH为中性，确定pH7.0为最佳接种条件。

(5)热处理方法研究

酪酸梭菌为内生芽孢菌，此类菌的优选及复壮一般都可采用热处理的方法。据此本实验在菌种转接时进行热处理。具体操作为培养基升温至80℃接种，接种后于80℃保持10分钟，然后冷却至培养温度继续培养，通过此步处理可起到优化菌种、激活芽孢促使其尽快萌发、促成同步培养以及进一步防止污染等效果。以下为热处理组与常温接种组连续转接3次后的对照实验结果。

表8.热处理对照实验结果

(6)培养温度研究

酪酸梭菌适宜培养温度为32-40℃，本实验分别取不同温度进行培养，24hr培养结果见表9。

表9.培养温度试验

根据表9结果，可确定最适培养温度为36℃。

(7)培养时间研究

培养时间是影响菌浓及芽孢成熟率的重要因素，本实验取不同培养时间进行培养，结果见表10。

表10.培养时间试验

结果表明培养时间短菌数高，但芽孢转化率及成熟度均较低；时间过长芽孢转化率及成熟度并无提高，反而出现菌体老化、菌数下降的情况。试验结果表明24hr为最适培养时间。

实施例3酪酸梭菌的耐受性实验

1、实验材料

菌种：酪酸梭菌CGMCC No.1925；嗜酸乳杆菌，北京市真菌工程实验室提供；

胆汁：动物胆汁，中国农业科学院畜牧研究所提供；

培养基：酪酸梭菌和嗜酸乳杆菌培养，均使用MRS培养基；MRS培养基配方：葡萄糖2％、酪蛋白胨0.5％、酵母粉0.3％、牛肉膏0.5％、(NH₄)₂SO₄0.2％、NaCl 0.2％、K₂HSO₄·H₂O 0.2％、KH₂SO₄0.2％、CaCO₃0.5％、琼脂2.0％(固体培养基用)、pH值：7.2，灭菌条件：121℃30分钟。

2、实验方法

2.1酪酸梭菌培养基接种后培养24小时，芽孢生成率≥85％，离心分离，使用蒸馏水制成菌悬液；嗜酸乳杆菌培养基接种后培养24小时，离心分离，使用蒸馏水制成菌悬液；

2.2配制不同胆汁浓度的液体，加入1/5的菌悬液，使胆汁的最终浓度为0.0、0.3、0.6、1.0％，处理1-6小时，用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数；

2.3将酪酸梭菌菌悬液用盐酸调pH到1、2、3、4，处理1-4小时后，用0.2M pH7.0的无菌磷酸盐缓冲溶液将样品逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数；

2.4将酪酸梭菌菌粉于常温(25℃)、80、90、100℃生理盐水中处理5、10、15、20分钟后，用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数。将酪酸梭菌菌粉用铝薄袋包装，放于常温(25℃)和60℃保温箱中存放10天，于第5、10天，取样用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数。

3、实验结果

3.1耐胆汁试验

将酪酸梭菌和嗜酸乳杆菌的菌悬液用预先配制好的胆汁溶液处理，处理时间分别为1、1.5、3、4.5、6小时，用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，然后测定酪酸梭菌活菌数，以无胆汁处理的样品为100％，计算存活率。结果见表11。

表11.酪酸梭菌耐胆汁试验

结果表明胆汁处理对酪酸梭菌的活性几乎没有影响，而嗜酸乳杆菌经胆汁处理后活性有明显下降的趋势，酪酸梭菌对胆汁的耐受性很高。

3.2耐酸试验

使用盐酸模拟胃酸环境，处理酪酸梭菌和嗜酸乳杆菌，不同时间测定酪酸梭菌和嗜酸乳杆菌的活性，以pH7样品的活菌数为100％，计算试验样品的存活率，测定结果见表12。

表12.酪酸梭菌耐酸试验

结果表明，在2小时内，酪酸梭菌对酸不敏感，活性基本无变坏，甚至在pH 1.0的环境中也很稳定，但随其在酸溶液中时间的延长，在pH 1.0、2.0条件下活性明显降低，在pH 3.0、4.0条件下酪酸梭菌的活性基本不受影响。结果显示，酪酸梭菌的耐酸性能明显强于嗜酸乳杆菌。

3.3耐温试验

酪酸梭菌菌粉于常温(25℃)、80、90、100℃生理盐水中处理5、10、15、20分钟后，用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数，以25℃条件的活菌数为100％，计算存活率。结果见表13。

酪酸梭菌菌粉于常温(25℃)和60℃温箱保存，在第5、10天取样，用蒸馏水逐级稀释至一定浓度，进行酪酸梭菌平板计数，以25℃条件的活菌数为100％，计算存活率。结果见表14。

表13.液体中耐高温试验

结果表明，在高温液体中酪酸梭菌具有一定的耐受能力，但在100℃条件下存活率降低较快，饲料加工过程只是瞬间达到高温，因此判断酪酸梭菌具有耐受饲料加工的瞬间热破坏的能力。同样条件下嗜酸乳杆菌全部灭活。

表14.耐高温保存试验

结果表明酪酸梭菌具有较好的热存放稳定性。

实施例4酪酸梭菌的抗性

1、材料与方法

1.1菌种：酪酸梭菌CGMCC No.1925

1.2培养基：MRS培养基

1.3不锈钢小管：内径6mm、高10mm、外径7.8mm。

1.4抗菌素：

(1)卡那霉素：含量98％，北京百林康源生物技术有限责任公司提供。

(2)杆菌肽锌：含量15％，天津新兴兽药厂提供。

(3)黄霉素：含量5％，北京大北农饲料科技公司提供。

(4)硫酸粘杆菌素：含量15％，天津新兴兽药厂提供。

(5)诺氟沙星：含量95％，北京都德伟业饲料公司提供。

1.5方法

(1)菌悬液配置：取酪酸梭菌接种于250ml灭菌的MRS培养中，37℃培养24小时，计数后，用无菌水稀释至浓度为1×10⁷个菌/ml的菌悬液，作为接种液。

(2)双碟的制备：将20ml灭菌后的MRS固体培养基融化后加入培养皿中，冷却制作第一层培养基。然后去融化的MRS培养基5ml和菌悬液1ml，于50-60℃加入培养皿中，摇匀后冷却制作第二层培养基(作为菌层)。

(3)检测：采用三剂量法，在每个培养皿中放入6个不锈钢小管，其中一组间隔的3个管中滴加高、中、低浓度的参照抗菌素溶液。另外3管加入稀释至一定浓度的试验高、中、低浓度样品(使用饲料用抗菌素推荐用量)，使用卡那霉素作为参照抗菌素。试验用抗菌素溶液配置见表15。

表15.抗菌素样品配置表

2、试验结果

将按表15配制的抗菌素溶液滴加到培养皿的钢管中，于37℃，厌氧罐中培养24小时后，观察抑菌圈大小，同参照抗菌素相同或接近的判断为敏感。研究结果表明，酪酸梭菌CGMCC No.1925对硫酸粘杆菌素不敏感，对诺氟沙星敏感性弱。

实施例5微生态制剂的制备

(1)酪酸梭菌CGMCC No.1925的菌种复壮；

酪酸梭菌CGMCC No.1925的菌种接种于250mlMRS培养基(500ml三角瓶)中，于37℃恒温箱中培养24小时，按此条件依次接种5代(接种量为10％)。实验结果如表16。

表16.酪酸梭菌传代试验

由上表可知第4代发酵液芽孢率高且平板记数较高，但发酵参数无很大差距，传代过程中，选***进行平板分离，挑取单菌落制作试管斜面，并将其保存在4℃冰箱中。

(2)酪酸梭菌CGMCC No.1925的培养、发酵：将复壮菌种接种于CBM液体培养基中，37℃恒温箱中培养24小时，芽孢率在75％以上后，接种于发酵罐中，接种量10％，37℃恒温培养24小时，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃；

(3)连续离心收集菌体，将菌泥用10％脱脂奶和玉米芯粉调配至固型物浓度10％，以进口温度115℃，出口温度80℃的条件进行喷雾干燥，收集菌粉或风干收集菌粉；

CBM培养基配方：葡萄糖1.0％、酪蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、牛肉膏0.5％、(NH₄)₂SO₄0.3％、NaCl 0.3％、K₂HPO₄·H₂O 0.4％、MnSO₄·H₂O 0.02％、MgSO₄·7H₂O0.05％、CaCO₃0.2％、琼脂2.0％(固体培养基用)，pH值：7.2，灭菌条件：121℃，30分钟。结果见表17

表17.微生态制剂检测结果(离心风干分离)

表18.微生态制剂检测结果(喷雾干燥)

结果表明喷雾干燥方式制备的菌粉比气流干燥制备的菌粉菌含量高，所得菌粉用铝箔袋封口，保存于4℃冰箱中。

实施例6微生态制剂的稳定性试验

一、材料与方法

1、实施例5喷雾干燥制备的微生态制剂，菌浓度7.4×10⁹cfu/g

2.培养基：葡萄糖15g，酪蛋白胨5g，酵母浸膏5g，氯化钠2g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，硫酸铵2g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2。将上述培养基分装后高压灭菌121℃20-30分钟。

3.取样稀释：以无菌操作取样品1g，放入装有99ml灭菌液体培养基和适量玻璃珠的三角瓶中，放于37℃恒温箱中活化1小时，用机械振荡器振荡30分钟制成1∶100的样品均液。用1ml无菌吸管，吸取1∶100样品均液1ml，沿管壁注入含有9ml无菌水生理水的试管中。另取1ml无菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液。如此每递增一支，更换1支1ml无菌吸管。

4.培养条件：选择合适的三个连续稀释度样品液进行平板计数。每个稀释度作6个平皿，在平皿上作上标记。每个平皿中加入12-15ml已融化并冷却至45-50℃的MRS培养基，待培养基冷却且表面干燥后，用无菌吸管吸取相应梯度的混合稀释液0.1ml加入平皿中，并立即用涂布器均匀涂布在冷却培养基表面。以上整个操作应自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20分钟内完成。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过2分钟，应用机械振荡器振荡15秒。待稀释液完全渗入培养基内后，将平板翻转，置于厌氧菌培养罐中于37±1℃温箱内培养24-48小时取出。

5.厌氧培养：

(1)利用氢硼化钠或氢硼化钾与水反应产生氢气，在钯的催化下，氢气与袋内的氧气结合生成水，从而建立起无氧环境。

(2)在无氧环境下加入10％左右的二氧化碳，有利于厌氧菌的生长。二氧化碳是由柠檬酸和碳酸氢钠反应得到的。

(3)称取2克氢硼化钠或氢硼化钾，1克柠檬酸和1克碳酸氢钠，用适当大小的滤纸包好，并装在三面密封的小塑料袋中。将干燥剂在电炉上烘烤5分钟左右，安装在厌氧菌培养罐的盖子下面。

(4)将准备好的平板倒置于铝制的小架子里，放在厌氧罐中，将装有药品的小塑料袋放在小架子旁边。

(5)将厌氧菌培养罐的盖子盖好，把盖子上的小口打开，用吸管吸取10ml左右的蒸馏水，通过小口加入到药品包上，尽快撤出吸管，并把口拧紧。

(6)待药品反应完全，且罐无漏气现象，将罐置于37±1℃温箱中培养。

6.计数：

7.样品试验：

(1)制剂存放试验：将实施例6喷雾干燥制备的微生态制剂分装于铝薄袋中，分别存放于25℃、40℃温度的保温箱中，于不同时间测定样品中的菌数。

(2)制剂在饲料中的稳定性试验：将实施例6喷雾干燥制备的微生态制剂按1％的添加量添加于饲料中，进行冷造粒，颗粒料分装于塑料袋中，存放于室温(20-30℃)，于不同时间取样测定饲料中的酪酸梭菌活菌数量。

二.试验结果

1.制剂存放试验

(1)25℃存放试验，见表19。

表19 25℃存放试验结果

(2)40℃存放试验，见表20。

表20 40℃存放试验结果

2.本发明的微生态制剂在饲料中的稳定性试验，见表21。

表21本发明的微生态制剂在饲料中的稳定性试验

试验结果表明，本发明实施例5制备的微生态制剂在25℃、40℃温度的保存条件下活性基本稳定，随存放时间的延长，活性略有下降，但在试验期内活性损失不大。

实施例7酪酸梭菌替代肉鸡饲料抗生素的应用效果实验

1材料与方法

1.1试验材料

实施例5喷雾干燥制备的微生态制剂，即微生态制剂，活菌数7.4×10⁹CFU/g。

1.2试验动物及分组

试验地点：试验在山东寿光鸡场

试验时间：42天

选取10日龄健康的AA肉鸡(公母混合)1200只，随机分布到10个处理组，每个处理3个重复，每个重复40只。饲养时间为42天。试验分组情况见表22。

表22试验动物分组及分组

1.3日粮配制

参照NRC(1994)肉鸡营养需要标准和本试验鸡场的饲养标准进行日粮设计和配制。基础日粮配方见表23。

表23试验基础日粮组成

1.4饲养管理

按照本试验鸡场的常规管理程序进行免疫和日常管理，采用地面平养垫料方式进行饲养，自由采食和饮水，每天投料两次，即上午9点和下午4点。在10、22和43日龄以重复为单位进行空腹称重，每天仔细观察和记录鸡只的健康状况和粪便情况，以重复为单位记录每天的投料量。

1.5检测指标

平均日采食量、平均日增重、料重比、腹泻率和成活率

1.6数据分析

采用SPSS13.0软件进行数据统计分析。

2结果与分析

2.1不同益生菌处理组对10-21日龄生产性能比较

表24 10-21日龄生产性能比较

备注：表格中同一列不同字母代表差异显著(p≤0.05)，字母相同者代表差异不显著(p≥0.05)，以下表同。

从表24结果得知，21d平均个体重：添加酪酸梭菌的试验组，添加量0.2％组最高，比抗生素对照组提高2.27％。

10-21d平均日增重：酪酸梭菌组以0.2％添加剂最高，显著高于0.05％和0.1％添加组(p≤0.05)，酪酸梭菌各处理组与两个对照组差异都不显著(p≤0.05)；各处理组以添加酪酸梭菌0.2％组最高。

10-21d料重比：酪酸梭菌组以0.2％添加剂最低，但各组间差异不显著(p≥0.05)。

2.2 10-42日龄不同益生菌处理生产性能比较

表25 10-42日龄生产性能比较

从表25结果可以看出，10-42d平均日增重和料重比及42d平均个体重各组间都差异不显著。酪酸梭菌组的42d平均个体重和10-42d平均日增重以低剂量的0.05％添加组最好，且分别比抗生素对照组提高了1.97％。

3结论

本试验结果表明，在肉鸡生长前期添加0.2％酪酸梭菌替代抗生素的综合效果较好；生长后期酪酸梭菌以低剂量的0.05％添加效果较好，添加本发明微生态制剂组死淘率显著降低，与添加黄霉素组死淘率相当，说明本发明的微生态制剂与黄霉素具有同等的抑菌作用，可替代黄霉素预防动物的疾病发生。

Claims (7)

1.一种兽用微生态制剂，其特征在于活性成分为酪酸梭菌CGMCC No.1925菌粉。

2.权1所述的兽用微生态制剂，其特征在于酪酸梭菌CGMCC No.1925菌浓度为1×10⁶CFU/g～1×10¹⁰CFU/g。

3.权2所述的兽用微生态制剂，其特征在于酪酸梭菌CGMCC No.1925菌浓度为1×10⁹CFU/g。

4.权1～3任一项所述的兽用微生态制剂，其特征在于进一步包含载体，载体为石粉、硫酸钾铝、玉米芯粉中的任一种或两种。

5.如权1～4任一项所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于制备过程如下：

(1)酪酸梭菌CGMCC No.1925的菌种复壮；

(2)酪酸梭菌CGMCC No.1925的培养、发酵：将复壮菌种接种于CBM液体培养基中，37℃恒温箱中培养24小时，芽孢率在75％以上后，接种于发酵罐中，接种量10％，37℃恒温培养24小时，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃；

(3)连续离心收集菌体，将菌泥用保护液和载体调配至固型物浓度5-10％，以进口温度115℃，出口温度80℃的条件进行喷雾干燥，收集菌粉，即得；

CBM培养基配方：葡萄糖1.0％、酪蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、牛肉膏0.5％、(NH₄)₂SO₄0.3％、NaCl 0.3％、K₂HPO₄·H₂O 0.4％、MnSO₄·H₂O 0.02％、MgSO₄·7H₂O0.05％、CaCO₃0.2％、琼脂2.0％(固体培养基用)，pH值：7.2，灭菌条件：121℃，30分钟。

6.权5所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于所述的保护液为10％的脱脂奶。

7.如权1～4任一项所述的兽用微生态制剂在制备饲料添加剂中的应用。