CN101967135B - 一种4-芳基香豆素类化合物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种4-芳基香豆素化合物及其制备方法和用途。该4-芳基香豆素类化合物具有如式(I)所示结构。制备包括以下步骤：以取代苯甲醛及丙二酸为原料，在吡啶与哌啶存在条件下加热，发生Perkin反应及脱羧反应，得到一系列取代苯基丙烯酸类化合物。取代苯基丙烯酸类化合物经溴代及消除反应或经乙酰化保护酚羟基后再经溴代及消除反应制备得到取代苯基丙炔酸类化合物。取代苯基丙炔酸类化合物与酚类化合物在三氟化硼***与三氯氧磷或三氟乙酸的催化下发生反应，得到一系列4-芳基香豆素类化合物。该化合物可用于制备抗肿瘤、抗血管异常增生、抗菌、抗氧化、抗疟疾药物。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，特别涉及一种4-芳基香豆素类化合物及其制备方法和用途。
背景技术
芳基香豆素(arylcoumarin，芳基-2H-1-苯并吡喃-2-酮)是一些天然产物的基本结构，广泛存在于自然界。芳基香豆素主要有3-芳基香豆素和4-芳基香豆素两大类。由于它与异黄酮及二苯乙烯类等天然产物具有相似的骨架结构，因而受到研究人员的关注。研究表明，芳基香豆素类化合物具有多种有益的生理活性，如抗白血病(Leuk.Res.2008，32：1914；J.Med.Chem，2003，46：5437；Exp.Hema，2008，36：1625)，抗真菌(Life.Sci.2002，71：1449；Microbiology，2005，151：1691)，抗凝血(Bioorg.Med.Chem.Lett，2006，16：257)，抗氧化(Bioorg.Med.Chem，2007，15：1516)，抗病毒(Nat.Prod.Res.2002，17(2)：91)、抗炎(Nat.Prod.Res，2007，21(12)：1104；Immu.Inve.2007，36：203)及抗糖尿病活性(Phytochemistry，2007，68：2087)等。2003年，日本东京大学的Minpei Kuroda等人就发现了多个具有PPAR-γ配体结合活性的3-芳基香豆素，这些3-芳基香豆素可以通过与PPAR-γ配体结合激活过氧化物酶体增生物激活受体，从而降低糖尿病小鼠的血糖水平(Bioorg.Med.Chem.Lett.2003，13：4267)。同年，Christian Bailly等人证实4-芳基香豆素 类化合物对肿瘤细胞具有明显的细胞毒性，能抑制微管蛋白的组装，导致肿瘤细胞死亡(J.Med.Chem.2003，46：5437)。可见，芳基香豆素类化合物中可能发现具有良好生物活性的化合物，是极具研究价值的、值得关注的化合物结构类型。
4-芳基香豆素类化合物作为芳基香豆素中的重要类别，其化学合成与生物活性研究在近年来逐渐受到重视，但相关研究仍属刚刚起步。4-芳基香豆素类化合物在结构上与CombretastatinA-4、鬼臼毒素具有一定的相似性，因而其生物活性研究和进一步的结构修饰工作非常值得关注。
Combretastatin A-4 鬼臼毒素 4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-5，6，7-三甲氧基香豆素
发明内容
为了解决上述现有技术存在的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种4-芳基香豆素类化合物。
本发明的另一目的在于提供上述4-芳基香豆素类化合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述4-芳基香豆素类化合物的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种4-芳基香豆素类化合物，该4-芳基香豆素类化合物具有如式(I)所示的结构：
(I)
其中R1、R2、R3、R5或R7为H、OCH3或OH；R4为H或OH；R6为H或OCH3。
上述4-芳基香豆素类化合物的制备方法，包括以下操作步骤(制备工艺流程如图1所示)：
(1)以丙二酸和取代苯甲醛为原料，在吡啶和六氢吡啶存在条件下加热，发生Perkin缩合和脱羧反应，经分离纯化得到取代苯基丙烯酸类化合物；所述取代苯甲醛具有如式(II)所示结构，其中R5为H、OCH3或OH，R7为H、OCH3或OH，R6为H或OCH3；
(II)
(2)将取代苯基丙烯酸类化合物溶于无水乙醇中，加入氯化亚砜(SOCl2)加热至回流，反应1～4h，浓缩反应液，加入水，产物自然析出，放置过夜，抽滤得到取代苯基丙烯酸乙酯；
(3)将取代苯基丙烯酸乙酯溶于二氯甲烷中，冰浴条件下滴加Br2，在5～30min内加完，搅拌0.5～3h，水洗反应液，旋干溶剂，静置过夜，得到2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物；
(4)将2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物、氢氧化钾及乙醇混合搅拌均匀，加热至回流，反应8～12h，冷却后加入浓盐酸至酸性，***萃取，旋 干溶剂后得苯基丙炔酸类化合物粗品；
(5)将苯基丙炔酸类化合物粗品和酚类物质溶入三氟化硼***溶液(BF3-Et2O)中，搅拌均匀，再加入三氯氧磷(POCl3)，常温搅拌2～12h，环合反应完全后，经分离纯化，得到如式(I)所示的4-芳基香豆素类化合物；或者将苯基丙炔酸类化合物粗品、酚类物质与三氟乙酸(CF3COOH)混合，常温条件下搅拌直到反应完全，经分离纯化，得到如式(I)的4-芳基香豆素类化合物。
步骤(1)所述丙二酸和取代苯甲醛的摩尔比为1∶1～1.5∶1；所述吡啶与六氢吡啶的摩尔比为20∶1～20∶6；所述吡啶与丙二酸的摩尔比为1∶1～1∶5。
步骤(1)所述分离纯化是反应完毕，冷却10～60min，加入1～10M的盐酸溶液，放置2～10h，抽滤，用水洗涤沉淀，得到取代苯基丙烯酸类化合物粗品；将取代苯基丙烯酸类化合物粗品用无水乙醇重结晶，得到纯品取代苯基丙烯酸类化合物，收率为85％～95％。
步骤(2)所述取代苯基丙烯酸乙酯类化合物含有游离酚羟基时，将取代苯基丙烯酸乙酯溶于乙酸中，加入氯化亚砜(SOCl2)加热至回流，反应1～4h，加入水，产物自然析出，静置，抽滤，得到酚羟基被乙酰基保护的取代苯基丙烯酸乙酯类化合物。
步骤(2)所述取代苯基丙烯酸类化合物、氯化亚砜和乙醇的摩尔比为1∶(1～2)∶(3～10)。
步骤(3)所述冰浴的温度为0～4℃。
步骤(3)所述取代苯基丙烯酸乙酯、Br2和二氯甲烷的摩尔比为1∶(1～1.5)∶(10～50)。
步骤(4)所述氢氧化钾与乙醇的摩尔比为1∶1.2～1∶5；所述2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物与氢氧化钾的摩尔比为1∶3～1∶30。
步骤(5)所述分离纯化是将反应液倒入冰水中，用***萃取，旋干除 去***，得到4-芳基香豆素类化合物粗品；再将4-芳基香豆素类化合物粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液为石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得到4-芳基香豆素类化合物纯品；所述环合反应的温度为0～40℃；所述苯基丙炔酸类化合物粗品和酚类物质的摩尔比为1∶1～1∶1.2；所述酚类化合物为间苯二酚、连苯三酚或间甲氧基苯酚。
上述的4-芳基香豆素类化合物可应用于制备抗肿瘤药物、抗血管异常增生药物、抗氧化药物、抗菌药物或抗疟疾药物。
本发明与现有技术相比具有如下优点和效果：
(1)本发明提供了一种新颖的4-芳基香豆素类化合物，具有与顺式二苯乙烯类化合物、鬼臼毒素等类似的化学结构及相关生物活性。
(2)提供一种4-芳基香豆素类化合物的合成方法，具有收率高、操作简便等优点。
(3)本发明提供的4-芳基香豆素类化合物可用于制备抗肿瘤、抗血管异常增生、抗菌、抗氧化、抗疟疾药物。
附图说明
图1为本发明4-芳基香豆素类化合物制备工艺流程图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
3，4-二甲氧基苯基丙烯酸的制备
在100mL的双口反应瓶中加入2.08g(0.02mol)丙二酸，2.8g(0.017mol)3，4-二甲氧基苯甲醛，3mL吡啶，0.3mL六氢吡啶，加热至95℃后回流3h， 反应完毕，冷却10min，加入50mL 10mol/L盐酸溶液，放置2h，抽滤，用200mL水洗涤沉淀，得到3，4-二甲氧基苯基丙烯酸粗品。再用无水乙醇重结晶，得3，4-二甲氧基苯基丙烯酸纯品3.1g，收率88.3％。
实施例2
3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸的制备
在100mL的双口反应瓶中加入12.98g(0.125mol)丙二酸，12.65g(0.083mol)3-羟基-4-甲氧基苯甲醛，15mL吡啶，0.5mL六氢吡啶，加热至95℃后回流3h，反应完毕，冷却60min，加入50mL 3mol/L盐酸溶液，放置10h，抽滤，用清水洗涤固体，得到3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸粗品。再用无水乙醇重结晶，得3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸纯品14.63g，收率90.6％。
实施例3：
3-羟基-4-甲氧基苯基丙炔酸的制备
将1.94g(10mmol)实施例2所得3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸溶于30mL无水乙醇中，加入1mL SOCl2加热至回流反应2h，停止加热，浓缩反应液，加入水，产物析出，放置，抽滤，得3-羟基-4-甲氧基苯基丙烯酸乙酯粗品。将3-羟基-4-甲氧基丙烯酸乙酯粗品溶于30mL乙酸中，加入1mL SOCl2加热至回流。反应2h，停止加热，加入水，产物自然析出，放置一夜后产物固化抽滤得3-羟基-4-乙酰氧基苯基丙烯酸乙酯粗品。将3-羟基-4-乙酰氧基苯基丙烯酸乙酯溶于20mL二氯甲烷中，冰浴滴加0.5mL Br2(9.8mmol)，5min加完，搅拌3h，水洗反应液，旋干，放置一夜后产物固化即可得3-(3-乙酰氧基-4-甲氧基苯基)-2，3-二溴丙酸乙酯粗品。再将3-(3-乙酰氧-4-甲氧基苯基)-2，3-二溴丙酸乙酯，5gKOH，20mL C2H5OH加入25mL反应瓶中，搅拌均匀，加热至回流，保持8h，冷却后加入浓盐酸至酸性，***萃取，旋干后 放置24h后产物固化得3-羟基-4-甲氧基苯基丙炔酸粗品0.71g。总收率37％。产品无需纯化，可直接用于下一步反应。
实施例4：
3，4-二甲氧基苯基丙炔酸的制备
将2.08g(10mmol)实施例1所得3，4-二甲氧基苯基丙烯酸溶于30mL无水乙醇中，加入1mL SOCl2加热至回流.反应4h，停止加热，浓缩反应液，加入水，产物析出，放置，抽滤得3，4-二甲氧基苯基丙烯酸乙酯粗品。再将3，4-二甲氧基苯基丙烯酸乙酯溶于20mL二氯甲烷中，冰浴滴加0.4mL Br2，30min加完，搅拌0.5h，水洗反应液，旋干，放置一夜后产物固化即可得3-(3，4-二甲氧基苯基)-2，3-二溴丙酸乙酯。将3-(3，4-二甲氧基苯基)-2，3-二溴丙酸乙酯，5gKOH，20mL C2H5OH加入25mL反应瓶中，搅拌均匀，加热至回流，保持12h，冷却后加入浓盐酸至强酸性，***萃取，旋干后放置24h后产物固化得3，4-二甲氧基苯基丙炔酸粗品0.9g。总产率44％。产品无需纯化，可直接用于下一步反应。
实施例5
4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素的制备
将100mL的双口反应瓶置于冰浴中，然后加入2.06g(10mmol)实施例4所得3，4-二甲氧基苯基丙炔酸，1.1g(10mmol)间苯二酚，5.6g(0.04mol)三氟化硼***，搅拌均匀，再加入3g(0.02mol)三氯氧磷，10min后撤去冰浴，常温搅拌，TLC监测反应进程(层析液∶石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，12h后停止反应，倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素粗品。粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液为石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素纯品1.60g，产率54.0％。谱图数据如下：
mp：239-241℃
IR：3194(OH)，1695(CO)，1624，1599，1518，1263and 1140cm-1
1HNMR(400MHz，CD3COCD3)δ3.90and 3.94(6H，s，3H and 3H，2×OCH3)，6.20(1H，s，C-3H)，6.74(1H，s，J＝2.4Hz and 8Hz，C-6’H)，6.91(1H，s，J＝2.4Hz，C-2’H)，6.97(1H，d，J＝8Hz，C-5’H)，6.98(1H，d，J＝2Hz，C-8H)，7.02(1H，dd，J＝2Hz and 8.8Hz，C-6’H)，7.45(1H，d，J＝8.8Hz，C-5’H)
Ms：m/Z：298(M+)，283(M+-CH3)，270，255，227，199，184，113
实施例6
4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素的制备
在100mL的双口反应瓶中加入2.06g(10mmol)实施例4所得3，4-二甲氧基苯基丙炔酸，1.1g(10mmol)间苯二酚，4mL三氟乙酸，常温搅拌，TLC监测反应进程(层析液∶石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，2h后停止反应，倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素粗品。粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素纯品1.68g，产率56.4％。谱图数据同实施例5。
实施例7
4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素的制备
在100mL的双口反应瓶中加入1.03g(5mmol)实施例4所得3，4-二甲氧基苯基丙炔酸，0.63g(5mmol)连苯三酚，4mL三氟乙酸，常温搅拌，TLC监测反应进程(层析液∶石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，7h后停止反应，倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素粗品。粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液为石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素纯品0.91g，产率58.0％。谱图数据如下：
mp：125-128℃
IR：2987，1726(CO)，1618，1518，1379，1255，1147and 814cm-1
1HNMR(400MHz，CD3COCD3)δ：3.87and 3.88(6H，s，3H and 3H，2×OCH3)，6.07(1H，s，C-3H)，6.83and 7.00(2H，2×d，J＝8.8Hz，C-5H and C-6H)7.06(1H，dd，J＝2Hz and 8.4Hz，C-5’H)，7.10(1H，d，J＝2Hz，C-2’H)，7.11(1H，d，J＝8.4Hz，C-6’H)
Ms：m/Z：314(M+)，286(M+-CO)，271(M+-CO-CH3)，161，133，115，103
实施例8
4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-甲氧基香豆素的制备
在100mL的双口反应瓶中加入1.76g实施例4所得3，4-二甲氧基苯基丙炔酸，1.1g间甲氧基苯酚，5mL三氟乙酸，常温搅拌，TLC监测反应进程(层析液∶石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，6h后停止反应，倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-甲氧基香豆素粗品。粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-甲氧基香豆素纯品1.44g，产率53.8％。谱图数据如下：
mp：157-158℃
IR：3411(CO)，1695(OH)，1606，1518，1448，1173and 1140cm-1
1HNMR(400MHz，CD3COCD3)δ：3.88，3.89and 3.93(9H，s，3H，3H and 3H，3×OCH3)，6.14(1H，s，C-3H)，6.90and 7.08(2H，2×dd，J＝8.8Hz，2.4Hz andJ＝8.4Hz，2Hz C-6H and C-6’H)6.94and 7.12(2H，2×d，J＝2.4Hz，C-8H andC-2’H)，7.12and 7.55(2H，2×d，J＝8.4Hz and 8.8Hz，C-5H and C-5’H)
Ms：m/Z：312(M+)，297(M+CH3)，284(M+-CO-CH3)，269，213，183，139
实施例9
4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素的制备
在100mL的双口反应瓶中加入0.6g(0.003mol)实施例3所得3-羟基-4- 甲氧基苯基丙炔酸，0.4g(0.003mol)连苯三酚，3mL三氟乙酸，常温搅拌，TLC监测反应进程(层析液∶石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，6.5h后停止反应，倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素粗品。粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，得4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素纯品0.51g，产率53.7％。谱图数据如下：
mp：123-125℃
IR：3371(OH)，1695(CO)，1653，1599，1448，1240，1178and 1130cm-1
1HNMR(400MHz，CD3COCD3)δ：3.91(3H，s，OCH3)6.03(1H，s，C-3H)，6.83(1H，d，J＝8.8Hz，C-6H)，6.95-6.99(3H，m，C-5H，C-2’H and C-6’H)7.10(1H，d，J＝8Hz，C-5’H)
Ms：m/Z：300(M+)，272(M+-CO)，257(M+-CO-CH3)，229，115
实施例10
本发明中合成的新化合物抗肿瘤活性的测定
将上述实施例8所得产物作为样品，用DMSO溶解后，用10％(质量百分比浓度，以下同)小牛血清和1％(质量百分比浓度)双抗的RPMI-1640培养液稀释，实验DMSO的浓度控制在1.5％(V/V)之内。取96孔细胞培养板，每孔中加50μL含约5000个肿瘤细胞(BGC823胃癌细胞)的培养液，在37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养12小时让细胞帖壁。每孔加50μL浓度为1mg/L、100μg/L、50μg/L、10μg/L、5μg/L和1μg/L的样品，每个浓度的样品设3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加50μL氯氨铂(10μg/mL)，3个阴性对照孔每孔加50μL培养液。在37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养48小时。每孔加10μLMTT(5mg/mL)染液。在37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4h后加入100μL 10％(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)，过夜培养，测其在570 nm下的吸光度值。根据下式计算出样品对细胞增殖的抑制率(IR)：IR＝1-ODr/ODc(ODr：实验组；ODc：阴性对照组)根据标准曲线计算样品的IC50，测定结果用 
表示，如表1所示：
表1抗肿瘤活性的测定结果
从表1中可以看出4-芳基香豆素类化合物对胃癌细胞具有明显的杀伤活性。其中4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素的IC50达36±3μg/m L。
实施例11
本发明中合成的新化合物抗氧化活性的测定：
称量1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)(WaKo公司生产)5mg，定容到50mL无水乙醇中，实验时稀释到10mg/L，并与等体积用无水乙醇稀释为1mg/L、100μg/L、50μg/L、10μg/L、5μg/L和1μg/L的样品混合，吸取100μL加入96孔板中，在酶标仪中每隔1min测定一次517nm波长下的吸光度值，阴性对照加入100μL无水乙醇，每组实验做三个重复。样品在某一时刻对DPPH自由基的清除率(Y)按下式计算：Y(％)＝[(ODc-ODs)/ODc]×100(ODc：阴性对照在517nm处的吸光度值；ODs：样品在517nm处的吸光度值)，根据样品在30min处的清除率，计算样品的半数抑制剂量EC50，测定结果用用 
表示，如表2所示：
表2清除DPPH自由基的活性
表2数据显示4-芳基香豆素类化合物具有不同程度的清除自由基能力。 其中4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素，4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素清除自由基能力最强。
实施例12
本发明中合成的新化合物抗菌活性的测定：
将每毫升含106细菌或孢子的菌液均匀涂布于固体细菌培养基表面，将经过灭菌的0.5cm直径的滤纸片置于培养基表面，滴加2.5μL 100μg.μL-1的待测样品溶液，于37℃培养18～20h，观察抑菌圈形成与否，有抑菌圈形成的表明有抗菌活性。供试菌包括：大肠杆菌Escherichia coli(ATCC25922)，金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus(ATCC2592)，枯草芽孢杆菌Bacillusdysenteriae，以及白色念珠菌Candida albicans(ATCC43300)。测定结果如表3所示：
表3抑菌活件的测定结果
表3数据说明样品具有抗菌活性，选取上表中有抑菌圈的样品测定其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。
供试菌在LB培养液中37℃过夜培养后，用无菌LB液稀释成105CUF/ml菌体浓度，取190μL种在96孔板中，加入10μL用DMSO二倍稀释的样品(浓度在48～25000μg/mL范围)。37℃培养24h，对微生物生长产生明显抑制作用的最低样品浓度记为最小抑菌浓度MIC(MinimumInhibitory Concentration)，吸取10μL样品处理后的菌液，滴加在LB平板上，观察是否有菌落形成，37℃培养48h后没有菌落形成或者只有一个菌落形成的最低样品浓度记为最低杀菌浓度MBC(Minimum BactericidalConcentration)。阴性对照为5％(V/V)DMSO，阳性对照为加入10μL用DMSO配制的氨苄青霉素和氯霉素(Amresco)，每次试验在96孔板的四个角各设计一个无菌验证孔(200μL的LB培养基)。MICs结果用有抑菌效果孔和相邻的无效孔对应的样品浓度的均值显示，MICs和MBCs结果见表4。
表4化合物的抑菌活性
从表4可以看出4-芳基香豆素类化合物具有不同程度抗菌活性。其中 4-(3’-羟基-4’-甲氧基苯基)-7，8-二羟基香豆素对枯草芽孢杆菌具有很强抑制作用，尤为值得关注。
实施例13药物组合物
制备每片含有10mg活性组分的100片片剂的配方：
4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素……………………1.0g
羟丙基纤维素………………………………………………0.2g
小麦淀粉……………………………………………………1.0g
乳糖…………………………………………………………10.0g
硬脂酸镁……………………………………………………0.3g
滑石粉………………………………………………………0.3g
实施例14
散剂将4-(3’，4’-二甲氧基苯基)-7-羟基香豆素100克和乳糖100克经研磨、100目过筛、混合均匀后分装成1000包(每包200毫克，含活性物质100毫克)。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：
（1）以丙二酸和取代苯甲醛为原料，在吡啶和六氢吡啶存在条件下加热，发生Perkin缩合和脱羧反应，经分离纯化得到取代苯基丙烯酸类化合物；所述取代苯甲醛具有如式（Ⅱ）所示结构，其中R5为H、OCH3或OH，R7为H、OCH3或OH，R6为H或OCH3；
（2）将取代苯基丙烯酸类化合物溶于无水乙醇中，加入氯化亚砜加热至回流，反应1～4h，浓缩反应液，加入水，产物自然析出，放置过夜，抽滤得到取代苯基丙烯酸乙酯，所述取代苯基丙烯酸类化合物、氯化亚砜和乙醇的摩尔比为1：（1～2）：（3～10）；
所述取代苯基丙烯酸乙酯为不含游离酚羟基的取代苯基丙烯酸乙酯时，直接进入步骤（3）反应；
所述取代苯基丙烯酸乙酯含有游离酚羟基时，将取代苯基丙烯酸乙酯溶于乙酸中，加入氯化亚砜加热至回流，反应1～4h，加入水，产物自然析出，静置，抽滤，得到酚羟基被乙酰基保护的取代苯基丙烯酸乙酯类化合物；
（3）将不含游离酚羟基的取代苯基丙烯酸乙酯或酚羟基被乙酰基保护的取代苯基丙烯酸乙酯类化合物溶于二氯甲烷中，冰浴条件下滴加Br2，在5～30min内加完，搅拌0.5～3h，水洗反应液，旋干溶剂，静置过夜，得到2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物；
（4）将2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物、氢氧化钾及乙醇混合搅拌均匀，加热至回流，反应8～12h，冷却后加入浓盐酸至酸性，***萃取，旋干溶剂后得苯基丙炔酸类化合物粗品；
（5）将苯基丙炔酸类化合物粗品和酚类物质溶入三氟化硼***溶液中，搅拌均匀，再加入三氯氧磷，常温搅拌2～12h，环合反应完全后，经分离纯化，得到4-芳基香豆素类化合物；或者将苯基丙炔酸类化合物粗品、酚类物质与三氟乙酸混合，常温条件下搅拌直到反应完全，经分离纯化，得到4-芳基香豆素类化合物；
所述4-芳基香豆素类化合物具有如式（I）所示的结构：
其中R1、R2、R3、R5或R7为H、OCH3或OH；R4为H或OH；R6为H或OCH3。
2.根据权利要求1所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述丙二酸和取代苯甲醛的摩尔比为1：1～1.5：1；所述吡啶与六氢吡啶的摩尔比为20：1～20：6；所述吡啶与丙二酸的摩尔比为1：1～1：5。
3.根据权利要求2所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：所述丙二酸和取代苯甲醛的摩尔比为1.2：1。
4.根据权利要求1所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述分离纯化是反应完毕，冷却10～60min，加入1～10M的盐酸溶液，放置2～10h，抽滤，用水洗涤沉淀，得到取代苯基丙烯酸类化合物粗品；将取代苯基丙烯酸类化合物粗品用无水乙醇重结晶，得到纯品取代苯基丙烯酸类化合物，收率为85％～95％。
5.根据权利要求1所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述冰浴的温度为0～4℃；所述取代苯基丙烯酸乙酯、Br2和二氯甲烷的摩尔比为1：（1～1.5）：（10～50）。
6.根据权利要求1所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述氢氧化钾与乙醇的摩尔比为1：1.2～1：5；所述2，3-二溴代苯基丙酸乙酯类化合物与氢氧化钾的摩尔比为1：3～1：30。
7.根据权利要求1所述的4-芳基香豆素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述分离纯化是将反应液倒入冰水中，用***萃取，旋干除去***，得到4-芳基香豆素类化合物粗品；再将4-芳基香豆素类化合物粗品用硅胶柱层析分离，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝1：1，得到4-芳基香豆素类化合物纯品；所述环合反应的温度为0～40℃；所述苯基丙炔酸类化合物粗品和酚类物质的摩尔比为1：1～1：1.2；所述酚类化合物为间苯二酚、对苯二酚、邻苯二酚、连苯三酚或间甲氧基苯酚。
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