CN101940317B

CN101940317B - 一种提高人体免疫力的保健食品及其制备方法

Info

Publication number: CN101940317B
Application number: CN2010101321552A
Authority: CN
Inventors: 潘亚莲; ***
Original assignee: WUXI CITY TIANCIKANG BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: Jiangsu Kingsley pharmaceutical Limited by Share Ltd
Priority date: 2010-03-25
Filing date: 2010-03-25
Publication date: 2012-07-25
Anticipated expiration: 2030-03-25
Also published as: CN101940317A

Abstract

本发明公开了一种提高人体免疫力的保健食品及其制备方法，该保健食品包括以下重量百分比的组分：40～50％的油菜花粉，10～25％的葡萄籽提取物，5～20％的维生素E，20～35的淀粉，0～1％的硬脂酸镁。所述保健食品的制备方法为：取油菜花粉粉碎，过筛；取葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁分别过筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合并装入胶囊。本发明采用油菜花粉、葡萄籽及维生素E为原料，入方比例科学，无任何毒副作用，适合各个年龄层免疫力低下的人群。

Description

一种提高人体免疫力的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种保健食品及其制备方法，具体是一种提高人体免疫力的保健食品及其制备方法。

背景技术

人体免疫***如同一支训练有素的精锐部队，对于外界侵入人体的有害物质进行识别、围剿，并且及时清除新陈代谢中死亡的细胞或组织碎片，以维持机体内环境的平衡与稳定。但是随着社会节奏的加快、生活竞争压力的增大、以及各种电子设备的辐射干扰，许多人出现了心境不佳、过劳、失眠、生活起居无规律、营养不良的状态。如果机体长期处于这种状态，会导致体内的抗体和生长因子分泌量的大幅度波动，以及体内免疫球蛋白含量的不稳定，使机体免疫力下降。因此，充分的运动和合理的饮食对提高人体的免疫力起着重要的作用。人们可以通过各种运动来达到健身的目的；饮食方面，由于用餐时间紧迫、食物搭配不合理等诸多问题始终不能很好解决，因此有必要选择保健食品来提供机体对营养的需求。目前，提高人体免疫力保健食品也不少，但是能真正起到调节人体免疫***，提高免疫力的保健食品还是比较匮乏。

发明内容

发明目的：本发明针对现有技术不足，提供一种提高人体免疫力的保健食品。

本发明的另一目的是提供上述保健食品的制备方法。

技术方案：一种提高人体免疫力的保健食品，包括以下重量百分比的组分：40～50％的油菜花粉，10～25％的葡萄籽提取物，5～20％的维生素E，20～35的淀粉，0～1％的硬脂酸镁。

其中，所述葡萄籽提取物的提取步骤如下：

(1)将葡萄籽用70％的乙醇回流提取并过滤；

(2)将滤液浓缩至无醇味，静置；

(3)取上层清液用聚酰胺柱层析；

(4)将层析液先用水洗脱，然后用70％乙醇再次洗脱；

(5)取洗脱液浓缩，将浓缩物干燥。

制备所述保健食品的方法，包括以下步骤：

(1)取油菜花粉粉碎，过筛；

(2)取葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁分别过筛；

(3)将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合；

(4)将混合后的混合物料装入胶囊。

其中，步骤(1)和步骤(2)优先选用60目筛。

其中，步骤(3)的混合时间以30min为最佳。

其中，装入胶囊的混合物料以0.35g为宜。

油菜花粉为可用于保健食品的物品。花粉作为一种国际公认的纯天然完全营养品，由于含有多种营养成分，在营养、保健、医疗等领域得到广泛的应用。油菜花中的花粉多糖能明显提高机体非特异性的细胞免疫和特异性的体液免疫，提高机体NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，同时能够增强体液免疫和细胞免疫功能，对非特异免疫功能、体液免疫功能、细胞免疫功能均有一定的增强作用。

葡萄为普通食品，根据保健食品注册管理办法第六十三条规定，可作为保健食品的原料。葡萄籽中含有的原花色素成分可增强能量，增强免疫力；葡萄籽多酚具有一定的免疫调节功能。

维生素E是人体内具有广泛生理功能的重要脂溶性维生素，除了促进生殖，维持中枢神经***、心血管***和骨骼肌的功能之外，还具有免疫调节剂的作用。维生素E通过增强体液免疫、提高细胞介导的免疫应答、影响吞噬细胞功能等作用而影响机体免疫状态。维生素E提高动物免疫能力一方面是通过保护细胞膜及细胞器膜免受氧化破坏，维持细胞及细胞器的完整与稳定，以保证细胞的正常功能；另一方面是维生素E可调节细胞调节素、***素、凝血素及促细胞生长素的合成。

有益效果：本发明采用油菜花粉、葡萄籽及维生素E为原料，入方比例科学，无任何毒副作用，适合各个年龄层免疫力低下的人群。

具体实施方式

实施例1：

取40％的油菜花粉(单位为重量百分数，下同)粉碎，过60目筛；取21.5％的葡萄籽提取物、5.5％的维生素E、32.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合30min，并装入胶囊，每粒0.35g。

实施例2：

取44.5％的油菜花粉粉碎，过60目筛；取19.5％的葡萄籽提取物、10.5％的维生素E、25％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合30min，并装入胶囊，每粒0.35g。

实施例3：

取47.5％的油菜花粉粉碎，过60目筛；取14.5％的葡萄籽提取物、9.5％的维生素E、28％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合30min，并装入胶囊，每粒0.35g。

实施例4：

取49.5％的油菜花粉粉碎，过60目筛；取12％的葡萄籽提取物、17.5％的维生素E、20.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合30min，并装入胶囊，每粒0.35g。

实施例5：

取55％的油菜花粉粉碎，过60目筛；取11.5％的葡萄籽提取物、14.5％的维生素E、28.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛；将过筛后的油菜花粉、葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁混合30min，并装入胶囊，每粒0.35g。

实施例6：

本发明提高免疫力功能实验研究

1.材料

1.1样品：由无锡市天赐康生物科技有限公司提供。成人每日推荐量为2100mg/60kg.BW，试验时用蒸馏水作溶剂配制受试物。

1.2试剂、实验器材及动物

1.2.1试剂

SRBC(绵羊红细胞)，Hank’s液，DNFB(2，4二硝基氟苯)，S_A缓冲液，琼脂糖，印度墨汁，Na₂CO₃(碳酸钠)，RPMI1640培养液，鸡红细胞悬液，生理盐水，YAC-1细胞。以上试剂由四川省疾病预防控制中心提供。

1.2.2实验器材

100μl微量注射器，二氧化碳培养箱，电子分析天平，723分光光度仪，离心机，手术器械

1.2.3实验动物

由成都达硕生物科技有限公司提供的昆明种小鼠160只，全雌，体重18-22g，生产许可证号为SCXK(川)2008-24SPF级；试验动物房为屏障***，使用许可证号为川实动管SYXK(川)2008-043。温度20-25℃，相对湿度40～70％。

2.实验方法

2.1剂量选择

受试物设350mg/kg.BW、700mg/kg.BW、1050mg/kg.BW三个剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍、30倍)，分别称取4.38g、8.75g、13.13g受试物加蒸馏水至250ml混匀，冷藏保存，用完再配，另设蒸馏水阴性对照组，每组40只动物。分为免疫一组、二组、三组、四组，其中一组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；二组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验；三组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发型***反应；四组用于小鼠碳廓清实验。小鼠按20mg/kg.BW体重一次经口灌胃，连续给予30天，每周称一次体重，调整灌胃体积。

2.2实验步骤

2.2.1小鼠碳廓清试验：连续灌胃30天后，于小鼠尾静脉注射用5倍生理盐水稀释的印度墨汁，按0.1ml/10g墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min分别从内眦静脉丛取血20μl，加到2mlNa₂CO₃溶液中，以Na₂CO₃溶液作空白对照，用723分光光度计在600nm处测定光密度值。取血后处死小鼠，取肝、脾称重，计算吞噬指数。

2.2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20％的鸡红细胞悬液1ml，30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水漂洗、晾干、固定，4％GiemsaPBS染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。

2.2.3迟发型***反应(DTH)(足跖增厚法)：灌胃30天后，给小鼠腹腔注射2％压积SRBC(0.2ml/每鼠)致敏4天后，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20μl/每鼠)，于注射后24h测量左后足跖厚度，同一位测量三次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

2.2.4ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(MTT法)：首先进行脾细胞悬液的制备。将细胞浓度调整为3×10⁶个/ml，然后将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作对照，置5％CO₂孵箱37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解，然后将每孔液体移入比色杯中，用723分光光度仪于570nm波长处比色测定光密度值。

2.2.5抗体生成细胞检测(Jernr改良玻片法)：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2％压积SRBC0.2ml，将免疫5天半后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有Hank’s液的平皿内，制成脾细胞悬液。将琼脂糖配成1％水溶液，水浴煮30min，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10％(用S_A缓冲液配制)压积SRBC50μl，脾细胞悬液各20μl做两个平行样，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。

2.2.6血清溶血素测定(血凝法)：在连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2％SRBC0.2ml免疫，继续灌胃5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，剥离，2000r/min离心10min，收集血清，用生理盐水将血清作倍比稀释，每份稀释12孔，将不同稀释度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5％SRBC悬液100μl，混匀，置湿盒37℃3h后观察结果，记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。

2.2.7NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)：连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全RPMI1640培养液配成2×10⁷个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分3孔置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞(YAC-1细胞，4×10⁵个/ml)100μl，同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl+培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μl+2.5％Triton100μl)各8孔，37℃5％CO₂培养4小时，取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔再加入100μl基质液，10分钟后加1mol/L的HCL30μl终止反应，在490nm处测定OD值，计算NK细胞活性率。

3.试验数据统计

试验数据采用SPSS10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett’sT3法进行两两比较(P＞0.05为非显著性差异，P＜0.05为显著性差异)。

4.结果

4.1本发明对小鼠体重的影响见表1-4。

表1各组小鼠的初始体重

表2各组小鼠的中期体重

表3各组小鼠的结束体重

表4本发明对小鼠体重增重的影响

由表1-4可见，本发明免疫一组、免疫二组、免疫三组及免疫四组小鼠的初始体重与阴性对照组相比，经方差齐性检验，方差齐(P＞0.05)，且方差分析结果(P＞0.05)，说明各组小鼠与阴性对照组之间的初始体重是均衡的。三个剂量组小鼠试验中期、末期的体重以及试验期间小鼠体重的增长与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异(P＞0.05)，即本发明对小鼠的体重增长无影响。

4.2本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

表5本发明对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响

由表5可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的碳廓清能力与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异(P＞0.05)。

表6本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

由表6可见，连续灌胃30天后，三个剂量组动物的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异(P＞0.05)。

由表5、表6可见，本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阴性。

4.3本发明对小鼠细胞免疫的影响

表7本发明对小鼠迟发型***反应(DTH)的影响

由表7可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的足跖肿胀度与阴性对照组相比，经统计学处理，中、高剂量组有显著性差异(P＜0.01、P＜0.05)

表8本发明对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响

由表8可见，连续灌胃小鼠30天后，三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异(P＞0.05)。

由表7、表8可见本发明对小鼠细胞免疫试验结果为阳性。

4.4本发明对小鼠体液免疫的影响

表9本发明对小鼠抗体生成细胞的影响

由表9可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的溶血空斑数与阴性对照相比，经统计学处理，均无显著性差异(P＞0.05)。

表10本发明对小鼠血清溶血素的影响

由表10可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的抗体积数与阴性对照组相比，经统计学处理，低、高剂量组有极显著性差异(P＜0.01、P＜0.01)

由表9、表10可见，本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性。

4.5本发明对小鼠NK细胞活性的影响

表11本发明对小鼠NK细胞活性的影响

由表11可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠NK细胞活性与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异(P＞0.05)。本发明对小鼠的NK细胞活性试验结果显阴性。

5.总结

本发明连续灌胃小鼠30天后，对小鼠体重无明显影响；对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阴性；对小鼠的NK细胞试验结果阴性；对小鼠的细胞免疫试验，三个剂量组小鼠的足跖肿胀度与阴性对照组比较，中、高剂量组差异有显著性(P＜0.01、P＜0.05)，试验结果阳性；对小鼠的体液免疫试验，三个剂量组小鼠的抗体积数与阴性对照组比较，低、高剂量组差异均有显著性(P＜0.01、P＜0.01)，试验结果阳性。

依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定，本发明具有提高免疫力的功能。

Claims

1.一种提高人体免疫力的保健食品，其特征在于由以下重量百分比的组分组成：40～50％的油菜花粉，10～25％的葡萄籽提取物，5～20％的维生素E，20～35的淀粉，0～1％的硬脂酸镁；其中，所述葡萄籽提取物的提取步骤如下：(1)将葡萄籽用70％的乙醇回流提取并过滤，(2)将滤液浓缩至无醇味，静置，(3)取上层清液用聚酰胺柱层析，(4)将层析液先用水洗脱，然后用70％乙醇再次洗脱，(5)取洗脱液浓缩，将浓缩物干燥。

2.制备权利要求1所述的一种提高人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取油菜花粉粉碎，过筛；

(2)取葡萄籽提取物、维生素E、淀粉和硬脂酸镁分别过筛；

(4)将混合后的混合物料装入胶囊。

3.根据权利要求2所述的制备一种提高人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于步骤(1)和步骤(2)选用60目筛。

4.根据权利要求2所述的制备一种提高人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于步骤(3)的混合时间为30min。