CN101910783B - 液体试样分析方法 - Google Patents

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Abstract

在使用形成有阻止液体试样从展开层(3)的流路区域(3a)流出至外部的流出阻止线(7)试验片(1)来进行液体试样中的分析对象物的分析的液体试样分析方法中，在液体试样未展开于展开层(3)的流路区域(3a)的状态下，以横穿展开层(3)的流路区域(3a)和流出阻止线(7)的方式测定试验片(1)。藉此，可以在展开层(3)的流路区域(3a)与流出阻止线(7)的亮度差大状态下，良好地辨识展开层(3)的流路区域(3a)与流出阻止线(7)的边界部，可准确地判定流路宽度。

Description

液体试样分析方法
技术领域
本发明涉及使用光学的信号检测方法进行液体试样中所含的分析对象物的分析的液体试样分析方法。
背景技术
作为测定血液或血浆、尿等液体试样中所含的分析对象物来进行分析的方法，已知下述液体试样分析方法和液体试样分析装置：将液体试样添加于被称为所谓的生物传感器的试验片，用色谱法使该液体试样在试验片上的展开层展开，利用其光学特性对被固定化于规定位置的分析对象物进行读取，从而分析液体试样中的分析对象物(例如专利文献1、2等)。
如图5(a)所示，所述试验片20如下构成：在薄板矩形的支承体2上配置有由多孔质载体形成的展开层3，在一端部设有添加液体试样的添加部(所谓的点样部)4，被添加于添加部4的液体试样在展开层3通过毛细现象等流动展开。此外，在展开层3中的靠近添加部的位置等配置有含有标记试剂的标记试剂部5，并且在规定的位置配置有固定化有特异性抗体的固定化试剂部6。并且，将血液或血浆等液体试样添加于添加部4后，该液体试样于试验片20上的展开层在与结合有特异性抗体(与固定化试剂部6的特异性抗体不同的特异性抗体)的标记试剂部5的标记试剂反应的同时展开并与固定化试剂部6的特异性抗体发生结合反应，固定化试剂部6对应于液体试样中的分析对象物的浓度显色。另外，试样分析装置如下构成：测定所述试验片1的固定化试剂部6的显色状态并换算成分析对象物的浓度，输出分析结果。
如图6所示，液体试样分析装置10’具备以承载于其上的状态保持试验片20保持台11，由对试验片20照射光的灯、发光二极管或半导体激光器等构成的光源12，进行来自光源12的漫射光(或者透射光或反射光)的进光量控制的光圈13，聚集通过光圈13而进入的光的聚光透镜14，聚集所述光而形成试验片20的表面的像的CCD等摄像元件15，图外的控制部等；所述控制部进行将来自摄像元件15的电信号转换为数字信号来进行图像处理等操作，算出设于试验片20的作为显色部的固定化试剂部6的显色程度(亮度)以吸光度计，利用所述吸光度根据预先存储的浓度换算式计算液体试样中的分析对象物的浓度并输出。还有，通过使用CCD等摄像元件15，还具有能够以减法处理去除由试验片20的展开层3产生的背景的显色部分或者以色调校正对显色进行校正来提高测定精度等优点。
图20表示采用试验片的以往的测定方法。
1为试验片，包括对应于液体试样中的测定对象物的浓度而呈现显色的固定化试剂部6。用于读取固定化试剂部6的显色程度的光学***由光源12、光圈13、聚光透镜14和摄像元件15构成。
试验片1由光源12照亮，试验片1的表面的漫射光通过光圈13和聚光透镜14后由摄像元件15受光。
处理通过摄像元件15拍摄的图像的步骤由图像生成步骤S1、显色程度判定步骤S2、结果输出步骤S3构成。
图像生成步骤S1中，将从摄像元件15输出的图像信号作为灰阶图像存放于图像存储器(未图示)。显色程度判定步骤S2中，算出固定化试剂部6的显色程度，结果输出步骤S3中，将测定结果输出至液晶显示器等显示器件(未图示)。
另外，对于这种试验片20，如果试验片20的展开层3的两侧面部开放，则通过毛细现象渗透展开层3而展开的液体试样和标记试剂会从两侧面部流出或蒸发，因此可能会需要大量的液体试样，或者渗透方向杂乱，显色状态变得不稳定。作为应对这一问题的方案，专利文献3中提出了通过照射激光使与试验片的展开方向(渗透方向)平行的两侧面部熔融固化来使其密闭而得的结构。
如果采用该结构，则试验片的两侧面部密闭，可阻止液体试样和标记试剂从试验片的两侧面部蒸发或流出，所以不仅可实现液体试样和标记试剂的少量化，而且可进行整流而使液体试样和标记试剂的展开状态良好，实现精度的提高。在这里，如图5(b)所示，可考虑顺着沿比试验片20’的侧面部在宽度方向上更靠近内侧的侧面部在长边方向上延伸的线进行激光的照射等，使展开部3的一部分熔融固化，从而使得展开部3中的液体试样流过的流路区域3a的宽度比试验片20’窄。还有，图5(b)中的7为通过进行激光照射等来熔融固化而形成的阻止液体试样和标记试剂向侧方(试验片20’的宽度方向)展开而流出的流出阻止线，3a为展开层3中液体试样和标记试剂实际流过的展开层3的流路区域，3b为展开层3中液体试样和标记试剂未流过的非流路区域。此外，图5(b)中示出了在展开层3中的宽度方向的左右2处分别形成有各2条流出阻止线7的情况。
如上所述，通过在试验片20’的两侧面部的内侧形成与试验片20’的两侧面部大致平行的流出阻止线7，减小实质上供液体试样和标记试剂展开的展开层3的流路宽度，从而可以减少液体试样的添加需要量。此外，通过使作为显色部的固定化试剂部6和标记试剂部5也按照该流路宽度设置为窄幅，则可减少固定化试剂和标记试剂的量。
如上所述，采用在试验片20’上形成流出阻止线7而使实质上供液体试样和标记试剂展开的展开层3的流路宽度比试验片20’的宽度小的结构的情况下，仅在流出阻止线7的试验片宽度方向的内侧的位置(流路区域3a)显色。因此，采用这样形成有流出阻止线7的试验片20’的情况下，测定作为显色部的固定化试剂部6的显色程度时，较好是在预先了解实质上起到展开层3的作用的流路区域3a的宽度后，将设有固定化试剂部6的位置设定为测定区域。
然而，由于实际上存在将试验片20’固定于保持台11时的位置变动或者试验片20’中的固定化试剂部6和展开层3、流出阻止线7的形成位置在制造工序中的变动等使定位精度下降的各种阻碍因素，因此无法假定流路区域3a和固定化试剂部6在每次测定中准确地位于相同的位置。因此，较好是每次进行测定时都通过摄像元件15识别试验片20’，检出展开层3的流路宽度。
作为获知该展开层3的流路宽度的现有方法，在将液体试样添加于试验片20’且液体试样展开于展开层3的状态下，生成拍摄该展开层3而得的图像，检测横穿包含流出阻止线7的展开层3的扫描线L1上的像素。在这里，图7表示通过液体试样分析装置10’测定形成有流出阻止线7的试验片20’(参照图5(b))的状态，图8(a)表示其拍摄图像的一例，图8(b)表示与所述拍摄图像对应的位置的亮度。另外，判定展开层3的与宽度方向中心部相比亮度变动少的区域、例如图8(a)中的区域D位于流出阻止线7的内侧。
专利文献1：日本专利特开平7-5110号公报
专利文献2：日本专利特开2001-4613号公报
专利文献3：日本专利特许3542999号公报
专利文献4：日本专利特开2000-266752号公报
专利文献5：国际公开号WO01/092884
发明的揭示
然而，为了获知试验片20’的展开层3的流路宽度，即使在液体试样已展开的状态下沿宽度方向测定展开层3，也可能会无法良好地辨识流出阻止线7的边界部，进而产生测定范围的设定精度下降而导致测定数据的可靠性下降的不良情况。
即，如图8(a)、(b)所示，使液体试样于展开层3展开后，形成液体试样渗透至由多孔质载体形成的展开层3的流路区域3a的状态，并且发生液体试样向流出阻止线7的渗出等，因此展开层3的流路区域3a的亮度与流出阻止线7的亮度的差减小，流出阻止线7的边界部变得不清晰，可能会将流出阻止线7误认为是展开层3的流路区域3a的一部分。发生这样的误认的情况下，误认为测定并作为数据输入的展开层3的流路宽度和固定化试剂部6的测定宽度比实际更宽的区域，可能会测定数据的可靠性下降。
此外，根据液体试样的不同，展开层3的流路区域3a中的背景的显色状况在各试验片20’中发生变化，各测定中的亮度和显色程度也随之发生变化。其结果是，难以良好地设定作为用于获知展开层3的流路宽度的判断基准的亮度变化阈值，进而还产生用于获知展开层3的流路宽度的判别作业也变得困难而可靠性下降或判别作业花费时间的问题。
另外，使液体试样于展开层3展开时，在展开层3的流路区域3a内，相对于其宽度方向，显色程度有时不恒定，会发生变化(未图示)，该情况下可能会无法良好地读取展开层3的流路宽度。
本发明是解决所述不良情况和问题的发明，其目的在于提供对于具有阻止液体试样从展开层的流路区域流出至外部的流出阻止线的试验片可良好地辨识展开层的流路区域与流出阻止线的边界的液体试样分析方法。
为了解决所述不良情况和问题，本发明是一种液体试样分析方法，该方法中使用在展开液体试样的展开层形成有阻止液体试样从所述展开层的流路区域流出至外部的流出阻止线且在展开层的流路区域的一部分设有固定化有试剂的显色部的试验片，使添加于试验片的液体试样在展开层的流路区域中展开，通过光学方法测定显色部的显色状态来进行液体试样中的分析对象物的分析，该方法的特征在于，在液体试样未展开于展开层的流路区域的状态下以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式通过光学方法测定试验片，基于该测定数据判定展开层的流路宽度。
如果采用该方法，则因为在液体试样未展开于展开层的流路区域的状态下以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式测定试验片，所以可以在液体试样未展开于展开层的流路区域而展开层的流路区域与流出阻止线的亮度差大的状态下，良好地辨识展开层的流路区域与流出阻止线的边界部。此外，在液体试样未展开的状态下，展开层的流路与流出阻止线分别为与产品出厂时基本相同的显色状态，所以不仅可以容易且良好地设定作为用于识别展开层的流路区域与流出阻止线的判断基准的亮度变化阈值，而且在展开层的流路区域内也呈大致均匀的显色状态，因而可以更准确且更迅速地识别展开层的流路区域与流出阻止线的边界部，还可以良好地辨识呈大致均匀的显色状态的展开层的流路区域的宽度。
此外，本发明的特征还在于，通过以摄像元件拍摄包含试验片的图像，以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式扫描所述图像的像素，从而判定展开层的流路宽度。
因为以液体试样未展开于展开层的流路区域的状态的图像为基础，以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式测定试验片，所以可以在液体试样未展开于展开层的流路区域而展开层的流路区域与流出阻止线的亮度差大的状态下，良好地辨识展开层的流路区域与流出阻止线的边界部。
此外，本发明的特征还在于，基于展开层的流路宽度判定信息，测定显色部或输入显色部的测定信息。
通过该方法，可以在良好且准确地检出展开层的流路宽度的状态下测定显色部或输入显色部的测定信息，进而分析作业的精度和可靠性提高。
此外，本发明的特征还在于，流出阻止线通过对由多孔性载体形成的展开层照射激光来使展开层的一部分熔融固化而形成。
此外，本发明的特征还在于，对于添加于试验片的液体试样使用色谱法使其展开来进行测定。
此外，本发明的特征还在于，所述试验片具备基准标记，所述基准标记由在与所述显色部相对的位置自包含所述显色部的面贯穿所述展开层的孔形成。
此外，本发明的特征还在于，所述试验片具备：支承体，所述支承体覆盖所述展开层的与包含所述显色部的面相反的面；至少1个基准标记，所述基准标记是自包含所述显色部的面贯穿所述展开层及所述支承体的孔。
此外，本发明的特征还在于，所述试验片具备：支承体，所述支承体覆盖所述展开层的与包含所述显色部的面相反的面，且包括一部分在所述展开层附近露出而成的露出部；基准标记，所述基准标记是自露出部贯穿所述支承体的孔。
此外，本发明的特征还在于，所述试验片具备：遮光层，所述遮光层直接或隔着支承体粘合于所述展开层，呈比所述展开层的表面颜色更暗的色系；基准标记，所述基准标记是自包含所述显色部的面贯穿所述展开层而使所述遮光层的一部分露出的孔。
此外，本发明的特征还在于，所述基准标记是通过激光熔融而形成且包含所述显色部的面的剖面呈圆形的孔。
此外，本发明的特征还在于，所述基准标记形成有多个，相对于与所述展开层的展开方向平行的中心线和中心点配置在非对称的位置。
此外，本发明的特征还在于，作为所述基准标记，在成为所述通孔的开口部的部分形成印刷标记来代替所述通孔。
此外，本发明的特征还在于，在所述采用光学方法的测定之前包括：图像生成步骤，通过图像传感器拍摄所述试验片的包含所述显色部的面而生成灰阶图像；基准标记检测步骤，根据所述灰阶图像算出表示所述试验片的基准标记的位置的位置偏差校正前基准标记位置；传感器位置偏差校正步骤，对于所述灰阶图像实施线性坐标变换，使得所述位置偏差校正前基准标记位置与对应的位置偏差校正后基准标记位置一致。
此外，本发明的特征还在于，在所述采用光学方法的测定之前包括：图像生成步骤，通过图像传感器拍摄所述试验片的包含所述显色部的面而生成灰阶图像；基准标记检测步骤，根据所述灰阶图像算出表示所述试验片的基准标记的位置的位置偏差校正前基准标记位置；安装缺陷检测步骤，确认所述位置偏差校正前基准标记位置是否全部存在于规定的基准标记搜索范围内；处置中止步骤，所述安装缺陷检测步骤中所述位置偏差校正前基准标记位置有至少1处不存在于规定的基准标记搜索范围内的情况下，中止处理；传感器位置偏差校正步骤，所述安装缺陷检测步骤中所述位置偏差校正前基准标记位置全部存在于规定的基准标记搜索范围内的情况下，对于所述灰阶图像实施线性坐标变换，使得所述位置偏差校正前基准标记位置与对应的位置偏差校正后基准标记位置一致。
此外，本发明的特征还在于，所述基准标记检测步骤中，将所述灰阶图像以规定的阈值二值化，将连通分量的重心作为所述基准标记的位置偏差校正前基准标记位置。
如果采用本发明，则通过在液体试样未展开于展开层的流路区域的状态下以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式测定试验片，可以在展开层的流路区域与流出阻止线的亮度差大的状态下，良好地辨识展开层的流路区域与流出阻止线的边界部。藉此，还可良好地设定展开层的流路宽度和显色部的测定范围，能够进行良好地设定好的测定范围内的显色部的测定，测定时的可靠性和测定精度提高。此外，在液体试样未展开的状态下，展开层的流路与流出阻止线分别为与产品出厂时基本相同的显色状态，所以可以良好且较容易地设定作为用于识别展开层的流路区域与流出阻止线的判断基准的亮度变化阈值，能够更准确且更迅速地识别展开层的流路区域与流出阻止线的边界部。此外，测定时的展开层的流路区域内也相对于宽度方向呈大致均匀的显色状态，所以可以良好地辨识展开层的流路区域的宽度，测定时的可靠性和测定精度也由此提高。
附图的简单说明
图1是本发明的实施方式1的液体试样分析方法中使用的试验片的立体图。
图2是简略地表示本发明的实施方式1的液体试样分析方法中使用的液体试样分析装置的立体图。
图3(a)是本发明的实施方式1的液体试样分析方法中使用的试验片中的未使液体试样展开的状态下的展开层的流路区域及其附近位置的拍摄图像的放大图，图3(b)是表示本发明的实施方式1的液体试样分析方法中的对应位置的扫描线L上的亮度的图。
图4是本发明的实施方式1的液体试样分析方法中使用的试验片中的使液体试样展开后的状态下的展开层的流路区域及其附近位置的拍摄图像的放大图。
图5(a)是不具有流出阻止线的以往的试验片的立体图，图5(b)是具有流出阻止线的以往的试验片的立体图。
图6是简略地表示通过液体试样分析装置测定不具有流出阻止线的以往的试验片的状态的立体图。
图7是简略地表示通过液体试样分析装置测定具有流出阻止线的以往的试验片的状态的立体图。
图8(a)是以往的液体试样分析方法中使用的试验片中的使液体试样展开后的状态下的展开层的流路区域及其附近位置的拍摄图像的放大图，图8(b)是表示以往的液体试样分析方法中的对应位置的扫描线L1上的亮度的图。
图9是本发明的实施方式2的采用试验片的测定方法的构成图。
图10是上述实施方式的试验片的结构图。
图11(a)是上述实施方式的基准标记的放大剖视图，图11(b)是上述实施方式的基准标记的俯视图。
图12是用于说明上述实施方式的求位置偏差校正前基准标记位置的程序的流程图。
图13是上述实施方式的基准标记周边的局部图像。
图14是上述实施方式的基准标记周边的二值图像。
图15(a)是本发明的实施方式3中的试验片的另一结构图，图15(b)是本发明的实施方式3中的试验片的另一结构图，图15(c)是本发明的实施方式3中的试验片的另一结构图。
图16(a)是本发明的实施方式4中的试验片的另一结构图，图16(b)是本发明的实施方式4中的试验片的另一结构图。
图17(a)是上述实施方式的基准标记的放大剖视图，图17(b)是上述实施方式的基准标记的俯视图。
图18(a)是上述实施方式的基准标记的放大剖视图，图18(b)是上述实施方式的基准标记的俯视图。
图19是本发明的实施方式5中的试验片的结构图。
图20是以往的采用试验片的测定方法的构成图。
图21(a)是本发明的实施方式5中的具备非对称的基准标记的试验片的结构图，图16(b)是本发明的实施方式5中的具备非对称的基准标记的试验片的结构图。
图22是表示实施方式5中的正确安装试验片的状态的图。
图23是表示实施方式5中的前后倒转地安装试验片的状态的图。
图24是表示实施方式5中的正反倒转地安装试验片的状态的图。
图25是表示实施方式5中的前后正反倒转地安装试验片的状态的图。
图26是表示实施方式5中的基准标记的识别图案的图。
实施发明的最佳方式
以下，基于附图对本发明的实施方式的液体试样分析方法进行说明。还有，对功能与以往的试验片20、20’和液体试样分析装置10’相同的构成要素标记同一符号。
(实施方式1)
首先，对本发明的液体试样分析方法中使用的试验片进行说明。本发明的液体试样分析方法中使用如图1所示的试验片1。如图1所示，试验片1采用如下结构：在由聚对苯二甲酸乙二醇酯等液体不透过性材料形成的薄板矩形形状的支承体2上配置有由硝化纤维素或玻璃滤纸等多孔质载体形成的形状与支承体2大致相同的薄板矩形形状的展开层3。此外，试验片1的展开层3中，在试验片1的相对于宽度方向比侧面部更靠内侧的位置，通过以与试验片1的侧面部大致平行的方式照射激光来使多孔质载体熔融固化，从而形成流出阻止线7。并且，添加血液或血浆等液体试样后，展开层3中的流出阻止线7的宽度方向内侧被视为液体试样和后述的标记试剂流过的流路区域3a，另一方面，流出阻止线7的宽度方向外侧被视作无液体试样和后述的标记试剂流过的非流路区域3b。还有，该实施方式中，示出了为了更可靠地阻止液体试样和标记试剂向非流路区域3b流出而在展开层3中的宽度方向的左右分别形成有各2条流出阻止线7的情况，但并不局限于此，可以在流路区域3a的左右分别形成各1条流出阻止线7，也可以形成3条以上流出阻止线7。
呈如下结构：在试验片1的一端部侧设有添加(点样)液体试样的添加部(所谓的点样部)4，添加至添加部4的液体试样通过毛细现象而被吸引，在展开层3的流路区域3a中流动(渗透)，从而向试验片1的另一端部侧展开。此外，在展开层3的流路区域3a中的靠近添加部4的位置等配置有含有标记试剂的标记试剂部5，并且在展开层3的流路区域3a中的规定的位置(比标记试剂部5更靠近试验片1的另一端部的位置)配置有固定化有特异性抗体的作为显色部的固定化试剂部6。并且，将血液或血浆等液体试样添加于添加部4后，该液体试样于试验片1上的展开层3的流路区域3a中在与结合有特异性抗体(与固定化试剂部6的特异性抗体不同的特异性抗体)的标记试剂反应的同时展开并与固定化试剂部6的特异性抗体发生结合反应，固定化试剂部6对应于液体试样中的分析对象物的浓度显色，从而起到显色部的作用。另外，后述的试样分析装置10如下构成：测定所述试验片1的固定化试剂部6的显色状态并换算成分析对象物的浓度，输出分析结果。
还有，图1所示的实施方式的试验片1示出了在3处设置作为显色部的固定化试剂部6的情况，但并不局限于此，可设置任意数量的固定化试剂部6，还有设置1处或2处或者4处以上的情况。此外，图1所示的实施方式的试验片1示出了用于检测试验片1中的固定化试剂部6相对于试验片长边方向的位置的孔部8形成于展开层3的非流路区域3b的一部分的情况，但并不局限于此。
如上所述，通过在试验片1的侧面部的内侧形成相对于试验片1的侧面部大致平行的流出阻止线7，减小实质上供液体试样和标记试剂展开的展开层3的流路宽度，从而可以减少液体试样的添加需要量。此外，通过使作为显色部的固定化试剂部6和标记试剂部5也与该流路宽度一致，与在展开层3的整个宽度范围内设置固定化试剂部6和标记试剂部5的情况相比，还可以减少固定化试剂和标记试剂的量。
此外，虽然未图示，但较好是通过液体不透过性片材覆盖展开层3的表面部(至少展开层3的流路区域3a的表面部)。另外，较好是如下构成：通过所述液体不透过性片材覆盖从添加部4的一部分或附近到至少固定化试剂部6为止的范围，而在展开层3的流路区域3a的下游端部(试验片1的另一端部侧)不覆盖液体不透过性片材。藉此，液体试样不仅不会从展开层3的流路区域3a流出至宽度方向外侧，而且不会从展开层3的流路区域3a的表面中被液体不透过性片材覆盖的位置蒸发或干燥，可以将需要的液体试样的量控制在最低限度。此外，由于在展开层3的流路区域3a的下游端部不覆盖液体不透过性片材，在该处展开液(液体试样和标记试剂等的溶液)蒸发而干燥，因此具有液体试样的展开流动方向(色谱流动方向)上的从上游区域至下游区域的展开进一步得到促进的优点。
下面，对本发明的实施方式的液体试样分析方法中使用的液体试样分析装置进行说明。
如图2所示，该本发明的实施方式的液体试样分析方法中使用的液体试样分析装置10具有基本上与图6、图7所示的液体试样分析装置10’同样的构成要素。即，液体试样分析装置10具备以承载于其上的状态保持试验片1的保持台11，由对试验片1照射光的灯、发光二极管或半导体激光器等构成的光源12，进行来自光源12的漫射光(或者透射光或反射光)的进光量控制的光圈13，聚集通过光圈13而进入的光的聚光透镜14，聚集所述光而形成试验片1的表面的像的CCD等摄像元件15，图外的控制部等；所述控制部进行将来自摄像元件15的电信号转换为数字信号来进行图像处理等操作，算出设于试验片1的作为显色部的固定化试剂部6的显色程度(亮度)以吸光度计，利用所述吸光度根据预先存储的浓度换算式计算液体试样中的分析对象物的浓度并输出。还有，由光圈13、聚光透镜14、摄像元件15构成光学***，但并不局限于此。此外，通过使用CCD等摄像元件15，还具有能够以减法处理去除由试验片1的展开层3产生的背景的显色(发色)部分或者以色调校正对显色进行校正来提高测定精度的功能。
但是，本发明的液体试样分析装置10中，辨识起到展开层3的作用的流路区域3a的宽度(即流路宽度)时的基于控制部的控制处理与以往的方法不同。本发明中，不是在液体试样展开于展开层3的流路区域3a后，而是在液体试样展开于展开层3的流路区域3a前的状态下，以横穿展开层3的流路区域3a和流出阻止线7的方式通过光学方法测定试验片1的亮度，基于该亮度测定数据判定展开层3的流路区域3a的宽度。
具体来说，首先，通过将试验片1承载于保持台11上并固定，从而通过保持台11保持试验片1。然后，在该状态下，在液体试样展开于展开层3的流路区域3a前，即在将液体试样添加于添加部4前的阶段或已添加液体试样但液体试样未达到展开层3的流路区域3a中的后述的测定位置的阶段，在通过摄像元件15拍摄的图像上以横穿展开层3的流路区域3a和流出阻止线7的方式对像素进行扫描(扫描线L)，判定展开层3的流路区域3a的宽度。
还有，展开层3的流路区域3a中的扫描线L在液体试样未展开的状态下，即使设置标记试剂部5或固定化试剂部6，亮度也不会与其他流路区域3a有所不同，所以可以测定展开层3的流路区域3a中的任意位置，也可以对展开层3的流路区域3a中配置有固定化试剂部6的位置进行扫描。然而，在亮度可能会因设置标记试剂部5或固定化试剂部6而与其他流路区域3a有所不同的情况下，可能会因亮度变化而误认为是边界部，因此为了不发生这样的不良情况，较好是对展开层3的流路区域3a中未设有标记试剂部5和固定化试剂部6的位置进行扫描。
如图3(a)、(b)所示，在液体试样未展开于展开层3的流路区域3a的状态下，以展开层3的流路区域3a与流出阻止线7的边界部为界，亮度差大(展开层3的流路区域3a的亮度比流出阻止线7的亮度大)。因此，通过预先将用于辨识展开层3的流路区域3a与流出阻止线7的边界部的亮度变化阈值存储于控制部的存储部等，将试验片1的展开层3的流路区域3a中相对于宽度方向上的移动距离有规定阈值以上的亮度变化的位置判定为边界部，或者将相对于流路区域3a的宽度方向中心部等有规定阈值以上的亮度变化的位置判定为边界部，从而可以良好地辨识该边界部内侧的部分为试验片1的展开层3的流路区域3a。
还有，然后，通过藉由图像处理检测试验片1中的形成于展开层3的非流路区域3b的一部分的孔部8，辨识试验片1中的固定化试剂部6相对于试验片长边方向的位置。在这里，作为孔部8的位置检测方法，可考虑对于以适当的阈值二值化后的图像进行图案匹配的方法。还有，也可以不另外设置孔部8等用于辨识固定化试剂部6相对于试验片长边方向的位置的标记，例如基于与试验片1的端部的距离来辨识固定化试剂部6的试验片长边方向位置。还有，该固定化试剂部6相对于试验片长边方向的位置辨识动作可以在进行展开层3的流路区域3a的宽度辨识动作前实施。
由此，基于展开层3的流路宽度判定信息和固定化试剂部6的试验片长边方向位置信息，可准确地辨识设有固定化试剂部6的区域。然后，在液体试样展开至固定化试剂部6并显色的状态下，测定如上所述进行了位置辨识的固定化试剂部6的显色状态，换算成分析对象物的浓度，输出分析结果。还有，并不局限于此，可以在测定包含固定化试剂部6的宽阔区域后，将与固定化试剂部6的区域对应的位置的测定数据作为浓度测定用数据输入。
如果采用上述方法，则通过在液体试样未展开于展开层3的流路区域3a的状态下以横穿展开层3的流路区域3a和流出阻止线7的方式测定试验片1，可以在展开层3的流路区域3a与流出阻止线7的亮度差大的状态下，良好地辨识它们的边界部。藉此，还可良好地设定展开层3的流路宽度和作为显色部的固定化试剂部6相对于试验片宽度方向的测定范围，能够进行良好地设定好的测定范围内的作为显色部的固定化试剂部6的测定，测定时的可靠性和测定精度提高。
此外，在液体试样未展开的状态下，展开层3的流路区域3a与流出阻止线7分别为与产品出厂时基本相同的显色状态，各试验片1的展开层3的亮度也稳定，所以不仅可以良好且较容易地设定作为用于识别展开层3的流路区域3a与流出阻止线7的判断基准的亮度变化阈值，因而可以更准确且更迅速地识别展开层3的流路区域3a与流出阻止线7的边界部，能够维持良好的可靠性并缩短判别作业时间。此外，测定时的展开层3的流路区域3a内也相对于宽度方向呈大致均匀的显色状态，所以可以良好地辨识展开层3的流路区域3a的宽度，测定时的可靠性和测定精度也由此提高。
还有，上述实施方式中，对为了辨识试验片1中的固定化试剂部6相对于试验片长边方向的区域而通过利用孔部8或与试验片1的端部的距离等来进行识别的情况进行了叙述，但并不局限于此，作为辨识试验片1中的固定化试剂部6相对于试验片长边方向的区域的方法，可以采用在固定化试剂部6已显色的状态下基于其浓度变化(亮度变化)状态进行判定的方法。
此外，上述实施方式中，对流出阻止线7通过对由多孔性载体形成的展开层3照射激光来使展开层3的一部分熔融固化而形成的情况进行了叙述，但并不局限于此，还可以用于另外呈线状配置不通过液体的阻隔用构件而构成液体试样不会流出至外侧的结构的试验片的情况。
(实施方式2)
下面，作为实施方式2，对实施方式1的液体试样分析方法中的试验片的位置偏差校正方法进行说明。但是，以下的位置偏差校正方法并不局限于与以横穿流路区域和流出阻止线的方式扫描像素的实施方式1的液体试样分析方法同时实施的情况，也可以应用于以往的一般的液体试样分析方法。
图9、图10、图11(a)、图11(b)、图12、图13、图14示出实施方式2中的试验片1及其测定装置。
与图20所示的以往例的区别在于，在试验片1的一部分追加有由孔部8(参照图1)等形成的基准标记23以及追加有基准标记检测步骤S1-a和试验片位置偏差校正步骤S1-b。
此外，试验片1的更具体的结构也与作为以往的结构的图20不同，在后文中对此进行说明。对于除此以外的与图20相同的编号的结构，与图20的说明相同，所以这里略去说明。
对于配置于保持台11上的试验片1，用光源12照射，通过由光圈13、聚光透镜14和摄像元件15构成的光学***进行拍摄。在图像生成步骤S1后的基准标记检测步骤S1-a中，根据图像生成步骤S1中生成的灰阶图像检测基准标记23的位置。
试验片位置偏差校正步骤S1-b中，以对于灰阶图像实施校正试验片的位置偏差的图像处理的形式构成。
该实施方式的试验片1如图10所示构成。
试验片1中，展开层3通过2条流出阻止线7被分隔为中央的流路区域3a和除此以外的非流路区域3b，并且在非流路区域3b设有基准标记23。该基准标记23的形成位置以确定的与固定化试剂部6的相对位置关系形成。具体来说，在与固定化试剂部6的特定位置沿X轴方向和Y轴方向分别相距规定距离的规定位置形成基准标记23。
展开层3与以往例同样，是硝化纤维素的多孔质载体。支承体2是聚对苯二甲酸乙二醇酯的液体不透过性片材。展开层3的厚度为0.25mm，支承体2的厚度为0.5mm。基准标记23由贯穿展开层3和支承体2的通孔形成。
基准标记23的通孔通过使用CO2激光标记装置对于展开层3的面垂直地以一定功率照射一定时间的CO2激光来使展开层3和支承体2熔融而形成。通过该方法形成的通孔3示于图11(a)、图11(b)。
图11(a)是基准标记23的剖视图。关于基准标记23的直径，展开层3的部分为约0.6mm，支承体2的部分为约0.3mm。这是由于展开层3的硝化纤维素是比支承体2的聚对苯二甲酸乙二醇酯更容易受热熔解的材质。图11(b)是从展开层3侧观察该基准标记23时的俯视图。如该图所示，基准标记23可见2重圆形的轮廓线。
承载有具有该基准标记23的试验片1的保持台11的表面被涂装为比展开层3和支承体2更暗的色系。具体来说，展开层3和支承体2采用白底的材料，在保持台11的表面实施黑色的涂装。
在将试验片1配置于该保持台11的状态下，通过摄像元件15拍摄的灰阶图像中，基准标记23的部分如图13所示呈现保持台11的黑色。由于展开层3和支承体2采用白底的材料，因此如果在基准标记23的周围截取灰阶图像，则如图13所示，获得黑白的对比强烈的基准标记23的局部图像。
基准标记检测步骤S1-a中，使用该局部图像求出表示基准标记23在灰阶图像上的位置的位置偏差校正前校正标记位置。
以下，使用图12对求位置偏差校正前校正标记位置的程序进行说明。
图12是用于说明实施方式2中的求位置偏差校正前基准标记位置的程序的流程图。
步骤a-1中，对局部图像以规定的阈值进行阈值处理，生成二值图像。对图13的局部图像以规定的阈值进行阈值处理后，获得如图14所示的二值图像。在这里，作为规定的阈值，对于0～255的量程，阈值采用100。
步骤a-2中，对于步骤S1中生成的二值图像，进行标示处理，提取黑像素的连通分量。图14的二值图像的例子中，黑像素的连通分量仅有与通孔对应的1个连通分量，但有时存在其他因附着于展开层3的垃圾或摄像元件15的噪声等的影响而产生的连通分量。
步骤a-3中，考察提取的各连通分量的特征参数，选取1个符合通孔的特征的连通分量。连通分量的特征参数是面积、圆度或周长等表示物体的形状的数值。作为最单纯的方法，预先实测与通孔对应的黑像素的连通分量的面积应为多少来确定面积的范围即可。
接着的步骤a-4中，求通孔的连通分量的重心坐标。二值图像中的重心坐标可以作为构成连通分量的所有像素的X坐标和Y坐标的各自的平均值而求出。将这里检出的重心坐标作为基准标记23的位置偏差校正前基准标记位置。
经过以上的步骤a-1～步骤a-4的程序，确定基准标记23的位置偏差校正前基准标记位置。
接着，试验片位置偏差校正步骤S1-b中，通过平移图像生成步骤S1中所生成的灰阶图像，使基准标记检测步骤S1-a中求得的位置偏差校正前基准标记位置与规定的位置偏差校正后基准标记位置一致，从而可以校正试验片1的位置偏差。
如上所述，实施方式2中，通过在试验片1的非流路区域3b中设置基准标记23来进行基于图像处理的试验片的位置偏差校正，显色部判定步骤S2中的固定化试剂部6的范围得到准确的辨识，因此可以提高测定精度。另外，通过在实施方式1的液体试样分析方法中进行位置偏差校正，可以良好地设定展开层3的流路宽度和作为显色部的固定化试剂部6相对于试验片宽度方向的测定范围，而且由于即使试验片1的位置偏离，也可以校正位置偏差，因此能够使显色部的测定的可靠性和测定精度提高。
此外，通过使基准标记23的形状为如图11所示的通孔并将保持台11着色为黑色，可以提高基准标记检测步骤S1-a中的灰阶图像上的基准标记的对比度，获得良好的二值图像，基准标记的检测精度提高。
此外，虽然设定为将展开层3通过流出阻止线7分割为流路区域3a和除此以外的非流路区域3b的结构，但可应用本发明的结构并不局限于此。
(实施方式3)
图15(a)、图15(b)、图15(c)分别表示试验片1的另一具体例子。
图15(a)所示的试验片1为未设实施方式2的试验片1中所见的支承体2的情况，基准标记23为仅贯穿展开层3的通孔，而且也没有流出阻止线7，因此整个展开层3都为流路区域，这些方面与图10的试验片1不同。
即使是这样的结构的试验片1，如果与涂装为暗色的保持台11组合，也可以获得如图13所示的基准标记23的灰阶图像，所以本发明可以适用。
图15(b)所示的试验片1没有实施方式2的试验片1中所见的流出阻止线7，整个展开层3都为流路部，这一点与图10的试验片1不同。基准标记23由贯穿展开层3和支承体2这两者的通孔形成。
即使是这样的结构的试验片1，如果与涂装为黑色的保持台11组合，也可以获得如图13所示的基准标记的灰阶图像，所以本发明可以适用。
图15(c)所示的试验片1不存在实施方式2的试验片1中所见的非流路区域3b，而是露出支承体2的一部分来代替，这一点与图10的试验片1不同。
具体来说，支承体2覆盖展开层3的与包含判定部2的面相反的面，且具有一部分在所述展开层3附近露出而成的露出部22a。基准标记23为存在于支承体2露出的露出部22a且仅贯穿支承体2的通孔。
即使是这样的结构的试验片1，如果与涂装为黑色的保持台11组合，也可以获得如图13所示的基准标记的灰阶图像，所以本发明可以适用。
在这里，以未形成流出阻止线的试验片为例进行了说明，但即使形成1对或多对流出阻止线7，也同样可以适用。
如上所述，通过在实施方式1的液体试样分析方法中进行位置偏差校正，可以良好地设定展开层3的流路宽度和作为显色部的固定化试剂部6相对于试验片宽度方向的测定范围，而且由于即使试验片1的位置偏离，也可以校正位置偏差，因此能够使显色部的测定的可靠性和测定精度提高。
(实施方式4)
图16(a)、图16(b)分别表示试验片1的另一具体例子。
图15所示的实施方式3的试验片1中，为了提高基准标记23的灰阶图像的对比度，使保持台11的颜色为暗色系，但如果是图16(a)、图16(b)所示的结构的试验片1，不论保持台11是什么颜色，都可以获得如图13所示的对比度高的基准标记的灰阶图像。
图16(a)所示的试验片1没有流出阻止线7，整个展开层3都为流路区域，而且在支承体2下设有暗色系、具体为黑色的遮光层28，这些方面与图10的试验片不同。该情况下的基准标记23的剖视图和俯视图示于图17(a)、图17(b)。如图17(a)的剖视图所示，基准标记23呈从展开层3贯穿至支承体2的孔，如图17(b)的俯视图所示，遮光层28露出呈黑色，因此不论保持台11是什么涂装色，都可以获得如图13所示的基准标记的灰阶图像，所以本发明可以适用。
图16(b)所示的试验片1没有流出阻止线7，整个展开层3都为流路区域，而且支承体2还起到比展开层3的表面颜色更暗的色系的遮光层的作用，具体呈黑色，这些方面与图10的试验片不同。基准标记23的剖视图和俯视图示于图18(a)、图18(b)。如图18(a)的剖视图所示，基准标记23呈仅贯穿展开层3的孔。这样的结构的试验片中，如图18(b)的俯视图所示，支承体2露出呈黑色，因此不论保持台11是什么涂装色，都可以获得如图13所示的基准标记的灰阶图像，所以本发明可以适用。
在这里，以未形成流出阻止线的试验片为例进行了说明，但即使形成1对或多对流出阻止线7，也同样可以适用。
如上所述，通过在实施方式1的液体试样分析方法中进行位置偏差校正，可以良好地设定展开层3的流路宽度和作为显色部的固定化试剂部6相对于试验片宽度方向的测定范围，而且由于即使试验片1的位置偏离，也可以校正位置偏差，因此能够使显色部的测定的可靠性和测定精度提高。
(实施方式5)
图19表示试验片1的另一具体例子。
实施方式2中，基准标记23仅设1处，仅校正平移的位置偏差，但如果设多处基准标记，则不仅是平移，还可以校正包括旋转或放大、缩小的位置偏差。
图19为设置多处实施方式2～实施方式4中的基准标记23的情况的试验片1，设置4处基准标记31、32、33、34来替代图10所示的试验片中的基准标记23。
这样有多处基准标记的情况下，基准标记检测步骤S1-a中，通过以图12的流程图说明了的程序分别求出各基准标记位置，试验片位置偏差校正步骤S1-b中，将图像生成步骤S1中所生成的灰阶图像进行平移、旋转和扩大或缩小，使各基准标记位置与对应于各位置偏差校正前基准标记位置的规定的位置偏差校正后基准标记位置一致，从而可以校正试验片1的位置。
这样的图像的平移、旋转和放大或缩小可通过对灰阶图像实施一般被称为仿射变换的线性坐标变换的处理来实现。
上述的各实施方式中，保持台11的颜色采用黑色且展开层3和支承体2的颜色采用白色，但只要是基准标记的中心与除此以外的区域的对比度高的颜色即可，并不限定于该组合。
此外，较好是将多处基准标记按照以各基准标记为顶点的二维图形呈不具有对称轴的图形的方式配置。另外，较好是按照以各基准标记为顶点的二维图形呈不具有对称点的图形的方式配置。即，通过使各基准标记相对于与展开层的展开方向平行的中心线或中心点或者该两者形成于非对称的位置，从而可以在试验片的安装于正反或前后方向上不正确时检出。
图21(a)、图21(b)为本发明的实施方式5中的具备非对称的基准标记的试验片的结构图，图21(a)为正面图，图21(b)为反面图。
图21(a)、图21(b)中，基准标记41、42、43为通孔，因此也设于反面。
如图9的结构图所示，试验片1安装于保持台11使用，但有时会弄错试验片1的前后、正反或前后正反这两者而安装。此外，也有时将试验片1安装于保持台11时的***位置的深度不适当。
这样的试验片1的安装状态不正确的情况下，无法准确地测定。
图22是表示实施方式5中的正确安装试验片的状态的图，图23是表示实施方式5中的前后倒转地安装试验片的状态的图，图24是表示实施方式5中的正反倒转地安装试验片的状态的图，图25是表示实施方式5中的前后正反倒转地安装试验片的状态的图。
图22所示的图像的安装状态为正确的安装状态，试验片1的前后和正反正确，且***位置的深度也适当。
图23所示的图像的安装状态中，***位置的深度适当，但试验片1的前后倒转。
图24所示的图像的安装状态中，试验片1的正反倒转，***位置的深度也过深。
图25所示的图像的安装状态中，试验片1的前后和正反倒转，***位置的深度也过深。
此外，设置图像中的特定的位置、大小的基准标记搜索范围10a、10b和10c。基准标记搜索范围10a～10c分别与基准标记41～基准标记43对应，设定为试验片1正确安装的状态下包含基准标记41～基准标记43的像的范围。仅检测正反或前后的安装缺陷的情况下，考虑到像的位置因试验片1和保持台11的尺寸误差而偏离，理想的是该基准标记搜索范围10a～10c设为有一定程度的宽容度的大小。例如，优选将基准标记搜索范围的形状设定为矩形，其一边的长度为基准标记的像的直径的2～3倍。
以下，对辨识图22～图25的安装状态的方法进行详细说明。
首先，判定基准标记是否存在于图像上的基准标记搜索范围10a～10c内。基准标记的确认方法与实施方式2～4相同。
接着，如果基准标记存在于基准标记搜索范围10a～10c的所有范围内，则判断为试验片1正确地安装。对于图22～图25的各图像判定基准标记搜索范围10a～10c是否存在的结果示于图26。图26是表示实施方式5中的基准标记的识别图案的图。如该结果所示，被判定为基准标记存在于基准标记搜索范围10a～10c的所有范围内的仅所安装的试验片1的前后、正反和***位置的深度正确的图22的情况。这是因为将基准标记41～基准标记43以非线对称或点对称的方式配置。
接着，基准标记不存在于基准标记搜索范围10a～10c的所有范围内而判断为有安装缺陷的情况下，中止色谱法测定，发出警告等。接着，基准标记存在于基准标记搜索范围10a～10c的所有范围内的情况下，实施上述的校正处理。
还有，上述各实施方式中，以通孔的形式制成基准标记41～基准标记43，但也可以通过印刷制成。印刷的情况下，不仅在表面印刷基准标记，采用通孔时在形成开口部的反面的位置也印刷基准标记。
此外，这里以设3个基准标记的情况为例进行了说明，只要将基准标记以非线对称或点对称的方式配置即可，个数任意。
如上所述，通过在实施方式1的液体试样分析方法中进行位置偏差校正，可以良好地设定展开层3的流路宽度和作为显色部的固定化试剂部6相对于试验片宽度方向的测定范围，而且由于即使试验片1的位置偏离，也可以校正位置偏差，因此能够使显色部的测定的可靠性和测定精度提高。
还有，对于实施方式2～实施方式5，对与实施方式1同时实施的情况进行了说明，但也可以仅用于试验片的位置偏差校正而不辨识显色部等的位置。
产业上利用的可能性
本发明的液体试样分析方法可以适用于采用对展开层供给液体试样且展开层的流路区域被流路阻止线分隔的各种试验片的分析方法。

Claims (16)

1.一种液体试样分析方法，该方法中在展开液体试样的展开层使用在展开层的流路区域的一部分设有固定化有试剂的显色部的试验片且在该试验片的侧面部的内侧形成有阻止液体试样从所述展开层的流路区域流出至外部的与试验片的两侧面部平行的流出阻止线，该流出阻止线通过照射激光使所述展开层的一部分熔融固化来形成，
使添加于试验片的液体试样在展开层的流路区域中展开，通过光学方法测定显色部的显色状态来进行液体试样中的分析对象物的分析，其特征在于，
在液体试样未展开于展开层的流路区域的状态下以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式通过光学方法测定试验片，基于该测定数据判定所述流路区域的宽度，
展开层中的所述流出阻止线的宽度方向内侧的区域成为所述流路区域。
2.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，通过以摄像元件拍摄包含试验片的图像，以横穿展开层的流路区域和流出阻止线的方式扫描所述图像的像素，从而判定展开层的流路宽度。
3.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，基于展开层的流路宽度判定信息，测定显色部或输入显色部的测定信息。
4.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，流出阻止线通过对由多孔性载体形成的展开层照射激光来使展开层的一部分熔融固化而形成。
5.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，对于添加于试验片的液体试样使用色谱法使其展开来进行测定。
6.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述试验片具备基准标记，所述基准标记由在与所述显色部相对的位置自包含所述显色部的面贯穿所述展开层的孔形成。
7.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述试验片具备：
支承体，所述支承体覆盖所述展开层的与包含所述显色部的面相反的面；
至少1个基准标记，所述基准标记是自包含所述显色部的面贯穿所述展开层及所述支承体的孔。
8.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述试验片具备：
支承体，所述支承体覆盖所述展开层的与包含所述显色部的面相反的面，且包括一部分在所述展开层附近露出而成的露出部；
基准标记，所述基准标记是自露出部贯穿所述支承体的孔。
9.如权利要求1所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述试验片具备：
遮光层，所述遮光层直接或隔着支承体粘合于所述展开层，呈比所述展开层的表面颜色更暗的色系；
基准标记，所述基准标记是自包含所述显色部的面贯穿所述展开层而使所述遮光层的一部分露出的孔。
10.如权利要求6所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述基准标记是通过激光熔融而形成且包含所述显色部的面的剖面呈圆形的孔。
11.如权利要求6所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述基准标记形成有多个，相对于与所述展开层的展开方向平行的中心线和中心点配置在非对称的位置。
12.如权利要求6所述的液体试样分析方法，其特征在于，作为所述基准标记，在成为进行贯穿的所述孔的开口部的部分形成印刷标记来代替进行贯穿的所述孔。
13.如权利要求6所述的液体试样分析方法，其特征在于，在所述采用光学方法的测定之前包括：
图像生成步骤，通过图像传感器拍摄所述试验片的包含所述显色部的面而生成灰阶图像；
基准标记检测步骤，根据所述灰阶图像算出表示所述试验片的基准标记的位置的位置偏差校正前基准标记位置；
传感器位置偏差校正步骤，对于所述灰阶图像实施线性坐标变换，使得所述位置偏差校正前基准标记位置与对应的位置偏差校正后基准标记位置一致。
14.如权利要求9所述的液体试样分析方法，其特征在于，在所述采用光学方法的测定之前包括：
图像生成步骤，通过图像传感器拍摄所述试验片的包含所述显色部的面而生成灰阶图像；
基准标记检测步骤，根据所述灰阶图像算出表示所述试验片的基准标记的位置的位置偏差校正前基准标记位置；
传感器位置偏差校正步骤，对于所述灰阶图像实施线性坐标变换，使得所述位置偏差校正前基准标记位置与对应的位置偏差校正后基准标记位置一致。
15.如权利要求11所述的液体试样分析方法，其特征在于，在所述采用光学方法的测定之前包括：
图像生成步骤，通过图像传感器拍摄所述试验片的包含所述显色部的面而生成灰阶图像；
基准标记检测步骤，根据所述灰阶图像算出表示所述试验片的基准标记的位置的位置偏差校正前基准标记位置；
安装缺陷检测步骤，确认所述位置偏差校正前基准标记位置是否全部存在于规定的基准标记搜索范围内；
处置中止步骤，所述安装缺陷检测步骤中所述位置偏差校正前基准标记位置有至少1处不存在于规定的基准标记搜索范围内的情况下，中止处理；
传感器位置偏差校正步骤，所述安装缺陷检测步骤中所述位置偏差校正前基准标记位置全部存在于规定的基准标记搜索范围内的情况下，对于所述灰阶图像实施线性坐标变换，使得所述位置偏差校正前基准标记位置与对应的位置偏差校正后基准标记位置一致。
16.如权利要求13所述的液体试样分析方法，其特征在于，所述基准标记检测步骤中，
将所述灰阶图像以规定的阈值二值化，将连通分量的重心作为所述基准标记的位置偏差校正前基准标记位置。
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