CN101891833A - 一种羧甲基玛咖多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，该方法以水和乙醇为介质，从玛咖干粉中提取玛咖多糖，再将玛咖多糖在异丙醇介质中与氯乙酸和适当过量的氢氧化钠反应，对多糖中的羟基进行取代反应，再除去其中的蛋白和透析得到高水溶性的羧甲基玛咖多糖。与现有技术相比，本发明得到高水溶性的羧甲基玛咖多糖，取代度为0.618，该制备方法简单，操作方便，得到的羧甲基玛咖多糖水溶性好；原料简单、成本低，反应速度快，易控制，产品易分离；所得到的羧甲基玛咖多糖纯度高。

Description

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及一种制备方法，尤其是涉及一种羧甲基玛咖多糖的制备方法。

背景技术

多糖(polysacchatide)几乎存在于所有的生物体中，在生命过程中表现出广泛的功能，早在上世纪40年代就发现了多糖类物质的抑癌效应，特别是上世纪60年代以来逐渐发现了多糖对肿瘤、肝炎、心血管病、糖代谢和抗衰老等方面具有一些独特的生物活性，同时毒性极低，几乎没有直接的细胞毒作用，因此深入研究多糖的结构、生物活性以及构效关系可推动多糖类新药的发现与研究。

玛咖多糖是从玛咖中提取的活性物质。玛咖(MACA)是十字花科植物玛咖，是形似萝卜样肥大的根茎，原产于秘鲁中部基宁(Jinin)及帕斯科(Pasco)附近4000米以上的安第斯山区，当地土著人常把鲜根加蜂蜜和水果榨汁作为一种饮料饮用。食用玛咖可抗疲劳，增强活力，补充体力，舒缓压力，改善抑郁症状，坚固免疫***，也可以促进风湿症、呼吸疾病的治疗并作为一种缓解药等，有“南美人参”的美誉，目前我国也已开始种植玛咖，对玛咖的研究也越来越受到重视。

关于玛咖的研究长期以来集中在玛咖的植物学和药用价值的研究，玛咖的一些传统作用也得到德国和北美植物学研究者的科学验证，玛咖被誉为全球十大畅销营养食品之一，被***粮农组织(FAO)列入目录之中，是被推荐食用的安全食品。但作为从玛咖中提取的活性物质玛咖多糖的有关研究鲜有报道。张永忠，余龙江等探讨南美药食两用植物玛咖多糖成分的体外抗氧化保健作用。采用邻苯二酚自氧化法、H₂O₂诱导红细胞氧化溶血等方法，观察体外给予玛咖多糖对这些氧化反应的影响。结果表明，玛咖多糖对邻苯二酚的自氧化有微弱的抑制作用，对H₂O₂诱导红细胞氧化溶血有显著的抑制作用，最大抑制率达77％，结果表明玛咖多糖体外具有一定的抗氧化保健作用。但玛咖多糖的水溶性不佳，限制了它的应用。因此我们从玛咖干粉中提取了玛咖多糖，并进一步对其结构进行改性。

多糖分子中的取代基对多糖的活性影响很大，常用于多糖官能团改造的方法有降解、羧甲基化、硫酸酯化、乙酰化、烷基化、磷酸酯化、二乙基氨基乙基化、碘化和氨化等，其中羧甲基方法因具有制备过程简单、试剂成本低及生成物无毒性等优点，是一种较常用的衍生化方法，已成功用于茯苓多糖、壳聚糖等多糖的羧甲基化，而羧甲基玛咖多糖的制备尚未见报道。玛咖多糖微溶于水，限制了其生理功效的发挥，研究表明玛咖多糖对羟自由基和氧自由基的清除率都不是很显著。因此需将其羧甲基化从而增加其在水中的溶解度，引入-COO^-后在一定pH值下使多糖带负电荷，它可以结合在病原菌的膜上，阻碍其它物质的进出，降低了膜对物质吸收的选择性，使菌体的正常代谢活动受阻，达到抑菌杀菌的作用；-COO^-还可使多糖与有害金属或离子形成络合物，清除“肠道垃圾”，因此对玛咖多糖进行结构改造有望得到活性更强、应用范围更广的玛咖多糖衍生物具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种制备方法简单、成本低、产品易分离的羧甲基玛咖多糖的制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，该方法以水和乙醇为介质，从玛咖干粉中提取玛咖多糖，再将玛咖多糖在异丙醇介质中与氯乙酸和适当过量的氢氧化钠反应，对多糖中的羟基进行取代反应，再除去其中的蛋白和透析得到高水溶性的羧甲基玛咖多糖。

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的方法具体包括以下步骤：

(1)玛咖多糖的提取：取玛咖块根粉末置于容器中，加入蒸馏水溶解得到溶液，蒸馏水与玛咖块根粉末的质量比为(7-9)∶1，开启搅拌装置搅拌，再将溶液加热至80-95℃，搅拌回流1-3h，然后将溶液冷却至20-30℃，通过离心分离收集清液，将清液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，再将所得浓缩液冷却至20-30℃，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，加入的乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，静置8-15min，再经抽滤得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到玛咖多糖固体；

(2)玛咖多糖的羧甲基化：将上述玛咖多糖固体置于氢氧化钠溶液中，开启搅拌装置搅拌，然后向其中加入异丙醇，玛咖多糖与异丙醇的重量比为1∶(20-25)，控制温度为40-60℃，搅拌3-5h，得到反应液，将反应液冷却至20-30℃，再中和至pH值为6.5-7.5，再进行过滤，将所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，加入的乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，控制真空度为0.1-0.4MPa，经真空干燥得到粗羧甲基玛咖多糖固体；

(3)Sevage法去除羧甲基玛咖多糖中的蛋白：将上述粗羧甲基玛咖多糖固体置于容器中，用蒸馏水溶解，得到羧甲基玛咖多糖溶液，将氯仿和正丁醇按体积比(3-5)∶1配制成混合溶液，将混合溶液和羧甲基玛咖多糖溶液按体积比(1-1.5)∶1混合，然后在20-25℃电磁25-40min，得到含有凝胶的溶液，用离心分离机分离出凝胶，收集上层的清液，再向清液中加入重量百分浓度为95％的乙醇，乙醇与清液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到膜状透明固体，将该固体放在真空干燥皿中，控制真空度为0.1-0.4MPa，经真空干燥得到除去蛋白质后的羧甲基玛咖多糖；

(4)羧甲基玛咖多糖的透析：用重量百分浓度为50-60％的乙醇将透析袋煮沸0.5-2h，再依次用重量百分浓度为50-60％的乙醇、碳酸氢钠溶液和EDTA溶液洗涤透析袋，最后用蒸馏水冲洗，将上述羧甲基玛咖多糖用蒸馏水溶解后，灌入透析袋中，将透析袋两端夹紧，置于装有蒸馏水的大烧杯中，利用磁力搅拌装置搅拌烧杯中的蒸馏水，每1-2天更换一次蒸馏水，透析8-12天，利用硝酸银溶液检测蒸馏水中不含氯化钠，透析结束，将透析袋内的透析液过滤后，所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，经离心分离后，将沉淀进行干燥，即得到半透明的羧甲基玛咖多糖固体。

所述的步骤(2)中氢氧化钠溶液的浓度为0.8-1.2mol/L。

所述的步骤(2)中的中和反应液所用溶剂为盐酸或冰醋酸。

所述的步骤(4)中的透析袋的截留分子量为14000。

所述的步骤(4)中的碳酸氢钠溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

所述的步骤(4)中的EDTA溶液的浓度为0.0008-0.0012mol/L。

所述的步骤(4)中的硝酸银溶液的重量百分浓度为0.5-2％。

与现有技术相比，本发明以水和乙醇溶液为介质，提取了玛咖多糖，再将玛咖多糖在异丙醇介质中与适当过量的氢氧化钠和氯乙酸反应，对多糖中的羟基进行取代反应，制得高水溶性的羧甲基玛咖多糖，制备出的羧甲基玛咖多糖为淡黄色固体粉末，取代度为0.618，可以应用在抗肿瘤药物、食品等方面，具有以下优点：

(1)制备方法简单，操作方便，得到的羧甲基玛咖多糖水溶性好；

(2)利用化学改性的方法制备出羧甲基玛咖多糖，解决了玛咖多糖难以溶解于水的问题；

(3)采用异丙醇、氯乙酸与氢氧化钠的反应体系，原料简单、成本低，反应速度快，易控制，产品易分离；

(4)采用透析和去蛋白的方法，所得到的羧甲基玛咖多糖纯度高。

附图说明

图1为实施例3得到的羧甲基玛咖多糖的红外光谱；

图2为实施例3得到的羧甲基玛咖多糖的DSC图谱。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

(1)玛咖多糖的提取：取15g玛咖块根粉末置于容器中，加入105g蒸馏水溶解得到溶液，开启搅拌装置搅拌，再将溶液加热至80℃，搅拌回流1h，然后将溶液冷却至20℃，通过离心分离收集清液，将清液加热浓缩至体积为原来的1/4，再将所得浓缩液冷却至20℃，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇80ml，静置8min，再经抽滤得到棕褐色沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到黄褐色玛咖多糖固体；

(2)玛咖多糖的羧甲基化：取上述玛咖多糖固体4g置于0.8mol/L的氢氧化钠溶液中，开启搅拌装置搅拌，然后向其中加入异丙醇80ml，控制温度为40℃，搅拌3h，得到反应液，将反应液冷却至20℃，利用盐酸将反应液中和至pH值为6.5，再进行过滤，将所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇60ml，得到沉淀，控制真空度为0.1MPa，经真空干燥得到浅黄褐色粗羧甲基玛咖多糖固体；

多糖分子葡萄糖残基上C2、C3和C6上的羟基具有醚化反应能力，与CH₂ClCOOH在NaOH存在的碱性环境中发生双分子亲核取代反应，反应分两步进行：

第一步为碱化反应：ROH+NaOH→RONa+H₂O

NaOH使葡萄糖残基上羟基变成氧负离子，提高其亲核性，所生成的多糖钠盐是进行醚化反应的活性中心；

第二步为醚化反应：ROH+NaOH→RONa+H₂O

R-ONa+CH₂ClCOOH→R-OCH₂COONa+NaCl+H₂O

同时NaOH还可与CH₂ClCOOH发生下列副反应：

CH₂ClCOOH+2NaOH→HOCH₂COONa+NaCl+H₂O

副反应会使得醚化剂失活，导致转化率降低，因此需要控制碱的用量；

(3)Sevage法去除羧甲基玛咖多糖中的蛋白：将上述粗羧甲基玛咖多糖固体置于容器中，用蒸馏水溶解，得到羧甲基玛咖多糖溶液50ml，将氯仿和正丁醇按体积比3∶1配制成混合溶液50ml，将混合溶液和羧甲基玛咖多糖溶液混合，然后在20℃电磁25min，得到含有凝胶的溶液，用离心分离机分离出凝胶，收集上层的清液，按同样方法重复处理3次，直至UV谱图中260nm、280nm处无吸收峰出现为止，说明产品中无蛋白质，再向清液中加入重量百分浓度为95％的乙醇300ml，得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到膜状透明固体，将该固体放在真空干燥皿中，控制真空度为0.1MPa，经真空干燥得到除去蛋白质后的羧甲基玛咖多糖；

(4)羧甲基玛咖多糖的透析：用重量百分浓度为50％的乙醇将透析袋煮沸0.5h，再依次用重量百分浓度为50％的乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠溶液和0.0008mol/LEDTA溶液洗涤透析袋，最后用蒸馏水冲洗，将上述羧甲基玛咖多糖用蒸馏水溶解后，灌入透析袋中，将透析袋两端夹紧，置于装有蒸馏水的大烧杯中，利用磁力搅拌装置搅拌烧杯中的蒸馏水，每天更换一次蒸馏水，透析8天，利用重量百分浓度为0.5％的硝酸银溶液检测蒸馏水中不含氯化钠，透析结束，将透析袋内的透析液过滤后，所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇75ml，得到沉淀，经离心分离后，将沉淀进行干燥，即得到半透明的羧甲基玛咖多糖固体。

实施例2

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

(1)玛咖多糖的提取：取20g玛咖块根粉末置于容器中，加入180g蒸馏水溶解得到溶液，开启搅拌装置搅拌，再将溶液加热至95℃，搅拌回流3h，然后将溶液冷却至30℃，经离心分离收集清液，再加热浓缩至体积为原来的1/2，将所得浓缩液冷却至30℃，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇450ml，静置15min，再经抽滤得到棕褐色沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到黄褐色玛咖多糖固体；

(2)玛咖多糖的羧甲基化：取上述玛咖多糖固体4g置于1.2mol/L的氢氧化钠溶液中，开启搅拌装置搅拌，然后向其中加入异丙醇100ml，控制温度为60℃，搅拌5h，得到反应液，将反应液冷却至30℃，利用冰醋酸将反应液中和至pH值为7.5，再进行过滤，将所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇250ml，得到沉淀，控制真空度为0.4MPa，经真空干燥得到浅黄褐色粗羧甲基玛咖多糖固体；

(3)Sevage法去除羧甲基玛咖多糖中的蛋白：将上述粗羧甲基玛咖多糖固体置于容器中，用蒸馏水溶解，得到羧甲基玛咖多糖溶液60ml，将氯仿和正丁醇按体积比5∶1配制成混合溶液90ml，将混合溶液和羧甲基玛咖多糖溶液混合，然后在25℃电磁40min，得到含有凝胶的溶液，用离心分离机分离出凝胶，收集上层的清液，按同样方法重复处理4次，直至UV谱图中260nm、280nm处无吸收峰出现为止，说明产品中无蛋白质，再向清液中加入重量百分浓度为95％的乙醇750ml，得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到膜状透明固体，将该固体放在真空干燥皿中，控制真空度为0.4MPa，经真空干燥得到除去蛋白质后的羧甲基玛咖多糖；

(4)羧甲基玛咖多糖的透析：用重量百分浓度为50％的乙醇将透析袋煮沸2h，再依次用重量百分浓度为60％的乙醇、0.02mol/L碳酸氢钠溶液和0.0012mol/LEDTA溶液洗涤透析袋，最后用蒸馏水冲洗，将上述羧甲基玛咖多糖用蒸馏水溶解后，灌入透析袋中，将透析袋两端夹紧，置于装有蒸馏水的大烧杯中，利用磁力搅拌装置搅拌烧杯中的蒸馏水，每两天更换一次蒸馏水，透析12天，利用重量百分浓度为2％的硝酸银溶液检测蒸馏水中不含氯化钠，透析结束，将透析袋内的透析液过滤后，所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇250ml，得到沉淀，经离心分离后，将沉淀进行干燥，即得到半透明的羧甲基玛咖多糖固体。

实施例3

一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，该方法具体包括以下步骤：

(1)玛咖多糖的提取：取18.7g玛咖块根粉末置于容器中，加入150g蒸馏水溶解得到溶液，开启搅拌装置搅拌，再将溶液加热至90℃，搅拌回流2h，然后将溶液冷却至25℃，通过离心分离收集清液，将清液加热浓缩至体积为原来的1/3，再将所得浓缩液冷却至30℃，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇200ml，静置10min，再经抽滤得到棕褐色沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到黄褐色玛咖多糖固体；

(2)玛咖多糖的羧甲基化：取上述玛咖多糖固体4g置于1.0mol/L的氢氧化钠溶液中，开启搅拌装置搅拌，然后向其中加入异丙醇100ml，控制温度为50℃，搅拌4h，得到反应液，将反应液冷却至25℃，利用冰醋酸将反应液中和至pH值为7.0，再进行过滤，将所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/3，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇140ml，得到沉淀，控制真空度为0.3MPa，经真空干燥得到浅黄褐色粗羧甲基玛咖多糖固体；

(3)Sevage法去除羧甲基玛咖多糖中的蛋白：将上述粗羧甲基玛咖多糖固体置于容器中，用蒸馏水溶解，得到羧甲基玛咖多糖溶液80ml，将氯仿和正丁醇按体积比4∶1配制成混合溶液80ml，将混合溶液和羧甲基玛咖多糖溶液混合，然后在25℃电磁30min，得到含有凝胶的溶液，用离心分离机分离出凝胶，收集上层的清液。

按同样方法重复处理4次后，称取0.1mg的羧甲基玛咖多糖溶于蒸馏水并移至25mL容量瓶中，再用蒸馏水稀释至溶液达刻度，以蒸馏水为溶剂和参比物，用日本岛津UV-1601PC紫外分光光度计，扫描范围为200-700nm，测定紫外光谱。结果表明羧甲基玛咖多糖水溶液仅在200nm处有一锐细吸收峰，而在260nm与280nm处均无吸收峰，表明羧甲基玛咖多糖中无蛋白质和核酸。

向清液中加入重量百分浓度为95％的乙醇640ml，得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到膜状透明固体，将该固体放在真空干燥皿中，控制真空度为0.3MPa，经真空干燥得到除去蛋白质后的羧甲基玛咖多糖；

(4)羧甲基玛咖多糖的透析：用重量百分浓度为50％的乙醇将透析袋煮沸1h，再依次用重量百分浓度为60％的乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠溶液和0.001mol/L EDTA溶液洗涤透析袋，最后用蒸馏水冲洗，将上述羧甲基玛咖多糖用蒸馏水溶解后，灌入透析袋中，将透析袋两端夹紧，置于装有蒸馏水的大烧杯中，利用磁力搅拌装置搅拌烧杯中的蒸馏水，每天更换一次蒸馏水，透析10天，利用重量百分浓度为1％的硝酸银溶液检测蒸馏水中不含氯化钠，透析结束，将透析袋内的透析液过滤后，所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/3，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇200ml，得到沉淀，经离心分离后，将沉淀进行干燥，即得到半透明的羧甲基玛咖多糖固体。

对实施例3得到的羧甲基玛咖多糖取代度的测定：取代度(DS)指每个多糖的葡萄糖单元被取代的羟基平均数。本发明采用灰化法测定样品钠含量，换算成羧甲基玛咖多糖取代度。

(1)称取0.0501g得到的羧甲基玛咖多糖，放入坩埚，置于烘箱80℃干燥，再冷却，迅速称量并记录；

(2)将放有羧甲基玛咖多糖的坩埚放入高温炉650℃灼烧2h，至无碳黑为止，然后冷却至室温，先用少量水润洗灰白粉末，然后反复洗涤并移至250mL锥形瓶中，总量不超过50mL，加入甲基红指示剂2-3滴，滴加0.05mol/L的硫酸至溶液为红色，再从滴定管中放入5mL，记下此时总硫酸用量α。

(3)将溶液加热至微沸10min，即用0.05mol/L的氢氧化钠微量滴定中和过量硫酸至溶液中红色消失，显黄色为止，记下氢氧化钠的用量β。

(4)取代度按下列公式计算

取代度 $\mathrm{DS}=\frac{162B}{23-80B}$

$B=\frac{2(\mathrm{\α}\×c_{H_{2}S{O}_4}-1/2\mathrm{\β}\×c_{\mathrm{NaOH}})\×23}{W}$

其中：C_H2SO4：硫酸标准溶液的浓度；

C_NaOH：氢氧化钠标准溶液的浓度；

W：样品质量(g)；

0.162：失水葡萄糖单元的mmol质量；

80：失水葡萄糖单元中一个羟基被羧甲基取代后，失水葡萄糖单元的mmol质量的净增值。

实验测得：

α＝10.00mL；β＝34.60mL；c_NaOH＝0.0475mol.L^-1；

得到：B＝0.0672，

取代度DS＝0.618。

羧甲基玛咖多糖的表征

(1)羧甲基玛咖多糖的一般性质

羧甲基玛咖多糖为无色透明膜状固体，显脆性，极易溶于水，不溶与乙醇等有机溶剂。

表1玛咖多糖与羧甲基玛咖多糖物性

(2)羧甲基玛咖多糖的红外光谱

用美国Nicolet 370红外光谱仪测定实施例3中制备出的羧甲基玛咖多糖在400-4000cm^-1的红外光谱图，结果如图1所示，表明玛咖多糖的羟基间存在氢键，在3200-3600cm^-1出现一宽峰，而羧甲基玛咖多糖中，这组峰明显减弱，说明羟基被部分取代，羧甲基玛咖多糖中1600cm^-1处的-COO^-的非对称伸缩振动峰明显增强，1323cm^-1处出现-COO^-的对称伸缩振动峰，1413cm^-1处出现-CH₂-的变角振动，说明玛咖多糖中羟基已经被羧甲基部分取代，1021cm^-1处为多糖的糖环上C-O-C的特征吸收峰，860cm^-1、931cm^-1为多糖骨架呋喃环的特征峰，表明玛咖多糖羧甲基后糖的骨架未发生改变。

(3)羧甲基玛咖多糖的热稳定性

用CDR-4P差热分析仪测定了实施例3中制备出的羧甲基玛咖多糖氧化分解的DSC图谱，升温速率10℃/min，采用空气气氛，温度范围室温至600℃。结果如图2所示，羧甲基玛咖多糖在温度低于246℃时未有任何变化，只有温度升高至246℃才开始出现热分解放热，在246℃至345℃之间羧甲基玛咖多糖分步分解，羧甲基玛咖多糖在空气中稳定性很好。

Claims (8)

1.一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，该方法以水和乙醇为介质，从玛咖干粉中提取玛咖多糖，再将玛咖多糖在异丙醇介质中与氯乙酸和适当过量的氢氧化钠反应，对多糖中的羟基进行取代反应，再除去其中的蛋白和透析得到高水溶性的羧甲基玛咖多糖。

2.根据权利要求1所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的方法具体包括以下步骤：

(1)玛咖多糖的提取：取玛咖块根粉末置于容器中，加入蒸馏水溶解得到溶液，蒸馏水与玛咖块根粉末的质量比为(7-9)∶1，开启搅拌装置搅拌，再将溶液加热至80-95℃，搅拌回流1-3h，然后将溶液冷却至20-30℃，通过离心分离收集清液，将清液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，再将所得浓缩液冷却至20-30℃，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，加入的乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，静置8-15min，再经抽滤得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到玛咖多糖固体；

(2)玛咖多糖的羧甲基化：将上述玛咖多糖固体置于氢氧化钠溶液中，开启搅拌装置搅拌，然后向其中加入异丙醇，玛咖多糖与异丙醇的重量比为1∶(20-25)，控制温度为40-60℃，搅拌3-5h，得到反应液，将反应液冷却至20-30℃，再中和至pH值为6.5-7.5，再进行过滤，将所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，加入的乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，控制真空度为0.1-0.4MPa，经真空干燥得到粗羧甲基玛咖多糖固体；

(3)Sevage法去除羧甲基玛咖多糖中的蛋白：将上述粗羧甲基玛咖多糖固体置于容器中，用蒸馏水溶解，得到羧甲基玛咖多糖溶液，将氯仿和正丁醇按体积比(3-5)∶1配制成混合溶液，将混合溶液和羧甲基玛咖多糖溶液按体积比(1-1.5)∶1混合，然后在20-25℃电磁搅拌25-40min，得到含有凝胶的溶液，用离心分离机分离出凝胶，收集上层的清液，再向清液中加入重量百分浓度为95％的乙醇，乙醇与清液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，将沉淀进行冷冻干燥，得到膜状透明固体，将该固体放在真空干燥皿中，控制真空度为0.1-0.4MPa，经真空干燥得到除去蛋白质后的羧甲基玛咖多糖；

(4)羧甲基玛咖多糖的透析：用重量百分浓度为50-60％的乙醇将透析袋煮沸0.5-2h，再依次用重量百分浓度为50-60％的乙醇、碳酸氢钠溶液和EDTA溶液洗涤透析袋，最后用蒸馏水冲洗，将上述羧甲基玛咖多糖用蒸馏水溶解后，灌入透析袋中，将透析袋两端夹紧，置于装有蒸馏水的大烧杯中，利用磁力搅拌装置搅拌烧杯中的蒸馏水，每1-2天更换一次蒸馏水，透析8-12天，利用硝酸银溶液检测蒸馏水中不含氯化钠，透析结束，将透析袋内的透析液过滤后，所得滤液加热浓缩至体积为原来的1/4-1/2，然后向其中加入重量百分浓度为95％的乙醇，乙醇与浓缩液的体积比为(3-5)∶1，得到沉淀，经离心分离后，将沉淀进行干燥，即得到半透明的羧甲基玛咖多糖固体。

3.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中氢氧化钠溶液的浓度为0.8-1.2mol/L。

4.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的中和反应液所用溶剂为盐酸或冰醋酸。

5.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中的透析袋的截留分子量为14000。

6.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中的碳酸氢钠溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

7.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中的EDTA溶液的浓度为0.0008-0.0012mol/L。

8.根据权利要求2所述的一种羧甲基玛咖多糖的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中的硝酸银溶液的重量百分浓度为0.5-2％。

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