CN101864471A - 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法 - Google Patents

一种微生物发酵法生产透明质酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101864471A
CN101864471A CN201010301064A CN201010301064A CN101864471A CN 101864471 A CN101864471 A CN 101864471A CN 201010301064 A CN201010301064 A CN 201010301064A CN 201010301064 A CN201010301064 A CN 201010301064A CN 101864471 A CN101864471 A CN 101864471A
Authority
CN
China
Prior art keywords
liquid
hyaluronic acid
fermentation
production
sediment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201010301064A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101864471B (zh
Inventor
刘小兵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Kangting Biological Engineering Group Co Ltd
Original Assignee
TIANJIN KANGTING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN KANGTING BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical TIANJIN KANGTING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN2010103010647A priority Critical patent/CN101864471B/zh
Publication of CN101864471A publication Critical patent/CN101864471A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101864471B publication Critical patent/CN101864471B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

本发明涉及一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其步骤包括(1)摇瓶种子液、(2)种子罐种子液、(3)发酵培养得到发酵液，还包括以下步骤：(4)发酵液的萃取提纯：将发酵液用乙醇沉淀后，再次溶解得溶解液，经二次板框过滤至澄清，再进行三次过滤得澄清液，再用乙醇喷淋澄清液，得喷淋沉淀物；(5)干燥制粉：将上述步骤得到的全部沉淀物经无水乙醇脱水后，用乳化泵进行乳化制粉，得粉状沉淀，进一步用无水乙醇脱水后，50-60℃真空干燥后，即得透明质酸。本发明采用复合诱变技术筛选出荚膜大，透明质酸产率高，不产透明质酸酶的菌种的生产菌种，该菌种对发酵原料适应性强，透明质酸产品产率高，可达到6-7g/L，其回收率高达92％，其发酵时间仅为24-26小时，有效节省能耗。

Description

一种微生物发酵法生产透明质酸的方法
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，尤其是一种微生物发酵法生产透明质酸的方法。
背景技术
透明质酸分子具有良好的保湿性和黏弹性，因而广泛应用于各种化妆品、保健品眼科手术、关节注射、促进创伤愈合、调节血管壁的通透性、医用整形材料和保健品等方面，本世纪90年代中期以来，国际市场透明质酸销量逐渐上升，目前全球药用透明质酸总销售额为4.2-5.5亿美元，到2010年肯定会超过10亿美元。目前国内研究水平低下，生产能力仅为10吨，远远不能满足市场的需求。
目前国内大部分微生物发酵法生产透明质酸的企业采用的工艺发酵周期长，一般在36-40左右，产物分子量低，产品透光率差(一般在90％左右)，蛋白质含量高，其成品葡萄糖醛酸含量一般为35-38％，部分厂家透明质酸产品形态为纤维状，此种透明质酸溶解困难，一般要2天左右，且收率低于75％，为了满足国内不断扩大的需求市场，透明质酸的生产工艺亟待改善。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种发酵周期短、产品溶解性高、成本低的微生物发酵法生产透明质酸的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其步骤包括(1)摇瓶种子液、(2)种子罐种子液、(3)发酵培养得到发酵液，还包括以下步骤：
(4)发酵液的萃取提纯：将发酵液经板框过滤后得滤液，加入2-4倍的乙醇溶液沉淀，收集沉淀物，加入与滤液等体积的Nacl溶液搅拌溶解，进行二次板框过滤至澄清，得到二次澄清液，将二次澄清液经0.3-0.5微米的滤膜或滤板过滤后，加入乙酸调节pH至4.0-5.0，得到酸处理后的三次澄清液，再用乙醇溶液喷淋三次澄清液，再进行沉淀，得到沉淀物；
(5)干燥制粉：将上述步骤得到的全部沉淀物经无水乙醇脱水后，用乳化泵进行乳化制粉，得粉状沉淀，进一步用无水乙醇脱水后，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明质酸。
而且，所述板框过滤使用的硅藻土的型号为821号和616号。
而且，所述821号和616号硅藻土的重量比例为1∶1-5。
而且，所述乙醇溶液的浓度为：95％(v/v)。
而且，所述Nacl溶液的浓度为：0.1mol/L。
本发明的优点和积极效果是：
1、本发明采用复合诱变技术筛选出荚膜大，透明质酸产率高，不产透明质酸酶的菌种的生产菌种，该菌种对发酵原料适应性强，透明质酸产品产率高，可达到6-7g/L，其回收率高达92％，其发酵时间仅为24-26小时，有效节省能耗。
2、本发明采用独创的喷淋制粉技术，使产品结构形态更加细腻，使用性能更加优越，溶解性更好，其透光率达到99％。
3、本发明产品的提纯过程采用板框过滤和微孔滤板过滤技术，替代活性炭吸附和CPC吸附等复杂过程，使生产操作更加简便。
4、本发明采用酸化乙醇喷淋制粉技术，制成的产品为粉末状，比絮状易于溶解。
5、本发明能够将透明质酸开发成食品级、化妆品级以及医用级产品。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明使用的发酵菌种属于外来菌种，菌种分类是兽疫链球菌。
一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其工艺过程如下：
(1)摇瓶种子液：将斜面菌种接种于装有灭菌培养液400ml的1L锥形瓶中，37℃培养12-16小时，光镜观察菌体生长良好，无杂菌污染，即可接种于种子罐中；
(2)种子罐种子液：按摇瓶种子液的配方配制培养液60L，加入种子罐中，通蒸汽加热，121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，用火焰法接种，将摇瓶种子液接种于种子罐中，通气量60L/min，搅拌转速120-140/min，37℃培养12-16小时，光镜观察菌体生长良好，无杂菌污染，即可接种于发酵罐中；
(3)发酵培养：按种子罐的配方，把糖的用量提高到6％，配制培养液600L，加入1吨的发酵罐中，通蒸汽加热，121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，将种子液通过移种管道接种于发酵罐中，维持通气量400-600L/min，搅拌转速140-160/min，37℃培养24-26小时，发酵过程中，糖的浓度下降至0.5％以下，PH下降很慢或不再下降时，即为发酵终点，得到含有透明质酸发酵液；(以上3个步骤在马朝梅(广西柳州化学工业集团有限公司)，发酵法生产透明质酸工艺研究，广西工学院学报，2007，18(3)：8-12中有报道，属于现有技术，本发明申请就不再更加详细描述)，本发明申请还包括：
(4)发酵液的萃取提纯：将发酵液经板框过滤后得滤液，加入3倍的95％乙醇沉淀，收集沉淀物，加入与滤液等体积的0.1mol/L的Nacl溶液搅拌溶解，进行二次板框过滤至澄清，得到二次澄清液；将二次澄清液经0.45微米的滤膜或滤板过滤后，加入乙酸调节pH至4.0-5.0，得到酸处理后的三次澄清液，再用95％乙醇喷淋三次澄清液，再进行沉淀，得到沉淀物；
板框过滤的硅藻土的型号为821号和616号，将两种硅藻土按比例混合，得到后装入板框进行过滤，821号和616号硅藻土的重量比例为1∶1-5。
(5)干燥制粉：将得到的全部沉淀物经无水乙醇脱水后，用乳化泵进行乳化制粉，得粉状沉淀，进一步用无水乙醇脱水后，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明质酸。
经本发明得到的透明质酸产品产率高，可达到6-7g/L，其回收率为92％。
产品性能指标：
性状：白色粉末或细小颗粒；
气味：无臭无味；
pH(1g/L)：  6.5-7.0；
澄清度(1g/L)：透光率＞99％；
干燥失重：＜10％；
分子量：＞1.8×106；
蛋白质：＜0.05％；
葡萄糖醛酸：≥44％；
铅：＜20mg/kg；
砷：＜2mg/kg；
细菌总数：＜10个/克；
粪大肠菌群：不得检出；
金黄色葡萄球菌：不得检出；
绿脓杆菌：不得检出。

Claims (5)

1.一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其步骤包括(1)摇瓶种子液、(2)种子罐种子液、(3)发酵培养得到发酵液，其特征在于：还包括以下步骤：
(4)发酵液的萃取提纯：将发酵液经板框过滤后得滤液，加入2-4倍的乙醇溶液沉淀，收集沉淀物，加入与滤液等体积的Nacl溶液搅拌溶解，进行二次板框过滤至澄清，得到二次澄清液，将二次澄清液经0.3-0.5微米的滤膜或滤板过滤后，加入乙酸调节pH至4.0-5.0，得到酸处理后的三次澄清液，再用乙醇溶液喷淋三次澄清液，再进行沉淀，得到沉淀物；
(5)干燥制粉：将上述步骤得到的全部沉淀物经无水乙醇脱水后，用乳化泵进行乳化制粉，得粉状沉淀，进一步用无水乙醇脱水后，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明质酸。
2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其特征在于：所述板框过滤使用的硅藻土的型号为821号和616号。
3.根据权利要求2所述的一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其特征在于：所述821号和616号硅藻土的重量比例为1∶1-5。
4.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其特征在于：所述乙醇溶液的浓度为：95％(v/v)。
5.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法生产透明质酸的方法，其特征在于：所述Nacl溶液的浓度为：0.1mol/L。
CN2010103010647A 2010-02-02 2010-02-02 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法 Active CN101864471B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010103010647A CN101864471B (zh) 2010-02-02 2010-02-02 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010103010647A CN101864471B (zh) 2010-02-02 2010-02-02 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101864471A true CN101864471A (zh) 2010-10-20
CN101864471B CN101864471B (zh) 2012-08-29

Family

ID=42956392

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010103010647A Active CN101864471B (zh) 2010-02-02 2010-02-02 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101864471B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559801A (zh) * 2011-12-20 2012-07-11 宁夏大学 一种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法
CN105434468A (zh) * 2015-12-15 2016-03-30 天津市康婷生物工程有限公司 一种皮肤细胞损伤修复试剂的制备方法
CN106589164A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 天津市康婷生物工程有限公司 一种提高透明质酸产量的方法
CN106632728A (zh) * 2016-12-02 2017-05-10 天津市康婷生物工程有限公司 一种高分子量透明质酸产量的方法
CN107929209A (zh) * 2017-12-23 2018-04-20 卞国民 一种泥鳅面膜用的精华液

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5496726A (en) * 1993-04-16 1996-03-05 Lucky Limited Streptococcus zooepidemicus medium and process for preparing hyaluronic acid
CN101020724A (zh) * 2006-02-14 2007-08-22 镇江东方生物工程设备技术有限责任公司 一种低分子量透明质酸钠的制备方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559801A (zh) * 2011-12-20 2012-07-11 宁夏大学 一种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法
CN105434468A (zh) * 2015-12-15 2016-03-30 天津市康婷生物工程有限公司 一种皮肤细胞损伤修复试剂的制备方法
CN106589164A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 天津市康婷生物工程有限公司 一种提高透明质酸产量的方法
CN106632728A (zh) * 2016-12-02 2017-05-10 天津市康婷生物工程有限公司 一种高分子量透明质酸产量的方法
CN107929209A (zh) * 2017-12-23 2018-04-20 卞国民 一种泥鳅面膜用的精华液

Also Published As

Publication number Publication date
CN101864471B (zh) 2012-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105925653B (zh) 含有β-胡萝卜素的微胶囊及脂肪粉
CN101864471B (zh) 一种微生物发酵法生产透明质酸的方法
CN102757995A (zh) 一种利用三孢布拉氏霉菌发酵制备β-胡萝卜素的方法
Sun et al. High-efficiency production of Tremella aurantialba polysaccharide through basidiospore fermentation
CN106399422A (zh) 一种细菌纤维素的制备方法
CN102051395A (zh) 一种利用玉米秆制备细菌纤维素的方法
CN103173507A (zh) 一种利用细菌发酵生产透明质酸钠的生产工艺
CN104059169B (zh) 一种透明质酸的提纯工艺
CN102174448B (zh) 一种小白链霉菌及其在制备聚赖氨酸和聚二氨基丁酸中的应用
CN104059865B (zh) 一种兽疫链球菌及用其制备透明质酸的生产工艺
KR101970440B1 (ko) 박테리아 셀룰로오스 생산 균주 배양용 조성물
CN109504725A (zh) 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基
CN109619591A (zh) 一种佛手果胶低聚糖及其制备与应用
CN110938666B (zh) 一种微生物源壳聚糖的制备方法
CN108424941A (zh) 一种制备细菌纤维素膜的方法
CN104055686B (zh) 一种皮肤保湿剂
CN104726515A (zh) 一种富含岩藻糖的细菌胞外多糖的提取方法
CN104055702B (zh) 一种皮肤抗敏保湿剂
CN109576328A (zh) 一种龙须菜琼胶寡糖的制备方法
CN102816751B (zh) 一种高活性壳聚糖酶及其制备方法
CN102391317A (zh) 一种从褐藻寡糖发酵液中分离褐藻寡糖的方法
CN100390295C (zh) 一种微生物多糖及其生产方法和应用
CN110628840A (zh) 一种微生物发酵提取杨梅素的方法
CN105368912B (zh) 一种喷雾逆流法提取透明质酸钠的方法
CN104055692B (zh) 一种含有透明质酸的洁肤化妆品

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Liu Xiaobing

Inventor after: Li Aihong

Inventor after: Zhou Ying

Inventor before: Liu Xiaobing

COR Change of bibliographic data
CP03 Change of name, title or address

Address after: No.9 Saida South Road, Xiqing Economic and Technological Development Zone, Tianjin 300200

Patentee after: Tianjin Kangting Bioengineering Group Co., Ltd.

Address before: 300385 No. 5 Jianfu Road, Xiqing Economic Development Zone, Tianjin

Patentee before: Tianjin Kangting Biotechnology Co., Ltd.

CP03 Change of name, title or address