CN101849973A - 一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物及其药物制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,用下述方法制成:(1)将桦褐孔菌粉碎后过筛,加入乙醇水溶液浸泡后进行超声波提取,分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏;(2)将乙醇浸膏分散于蒸馏水中,然后用石油醚振荡萃取,将萃取液和水相萃余物分离;(3)将述水相萃余物用正丁醇振荡萃,分离出萃取液,合并浓缩并干燥,即获得三萜含量为70-300mg/g的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物。本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对高血糖小鼠具有明显的降低空腹血糖水平,明显缓解高血糖小鼠糖尿病症状的作用,且对主要脏器没有明显毒性。
Description
技术领域
本发明属于制药领域,特别是涉及一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物及其药物制剂。
背景技术
糖尿病是一种常见的有遗传倾向的内分泌代谢疾病,其病理生理改变是胰岛素分泌绝对或相对不足,引起糖、脂肪、蛋白质等代谢紊乱。目前,糖尿病已成为全世界许多国家的常见病和多发病,其死亡率已居肿瘤、心血管之后的第三位,全球糖尿病患者中90%以上患的是2型糖尿病,即非胰岛素依赖型糖尿病(NID.DM)。此外,糖尿病目前的流行趋势呈年轻化,WHO预测到2025年在发展中国家的糖尿病人群中只有26%超过65岁,而在发达国家这个数字为62%。中国由于人口基数大,目前绝对患病人数居世界首位,其中绝大部分为2型糖尿病。根据WHO预测,1995-2025年间,中国糖尿病增长幅度将达68%,增长率居全球首位,届时我国糖尿病患者绝对人数将突破5000万。近年来随着中药现代化与国际化进程的不断推进,从中药中提取出其有效成分或单体,将其开发成抗糖尿病药物成为了研究热点。
桦褐孔菌是一种药用真菌,主要分布在北纬45°-50°的寒冷地区,含有以多糖、三萜类、甾体类和多酚类化合物为主的多种成分,具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖、抗炎、止痛、抗血小板凝集、抗病毒、增强机体免疫力等多种药理活性。从16世纪开始,俄罗斯、波兰、芬兰等国的居民就已经开始食用,并且用于防治胃肠道、糖尿病、癌症等多种疾病。1955年莫斯科医科院宣布桦褐孔菌为抗癌物质,政府批准桦褐孔菌可用于医药品开发。美国十分关注桦褐孔菌的免疫增强效果,并将其制成健康辅助食品。日本的研究人员高度评价这种民间的药物,把桦褐孔菌菌核作为肝癌,艾滋病和0-157大肠杆菌中毒的治疗剂,并申请多项有关桦褐孔菌的专利,认为桦褐孔菌是一种“万能药”。但到目前为止尚未发现有关采用超声波方法从桦褐孔菌中获取总三萜类化合物并开发降血糖药物制剂的诸报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种作用明确、毒副作用小的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物。
本发明的第二个目的是提供一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物的药物制剂。
本发明的技术方案概述如下:
一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,用下述方法制成:
(1)将桦褐孔菌粉碎后过筛,按1g∶8-12mL的比例加入体积浓度为70%-95%的乙醇水溶液浸泡1-3小时后进行超声波提取,提取的次数为2-4次,每次30-120分钟,合并提取液,分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏;
(2)将所述乙醇浸膏分散于蒸馏水中,然后用石油醚振荡萃取3-5次,每次2-4小时,将萃取液和水相萃余物分离;
(3)将所述水相萃余物用正丁醇振荡萃取3-5次,每次2-4小时,分离出萃取液,合并浓缩并干燥,即获得三萜含量为70-300mg/g的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物。
所述超声波的功率为100-150W。
所述的步骤(2)中乙醇浸膏与蒸馏水的用量比为1g∶20-50mL。
所述的步骤(2)中石油醚的用量为乙醇浸膏重量的10-30倍。
所述步骤(3)中正丁醇的用量为乙醇浸膏重量的10-30倍。
所述制剂由25-70重量份的所述具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物和30-75重量份的药用辅料制成。
所述药物制剂的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂、悬浮剂或栓剂。
本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对高血糖小鼠具有明显的降低空腹血糖水平,明显缓解高血糖小鼠糖尿病症状的作用,且对主要脏器没有明显毒性。
附图说明
图1为具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物的薄层色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
(1)将100g桦褐孔菌粉碎后过30目筛,用800mL体积浓度为70%浓度的乙醇水溶液浸泡2小时,然后超声波提取2次,超声波的功率为150W,每次30min,合并提取液,离心分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏6.462g;
(2)将乙醇浸膏分散于20重量倍于乙醇浸膏的蒸馏水中,然后用10重量倍于乙醇浸膏的石油醚振荡萃取3次每次2小时,将萃取液和水相萃余物分离;
(3)将上述水相萃余物用10重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振荡萃取3次,每次2小时,分离出萃取液,然后将萃取液合并浓缩并干燥,即获得4.294g具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,对其进行含量测定,三萜含量为100.270mg/g。
见图1(展开条件:石油醚∶丙酮=4∶1其中,点a为具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,点b为桦褐孔菌醇标准品)
实施例2
(1)将100g桦褐孔菌粉碎后过30目筛,用1000mL体积浓度为80%浓度的乙醇水溶液浸泡3小时,然后超声波提取3次,超声波的功率为100W,每次2小时,合并提取液,抽滤分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏10.977g;
(2)将乙醇浸膏分散于30重量倍于乙醇浸膏的蒸馏水中,然后用20重量倍于乙醇浸膏的石油醚振荡萃取4次,每次3小时,将萃取液和水相萃余物分离;
(3)将上述水相萃余物用20重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振荡萃取4次,每次3小时,然后将萃取液合并浓缩并干燥,即可获得6.304g具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,三萜含量为115.736mg/g。
实施例3
(1)将100g桦褐孔菌粉碎后过30目筛,用1200mL体积浓度为95%浓度的乙醇水溶液浸泡1小时,然后超声波提取4次,超声波的功率为100W,每次1小时,合并提取液,离心分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏4.391g;
(2)将上述乙醇浸膏分散于50重量倍于乙醇浸膏的蒸馏水中,然后用30重量倍于乙醇浸膏的石油醚振荡萃取5次,每次4小时,将萃取液和水相萃余物分离;
(3)将上述水相萃余物用30重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振荡萃取5次,每次4小时,然后将萃取液合并浓缩并干燥,即可获得3.840g具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,三萜含量为75.000mg/g。
各实施例的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,遇醋酐-浓硫酸反应,氯仿-浓硫酸反应及三氯醋酸反应呈阳性。薄层色谱分析,该提取物中含有三萜类化合物桦褐孔菌醇,其含量经HPLC分析为2-50mg/mL。
实施例4
具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对高血糖小鼠的降血糖作用
通过腹腔注射四氧嘧啶的方式诱导小鼠产生糖尿病症状。注射四氧嘧啶水合物72h后,用试剂盒测量小鼠的血糖值(血液来源于小鼠尾静脉),将血糖值高于11.1mmol/L的小鼠随机分为4组,每组8只。第一组为糖尿病小鼠对照;第二组为格列苯脲为阳性对照药组;第三组为本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,每天为小鼠灌饲具有降血糖降血脂作用的桦褐孔菌总三萜提取物。第四组为正常小鼠对照组,每天正常饮食。待测样品均与0.4%的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液混悬后,通过灌胃针将样品溶液强行灌入小鼠胃内,第一组和第四组每天灌饲CMC-Na水溶液。每天记录饮食、饮水及体重。灌胃20天之后,从小鼠眼球取血直至小鼠死亡,然后立即将小鼠解剖,迅速取出肝脏、胸腺和脾脏并称重。小鼠血液离心获得血清,测定小鼠血清中血糖含量,总胆固醇含量,甘油三酯含量,高密度脂蛋白含量及小鼠肝糖原含量。
结果显示,四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠多饮、多食、生长缓慢,脾指数及胸腺指数比正常组小鼠低,而具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物可以有效的改善糖尿病小鼠多饮,多食的症状,体重、脾指数及胸腺指数较糖尿病模型组均有所增加。
如表1所示,腹腔注射四氧嘧啶致使糖尿病小鼠的血糖水平增大了2倍以上。灌胃具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物20天后,空腹血糖水平有了显著地降低(p<0.01),空腹血糖值从最初的10.26mmol/L降低到3.96mmol/L。具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物小鼠的肝糖原含量比糖尿病模型组高,说明具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物可促进血糖向肝糖元的转化。
表1具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对糖尿病小鼠血糖水平和肝糖原含量的影响
##:p<0.01与糖尿病模型组比较;**:p<0.01与正常对照组比较
测定血脂水平的结果显示,糖尿病模型组小鼠的总胆固醇含量、甘油三酯含量比正常对照组高,而高密度脂蛋白含量比正常对照组低。灌胃具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物后,糖尿病小鼠的总胆固醇含量、甘油三酯含量有所降低,高密度脂蛋白含量明显增高(p<0.05),从1.02mmol/L增至1.77mmol/L。这些数据表明,具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对糖尿病小鼠具有良好的降血脂作用。
表2具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物对糖尿病小鼠血脂水平的影响
#:p<0.05,##:p<0.01与糖尿病模型组比较;*:p<0.05,**:p<0.01与正常对照组比较
实施例5
颗粒剂:(以重量百分比计)
本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物 25%
玉米淀粉 65%
蔗糖 10%
将上述原料加入适量的体积浓度为70%的乙醇水溶液润湿而制成软材,过14目尼龙筛制粒,湿颗粒于60℃干燥,干颗粒过14目筛整粒,再过4号筛筛去细粉,然后分装,密封,包装即得成品。
实施例6
胶囊剂:(以重量百分比计)
本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物 70%
玉米淀粉 5%
糊精 10%
微晶纤维素 10
微粉硅胶 5%
将上述原料加入适量的体积浓度为70%的乙醇水溶液润湿而制成软材,过20目尼龙筛制粒,湿颗粒于60℃干燥,干颗粒过14目筛整粒,所得颗粒灌入胶囊,制成成品。
实施例7
片剂:(以重量百分比计)
本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物 32%
玉米淀粉 32%
糊精 25%
蔗糖 5%
滑石粉 5%
硬脂酸镁 1%
取本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物、淀粉、糊精、蔗糖,混匀制成颗粒。60℃以下干燥,加入5%滑石粉,1%硬脂酸镁,混匀,压制成片,包糖衣或薄膜衣,既得成品。
散剂、滴丸剂、悬浮剂或栓剂的制备是取本发明的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物加上适当的药学可接受的辅料按常规的方法制成。
Claims (7)
1.一种具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,其特征是用下述方法制成:
(1)将桦褐孔菌粉碎后过筛,按1g∶8-12mL的比例加入体积浓度为70%-95%的乙醇水溶液浸泡1-3小时后进行超声波提取,提取的次数为2-4次,每次30-120分钟,合并提取液,分离上清液,并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏;
(2)将所述乙醇浸膏分散于蒸馏水中,然后用石油醚振荡萃取3-5次,每次2-4小时,将萃取液和水相萃余物分离;
(3)将所述水相萃余物用正丁醇振荡萃取3-5次,每次2-4小时,分离出萃取液,合并浓缩并干燥,即获得三萜含量为70-300mg/g的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物。
2.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,其特征在于所述超声波的功率为100-150W。
3.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,其特征在于所述的步骤(2)中乙醇浸膏与蒸馏水的用量比为1g∶20-50mL。
4.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,其特征在于所述的步骤(2)中石油醚的用量为乙醇浸膏重量的10-30倍。
5.根据权利要求1所述的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物,其特征在于所述步骤(3)中正丁醇的用量为乙醇浸膏重量的10-30倍。
6.权利要求1-5之一的具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物的药物制剂,其特征在于所述制剂由25-70重量份的所述具有降血糖作用的桦褐孔菌总三萜提取物和30-75重量份的药用辅料制成。
7.根据权利要求6所述的具有降血糖降血脂作用的桦褐孔菌总三萜提取物的药物制剂,其特征在于所述药物制剂的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂、悬浮剂或栓剂。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20101006 |