CN101837004B - 薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用，可以显著抑制药物(四氯化碳或扑热息痛)、酒精引起的转氨酶和乳酸脱氢酶活性的增加，降低肝脏指数，发挥其肝保护作用；本发明亦可升高SOD活力和降低MDA含量，增加GSH的含量，抑制药物(四氯化碳或扑热息痛)诱导的肝脏脂质过氧化；同时本发明还可降低TG和TC含量，抑制酒精造成的肝脏脂肪变性。可以薯蓣皂苷为原料，根据药剂学相关要求和临床需要制成各种剂型应用于临床中，如：片剂、胶囊剂、注射剂、口服液体制剂、颗粒剂等，具有安全(无毒无副作用)、简便、经济等优点。

Description

薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用

技术领域：

本发明涉及中药有效成分的新用途，尤其是从穿山薯蓣中获得的薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用。

背景技术：

肝脏是人体最重要的新陈代谢器官，肝病患者由于其肝脏长期受到病毒侵害而导致肝功能损坏，从而引起一系列新陈代谢障碍，肝硬化和肝癌都是肝病发展的必然结果，肝脏疾病已成为危害人类三大疾病之一，不仅给患者造成了极大痛苦，亦给家庭及社会带来沉重负担。

薯蓣皂苷(Dioscin)是一种天然皂苷类化合物，存在于薯蓣科植物穿山龙(Dioscorea nipponica Makino)、盾叶薯蓣(D.zingiberensis C.H.Wright)和福州薯蓣(D.futschauensis Uline)等植物的根茎中。目前，关于薯蓣皂苷的相关报道有：薯蓣皂苷具有止咳、祛痰、脱敏、消炎作用，可用于气管炎的治疗；具有杀昆虫和抗须癣毛菌等真菌的作用；可作为合成甾体激素及避孕药的原料；具有抗氧化、抗肿瘤《蔡晶等，薯蓣皂苷对HeLa细胞的凋亡诱导作用及其机制研究.中草药，2001，32(增刊)：94-97.》生物活性；具有显著的心血管活性，已作为地奥心血康、维奥欣等降脂药物的主要成分。但迄今为止，未见薯蓣皂苷在肝损伤保护及在制备肝保护药物制剂中应用的相关报道。

发明内容：

本发明是发现了薯蓣皂苷对肝损伤有保护作用，提供一种薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用。

本发明的技术解决方案是：

一种薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用。

在制备保护药物性肝损伤、酒精肝损伤或肝纤维化损伤药物中的应用。

在制备保护四氯化碳或扑热息痛所致肝损伤药物中的应用。

本发明可以显著抑制药物(四氯化碳或扑热息痛)、酒精引起的转氨酶和乳酸脱氢酶活性的增加，降低肝脏指数，发挥其肝保护作用；本发明亦可升高过氧化物岐化酶(SOD)活力和降低丙二醇(MDA)含量，增加GSH的含量，抑制药物(四氯化碳或扑热息痛)诱导的肝脏脂质过氧化；同时本发明还可降低总胆固醇(TG)和甘油三酯(TC)含量，抑制酒精造成的肝脏脂肪变性。可以以薯蓣皂苷为原料，根据药剂学相关要求和临床需要制成各种剂型应用于临床中，如：片剂、胶囊剂、注射剂、口服液体制剂、颗粒剂等，具有安全(无毒无副作用)、简便、经济等优点。

附图说明：

图1：本发明实施例1保护小鼠四氯化碳急性肝损伤的组织病理切片图。

图2：本发明实施例2保护小鼠扑热息痛急性肝损伤的组织病理切片图。

图3：本发明实施例3保护小鼠酒精急性肝损伤的组织病理切片图。

图4：本发明实施例4保护大鼠四氯化碳慢性肝纤维化损伤的组织病理切片图。

实施例1：薯蓣皂苷对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

1.1以薯蓣皂苷为主药，根据药剂学相关要求和临床需要与辅料制成各种剂型。

1.1.1薯蓣皂苷片剂的制备

取薯蓣皂苷100g、淀粉125g、乳糖175g及微晶纤维素100g为原料。

将上述主药及辅料分别过80目筛，充分混合均匀，采用5％的聚维酮K30(PVP K30)乙醇溶液为粘合剂，用20目筛网制粒，40～60℃干燥，18目筛网整粒，加入适量润滑剂压片，每片0.5g。

1.1.2薯蓣皂苷胶囊剂的制备

取薯蓣皂苷100g及淀粉300g。

将上述主药及辅料分别过80目筛，充分混合均匀，采用5％的聚维酮K30(PVP K30)乙醇溶液为粘合剂，用20目筛网制粒，40～60℃干燥，分装于0号胶囊中，每粒0.4g。

1.1.3薯蓣皂苷滴丸剂的制备

取薯蓣皂苷100g及聚乙二醇(4000)300g。

将聚乙二醇4000在80℃水浴中熔融，再加入薯蓣皂苷无水乙醇液，充分混匀，待无水乙醇完全挥发，药液放入保温储液罐中，80℃保温下将熔化的混合物滴入到冷凝的液体石蜡中，液滴冷凝固化成丸，取出沥干后，滤纸吸去表面的液体石蜡即得薯蓣皂苷滴丸，共制备1000粒。

1.1.4薯蓣皂苷颗粒剂的制备

取薯蓣皂苷100g、淀粉1900g及蔗糖粉500g。

将主药和辅料分别过80目筛，充分混合均匀，加入5％的聚维酮K30(PVPK30)乙醇溶液，拌合成软材，挤压过筛(14目)制颗粒，40～60℃干燥、整粒，分装于塑料袋中，密封即得。

1.1.5薯蓣皂苷注射剂的制备

取薯蓣皂苷10g、丙二醇50mL、苯甲醇20mL及注射用水。

将上述薯蓣皂苷、丙二醇及适量注射用水搅拌、加热，使其完全溶解，再加入苯甲醇，补充注射用水至1000mL，滤过至澄明、灌封、灭菌即得。采用肌内注射的方式给药。

1.2建立实验模型

将60只雄性昆明小鼠(20±2g)随机分成6组(空白组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性组)，每组10只。空白组和模型组小鼠均灌胃给予CMC-Na溶液(0.5％，w/v)；将薯蓣皂苷口服药剂混悬于CMC-Na溶液(0.5％，w/v)中，低、中、高剂量小鼠分别灌胃给予25、50、100mg/kg薯蓣皂苷；阳性组小鼠灌胃给予200mg/kg水飞蓟素。每天灌胃一次，连续给药5天。第五天给药2h后，空白组小鼠腹腔注射植物油，其它三组小鼠腹腔注射CCl₄植物油溶液(0.3％，v/v)。注射剂量均为10mL/kg。禁食不禁水。24h后眼眶取血，处死小鼠，收集血清和肝脏。

1.3肝保护指标测定

称重肝脏和脾脏重量，根据公式肝脏指数＝(肝重/体重)×100％计算肝脏指数。测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)水平，以及肝脏中丙二醛(MDA)、过氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。以上均采用试剂盒法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

表1 薯蓣皂苷对CCl₄诱导肝损伤的保护作用

^#与空白组相比，p＜0.05；^*与模型组相比，p＜0.05.

表2 薯蓣皂苷对CCl₄诱导肝脂质过氧化的抑制作用

^#与空白组相比，p＜0.05；^*与模型组相比，p＜0.05.

结果显示，薯蓣皂苷可以显著抑制CCl₄引起的转氨酶和乳酸脱氢酶活性的增加，降低肝脏指数，发挥其肝保护作用。同时薯蓣皂苷亦可升高SOD活力和降低MDA含量，并增加GSH的含量，抑制CCl₄诱导的肝脏脂质过氧化。

1.4肝脏组织病理学

取肝脏组织进行H&E染色，于100倍光镜下观察。如图1所示：正常组肝脏组织结构完整，细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝小叶轮廓清晰，肝细胞呈多边形，细胞分界清，核圆而清晰，位于细胞中央，细胞质丰富；模型组可见肝细胞索排列紊乱，失去正常结构，大部分肝细胞明显肿胀，胞核浓缩，胞质空网状，似气球样变，部分肝细胞坏死，个别区域仅见残留的坏死肝细胞碎片；高剂量组和阳性组肝小叶结构完整、清晰，少量细胞点状坏死，少量淋巴细胞浸润。

实施例2：薯蓣皂苷对扑热息痛诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

2.1按照实施例1的方式，以薯蓣皂苷为主药，根据药剂学相关要求和临床需要与辅料制成各种剂型。

2.2建立实验模型

将60只雄性昆明小鼠(20±2g)随机分成6组(空白组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性组)，每组10只。空白组和模型组小鼠均灌胃给予CMC-Na溶液(0.5％，w/v)；将薯蓣皂苷口服剂混悬于CMC-Na溶液(0.5％，w/v)中，低、中、高剂量组分别灌胃给予25、50、100mg/kg薯蓣皂苷；阳性组小鼠灌胃给予200mg/kg水飞蓟素。每天灌胃一次，连续给药5天。第五天给药2h后，采用350mg/kg扑热息痛腹腔注射造成小鼠肝损伤模型，16h后处死小鼠，收集血清和肝脏。

2.3肝保护指标测定

称重肝脏和脾脏重量，根据公式肝脏指数＝(肝重/体重)×100％计算肝脏指数。测定小鼠血清转氨酶ALT、AST和LDH水平，以及肝脏中MDA、SOD和GSH的含量。以上均采用试剂盒法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

表3 薯蓣皂苷对扑热息痛诱导肝损伤的保护作用

^#与空白组相比，p＜0.05；^*与模型组相比，p＜0.05.

表4 薯蓣皂苷对扑热息痛诱导肝脂质过氧化的抑制作用

^#与空白组相比，p＜0.05；^*与模型组相比，p＜0.05.

结果显示，薯蓣皂苷可以显著抑制扑热息痛引起的转氨酶和乳酸脱氢酶活性的增加，降低肝脏指数，发挥其肝保护作用。同时薯蓣皂苷亦可升高SOD活力和降低MDA含量，并增加GSH的含量，抑制扑热息痛诱导的肝脏脂质过氧化。

2.4肝脏组织病理学

取肝脏组织进行H&E染色，于100倍光镜下观察。如图2所示：正常组肝脏组织结构完整，细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝小叶轮廓清晰，肝细胞呈多边形，细胞分界清，核圆而清晰，位于细胞中央，细胞质丰富；模型组肝细胞带状坏死，肝细胞呈弥漫性变化；高剂量组和阳性组肝小叶结构完整、清晰，少量细胞点状坏死，少量淋巴细胞浸润。

实施例3：薯蓣皂苷对大鼠慢性酒精性肝的保护作用

3.1按照实施例1的方式，以薯蓣皂苷为主药，根据药剂学相关要求和临床需要与辅料制成各种剂型。

3.2建立实验模型

SD大鼠60只，雄性，体重(180±20g)，随机分成6组(空白组、模型组、低剂量组、中低剂量、高剂量组和阳性组)，每组10只。空白组：灌服生理盐水，每日一次；其他各组：在1～3天给予5％的酒精随意饮用，4～7天给予10％的酒精随意饮用。第二周开始给予20％的酒精灌服(2mL/100g体重，i.g.)，每日一次。第三周30％酒精灌服(2mL/100g体重，i.g.)，每日一次。第四周～第七周40％酒精灌服(2mL/100g体重，i.g.)，每日一次。将薯蓣皂苷混悬于CMC-Na溶液(0.5％，w/v)中，低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予25、50和100mg/kg薯蓣皂苷；阳性组大鼠灌胃给予200mg/kg水飞蓟素。各组大鼠连续灌胃7周。所有大鼠于第6周末禁食24h，股静脉取血，制备血清。

3.3薯蓣皂苷肝保护指标测定

检测甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase，AST)。以上均采用试剂盒法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

表5 薯蓣皂苷对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用

^#与空白组相比，p＜0.05；^*与模型组相比，p＜0.05.

结果显示，薯蓣皂苷可以显著抑制酒精引起的转氨酶活性的增加，同时降低TG和TC含量，抑制酒精造成的肝脏脂肪变性。

3.4肝脏组织病理学

取肝最大叶同一部位组织，10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下行组织形态学观察。如图3所示：正常组肝脏组织结构完整，细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝小叶轮廓清晰，肝细胞呈多边形，细胞分界清，核圆而清晰，位于细胞中央，细胞质丰富；模型组肝窦扩张，肝细胞肿胀，细胞质疏松，细胞质内可见大小不等、数量不一的圆形脂肪空泡，散在肝细胞嗜酸性变，小叶中央静脉周围和汇管区有少量炎细胞浸润；高剂量组和阳性组细胞索排列较整齐，肝细胞呈现多边形，细胞分界清，核圆而清晰，位于细胞中央，细胞质未见脂肪滴。

实施例4：薯蓣皂苷对四氯化碳大鼠慢性肝纤维化损伤的保护作用

4.1按照实施例1的方式，以薯蓣皂苷为主药，根据药剂学相关要求和临床需要与辅料制成各种剂型。

4.2建立实验模型

SD大鼠，雄性，体重180±20g，60只，随机分成6组(空白组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性组)，每组10只。空白组和模型组每天灌胃给予0.5％CMC-Na(1mL/100g)；低剂量、中剂量组和高剂量组每天灌胃给予20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg薯蓣皂苷；阳性组每天灌胃给予秋水仙素(0.1mg/kg)。空白组和单纯给药组从造模开始每周腹腔注射豆油(1ml/kg)两次；其他组每周腹腔注射50％CCl₄(CCl₄∶豆油＝1∶1，1mL/kg)两次。造模开始后，每周称一次大鼠的体重，并根据体重调整给药量。实验持续7周，第7周造模结束后，大鼠禁食过夜，24小时后，通过眼后静脉丛取血，3000r，4℃，离心15分钟得血清，用于测定血清中的AST和ALT。取血后将老鼠处死，取出肝脏，一部分放入10％甲醛中固定，用于病理学检测(H&E)。

4.3薯蓣皂苷肝保护指标测定

检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)。以上均采用试剂盒法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

表6 薯蓣皂苷对大鼠慢性肝纤维化损伤的保护作用

^#与空白组相比，p＜0.01；^*与模型组相比，p＜0.05，^**与模型组相比，p＜0.01.

结果显示，通过各组之间的比较，可以看出模型组的值比空白组的值高，表明造模成功，肝脏存在损伤，经文献报道，当AST/ALT＞1时，肝脏纤维化，再用低、中、高剂量组与模型组进行比较，可以看出中剂量效果比高剂量效果可显著降低两种转氨酶，高剂量组只能降低AST水平，证明药物对肝纤维化有预防、治疗作用。

4.4肝脏组织病理学

取肝最大叶同一部位组织，10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下行组织形态学观察。如图4所示：正常组肝结构清晰，肝细胞多为单核；模型组大鼠肝细胞肿胀，胞浆疏松并出现颗粒，门区有嗜酸性细胞浸润，中央静脉充血，肝组织汇管区和小叶内有明显碎屑坏死，部分桥接坏死，有假小叶形成。中剂量组可改善肝细胞损伤破坏，有明显减弱损伤作用。

Claims (1)

1.一种薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用，其特征是在制备保护四氯化碳或扑热息痛所致肝损伤、酒精肝损伤或肝纤维化损伤药物中的应用。

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