CN101830868B - 法尼基环六烷醇类衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及法尼基环六烷醇类衍生物及其应用，属微生物农药技术领域。本发明的生产菌株Talaromyces sp.YM1-3已于2009年11月05日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC NO.3400。本发明由YM1-3经常规发酵、提取分离获得两个新的结构相似的法尼基环六烷醇类代谢产物，命名为法尼基环六烷醇D(oligosporol D)和法尼基环六烷醇E(oligosporol E)。本发明的法尼基环六烷醇类代谢产物在液体浸泡法的抗线虫活性测试中显示出杀线虫活性，均能有效毒杀线虫。本发明的法尼基环六烷醇类衍生物具有对环境无污染、成本低、毒杀线虫效果佳的优点，能作为制备杀线虫药剂的应用。

Description

法尼基环六烷醇类衍生物及其应用

技术领域：

本发明涉及法尼基环六烷醇类衍生物及其应用，属微生物农药技术领域。 

背景技术：

利用微生物本身及其代谢产物来防治农业害虫近年来在病虫害防治中的地位已越来越重要。由于微生物杀虫剂，对人畜安全，毒性小，环境污染小，低残留，对有害靶标特异性强，不易杀伤天敌和有益生物，有利于生态平衡。生产原料和有效成分属天然产物，能保证自然生产的可持续发展，因此，近年来，微生物杀虫剂的品种在不断增加，应用范围在不断扩大，微生物杀虫剂的研究开发和应用已进人了一个新的历史时期。 

由于微生物代谢物可以方便地解决菌株活体应用时的种种缺点，为害虫防治提供更为广泛的选择，随着生物技术的发展，微生物代谢产物在害虫防治上的应用研究引起人们越来越多的重视。 

发明内容：

本发明的目的旨在提供一种具有杀线虫活性的法尼基环六烷醇类衍生物及其应用。 

本发明从具有毒杀线虫功能的真菌中筛选出高毒力Talaromyces sp.YM1-3，从YM1-3菌株的次生代谢产物中提取高毒力杀线虫化合物，为研究开发生物杀线虫制剂和研究开发仿生生物农药奠定基础。 

本发明是这样实现的： 

本发明人在前期研究中，筛选获得了具有良好杀线虫功能的真菌Talaromyces sp.YM1-3，YM1-3菌株已于2009年11月05日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC NO.3400。 

本发明将YM1-3菌株采用YEP培养基，用常规发酵方法培养，将发酵液低压浓缩后，用乙酸乙酯萃取，然后将有机部分合并浓缩后，再通过硅胶(氯仿/甲醇 洗脱)和Sephedex-LH20凝胶柱(甲醇洗脱)反复层析，即得到本发明的无色的法尼基环六烷醇类化合物，该类化合物是经核磁共振波谱，质谱，红外光谱紫外和旋光光谱确定为两个新的结构相似的法尼基环六烷醇类代谢产物，命名为法尼基环六烷醇D(oligosporol D)和法尼基环六烷醇E(oligosporol E)。该类代谢产物的结构如下(以下分别简称为化合物1和2，上部分为化合物1的结构式，下部分为化合物2的结构式)： 

本发明所述的从少孢节从孢中分离得到的法尼基环六烷醇类次生代谢产物的物理外观分别为无色油状，与硫酸显色呈棕色；黄色油状，与硫酸显色呈黄绿色变灰色；无色油状，与硫酸显色呈黄色变灰色。分子式都为C₂₂H₃₄O₆。核磁谱特征见表1，其溶解溶剂为CD₃COCD₃，400MHz，δ：ppm. 

法尼基环六烷醇D(oligosporol D)(1)：Colorless oil；[α]-12.29°(c 0.1，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)203(4.14)；IR(KBr)vmax 3424，2966，2922，2856，1657，1638，1631，1460，1451，1442，1433，1383，1271，1172，1109，1087，1019，948，740，670，580，552cm-1；¹H NMR and ¹³C NMR seeTable 1；Negative ESI-MS m/z 429[M+Cl]^-；Negative HRESI-MS m/z 429.2044[M+Cl]^-(calculated for C₂₂H₃₄O₆Cl，429.2043). 

法尼基环六烷醇E(oligosporol E)(2)：Colorless oil；[α]+19.36°(c 0.3，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)205.2(3.90)；IR(KBr)vmax 3423， 2967，2924，2856，1657，1639，1630，1441，1384，1261，1167，1104，1076，1021，950，896cm-1；¹H NMR and ¹³C NMR see Table 1；Negative ESI-MS m/z429[M+Cl]^-；Negative HRESI-MS m/z 429.2041[M+Cl]^-，calculated 429.2047for C₂₂H₃₄O₆Cl. 

表1.化合物1和2的¹H and ¹³C NMR数据^a

^aData were measured in acetone-d₆ at 400MHz for ¹H and 100MHz for ¹³C with reference to thesolvent signals，δin ppm and J in Hz. 

实验表明：本发明的活性化合物在液体浸泡法的抗线虫活性测试中，在处理时间为48小时时，化合物对Panagrellus redivevus线虫的LC₅₀(半致死率)分别为110.2μg·ml^-1和80.6μg·ml^-1，表现了杀线虫活性。 

因此，该类化合物能作为制备杀线虫药剂的应用。 

本发明具有对环境无污染、成本低、毒杀线虫效果佳的优点。 

具体实施方式：

实施例1： 

化合物1和2的分离制备： 

1.真菌YM1-3的种子培养： 

YEP培养基：Yeast extract(酵母膏)1g，Multi-peptone(多蛋白胨)2g，Beef extract(牛肉膏)1g，Glucose(葡萄糖)10g，Agar(琼脂)20g，Distilled water(蒸馏水)1L，自然PH，灭菌后倒成平板。将YM1-3菌块接种到平板上，38℃培养5～7天。 

2.真菌YM1-3的液体发酵培养： 

YEP培养基：YEP培养基：Yeast extract(酵母膏)1g，Multi-peptone(多蛋白胨)2g，Beef extract(牛肉膏)1g，Glucose(葡萄糖)10g，Distilled water(蒸馏水)1L，自然PH。将平板菌种接种到500ml三角瓶中(每瓶装250ml)液体培养基，在38℃下摇床培养，转速180rpm，培养时间12天。 

3.将发酵液过滤，滤液即发酵原液减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取，然后将乙酸乙酯部萃取物合并后进行硅胶色谱分离，以甲醇/氯仿＝0-25％为洗脱剂梯度洗脱。 

4.收集2％~10％的甲醇/氯仿洗脱液，减压浓缩。将浓缩液再进行反复硅胶色谱分离 

5.收集TLC板上硫酸显色为绿色的洗脱液浓缩，经甲醇Sephedex-LH 20，丙酮Sephedex-LH 20反复分离后得到化合物1和2。 

实施例2： 

用液体浸入法检测本发明化合物的单体抗线虫活性的实验： 

1.试验用药剂 

将化合物1和2溶于10μl丙酮，再加入10％浓度的吐温-20溶液，分别制备400μg·ml^-1、200μg·ml^-1、100μg·ml^-1、50μg·ml^-1和25μg·ml^-1浓度的供试液，在该溶液中，丙酮的终浓度不超过3％，吐温-20的终浓度不超过0.5％。另 将相同浓度的丙酮溶解于含有0.5％(v/v)的吐温-20水溶液作为对照。 

2.线虫的培养与制备 

将P.redivevus线虫接种于燕麦培养基上(燕麦20g，水80ml)，于28℃培养5～7天。用贝尔曼漏斗法洗出所需线虫，经1％次氯酸钠消毒2分钟后，用无菌蒸馏水将线虫稀释为6000/ml作为线虫悬液。 

3.试验方法 

将供试液3ml放于6cm平板中，加入活线虫18000条，置于28℃恒温培养箱，分别于6，12，18，24，36小时和48小时在光学显微镜下检查计算线虫死亡率。并在双目显微镜下观察线虫体壁消解的情况。 

鉴定死亡的方法：死亡线虫僵直或呈“J”型，活线虫则卷曲扭动。用针尖拨动静止线虫身体各部，线虫仍未做出任何反应则鉴定为死亡。 

死亡率＝(死亡线虫数/(死亡线虫数+活线虫数))×100％ 

校正死亡率＝供试样品死亡率-对照组死亡率 

以未加样品的测试溶液为对照，整个实验重复三次，取三次平均值，计算出平均死亡率和校正死亡率。 

4.实验结果 

表1供试化合物对P.redivevus线虫的毒杀性结果 

结果表明：本发明的化合物1和2对松材线虫都有较好的毒杀作用，能用于制备农药杀线剂用。化合物1和2对P.redivevus线虫的LC₅₀(半致死率)在48小时分别为100μg·ml^-1和80.6μg·ml^-1，对腐生线虫具有良好毒杀活性。 

Claims (2)

1.法尼基环六烷醇类衍生物，由生产菌株经常规发酵、提取分离获得；其特征在于：

a.生产菌株Talaromyces sp.YM1-3已于2009年11月05日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC NO.3400；

b.法尼基环六烷醇类衍生物由2种化合物组成，其结构式为：

2.权利要求1所述的法尼基环六烷醇类衍生物的应用，其特征在于该法尼基环六烷醇类衍生物作为制备杀线虫药物的应用。