CN101829053B - 一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法，是以醋酸棉酚为活性成分，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯为油相，大豆卵磷脂为表面活性剂，无水乙醇或PEG400为助表面活性剂，灭菌注射用水为水相，其制备步骤如下：(1)将醋酸棉酚溶于***，然后与油相、表面活性剂、助表面活性剂混合，减压蒸发去掉***，恒温保存备用；(2)将灭菌注射用水加热，恒温保存备用；(3)60或70℃恒温下将(1)、(2)所得液体混合，搅拌至形成透明均一的溶液，定容，然后用均质机反复匀化，用微孔滤膜过滤。本发明的制备方法得到的醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂经研究表明，具有良好的缓释和靶向效果，且具有良好的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及一种醋酸棉酚药物制剂的制备方法，特别涉及一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法。
背景技术
棉酚(gossypol)，又称为棉籽醇，是一种黄色的酚类化合物。天然存在于锦葵科棉属植物棉花的种子、叶、茎及根部等器官中的。常温下，棉酚呈黄色结晶，易溶于乙醇、***、丙酮、三氯甲烷等有机溶剂，亦溶于油脂，但不溶于水、己烷及低沸点的石油醚，其中大部分有机溶剂对人体毒性较大，不适于作为药物载体。
棉酚作为男性节育药已为人们所熟知。近年来，其抗肿瘤作用日益也受到重视，其对肿瘤细胞的具有广泛的杀伤作用如子宫肌瘤、***癌、结肠癌、肺癌、肝癌、喉癌、头颈部肿瘤、胶质瘤等。
棉酚作为一种广谱抗肿瘤药物，具有来源丰富、成本低等优势，并可与化学治疗、放射治疗等发挥协同治疗作用。我国是产棉大国，棉酚来源丰富，加强棉酚肿瘤制剂的研发将具有良好的经济和社会效益。
目前上市的棉酚制剂只有醋酸棉酚口服制剂，作口服男用避孕药或用于治疗妇科疾病，包括月经过多或失调、子宫内膜异位症等。但由于棉酚及醋酸棉酚不溶于水，其口服制剂生物利用度低，对胃肠道刺激性食欲减退、恶心、呕吐等胃肠道反应，并出现“峰谷”现象容易引起低钾血症。
中国专利200510022777.9(申请人：沈阳药科大学，公开号CN1827117，公开日2006年09月06日，授权公告日期：2009年12月16日)公开了一种口服醋酸棉酚缓释制剂将醋酸棉酚片剂加入缓释材料形成缓释制剂避免出现“峰谷”现象，用于解决“峰谷”现象。但缓释制剂在加入众多缓释辅料后其载药量受限且仍无法避免其对胃肠道的刺激作用。而醋酸棉酚用于***的剂量相对较高，美国专利US5385936(申请日期：1990年7月12日，公开日：1995年1月31日)公开的醋酸棉酚用于肿瘤的治疗方法表明，醋酸棉酚用于***的人用剂量为40-100mg/天。其一期临床试验中对部分肿瘤剂量达到70mg/天仍无效果。可见醋酸棉酚单位剂量至少为40-60mg，才能减少患者给药次数并获得较好的疗效。并且上述制剂无法实现靶向性给药。
注射制剂通常有利于提高药物生物利用度，有利于更好的发挥药物的治疗作用，但是由于醋酸棉酚水溶性较差，很难制成稳定的注射制剂，本发明的发明人在利用水溶性棉酚钠制备注射剂的过程中发现，棉酚钠在常用注射剂溶剂中也很难达到理想的载药量和稳定性。
脂肪乳剂是一种可以显著提高药物溶解度的药物剂型，对改善水难溶性药物的载药量及药剂学特征具有很大帮助，目前国内已研究了几种药物的脂肪乳剂。但是由于不同药物如要获得稳定的脂肪乳剂，对辅料即药物载体的种类及用量的要求存在较大差异，需要对组方进行大量筛选实验才能获得最佳的药物载体及配比。并需要对制备工艺进行优化涉及才能达到预期的稳定性及缓释、靶向给药的效果。目前，现有技术中并没有关于棉酚的脂肪乳剂的制备方法的报道。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种用于制备醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法，是以醋酸棉酚为活性成分，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯为油相，大豆卵磷脂为表面活性剂，无水乙醇或PEG400为助表面活性剂，灭菌注射用水为水相，其制备步骤如下：
(1)将醋酸棉酚溶于***，然后与油相、表面活性剂、助表面活性剂混合，混合温度为60或70℃，搅拌速率为1600-1800rpm，搅拌时间为1-2小时，减压蒸发去掉***，60或70℃恒温保存备用；
(2)将灭菌注射用水加热，60或70℃恒温保存备用；
(3)60或70℃恒温下将(1)、(2)所得液体混合，搅拌速率为2000-2400rpm，搅拌时间为1小时，至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机在40-60Mpa下反复匀化5-6次，用0.45μm微孔滤膜过滤。
所述中链脂肪酸是指C8～C10的脂肪酸。
为表述方便，及避免目前脂肪乳剂相关文献中对“油相”一词使用不规范造成的误解，在本说明书后续部分中将步骤(1)所得液体称为油相药液，步骤(2)所得液体称为水相液。
本发明的制备方法得到的醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂经研究表明，以油酸乙酯或中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯为油相、以豆卵磷脂或吐温80为表面活性剂、以无水乙醇或PEG400为助表面活性剂、以灭菌注射用水为水相可显著提高醋酸棉酚的载药量，但混合温度、搅拌速度、搅拌时间及均质压力和匀化次数对制剂的稳定性及乳滴粒度、缓释效果及靶向性均有显著影响。经全面的制剂工艺研究及体内药代动力学和组织分布表明，在油相药液混合温度为60或70℃，搅拌速率为1600-1800rpm，搅拌时间为1-2小时，油相药液与水相液混合温度为60或70℃，搅拌速率为2000-2400rpm，搅拌时间为1小时，均质压力为40-60Mpa，匀化次数为5-6次时，用0.45μm微孔滤膜过滤所得注射剂乳滴平均粒径可保持在70-150nm。所得注射液具有良好的缓释和靶向效果，且具有良好的稳定性。本制备方法工艺简单，利于工业化生产。用本方法制备醋酸棉酚注射剂具备突出的实质性特点和显著的进步。
附图说明
图1为醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂大鼠单次尾静脉注射后的药时曲线；
图2为醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂荷瘤小鼠单次尾静脉注射后的组织含量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明：
实施例1醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制
组方：
醋酸棉酚40g
油酸乙酯207g
大豆卵磷脂35g
无水乙醇18g
无菌注射用水至1000ml
制备：
将处方量醋酸棉酚溶于***，然后在60℃恒温水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、无水乙醇，边加入边搅拌，搅拌速度为1600rpm，搅拌2小时，减压蒸发去掉***，作为油相药液，60℃恒温水浴保存备用；
将适量灭菌注射用水，60℃恒温水浴保存作为水相液；
在60℃恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2200rpm，搅拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k高压均质机，意大利Niro Soavi S.p.A.公司)60Mpa下反复匀化5次，0.45μm微孔滤膜过滤。分装成1000份，灭菌保存。
所得样品，乳滴平均粒径为104nm，包封率为87.2％。
实施例2醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制
组方：
醋酸棉酚60g
油酸乙酯220g
大豆卵磷脂43g
PEG400 35g
无菌注射用水至1000ml
制备：
将处方量醋酸棉酚溶于***，然后在70℃恒温水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、PEG400，边加入边搅拌，搅拌速度为1700rpm，搅拌1.5小时，减压蒸发去掉***，作为油相液，70℃恒温水浴保存备用；
将适量灭菌注射用水70℃恒温水浴保存作为水相液；
在70℃恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2000rpm，搅拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k高压均质机，意大利Niro Soavi S.p.A.公司)60Mpa下反复匀化6次，0.45μm微孔滤膜过滤。分装成1000份，灭菌保存。
所得样品，乳滴平均粒径为142nm，包封率为93.6％。
实施例3醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制
组方：
醋酸棉酚80g
中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯297g
大豆卵磷脂36g
PEG400 29g
无菌注射用水至1000ml
制备：
将处方量醋酸棉酚溶于***，然后在70℃恒温水浴下加入中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯、大豆卵磷脂、PEG400，边加入边搅拌，搅拌速度为1800rpm，搅拌2小时，减压蒸发去掉***，作为油相液，70℃恒温水浴保存备用；
将适量灭菌注射用水70℃恒温水浴保存作为水相液；
在70℃恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2400rpm，搅拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k高压均质机，意大利Niro Soavi S.p.A.公司)40Mpa下反复匀化6次，0.45μm微孔滤膜过滤。分装成1000份，灭菌保存。
所得样品，乳滴平均粒径为93nm，包封率为97.4％。
实施例4醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂在大鼠体内的药代动力学实验
Wister大鼠12只，180-240g，雌雄各半实验前禁食一夜，随机分为2组，每组6只，实验组单次尾静脉注射给予实施例1所制静脉注射脂肪乳剂(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)，对照组将醋酸棉酚混悬与0.25％的羧甲基纤维素制成混悬液经口灌胃给药(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)。
给要后第0、30、60分钟及第2、8、16、24小时分别采血测定血浆中醋酸棉酚含量，绘制药时曲线图，结果见图1。从药时曲线图可见静脉注射脂肪乳剂具有显著的缓释特点，且生物利用度显著高于口服给药。
实施例5醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂在荷瘤小鼠体内的组织分布实验
荷Lewis肺癌C-57模型小鼠由陕西中医研究院实验动物中心购得，C-57小鼠由第四军医大学实验动物中心提供，4-6周龄，体重15-25g，共60只，雄性。将模型的肿瘤剪下，研磨制成细胞匀浆，接种于C-57实验小鼠右前肢根部腹侧皮下，每只接种2.0×107个肿瘤细胞，总体积0.20ml。2周后肿块长大，用于实验。
将荷瘤小鼠随机分为2组，每组30只，实验组单次尾静脉注射给予实施例2所制静脉注射脂肪乳剂(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)，对照组将醋酸棉酚混悬于0.25％的羧甲基纤维素制成混悬液经口灌胃给药(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)。给药后1、2、8、12、16、24小时每组各处死5只小鼠，取出肿瘤组织及心、肝、脾、肺、肾、脑测定其组织含量。根据组织中药物的浓度及组织重量计算其相对含量，结果见图2。
由组织分布图可见醋酸棉酚静脉注射剂给药后肿瘤组织中醋酸棉酚含量显著高于经口给药制剂。醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂对肿瘤组织具有一定的靶向性。
实施例6棉酚静脉注射脂肪乳剂的稳定性实验
对实施例1-3所得静脉注射脂肪乳剂进行稳定性实验。
(1)强光照射试验：将棉酚静脉注射脂肪乳剂在4000lx光照下分别放置5天和10天后进行观测，结果发现，与放置前相比，注射剂仍保持澄清透明，未见油水分层。
(2)高湿度试验：将棉酚静脉注射脂肪乳剂放在密闭器皿中分别于25％、75％及92.5％相对湿度条件下放置，5天和10天后考察稳定性。与放置前相比，静脉注射剂仍保持澄清透明，未见油水分层。
(3)高温试验：将棉酚静脉注射脂肪乳剂放在密闭器皿中并分别置于40、60、80℃条件下，5天和10天后考察稳定性。与放置前相比，仍保持澄清透明，未见油水分层。
(4)加速试验：将棉酚静脉注射脂肪乳剂4000rpm离心10min，仍保持澄清透明，未见油水分层。
(5)常温留样考察：将棉酚静脉注射脂肪乳剂在温度25℃、相对湿度75％条件下分别放置1、2、3、6、12、24月，仍保持澄清透明，未见油水分层及药物析出。
实施例7制备温度对棉酚静脉注射脂肪乳剂的影响研究
按照实施例1-3的处方，制备醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂，三种处方制备温度均设定为40℃、60℃、70℃、80℃、90℃五种温度，其他条件不变，将油相药液与水相液混合至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，观察脂肪乳剂表面油滴及乳剂挂壁情况。并进一步高压均质制成脂肪乳剂。结果表明，在40℃条件下将油相药液与水相液混合至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，乳剂表面有油滴及存在挂壁现象；80℃、90℃条件下将油相药液与水相液混合至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，乳剂表面无油滴及挂壁现象，但高压均质后脂肪乳剂的乳滴粒径差异较大，可能使药物释放速度产生较大波动并对组织分布产生影响。在60℃、70℃条件下将油相药液与水相液混合至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，乳剂表面无油滴及挂壁现象，高压均质后脂肪乳剂的乳滴粒径差异均不超过20nm。
实施例8制备压力对棉酚静脉注射脂肪乳剂的影响研究
按照实施例1和3的处方，制备醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂，二种处方制备均质压力均设定20Mpa、40Mpa、60Mpa、90Mpa四种压力。其他条件不变。制备完成后进行荷瘤小鼠组织分布实验。
荷Lewis肺癌C-57模型小鼠由陕西中医研究院实验动物中心购得，C-57小鼠由第四军医大学实验动物中心提供，体重15-20g，共48只，雄性。将模型的肿瘤剪下，研磨制成细胞匀浆，接种于C-57实验小鼠右前肢根部腹侧皮下，每只接种2.0×107个肿瘤细胞，总体积0.20ml。2周后肿块长大，用于实验。
将荷瘤小鼠随机分为8组，每组6只，分别单次尾静脉注射给予按照实施例1和3的处方在20Mpa、40Mpa、60Mpa、90Mpa四种均质压力所制静脉注射脂肪乳剂(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)，给药后24小时处死小鼠，取出肿瘤组织测定其组织含量。根据组织中药物的浓度及肿瘤组织重量计算其相对含量，结果见表1。
表1均质压力对棉酚静脉注射脂肪乳剂在肿瘤组织分布的影响(μg/g，平均值±标准差)
a与20Mpa下制备的制剂相比p＜0.05；a与90Mpa下制备的制剂相比p＜0.05。
结果表明均质压力40Mpa和60Mpa制备的棉酚静脉注射脂肪乳剂在肿瘤组织分布较高，且与20Mpa和90Mpa相比有显著差异。
实施例9匀质次数的影响
按照实施例1和2的处方，制备醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂，二种处方制备的匀质次数均设定5次、6次、8次、10次四种匀质次数。其他条件不变。制备完成后测定其乳滴粒径。结果见表2。
表2匀质次数对棉酚静脉注射脂肪乳剂乳滴粒径的影响(nm，平均值±标准差)
结果表明匀质次数超过8次时乳滴粒径均差异较大。
Claims (2)
1.一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法，其特征在于：是以醋酸棉酚为活性成分，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯为油相，大豆卵磷脂为表面活性剂，无水乙醇或PEG400为助表面活性剂，灭菌注射用水为水相，其制备步骤如下：
(1)将40～80g醋酸棉酚溶于***，然后与200～300g油相、30～50g表面活性剂、10～40g助表面活性剂混合，混合温度为60℃或70℃，搅拌速率为1600-1800rpm，搅拌时间为1-2小时，减压蒸发去掉***，60℃或70℃恒温保存备用；
(2)将灭菌注射用水加热，60℃或70℃恒温保存备用；
(3)60或70℃恒温下将(1)、(2)所得液体混合，搅拌速率为2000-2400rpm，搅拌时间为1小时，至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机在40-60Mpa下反复匀化5-6次，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得平均粒径在70～150nm的醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂。
2.采用权利要求1所述的一种醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的制备方法制备得到的醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂。
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