CN101792792A - 一种检测***分泌物中需氧菌群的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种检测***分泌物中需氧菌群的试剂盒，其中干化试剂盒包括检测β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶的酶活性的反应装置和显色剂；湿化试剂盒由β-葡萄糖醛酸酶的底物溶液、凝固酶的底物溶液和显色剂组成。本发明还提供了该试剂盒的制备方法。本发明试剂盒通过检测β-葡萄糖醛酸酶和凝固酶的活性，从而直接鉴定出***分泌物中的需氧菌群，特别是引起需氧菌***炎的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌和埃希氏大肠杆菌等需氧菌群，该方法操作简便快速，无需细菌培养，适于临床常规特别是医院门诊的使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测微生物的试剂盒及其制备方法，具体地说，涉及一种检测***分泌物中需氧菌群的试剂盒及其制备方法。
背景技术
需氧菌***炎是近年来新发现的一种***炎，约占***感染的20％，其主要致病菌是B族链球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌。目前，常用的检测***分泌物中需氧菌的方法是微生物培养法，其是将***分泌物接种在血平皿上，培养后进行分离，鉴定，该方法复杂、费时，不便于临床常规特别是门诊病人的使用。
细菌预成酶是细菌在生长繁殖过程中合成的一系列与生长代谢有关的酶类，这些酶类能分解多种生化反应的底物，并且在有氧环境中能较长时间地保留其活性。不同种属的细菌，其预成酶的种类不同。因此，采用特定的底物和指示剂，直接检测细菌预成酶的种类和活性，即可鉴定出细菌的种属。该方法操作简便快速，不需要细菌培养，只需用少量浓菌液即可，并能在较短的时间(一般4h左右)观察结果。目前，预成酶法已被广泛地用于样品中微生物，特别是厌氧菌的鉴定和检测，如用***分泌物中的唾液酸苷酶的活性检测***加德纳菌感染、用天门酰胺蛋白酶的活性检测***白色假丝酵母菌感染等，但未见采用细菌预成酶直接鉴定***分泌物中需氧菌群的报告。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够快速、简便地检测***分泌物中需氧菌群的试剂盒。
本发明的另一目的是提供所述试剂盒的制备方法。
为了实现本发明目的，本发明的一种检测***分泌物中需氧菌群的试剂盒包括干化试剂盒和湿化试剂盒，其中干化试剂盒包括：
1)反应装置
所述反应装置具有β-葡萄糖醛酸酶反应孔/反应垫和凝固酶反应孔/反应垫；
2)一种或多种显色剂。
前述反应装置的β-葡萄糖醛酸酶反应孔/反应垫包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐。
前述反应装置的凝固酶反应孔/反应垫包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其对应的显色剂为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR，优选固蓝B。
前述的干化试剂盒，所述反应装置按如下方法制备获得：
1)反应基板/反应试条的制备：
反应基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有2个Φ4mm的圆孔，分别为β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入相应的反应垫；反应试条由PVC塑料制成，其上粘贴有β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫；
2)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：
底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.0 10ml，其中含乙二醇50mmol/L
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
3)凝固酶反应垫的制备：
底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.5 10ml
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
将2)和3)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；或者将2)和3)制备的反应垫粘贴于由PVC塑料制成的反应试条上，即得。
制备前述干化试剂盒的方法，其包括如下步骤：
1)反应基板/反应试条的制备：
反应基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有2个Φ4mm的圆孔，分别为β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入相应的反应垫；反应试条由PVC塑料制成，其上粘贴有β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫；
2)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：
底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.0 10ml，其中含乙二醇50mmol/L
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
3)凝固酶反应垫的制备：
底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.5 10ml
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
将2)和3)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；或者将2)和3)制备的反应垫粘贴于由PVC塑料制成的反应试条上，即得；
4)显色剂的制备：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
本发明的湿化试剂盒，其由β-葡萄糖醛酸酶的底物溶液和凝固酶的底物溶液以及显色剂组成。
前述β-葡萄糖醛酸酶的底物溶液为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐溶液，所述凝固酶的底溶液为甘氨酰精氨酸β萘胺溶液，所述显色剂为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR，优选固蓝B。
前述的湿化试剂盒，按如下方法制备获得：
1)β-葡萄糖醛酸酶底物溶液的配制：
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH 7.0 99ml
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐50mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 4g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
2)凝固酶底物溶液的配制：
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.0 99ml
甘氨酰精氨酸β萘胺 60mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 5g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
3)显色剂的配制：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
制备前述湿化试剂盒的方法，其包括如下步骤：
1)β-葡萄糖醛酸酶底物溶液的配制：
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH 7.0 99ml
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐50mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 4g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
2)凝固酶底物溶液的配制：
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.0 99ml
甘氨酰精氨酸β萘胺 60mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 5g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
3)显色剂的配制：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
采用本发明试剂盒检测引起***炎的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌、埃希氏大肠杆菌及其它***需氧菌群，其具体方法为：
1)干化试剂盒的方法：
用棉签从***后穹隆取***分泌物，放入软塑料试管中，加入0.5ml生理盐水，用手挤压试管，使分泌物与样品稀释液混匀，取出棉签，用吸管取稀释后的样品，滴加在反应装置的反应孔中或PVC试条的反应垫上，每孔1滴(约30μl)，50℃反应10min，在凝固酶反应孔中加1滴(约30μl)显色剂，结果如表1所示：
表1
| 检测项目 | 阳性 | 阴性 |
| β-葡萄糖醛酸酶 | 蓝色 | 无色 |
| 凝固酶 | 紫色 | 浅黄色 |
结果表明：β-葡萄糖醛酸酶和凝固酶呈阳性的为需氧菌群感染。
2)湿化试剂盒的方法：
用棉签从***后穹隆取***分泌物，放入软塑料试管中，加入0.5ml生理盐水，用手挤压试管，使分泌物与样品稀释液混匀，取出棉签，用吸管取稀释后的样品0.1ml，加底物溶液0.1ml，50℃反应10min，用分光光度计或酶板仪比色。
本发明的优点在于，该试剂盒通过检测β-葡萄糖醛酸酶和凝固酶的活性，从而直接鉴定出***分泌物中的需氧菌群，特别是引起需氧菌***炎的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌和埃希氏大肠杆菌等需氧菌群，该方法操作简便快速，无需细菌培养，适于临床常规特别是医院门诊的使用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例 需氧菌***炎的主要致病菌，金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌、埃希氏大肠杆菌等菌群的检测试剂盒的制备
实验1***分泌物中需氧菌、厌氧菌的培养、分离鉴定
按《全国临床检验操作常规》，取采用临床和微生物学诊断的48例细菌性***病患者和36例需氧菌***炎患者的***分泌物，分别接种于4块血琼脂培养皿和2块麦康凯培养皿，将2块血琼脂培养皿和2块麦康凯培养皿放置于35℃需氧培养24小时，将其余2块血琼脂培养皿放厌氧罐中培养28小时，取可疑菌落进行分离、鉴定、结果如表2所示：
表2
结果是，48例细菌性***病患者的***分泌物中均分离出消化链球菌、加德纳菌、普雷沃菌、脆弱拟杆菌；31例需氧菌***炎患者***分泌物中均分离出金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠菌、粪肠球菌、少数可分离出B族链球菌。
实验2***分泌物需氧菌、厌氧菌预成酶谱的筛选
选择从需氧菌***炎患者***分泌物中分离的金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、粪肠球菌、加德纳菌、白色念珠菌和B族链球菌等需氧菌，以及从细菌性***病患者***分泌物中分离的消化链球菌、普雷沃菌、脆弱拟杆菌等厌氧菌，分别测定这些细菌的碱性磷酸酶ALP、β-半乳糖苷酶Gal、岩藻糖酶Fuc、β-葡萄糖苷酶Glu、β-葡萄糖醛酸酶GUS、β-甘露糖苷酶Man、唾液酸苷酶Sna、β-N-乙酰半乳糖胺酶GalNAC、β-N-乙酰葡萄糖胺酶GluNAC、胱氨酰氨基肽酶LAP、丙氨酰氨基肽酶AAP、精氨酰氨基肽酶ArAp、脯氨酰氨期肽酶PAP、脯氨酰谷氨酸二肽酶PGDP、丙氨酰精氨酸二肽酶AADP、凝固酶GADP(SHOSHANA BASCOMB，MAMMAD MANAFI Use of EnzymeTests in Characterization and Identification of Aerobic and FacultativelyAnaerobic Gram-Positive Cocci CLINICAL MICROBIOLOGYREVIEWS，1998，11：318 340；MacFaddin JF Biochemical tests foridentification of medical bacteria.2000，3rd ed.Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia.)，结果如表3所示：
表3
| 检测项目 | 金黄色葡萄球菌 | 埃希氏大肠杆菌 | 粪肠球菌 | B族链球菌 | 加德纳菌 | 普雷沃菌 | 消化链球菌 | 白色念珠菌 | 脆弱拟杆菌 |
| ALP | + | - | + | - | - | + | + | - | - |
| Gal | - | + | - | + | + | - | + | + | + |
| Glu | + | - | - | - | - | + | - | - | + |
| GUS | - | + | - | + | - | - | - | - | - |
| Fuc | - | - | + | - | - | + | - | - | + |
| Man | - | + | + | - | + | + | - | - | - |
| GluNAC | + | - | - | - | + | - | - | + | - |
| GalNAC | - | - | - | - | - | - | - | + | - |
| SNa | - | - | + | - | + | + | - | + | - |
| LAP | + | + | + | + | - | + | - | + | + |
| AAP | + | + | + | - | + | + | - | + | - |
| ArAp | + | - | - | - | + | + | + | - | + |
| PAP | - | - | - | - | + | - | - | + | - |
| PGDP | - | - | + | - | + | - | - | - | - |
| AADP | - | + | - | - | - | + | - | - | - |
| GADP | + | + | + | - | - | - | - | ± | - |
结果是，仅金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、粪肠球菌等需氧菌可检出GADP，仅埃希氏大肠杆菌和B族链球菌等需氧菌可检出GUS，引起细菌性***病的主要致病菌加德纳菌、普雷沃菌、消化链球菌和脆弱拟杆菌均不能检出GADP和GUS。
实验3选择用实验1的方法检测出需氧菌的38例患者的***分泌物和检测出厌氧菌的48例患者的***分泌物，测定这些分泌物的GADP和GUS。结果如表4所示：
表4
结果是，用培养法检出需氧菌的样品均可检出GADP或GUS，厌氧菌阳性样品中仅1例检出GADP，GUS均为阴性。
检测151例正常育龄妇***道分泌物中的GADP和GUS，结果仅3例GADP为阳性，GUS均为阴性。
实验4导致***感染的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌、埃希氏大肠杆菌等需氧菌群的检测试剂盒的制备
1、干化试剂盒的制备
1)反应基板/反应试条的制备：
反应基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有2个Φ4mm的圆孔，分别为β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入相应的反应垫；反应试条由PVC塑料制成，其上粘贴有β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫；
2)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：
底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.0 10ml，其中含乙二醇50mmol/L
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
3)凝固酶反应垫的制备：
底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.5 10ml
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
将2)和3)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；或者将2)和3)制备的反应垫粘贴于由PVC塑料制成的反应试条上，即得；
4)显色剂的制备：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在棕色瓶中。
2、湿化试剂盒的制备
1)β-葡萄糖醛酸酶底物溶液的配制：
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH 7.0 99ml
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐50mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 4g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在棕色瓶中，6ml/瓶，密封保存；
2)凝固酶底物溶液的配制：
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.0 99ml
甘氨酰精氨酸β萘胺 60mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 5g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在棕色瓶中，6ml/瓶，密封保存；
3)显色剂的配制：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在棕色瓶中。
实验5采用本发明试剂盒检测***分泌物中需氧菌群的准确性
1)干化试剂盒的方法：
用棉签从患者的***后穹隆取***分泌物，放入软塑料试管中，加入0.5ml生理盐水，用手挤压试管，使分泌物与样品稀释液混匀，取出棉签，用吸管取稀释后的样品，滴加在反应装置的反应孔中或PVC试条的反应垫上，每孔1滴(约30μl)，50℃反应10min，在凝固酶反应孔中加1滴(约30μl)显色剂。结果表明：β-葡萄糖醛酸酶和凝固酶呈阳性的为需氧菌群感染。
2)湿化试剂盒的方法：
用棉签从患者的***后穹隆取***分泌物，放入软塑料试管中，加入0.5ml生理盐水，用手挤压试管，使分泌物与样品稀释液混匀，取出棉签，用吸管取稀释后的样品0.1ml，加底物溶液0.1ml，50℃反应10min，用分光光度计或酶板仪比色。结果表明：β-葡萄糖醛酸酶和凝固酶呈阳性的为需氧菌群感染。
采用本发明试剂盒检测***分泌物中需氧菌群的结果及准确度如表5所示：
表5
敏感性＝41÷44×100％＝93％；特异性＝195÷201×100％＝97％
由此可见，采用本发明的试剂盒对***分泌物中需氧菌群检测的敏感性和特异性均在90％以上，可满足临床需求。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种检测***分泌物中需氧菌群的干化试剂盒，其包括：
1)反应装置
所述反应装置具有β-葡萄糖醛酸酶反应孔/反应垫和凝固酶反应孔/反应垫；
2)一种或多种显色剂。
2.如权利要求1所述的干化试剂盒，其特征在于，所述反应装置的β-葡萄糖醛酸酶反应孔/反应垫包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐。
3.如权利要求1或2所述的干化试剂盒，其特征在于，所述反应装置的凝固酶反应孔/反应垫包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其对应的显色剂为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR。
4.如权利要求1～3任一项所述的干化试剂盒，其特征在于，所述反应装置按如下方法制备获得：
1)反应基板/反应试条的制备：
反应基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有2个Φ4mm的圆孔，分别为β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入相应的反应垫；反应试条由PVC塑料制成，其上粘贴有β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫；
2)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：
底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
3)凝固酶反应垫的制备：
底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.5 10ml
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
将2)和3)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；或者将2)和3)制备的反应垫粘贴于由PVC塑料制成的反应试条上，即得。
5.制备权利要求1～4任一项所述干化试剂盒的方法，其包括如下步骤：
1)反应基板/反应试条的制备：
反应基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有2个Φ4mm的圆孔，分别为β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入相应的反应垫；反应试条由PVC塑料制成，其上粘贴有β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫；
2)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：
底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
3)凝固酶反应垫的制备：
底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g
Tris-HCl 200mmol/L pH 8.510ml
将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；
将2)和3)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；或者将2)和3)制备的反应垫粘贴于由PVC塑料制成的反应试条上，即得；
4)显色剂的制备：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
6.一种检测***分泌物中需氧菌群的湿化试剂盒，其由β-葡萄糖醛酸酶的底物溶液和凝固酶的底物溶液以及显色剂组成。
7.如权利要求6所述的湿化试剂盒，其特征在于，所述β-葡萄糖醛酸酶的底物溶液为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐溶液，所述凝固酶的底溶液为甘氨酰精氨酸β萘胺溶液，所述显色剂为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR。
8.如权利要求6或7所述的湿化试剂盒，按如下方法制备获得：
1)β-葡萄糖醛酸酶底物溶液的配制：
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.0 99ml
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐 50mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 4g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
2)凝固酶底物溶液的配制：
Tris-HCl 200mmol/L pH8.0 99ml
甘氨酰精氨酸β萘胺 60mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 5g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
3)显色剂的配制：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
9.制备权利要求6～8任一项所述湿化试剂盒的方法，其包括如下步骤：
1)β-葡萄糖醛酸酶底物溶液的配制：
磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.0 99ml
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐 50mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 4g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
2)凝固酶底物溶液的配制：
Tris-HCl 200mmol/L pH8.0 99ml
甘氨酰精氨酸β萘胺 60mg
二甲基甲酰胺 1ml
PVPK30 5g
将上述组分混合均匀后，经0.2μm微孔滤膜过滤，滤液分装在深色瓶中，密封保存；
3)显色剂的配制：
固蓝B 1.5g
Triton×100 2g
PVPK30 4g
蒸馏水 1000ml
充分混匀，分装在深色瓶中。
10.如权利要求1～9任一项所述的试剂盒在检测***分泌物中金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、B族链球菌和埃希氏大肠杆菌中的应用。
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