CN101747329A - 一类4-芳硫基喹唑啉衍生物及制备方法和医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类4-芳硫基喹唑啉新衍生物和其制备方法及在制备治疗急性髓细胞白血病药物组合物中的用途，发明人经过研究发现4-芳硫基喹唑啉衍生物，具有很强的FLT3抑制活性，该制备方法具有反应步骤简短，所需原料试剂廉价易得，不需要柱层析纯化，整个过程只需1次重结晶，即可得到高纯度的目标产物。
Description
技术领域
本发明涉及治疗急性髓细胞白血病的一类新型的4-芳硫基喹唑啉衍生物和其制备方法及在制备治疗急性髓细胞白血病药物组合物中的用途。
背景技术
急性髓细胞白血病(AML)是造血干细胞异常克隆增生导致的一种恶性肿瘤性疾病，是成人急性白血病中最常见的类型；其发病率高，据统计，我国AML的年发病率是1.62/100000，近年来还有逐年上升的趋势。而据美国国立癌症研究所的最新统计表明，2001～2005年美国AML的总体发病率为3.6/100000，死亡率为2.8/100000，中位发病年龄为67岁，65岁以上患者发病率为15.3/100000-18.1/100000。
化疗是AML的主要治疗手段，常用的化疗药物包括蒽环类药，例如柔红霉素，和核苷类似物，如氟拉达滨、Clofarabine、Sapacitabine和Troxacytabine等。单药应用蒽环类药物治疗AML，完全缓解率只有30％～50％，如联合阿糖胞苷，可在一定程度上提高完全缓解率。但难治、复发、老年AML仍是当前临床治疗的难点。例外，传统的化疗药物靶向性差、毒性大。因此，特异性分子靶向化疗药物是未来治疗AML药物的发展方向。
FLT3(Fms-like tyrosine kinase，FMS样的酪氨酸激酶3)是一种受体酪氨酸激酶，它在造血干细胞的增殖和分化方面起着重要作用。近年来的分子生物学研究发现，大约三分之一的急性髓细胞白血病患者中，其造血干细胞出现FLT3突变或高表达。许多研究表明，具有FLT3突变的AML患者，易复发且预后差。目前，FLT3已作为治疗AML的重要治疗靶点，其特异性抑制剂被认为是当前最有前景的治疗AML的分子靶向药物。
发明内容
发明人经过研究发现4-芳硫基喹唑啉衍生物，具有很强的FLT3抑制活性，其结构式如下：
式中，R1为甲基、甲氧基乙基、N取代的乙胺基或丙胺基，R2为甲基、甲氧基乙基。X1＝X2＝CH时，R3为氢；X1＝N，X2＝CH时，R3为氢、甲基或4-CH3-5-CH2CONHR4(R4为取代或未取代的苯基或苄基)；X1＝X2＝N时，R3为氢、5-NHCONHR4(R4为取代或未取代的苯基)。
通用反应步骤如下：
式中，R1为甲基、甲氧基乙基、N取代的乙胺基或丙胺基，R2为甲基、甲氧基乙基。X1＝X2＝CH时，R3为氢；X1＝N，X2＝CH时，R3为氢、甲基或4-CH3-5-CH2CONHR4(R4为取代或未取代的苯基或苄基)；X1＝X2＝N时，R3为氢、5-NHCONHR4(R4为取代或未取代的苯基)。
而发明人在研究中更进一步发现化合物6，7-dimethoxy-4-(thiazol-2-ylthio)quinazoline(1)，该化合物对FLT3激酶具有很强的抑制作用，IC50(半数抑制浓度)为7nM，对FLT3突变的白血病细胞株MV-4-11和RS-4-11具有明显的抑制作用。该化合物的相对分子质量为305.38，为白色粉末，水溶性较差，可溶于二甲基亚砜(DMSO)及乙醇等溶剂。其结构式如下：
其化学名为：C13H11N3O2S2，英文名：6，7-dimethoxy-4-(thiazol-2-yl thio)quinazoline，中文命名：6，7-二甲氧基-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉。
化合物1的制备方法为：
该制备方法优点在于：反应步骤简短，所需原料试剂廉价易得，不需要柱层析纯化，整个过程只需1次重结晶，即可得到高纯度的目标产物。
目前还没有关于该化合物和其它4-芳硫基喹唑啉的衍生物的医药用途报道。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种抗肿瘤小分子靶向药物。发明人经过研究发现4-芳硫基喹唑啉衍生物具有抑制FLT3激酶的活性，特别是6，7-dimethoxy-4-(thiazol-2-ylthio)quinazoline(1)，可用于制备治疗急性髓细胞白血病小分子靶向药物。
抗肿瘤小分子靶向药物是以式I所示的4-芳硫基喹唑啉衍生物为主要活性成分添加药学上可接受的辅助性成分制备而成的。
本发明的有益效果在于，创造性地通过体内外实验证明了4-芳硫基喹唑啉衍生物具有很好的抗肿瘤作用，能用于制备抗肿瘤药物组合物。为抗肿瘤药物制备领域提供了一种新的选择，具有很好的市场前景。
附图说明
图1实施例1化合物对FLT3激酶的抑制活性随化合物浓度增高的变化
图2实施例1化合物对不同人肿瘤细胞株的增殖抑制作用随化合物浓度增高的变化
图3实施例10化合物对不同人肿瘤细胞株的增殖抑制作用随化合物浓度增高的变化
图4实施例16化合物对不同人肿瘤细胞株的增殖抑制作用随化合物浓度增高的变化
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行更进一步阐述但不是对本发明的限制；凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例16，7-二甲氧基-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤如下：
1、将喹唑啉酮A(48.5mmol)与POCl3(42ml，458.8mmol)搅拌回流反应2小时，待反应液冷至室温后倒入冰水中，用20％NaOH调pH至中性，加入二氯甲烷(DCM)萃取分液，有机相旋干得到白色固体B，直接用于下一步反应。
2、室温搅拌下，向C(2.8mmol)的丁酮(30ml)悬浮液中加入K2CO3(8.0mmol)，室温下搅拌反应10分钟，再加入B(2.7mmol)，升温至80-85℃反应4小时，冷却反应液，用水和二氯甲烷(DCM)萃取分液，旋干有机层得到4-芳硫基喹唑啉衍生物初产品。用乙醇(30ml)重结晶得到纯品。
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑，制得粗品(1)810mg，粗品产率为99.3％。用乙醇(30ml)重结晶得到700mg，重结晶产率85.8％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.88(s，1H)，8.06(d，J＝3.2Hz，1H)，8.03(d，J＝3.2Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.29(s，1H)，4.00(s，6H)ppm；
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)：δ162.4，156.1，153.8，151.6，150.5，146.0，143.0，125.3，117.4，107.1，100.7，56.3，56.1ppm；
ESI-MS(m/z，％)306.1(M+H)+。
实施例26，7-二甲氧基-4-(噻吩-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻吩，制得粗品(2)410mg，产率为92.0％。用乙醇重结晶得到360mg，重结晶产率80.5％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.74(s，1H)，7.95(d，J＝5.2Hz，1H)，7.47(d，J＝3.6Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.31(s，1H)，7.25(t，J＝4.4Hz，1H)，3.99(s，6H)ppm；
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)：δ165.6，155.8，152.2，150.3，145.8，137.7，133.9，128.2，123.3，117.4，107.0，100.6，56.2，56.0ppm；
ESI-MS(m/z，％)305.0(M+H)+。
实施例3 6，7-二甲氧基-4-(1，3，4-噻二唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为2-巯基-1，3，4-噻二唑，制得粗品(3)350mg，产率为85.5％。用乙醇重结晶得到200mg，重结晶产率48.9％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.33(s，1H)，8.97(s，1H)，7.37(s，1H)，7.23(s，1H)，4.09(d，J＝5.6Hz，6H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)307.2(M+H)+。
实施例46，7-二甲氧基-4-(4-甲基噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为4-甲基-2-巯基噻唑，制得粗品(4)300mg，产率为82.2％。用乙醇重结晶得到150mg，重结晶产率41.9％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，7.29(s，1H)，7.24(s，1H)，7.15(d，J＝1.2Hz，1H)，4.05(s，6H)，2.53(d，J＝0.8Hz，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)318.3(M+H)+。
实施例5 7-甲氧基-6-(2-哌啶乙氧基)-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为7-甲氧基-6-(2-(1-哌啶基)乙氧基)喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑，制得固体(5)187mg，总产率为54.2％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.88(s，1H)，8.06(d，J＝3.2Hz，1H)，8.03(d，J＝3.2Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.38(s，1H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，4.00(s，3H)，2.75(t，J＝5.8Hz，2H)，2.48(broad，3H)，1.84(s，1H)，1.50-1.55(m，4H)，1.39-1.40(m，2H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)403.03(M+H)+。
实施例67-甲氧基-6-(2-吗啉乙氧基)-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为7-甲氧基-6-(2-吗啉基乙氧基)喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑，得到固体(6)100mg，总产率为36.8％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.88(s，1H)，8.06(d，J＝3.6Hz，1H)，8.03(d，J＝3.2Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.36(s，1H)，4.33(t，J＝5.8Hz，2H)，4.00(s，3H)，3.61(t，J＝4.4Hz，4H)，2.80(t，J＝5.8Hz，2H)，2.51(t，J＝1.8Hz，4H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)405.01(M+H)+。
实施例77-甲氧基-6-(2-吡咯烷乙氧基)-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为7-甲氧基-6-(2-(1-四氢吡咯基)乙氧基)喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑
按照实施例1相同方法，得到固体(7)92mg，总产率为42.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.88(s，1H)，8.06(d，J＝3.2Hz，1H)，8.03(d，J＝3.2Hz，1H)，7.41(s，1H)，7.36(s，1H)，4.31(t，J＝5.6Hz，2H)，4.01(s，3H)，2.91(t，J＝5.6Hz，2H)，2.59(s，4H)，1.71(s，4H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)388.99(M+H)+。
实施例87-甲氧基-6-(3-(N，N-二甲基)丙氧基)-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6-(3-二甲氨基丙氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑，得到固体(8)90mg，总产率为46.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.87(s，1H)，8.06(d，J＝3.2Hz，1H)，8.03(d，J＝3.2Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.28(s，1H)，4.22(t，J＝6.6Hz，2H)，4.01(s，3H)，2.41(t，J＝7.0Hz，2H)，2.18(s，6H)，1.96(m，J＝6.8Hz，2H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)376.99(M+H)+。
实施例96，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-(噻唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-巯基噻唑，制得粗品(9)200mg，产率为74.5％。用乙醇重结晶得到135mg，重结晶产率50.5％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.89(s，1H)，7.97(d，J＝3.2Hz，1H)，7.61(d，J＝3.2Hz，1H)，7.33(s，1H)，4.33(m，J＝2.2Hz，4H)，3.89(m，J＝4.4Hz，4H)，3.50(d，J＝7.6Hz，6H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)393.89(M+H)+。
实施例106，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-(1，3，4-噻二唑-2-硫基)喹唑啉的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-硫基-1，3，4-噻二唑，制得粗品(10)300mg，产率为79.3％。用乙醇重结晶得到165mg，重结晶产率43.6％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.86(s，1H)，8.94(s，1H)，7.46(s，1H)，7.40(s，1H)，4.38(q，J＝4.4Hz，4H)，3.78(q，J＝4.8Hz，4H)，3.37(d，J＝7.6Hz，6H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)417.08(M+Na)+。
实施例112-(4-(6，7-二甲氧基喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3-氯苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为N-(3-氯苯基)-2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)乙酰胺，得到目标产品(11)167mg，产率为51.8％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.52(s，1H)，8.86(s，1H)，7.82(s，1H)，7.45(d，J＝8.4Hz，1H)，7.34-7.39(m，2H)，7.29(s，1H)，7.13(d，J＝7.6Hz，1H)，4.00(s，8H)，2.39(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)485.00(M-H)-.
实施例12 2-(4-(6，7-二甲氧基喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3-三氟甲基苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)-N-(3-三氟甲基苯基)乙酰胺，得到产品(12)153mg，产率为44.5％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.67(s，1H)，8.87(s，1H)，8.11(s，1H)，7.78(d，J＝7.6Hz，1H)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H)，7.40-7.44(m，2H)，7.29(s，1H)，4.04(s，2H)，4.00(s，6H)，2.40(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)519.00(M-H)-。
实施例13 2-(4-(6，7-二甲氧基喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(4-乙酰苯氨基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为N-(4-乙酰胺基苯基)-2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)乙酰胺，得到产品(13)232mg，产率为57.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.27(s，1H)，9.90(s，1H)，8.86(s，1H)，7.51(s，4H)，7.39(s，1H)，7.28(s，1H)，4.00(s，6H)，3.96(s，2H)，2.40(s，3H)，2.02(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)508.00(M-H)-。
实施例14 2-(4-(6，7-二甲氧基喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(4-氯苄胺基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为N-(4-氯苄基)-2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)乙酰胺，得到产品(14)153mg，产率为48.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.85(s，1H)，8.77(s，1H)，7.39(d，J＝7.2Hz，3H)，7.30(d，J＝8.0Hz，3H)，4.30(d，J＝4.8Hz，2H)，4.00(s，6H)，3.81(s，2H)，2.35(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)500.96(M+H)+。
实施例152-(4-(6，7-二甲氧基喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3，5-二氯苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧基喹唑啉-4-酮，C为N-(3，5-二氯苯基)-2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)乙酰胺，得到产品(15)110mg，产率为32.3％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.68(s，1H)，8.87(s，1H)，7.67(s，2H)，7.40(s，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，4.01(d，J＝7.6Hz，8H)，3.96(s，2H)，2.39(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)520.91(M+H)+。
实施例16 2-(4-(6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3-三氟甲基苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)-N-(3-三氟甲基苯基)乙酰胺，得到产品(16)119mg，产率为36.8％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.67(s，1H)，8.86(s，1H)，8.11(s，1H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H)，7.43(d，J＝6.8Hz，2H)，7.35(s，1H)，4.36(t，J＝2.2Hz，4H)，4.03(s，2H)，3.77(q，J＝2.2Hz，4H)，3.36(d，J＝5.6Hz，6H)，2.40(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)607.22(M-H)-。
实施例17 2-(4-(6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(4-三氟甲基苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)-N-(4-三氟甲基苯基)乙酰胺，得到产品(17)160mg，产率为49.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.69(s，1H)，8.85(s，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，2H)，7.70(d，J＝8.8Hz，2H)，7.42(s，2H)，7.35(s，1H)，4.36(d，J＝4.4Hz，4H)，4.05(s，2H)，3.77(q，J＝4.0Hz，4H)，3.36(d，J＝6.0Hz，6H)，2.40(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)607.22(M-H)-。
实施例18 2-(4-(6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3-氯苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)-N-(3-氯苯基)乙酰胺，得到产品(18)200mg，产率为62.3％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.52(s，1H)，8.85(s，1H)，7.82(t，J＝1.8Hz，1H)，7.42-7.46(m，2H)，7.38(s，1H)，7.34-7.36(m，1H)，7.13(dd，J＝0.8Hz，1H)，4.35(m，J＝2.9Hz，4H)，4.01(s，2H)，3.77(m，J＝3.2Hz，4H)，3.36(d，J＝6.0Hz，6H)，2.39(s，3H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)573.02(M-H)-。
实施例19 2-(4-(6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)硫基)-4-甲基噻唑-5-(N-(3，5-二甲苯基))乙酰胺的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为2-(2-巯基-4-甲基噻唑-5-基)-N-(3，5-二甲基苯基)乙酰胺，得到产品(19)210mg，产率为68.6％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.17(s，1H)，8.85(s，1H)，7.42(s，2H)，7.35(s，1H)，7.22(s，2H)，6.71(s，1H)，4.36(d，J＝4.0Hz，4H)，3.96(s，2H)，3.77(d，J＝4.0Hz，4H)，3.36(d，J＝6.0Hz，6H)，2.39(s，3H)，2.23(s，6H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)567.02(M-H)-。
实施例20 2-(4-(6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)硫基)-5-(N-(3-氯苯基)脲)噻二唑的制备
按制备4-芳硫基喹唑啉衍生物通用反应步骤的方法，其中A为6，7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮，C为1-(3-氯苯基)-3-(5-巯基-1，3，4-噻二唑-2-基)脲，得到产品(20)85mg，产率为15.7％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.41(s，1H)，9.34(s，1H)，8.89(s，1H)，7.73(s，1H)，7.45(s，1H)，7.38(broad，3H)，7.14(s，1H)，4.38(d，J＝4.4Hz，4H)，3.78(q，J＝4.8Hz，4H)，3.37(d，J＝7.6Hz，6H)ppm；
ESI-MS(m/z，％)563.00(M-H)-。
实施例21化合物1的FLT3激酶抑制活性检测实验
1、实验方法
将化合物1以梯度浓度溶解在100％的DMSO中作为待测样本，接着，把不同浓度的待测样本和5-10mU的FLT3(人源)混合在25ul工作液中(工作液成分：8mM MOPS、0.2mM EDTA，50μM EAIYAAPFAKKK(短肽)，pH7.0)。震荡混匀后，加入Mg[γ-33P-ATP]复合物后开始反应。在室温下孵育40分钟，加入3％的磷酸溶液终止反应，再将反应液滴在P30滤膜垫上，并用75mM磷酸溶液洗脱三次(每次5分钟)。最后，用甲醇浸洗后晾干并进行放射性闪烁计数检测。检测结果见表1和图1。
2.结果
表1化合物1对FLT3及其它常见激酶的抑制活性(IC50)
| 激酶 | IC50(nM) | 激酶 | IC50(nM) |
| FLT3 | 7 | Lck | ＞10000 |
| KIT | ＞10000 | Met | ＞10,000 |
| FMS | 10,180 | RAF1 | ＞10,000 |
| PDGFR | ＞10,000 | Syk | ＞10000 |
| PDGFR | ＞10,000 | Pim-1 | ＞10,000 |
| FLT1 | 9,046 | PLK1 | ＞10,000 |
| KDR | 5880 | PLK3 | ＞10,000 |
| FLT4 | 3,548 | EGFR | ＞10000 |
| Aurora A | 3874 | CDK1 | ＞10000 |
| Aurora B | 993 | CDK2 | ＞10000 |
| IGF-1R | ＞10000 | CHK1 | ＞10000 |
表1中活性数据表明，化合物1对FLT3的半数抑制浓度(IC50)7nM，对其它常见激酶的抑制活性较低或几乎没有活性(IC50＞10000nM)。通过图1还进一步表明，随着药物浓度增大，化合物1对FLT3的抑制活性越明显，具有明显的剂量依赖性。
实施例224-芳硫基喹唑啉衍生物的体外肿瘤细胞增殖抑制实验
1、实验材料
1.1主要试剂
RPMI-1640、DMEM、胎牛血清、胰酶等购自Gibco BRL公司(InvitrogenCorporation，USA)，IMDM培养基购自ATCC(American Type CultureCollection)。溴化噻唑蓝四唑(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)为Sigma公司(USA)产品。4-芳硫基喹唑啉系列衍生物由发明人合成，体外实验时用100％DMSO配制成20mg/ml储存液，置-20℃冰箱避光保存备用，临用时用完全培养液稀释至所需浓度。
1.2细胞系及培养
本实验所用的人肝癌细胞株(HepG2)、人***癌细胞株(PC-3)、人肺癌细胞株(A549)、人结肠癌细胞株(HCT-116)、人慢性髓性白血病细胞株(K562)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人单核细胞白血病细胞株(Raji)、人恶性黑色素瘤细胞株(A375)、人急性髓性白血病细胞株(MV4-11)均购于美国ATCC公司，由本实验室保存。
人肝癌细胞株(HepG2)、人***癌细胞株(PC-3)、人结肠癌细胞株(HCT-116)和人乳腺癌细胞株(MCF-7)用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的DMEM完全培养基在5％CO2、37℃条件下培养。人肺癌细胞株(A549)、人慢性髓性白血病细胞株(K562)、人单核细胞白血病细胞株(Raji)和人恶性黑色素瘤细胞株(A375)用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI-1640完全培养基在5％CO2、37℃条件下。人急性髓性白血病细胞株(MV4-11)(注：MV4-11是FLT3-ITD突变细胞株，其他细胞株均无FLT3-ITD突变)用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的IMDM完全培养基在5％CO2、37℃条件下。
2实验方法和结果
2.1实验方法(MTT法)
用完全培养液调整细胞浓度为1-2×104个/ml的细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl细胞悬液，培养过夜，次日分别用梯度浓度的4-芳硫基喹唑啉衍生物处理细胞(对于悬浮细胞直接用含不同浓度化合物的培养基混悬细胞，且其细胞初始浓度是贴壁细胞的3-10倍)，同时设不含药物的阴性对照组和等体积的溶剂对照组，DMSO浓度为0.1％，每个剂量组设3个复孔，在37℃，5％CO2条件下培养。48小时后，每孔加入5mg/ml MTT试剂20μl，继续培养2-4h，弃上清，再加DMSO150μL，振荡混匀15min，用酶标仪(λ＝570nm)测定吸光度(A)值(A值与活细胞数成正比)，取其平均值。相对细胞增殖抑制率＝(对照组A570-实验组A570)/对照组A 570×100％。实验至少重复3次。实验数据用均数表示，数据统计资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。以下各化合物对细胞增殖抑制作用均用IC50或抑制率表示。检测结果见表2和图2、图3及图4。
2.2实验结果
表2实施例1-20的化合物在不同肿瘤细胞株上的对细胞增殖抑制作用
实验结果显示，化合物1-20中大部分对FLT3突变高表达的细胞株MV4-11有明显的生长抑制，IC50一般在2M以下。而它们对其它五种肿瘤细胞株的抑制作用较弱或无抑制活性，表明这些化合物对FLT3突变高表达的细胞株MV4-11有选择性抑制作用。通过图2、图3、图4还进一步表明，随着药物浓度增大，细胞增殖抑制越明显，且明显对FLT3突变细胞的具有选择性和剂量依赖性。
Claims (3)
1.一种4-芳硫基喹唑啉衍生物，其结构式如式I所示：
式中，R1为甲基、甲氧基乙基、N取代的乙胺基或丙胺基，R2为甲基、甲氧基乙基。X1＝X2＝CH时，R3为氢；X1＝N，X2＝CH时，R3为氢、甲基或4-CH3-5-CH2CONHR4(R4为取代或未取代的苯基或苄基)；X1＝X2＝N时，R3为氢、5-NHCONHR4(R4为取代或未取代的苯基)。
2.如权利要求1所述的衍生物I的制备方法，其反应方程式如下：
式中，R1为甲基、甲氧基乙基、N取代的乙胺基或丙胺基，R2为甲基、甲氧基乙基。X1＝X2＝CH时，R3为氢；X1＝N，X2＝CH时，R3为氢、甲基或4-CH3-5-CH2CONHR4(R4为取代或未取代的苯基或苄基)；X1＝X2＝N时，R3为氢、5-NHCONHR4(R4为取代或未取代的苯基)。
3.一种式I衍生物作为活性成分在制备用于***的药物组合物的用途，其特征在于添加药学上可接受的辅助性成分制备而成：
式中，R1为甲基、甲氧基乙基、N取代的乙胺基或丙胺基，R2为甲基、甲氧基乙基。X1＝X2＝CH时，R3为氢；X1＝N，X2＝CH时，R3为氢、甲基或4-CH3-5-CH2CONHR4(R4为取代或未取代的苯基或苄基)；X1＝X2＝N时，R3为氢、5-NHCONHR4(R4为取代或未取代的苯基)。
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| PB01 | Publication | ||
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