CN101721375B - 胰岛素缓释微米球组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种生物技术制药领域的胰岛素缓释微米球组合物及其制备方法,其组分和重量百分比为:聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯为50%-99.8%、胰岛素纳米球组合物为0.2%-50%。制备方法包括①胰岛素纳米球组合物制备;②胰岛素缓释微米球组合物制备。本发明克服现有的技术不能制备球形的微纳米球及在高分子缓控释放材料里的稳定性,同时可以克服包封率不高,和S/O/O的严重突释,及造成的环境污染的缺点;采用该方法制备微米球,其粒径的大小可控制,不污染环境,微米球组合物的表面光滑圆整,颗粒规整无粘连,粒径可以根据需要进行调控从1μm到200μm,其冻干粉剂为白色细腻,疏松,不会塌陷,不粘连,再分散性良好。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种生物制药技术领域的组合物及其制备方法,尤其是一种胰岛素缓释微米球组合物及其制备方法。
背景技术
制药行业从药物发现,到临床的应用,最后一个环节是药物制剂。其中有一部分药物需要长期给药才能治愈;还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的,原料药必须要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物,宜制备成缓释或控释剂型;对于一些肿瘤的治疗,需要一些药物靶向于病照,例如靶向于肿瘤血管的栓塞微米球制剂等;基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来,到目前为止,已有30多个蛋白药物产品投入临床使用,近200个在审批和研发过程中,涌现出一批诸如安进(Amgen)、基因技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的快速发展,其剂型技术进展缓慢。一方面,蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短,需要注射给药;另一方面,许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物治疗周期长,长期而频繁地注射成为必须,也影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发,由于在制备微粒过程导致活性的损失诸如W/O/W法制备的微米球易突释等缺点。发展制备具有活性保护的蛋白微米球又可以提高包封率和减少突释的方法势在必行。人们为了减少突释研究了制备双层微米球,但是到目前还是不能解决这一难题。
经对现有技术文献的检索发现,[Claudia Klingler,Bernd W.Müller,HartwigSteckel,Insulin-micro-and nanoparticles for pulmonary delivery,InternationalJournal of Pharmaceutics,377(2009)173-179],[Claudia Klingler,BerndW.Müller,Hartwig Steckel,胰岛素的微纳米粒用于肺部给药,国际药学杂志,377(2009)173-179]Claudia Klingler等人在该文献报道了利用喷雾干燥的方法制备2μm的颗粒用于肺部给药,但是在用药安全、方便仍然存在非常大的问题,正如曾经参加了Exubera早期临床试验的洛杉矶查尔斯德鲁大学(Charles R.DrewUniversity)医学教授Mayer Davidson说:“Exubera(胰岛素的吸入剂)的体积比较大,使用起来不方便。另外,使用Exubera的患者还需要使用长效胰岛素来维持血糖的水平,并需要定期进行肺功能检测。”辉瑞Exubera撤市之后,诺和诺德也终止了吸入性胰岛素的开发。该文献利用W/O/W最见的复乳法来制备双层微米球,而复乳法的油水界面是公认的蛋白杀手,导致水溶性的蛋白在该界面的聚集,同样致使包封率也不高,存在不完全释放和突释。[Yadong Hah,Huayu Tian,Pan He,Xuesi Chen,Xiabin Jing,Insulin nanoparticle preparation and encapsulation intopoly(lactic-co-glycolic acid)microspheres by using an anhydrous system,International Journal of Pharmaceutics 378(2009)159-166],[Yadong Hah等人在该文献报道了制备胰岛素的纳米粒及利用S/O/O乳化法进一步被包裹在PLGA微米球里,国际药学杂志,378(2009)159-166]。他们利用文献[Zhang,X.F.,Hu,J.L.,Chen,X.S.,Jing,X.B,2005.Preparation and characteri-zation of biodegradableinsulin-loaded microspheres.Chem.J.Chin.U 26,554?57.]的方法等电点沉淀法制备纳米粒,然后再微囊包形成PLGA微米球,但是制备的纳米胰岛素的颗粒仍然不是球形,而是立方体形和其它不规则的形状,这也不利于进一步包封;制备微米球利用了大量的难于除去的有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、玉米油、***、和乙醇等这些溶剂对环境及微米球的质量造成极大的质量控制麻烦等缺点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足,提供一种胰岛素缓释微米球组合物及其制备方法。本发明解决了现有的技术长期无法制备球形的纳米胰岛素的难题,利用水包油-油包固体(S/O/W)制备微米球方法把上述纳米球进一步微囊包在具有缓释的高分子材料中。使其制备的微米球表面光滑圆整,均匀度好,颗粒规整无粘连;包封率高,突释小,载药量高。
本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明涉及的胰岛素缓释微米球组合物,其组分和重量百分比为:聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)或聚己内酯(PCL)为50%-99.8%、胰岛素纳米球组合物为0.2%-50%。
所述的胰岛素纳米球组合物,其组分和重量百分比为:胰岛素为50%-99.99%、葡聚糖为0%-50%、锌离子化合物为0.01%-50%。
所述胰岛素缓释微米球组合物的粒径为1-500μm。
所述的锌离子化合物为醋酸锌、氯化锌、硫酸锌、硫酸氢锌、硝酸锌或葡萄糖酸锌。
本发明还涉及的如上所述的胰岛素缓释微米球组合物的制备方法,包括以下步骤:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为0.01%-50%锌离子的化合物配制成一定浓度溶液、或上述锌离子化合物和含有占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为0%-50%葡聚糖配制成一定浓度的葡聚糖和锌离子化合物的溶液;
b)然后再在上述步骤a)的溶液中滴加含有占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为50%-99.99%的胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)的PEG溶液中;
c)然后再将上述步骤b)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
d)将上述步骤c)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解聚乙二醇(PEG),再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去聚乙醇(PEG)即得胰岛素纳米球组合物;
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将步骤①得占胰岛缓释微米球组合物的重量百分比为2%-50%胰岛素纳米球组合物加入到占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为50%-98%聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、或聚己内酯(PCL)有机溶液后,形成混悬液。即油相(O)中搅拌或漩涡等使之均匀分散形成均匀的混悬液;
b)将完成步骤a)形成微米球的混悬液加到重量百分比浓度为0%-10%的氯化钠溶液和重量百分比浓度为1%-10%表面活性剂乳化1-5min,然后把它转移到重量百分比浓度为1%-10%的氯化钠溶液固化1-4小时;然后将收集的微米球用水洗涤三到五次除去表面活性剂和氯化钠;
c)将完成步骤b)的样品冻干除去水分得胰岛素缓释微米球组合物;
所述的胰岛素的重量百分比浓度为:0.001%20%
所述的锌离子的化合物为:醋酸锌、氯化锌、硫酸锌、硫酸氢锌、硝酸锌、或葡萄糖酸锌的重量百分比浓度为:0.001%-20%;
所述的葡聚糖的重量百分比浓度为:0.001%-20%,葡聚糖的分子量为10000-5000000道尔顿;
所述的PEG的分子量为:2,000-300,000道尔顿,在水溶液中的重量百分比浓度为1%-40%;
所述的胰岛素纳米球组合物,其颗粒的粒径大小在0.01μm-2μm,以粒径为0.02μm-1μmm为佳。
所述的油相(O)为:聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)或它们的任意混合物的有机溶液;
所述的有机溶液中的有机溶剂为:二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液,以二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈或它们的任意组合的有机溶液为佳;
所述的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)或它们的任意混合物的有机溶液浓度为:聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)或它们的任意混合物的重量百分比浓度为5%40%;
所述的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)它们的分子量为5000-500000道尔顿;
所述的表面活性剂为:聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、或泊洛沙姆(poloxmer);
所述的聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、或泊洛沙姆(poloxmer)它们的分子量分别为:10000-1000000道尔顿、4000-300000道尔顿、20000-400000道尔顿或10000-400000道尔顿;
所述的表面活性剂聚乙烯醇(PVA)的重量百分比浓度为0.5%-10%或含0.5%-10%氯化钠的溶液、聚乙二醇(PEG)的重量百分比浓度为0.5%-20%或含0.5%-10%氯化钠的盐溶液、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)重量百分比浓度为0.5%-20%或含重量百分比浓度为0.5%-10%氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆(poloxmer)重量百分比浓度为0.5%-20%或含0.5%-10%氯化钠等盐溶液。
本发明克服现有的技术制备不了球形的胰岛素的纳米球,可以制备成非常规则的微纳米球组合物,还有可以克服胰岛素在缓控释材料里的不稳定性;制备成微纳米球组合物,避免用常规的W/O和W/O/W的包封率不高,及S/O/O的严重突释,造成的环境污染的缺点;采用该方法制备微米球组合物,其粒径的大小可以根据不同需要,进行控制,不污染环境;可以避免对胰岛素的治疗的作用影响,尤其是那些物理化学性质不稳定的。微粒的表面光滑圆整,颗粒规整无粘连,粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm,其冻干粉剂为白色细腻、疏松,不会塌陷、不粘连,再分散性良好。
附图说明
图1胰岛素纳米球组合物扫描电镜图。
图2胰岛素缓释PLGA微米球组合物扫描电镜图。
图3胰岛素缓释PLGA微米球组合物体外释放曲线图。
具体实施方式
以下对本发明的实施例作详细说明:以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例一:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将醋酸锌在水中溶解,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在盐酸溶液(pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、10%、20%或40%的PEG(分子量为8000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶3或1∶4等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解PEG,再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.99%、75%或80%;醋酸锌相应的为50%、0.01%、25%或20%;葡聚糖全为零);(其中按照1∶10制备的胰岛素纳米球的如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,约0.01-0.03μm;其它的1∶1、1∶3或1∶4制备的胰岛素纳米球的颗粒的表面与1∶10的相似比较光滑、粒径分布也较均匀,粒径分别约为0.3-1μm、0.5-1.5μm和0.4-2μm,图上均未显示);
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚乳酸(PLA)重量百分比浓度为5%、10%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为:50%、60%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和0%-10%的聚乙二醇(PVA)水溶液并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的1000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物(1∶20比例制备的微米球如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,粒径为约40-100μm;其它相应比例3∶20、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约为60-150μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
1∶20比例制备的微米球在体外释放曲线如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
实施例二:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将硫酸锌分别溶解在重量浓度为0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量为10000的葡聚糖溶液中,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、5%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、5%、10%、20%或40%的PEG(分子量为6000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、5%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解PEG,再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.98%、80%、60%或70%;葡聚糖分别为:0%、0.01%、10%、20%或15%;硫酸锌分别为:50%、0.01%、10%、20%或15%);(结果类似如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,按照1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14制备的胰岛素纳米球的粒径分别约为0.01-0.04μm、0.02-0.06μm、0.3-1μm、0.5-1.5μm和0.4-2μm。)
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)重量百分比浓度5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为∶50%、60%、85%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和1%-10%的聚乙二醇(PVA)溶液并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的100ml?000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物(上述比例制备的微米球类似如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,相应比例1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约1-10μm、10-50μm、80-120μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
相应比例制备的微米球在体外释放曲线类似如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
实施例三:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将硝酸锌分别溶解在重量浓度为0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量为100000的葡聚糖溶液中,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、5%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、5%、10%、20%或40%的PEG(分子量为4000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、5%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解PEG,再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.98%、80%、60%或70%;葡聚糖分别为:0%、0.01%、10%、20%或15%;硝酸锌分别为:50%、0.01%、10%、20%或15%);(结果类似如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,按照1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14制备的胰岛素纳米球的粒径分别约为0.015-0.04μm、0.03-0.06μm、0.35-1μm、0.52-1.5μm和0.45-2μm。)
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)重量百分比浓度为5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为:50%、60%、85%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和1%-10%的聚乙二醇(PEG)溶液并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的1000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物。(上述比例制备的微米球类似如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,相应比例1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约1-10μm、10-50μm、80-120μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
相应比例制备的微米球在体外释放曲线类似如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
实施例四:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将硫酸氢锌分别溶解在重量浓度为0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量为60000-70000的葡聚糖溶液中,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、5%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、5%、10%、20%或40%的PEG(分子量为2000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、5%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解PEG,再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.98%、80%、60%或70%;葡聚糖分别为:0%、0.01%、10%、20%或15%;硝酸锌分别为:50%、0.01%、10%、20%或15%);(结果类似如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,按照1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14制备的胰岛素纳米球的粒径分别约为0.010-0.035μm、0.025-0.06μm、0.34-1μm、0.50-1.5μm和0.45-2μm。)
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚己内脂(PCL)重量百分比浓度为5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为:50%、60%、85%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和1%-10%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的100ml?000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物(上述比例制备的微米球类似如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,相应比例1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约40-100μm、60-150μm、80-120μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
相应比例制备的微米球在体外释放曲线类似如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
实施例五:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将葡糖酸锌分别溶解在重量浓度为0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量为500000的葡聚糖溶液中,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、5%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、5%、10%、20%或40%的PEG(分子量为300000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、5%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解PEG,再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.98%、60%或80%;葡聚糖分别为:0%、0.002%、10%或20%);(如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,约0.01-0.03μm);(其中1∶10如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,约0.01-0.03μm;其它的1∶1、1∶3或1∶4颗粒的表面与1∶10的相似比较光滑、粒径分布也较均匀,粒径约则分别为0.3-1μm、0.5-1.5μm和0.4-2μm、)
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚乳酸(PLA)重量百分比浓度为5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为:50%、60%、85%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和1%-10%的聚乙二醇(PEG)溶液并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的100ml?000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物(上述比例制备的微米球类似如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,相应比例1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约1-10μm、10-50μm、50-120μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
相应比例制备的微米球在体外释放曲线类似如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
实施例六:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将醋酸锌分别溶解在重量浓度为0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量为5000000的葡聚糖溶液中,配制成重量百分比浓度分别为0.001%、0.001%、5%、10%、或20%等溶液;
b)将胰岛素溶解在酸性(盐酸溶液,pH<2)重量百分比浓度分别为:1%、5%、10%、20%或40%的PEG(分子量为300000道尔顿)配制成重量百分比浓度分别为:0.001%、1%、5%、10%或20%等;
c)然后再在上述步骤a)和b)的溶液按照重量比分别为1∶1、1∶10、1∶8、1∶3或3∶14等把步骤a)的溶液滴加b)的溶液中并不断地搅拌;
d)然后再将上述步骤c)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
e)将上述步骤d)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解聚乙二醇(PEG),再离心除去上清液即PEG的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去PEG即得胰岛素纳米球组合物(即制备到胰岛素占胰岛素纳米球组合物的重量百分比分别为50%、99.98%、60%或80%;葡聚糖分别为:0%、0.002%、10%或20%);(如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,约0.01-0.03μm);(其中1∶10如图1所示,颗粒的表面光滑、粒径分布均匀,约0.01-0.03μm;其它的1∶1、1∶3或1∶4颗粒的表面与1∶10的相似比较光滑、粒径分布也较均匀,粒径约则分别为0.3-1μm、0.5-1.5μm和0.4-2μm、)
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将①得占胰岛素纳米球组合物和聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)重量百分比浓度为5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245(相对应的胰岛素纳米球组合物所占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为:50%、60%、85%、75%或98%)比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液,即油包固体(S/O)乳液;
b)把步骤(a)得乳液滴加到1%-10%氯化钠和1%-10%的聚乙烯醇(PVA)溶液并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成复乳;
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1%-10%的100ml?000ml氯化钠溶液固化1-4小时;
(d)把步骤(c)得到的离心收集微米球,并用水洗涤3-5次,冻干后得到微米球组合物(上述比例制备的微米球类似如图2所示,微米球的表面光滑、粒径分布均匀,相应比例1∶20、3∶20、1∶9、1∶15或2∶245制备的微米球的粒径分别约1-10μm、10-50μm、50-120μm、100-200μm和200-500μm,图上均未显示)。
相应比例制备的微米球在体外释放曲线类似如图3所示,结果显示没有突释和不完全释放,其它也有类似的结果但图上未显示。
Claims (4)
1.一种胰岛素缓释微米球组合物的制备方法,其特征在于,所述的组合物粒径为:1-500μm,其组分和重量百分比为:聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯为50%-98%、胰岛素纳米球组合物为2%-50%,所述的制备方法包括如下步骤:
①胰岛素纳米球组合物制备
a)预先将占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为0.01%-50%锌离子的化合物配制成溶液或锌离子化合物和含有占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为0%-50%葡聚糖配制成葡聚糖和锌离子化合物的溶液;
b)然后再在上述步骤a)的溶液中滴加含有占胰岛素纳米球组合物的重量百分比为50%-99.99%的胰岛素溶解在pH<2的盐酸酸性的PEG溶液中;
c)然后再将上述步骤b)所混和均匀的在冷冻室预冻8-32小时,然后冻干,
d)将上述步骤c)冻干后的粉末利用有机溶剂溶解聚乙二醇,再离心除去上清液即聚乙二醇的有机溶液,重复三次,然后挥发干收集然后用有机溶剂除去聚乙二醇即得胰岛素纳米球组合物;
②胰岛素缓释微米球组合物制备
a)将步骤①得占胰岛缓释微米球组合物的重量百分比为2%-50%胰岛素纳米球组合物加入到占胰岛素缓释微米球组合物的重量百分比为50%-98%聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、或聚己内酯有机溶液后,形成混悬液;
b)将完成步骤a)形成微米球的混悬液加到重量百分比浓度为小于10%的氯化钠溶液和重量百分比浓度为1%-10%表面活性剂乳化1-5min,然后把它转移到重量百分比浓度为1%-10%的氯化钠溶液固化1-4小时;然后将收集的微米球用水洗涤三到五次除去表面活性剂和氯化钠;
c)将完成步骤b)的样品冻干除去水分得胰岛素缓释微米球组合物;
所述的锌离子的化合物为:醋酸锌、氯化锌、硫酸锌、硫酸氢锌、硝酸锌、葡萄糖酸锌或它们的任意混合物,其重量百分比浓度为:0.001%-20%;
所述的葡聚糖的重量百分比浓度为:0.001%-20%,葡聚糖的分子量为10000-500000;
所述的聚乙二醇的分子量为:2,000-300,000道尔顿,在水溶液中的重量百分比浓度为1%-40%。
2.根据权利要求1所述的胰岛素缓释微米球组合物的制备方法,其特征是,所述的有机溶液中的有机溶剂为:二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮。
3.根据权利要求1所述的胰岛素缓释微米球组合物的制备方法,其特征是,所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯或它们的任意混合物的有机溶液浓度为:聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯或它们的任意混合物的重量百分比浓度为5%-40%。
4.根据权利要求1所述的胰岛素缓释微米球组合物的制备方法,其特征是,所述的表面活性剂为:聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮或泊洛沙姆。
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