CN101720237A

CN101720237A - 新型医用产品

Info

Publication number: CN101720237A
Application number: CN200880022090A
Authority: CN
Inventors: 本特·韦斯特林
Original assignee: Lipopeptide AB
Current assignee: Lipopeptide AB
Priority date: 2007-06-25
Filing date: 2008-06-25
Publication date: 2010-06-02
Also published as: KR20100049039A; US20100178320A1; EP2173389A2; AU2008269575A1; JP2010531189A; US20130108682A1; WO2009001087A3; WO2009001087A2; CA2691645A1

Abstract

本发明提供了伤口护理产品，其包含伤口护理材料和具有伤口愈合性能的多肽。在一个实施方式中，所述伤口护理材料包含藻酸盐、无定形水凝胶、片状水凝胶、水性纤维、泡沫及其混合物，或由其组成。在另一个实施方式中，所述具有伤口愈合性能的多肽是cathelicidin，例如LL-37。本发明还提供了使用本发明的产品治疗伤口的方法。

Description

新型医用产品

发明领域

本发明涉及伤口护理产品及其应用。特别地，本发明提供了用于处理慢性伤口的产品。

背景技术

不愈合的慢性伤口是对患者、医护人员以及卫生保健体系的挑战。它们严重损害了数百万人的生活质量。它们需要大量治疗并且在生产力损失和卫生保健预算方面给社会带来了严重的负担。因此，对慢性伤口愈合的研究至关重要。

伤口愈合是最佳地获得组织完整性和功能恢复的动态途径。在正常的修复过程被打断的情况下产生慢性伤口。通过理解伤口愈合的生物学，医师可以优化伤口存在的组织环境。

愈伤途径在受伤时启动。伤口愈合是包括凝聚、炎症、基底物质和基质合成、血管生成、纤维素增生、上皮形成、伤口收缩和重建在内的过程的累积结果。这些复杂且重叠过程被非常好地分为愈合的3个阶段：炎症期、增殖期和成熟期。

慢性伤口

关于伤口愈合过程的上述描述可应用于急性和慢性伤口。然而，在后者的情况下，此连续过程被打断。当伤口通过有序且及时的修复过程并且导致组织和功能完整性的持续恢复时，将其称为急性伤口。与此相反，慢性伤口是指不能通过该正常的分步方式的伤口。结果，愈合过程延长且不完整，且缺少完整性的恢复。

当某些因素导致正常的受控炎症期或细胞增殖期被打断时，出现慢性伤口。很多因素可导致不良的伤口愈合。最常见的包括局部原因，例如伤口感染、组织缺氧、反复外伤、存在碎片和坏死组织；和全身原因，例如糖尿病、营养不良、免疫缺陷以及使用某些药物。

伤口感染很可能是不良伤口愈合的最常见原因。所有伤口都受到细菌的污染。伤口是否被感染取决于宿主的免疫能力以及细菌接种量的大小。依靠正常的宿主抵抗力和充分清创，伤口可负载每克组织100,000(10⁵)个微生物的水平并且仍然成功愈合。然而，大于此数量，伤口可能出现感染。

软组织蜂窝组织炎通过诱导组织蛋白酶降解新的肉芽组织和组织生长因子，以及通过延缓胶原分解而使炎症期延长。与急性伤口相反，来自慢性伤口的渗出液具有升高的蛋白酶活性、降低的生长因子活性以及提高的促炎症细胞因子水平。因此，感染通过干扰从伤口发炎、增殖到成熟的正常过程中的多个步骤来阻止愈合。

组织灌注可以因动脉阻塞或血管收缩、血压过低、体温过低以及外周静脉充血而被损害。伤口氧张力减低会通过减缓胶原生成而延迟伤口愈合。当组织氧压力下降到40mm Hg以下时，胶原纤维交联开始减弱，这是因为脯氨酸和赖氨酸的羟基化以合成成熟胶原的过程需要氧。伤口缺氧还是细菌感染的诱因，这是因为白细胞的氧化磷酸化杀菌活性在没有正常组织氧水平时受到严重阻碍。应尽可能地纠正这些因素。

例如，可通过血管重建术或搭桥术改进因动脉阻塞疾病造成的缺氧。应力劝患者停止使用烟草(其导致动脉血管收缩)。低血压或低体温的患者应接受适当的复苏术以改进心脏功能和所需的血量。通常使用压缩服治疗静脉停滞以改进静脉回血。只要红细胞压积值大于15％且患者是等容性(euvolemic)贫血，则贫血对愈伤并没有损害。因为充足的组织氧张力与成功的伤口愈合直接相关，所以优化氧张力对于患有任何类型伤口的所有患者都是必要的。

失活组织会妨碍愈合，因为其向细菌提供生长培养基，增加了感染的可能性。死亡组织还渗出抑制纤维原细胞和角化细胞向伤口内迁移的内毒素。当伤口的性质为慢性时，异物例如缝合材料也落入碎片的范畴。丝质缝合线的存在使刺激感染所需的细菌数量减少10000倍。因此，清除所有坏死组织和碎片，无论是通过手术手段，还是使用酶试剂或伤口敷料，对于实现伤口愈合都是至关重要的。

带有伤口的患者的潜在全身疾病可能使伤口按及时方式愈合的可能性大大下降。糖尿病是典型的实例。伤口愈合通常因炎症期和增殖期被打断而延迟。嗜中性粒细胞和巨噬细胞不能足够地控制伤口的细菌负载，因为它们的糖基化抑制吞噬功能。因此，感染使发炎期延长。红细胞因糖基化(通过血红素A1c水平测量)而被影响时，其柔韧性下降，从而导致微血管淤塞(sludging)和缺血。如上所述，低组织氧张力削弱细胞增殖和胶原合成。

营养不良导致纤维原细胞增殖和新血管生成的速率下降，并且削弱细胞免疫和体液免疫。伤口部位，特别是新肉芽组织中存在高速率的代谢活性。如果没有提供这些活性所必需的营养，则该组织的健康情况会是脆弱的。蛋白质及其基本成分氨基酸，例如蛋氨酸、脯氨酸、甘氨酸和赖氨酸对于正常细胞功能和皮肤伤口的修复是必不可少的。必须在饮食中提供亚麻酸和亚油酸，这是它们被称作必需脂肪酸的原因。

因为它们是细胞膜的重要组分并且是介导炎症的***素的来源，所以必需脂肪酸的缺乏将导致伤口愈合变差。维生素C或K的缺乏分别导致坏血病和凝血病。必须向伤口周围递送矿物质，包括钙、铁、铜、锌和镁，以充当愈伤过程所需蛋白质合成中的关键反应的辅助因子。如果诊断为营养不良导致的伤口愈合受损，则要保证患者接受足够的蛋白质和能量(卡路里)摄入。为了快速恢复必需营养物，可能需要补充特别的维生素和矿物质。

最后，证明某些药物对伤口愈合是有害的。皮质类固醇抑制所有水平的炎症，从而减弱这一阶段的愈合。维生素A逆转类固醇的负面影响并且显示适合局部和全身应用于不能中断皮质类固醇治疗且带有慢性伤口的所有患者。非类固醇抗炎剂，例如阿斯匹林和消炎痛干扰花生四烯酸级联，阻碍该愈合路线中的一些主要介体的功能(elucidation)。此外，它们发挥抑制血小板作用和血小板凝集的作用，由此从受伤的第一时刻起干扰愈合过程。

慢性伤口的治疗

传统的伤口护理产品主要由低技术的基于纱布的敷料组成，例如纺织和无纺布片、弹性绷带(conforming bandage)或非粘贴绷带。尽管在某些伤口护理环境下有效，但是工业和商业上的目标集中于即将上市的大量新型的改进伤口护理产品和治疗。

改进的伤口护理产品涵盖了落入三种主要分类(参见Ovington et al.，2007，Clinics in Dermatology 25：33-38)的范围广泛的不同技术：

(i)湿润的伤口愈合敷料(水凝胶、水状胶体、藻酸盐(alginate)、泡沫和透明薄膜)；

(ii)将如银的物质递送到伤口的抗微生物敷料；

(iii)生物产品，例如皮肤替代物、组织工程产品和生长因子。

此外，数量不断增加的伤口愈合设备，例如负压伤口治疗(NPWT)，也成为众所周知。此部分还包括多种其他治疗，例如氧疗法、电刺激、低水平激光疗法(LLLT)、治疗性超声和蛆疗法。

价值41亿美元的全球先进伤口护理产品是以每年10％的两位数增长的最快成长区域。此增长受到老年人口、世界糖尿病发生率增加，以及科技稳步进步和比其传统相似物在临床上更有效且低廉的产品的驱动。

因此，对于研发用于伤口治疗和护理的改进的医用产品存在持续的需求。

发明内容

在本发明的第一方面，提供了伤口护理产品，其包含伤口护理材料和具有伤口愈合性能的多肽。

所述“伤口护理产品”包括在应用到伤口部位时，能够帮助(例如促进)伤口愈合过程和/或阻止伤口感染的产品和装置。例如，所述伤口护理产品能够增强上皮再生和/或伤口上皮和/或伤口基质愈合。在一个实施方式中，所述伤口护理产品能够通过非裂解机制(non-lytic mechanism)增强上皮和/或基质细胞的增殖。

所述“伤口护理材料”包括适合用于伤口护理的基本无毒材料，包括以下详述的伤口护理产品。

在本发明伤口护理产品的一个实施方式中，所述伤口护理材料能够吸收伤口渗出物。

所述伤口护理材料可选自由藻酸盐、无定形水凝胶、片状水凝胶(sheethydrogel)、水性纤维(hydrofibre)、泡沫及其混合物组成的组。

能够吸收伤口渗出物的其他伤口护理材料包括水状胶体、基于胶原的材料(collagen-based material)、基于透明质酸的材料(hyaluronic acid basedmaterial)、聚糖酐(dextranomer)、聚糖酐(dextrinomer)/卡地姆(cadexomer)和氧化再生纤维素。

例如，所述伤口护理材料可包含藻酸盐或由藻酸盐组成。包含此类伤口护理材料的伤口护理产品通常以干燥无纺布片(dry non-woven sheet)(或“毡”)、冻干片(freeze-dried sheet)、带或绳的形式提供，并且特别适合治疗高度渗出的(highly-exuding)伤口。

可商购的藻酸盐实例包括(可购自Sammons Preston，USA)和

(可购自ConvaTec，UK)。

或者，所述伤口护理材料也可包含无定形水凝胶或由无定形水凝胶组成。包含此类伤口护理材料的伤口护理产品通常以粘性凝胶(例如，位于管或其他敷药器(applicator)中)的形式提供，并且特别适合治疗无渗出的伤口。

适合的无定形水凝胶可包含选自由以下组成的组中的一种或多种形成水凝胶的聚合物：合成聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇和泊洛沙姆嵌段共聚物等；半合成聚合物，例如纤维素醚，包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、甲基羟丙基纤维素和乙基羟乙基纤维素等；天然胶，例如***树胶、角叉菜胶、壳聚糖、果胶、淀粉和黄原胶等；和藻酸盐。

可将此类形成水凝胶的聚合物溶解于水溶剂或非水溶剂中。示例性的水溶剂包括水、盐水、缓冲液、水/丙二醇；示例性的非水溶剂包括甘油、丙二醇和聚乙二醇。

使用泊洛沙姆型的嵌段共聚物，即由聚乙二醇和聚丙二醇嵌段组成的聚合物，也是有利的。分散在水中的某些泊洛沙姆是热可逆性的：它们在室温下的粘度低，但在升高的温度下粘度显著提高，从而在体温下形成凝胶。这样可以延长施用到相对温暖的伤口腔内的药物制剂的接触时间，并且可由此改进加入物质(例如多肽)的功效。

可商购的水凝胶实例包括

(可购自Smith & Nephew，UK)和

(可购自Health Care AB，Sweden)。

此外，所述伤口护理材料也可包含片状水凝胶或由片状水凝胶组成。与无定形水凝胶类似，此类伤口护理材料特别适合治疗无渗出的伤口。

适合的片状水凝胶可包含选自由以下组成的组中的一种或多种形成水凝胶的聚合物：合成聚合物，例如聚氨酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇和泊洛沙姆嵌段共聚物等；半合成聚合物，例如纤维素醚，包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、甲基羟丙基纤维素和乙基羟乙基纤维素等；天然胶，例如***树胶、角叉菜胶、壳聚糖、果胶、淀粉和黄原胶等；和藻酸盐。如上所述，可将此类形成水凝胶的聚合物溶解于水溶剂或非水溶剂中。

可商购的片状水凝胶实例包括

(可购自SouthwestTechnologies Inc.，USA)和

G(可购自Sammons Preston，USA)。

此外，所述伤口护理材料也可包含水性纤维或由水性纤维组成。包含此类伤口护理材料的伤口护理产品通常以干燥无纺布片、冻干片、或者带或绳的形式提供，并且特别适合用于轻度到重度渗出的伤口或者既具有干燥区又具有湿润区的伤口。

适合的水性纤维可包含羧甲基纤维素或由羧甲基纤维素组成，并且包括(可商购自ConvaTec，UK)

此外，所述伤口护理材料也可包含聚氨酯泡沫或由聚氨酯泡沫组成，所述聚氨酯泡沫例如Allevyn系列产品(可购自Smith & Nephew，英国)。

本发明伤口护理产品的另一个关键组分是具有伤口愈合性能的多肽。

所述“具有伤口愈合性能的多肽”包括能够帮助(例如促进)伤口愈合过程和/或防止伤口感染的多肽。例如，所述伤口护理产品能够增强上皮再生和/或伤口上皮和/或伤口基质愈合。在一个实施方式中，所述多肽能够通过非裂解机制增强上皮和/或基质细胞的迁移和/或增殖。

可以理解，此类具有伤口愈合性能的多肽可在本发明伤口护理产品的功能中发挥主要或辅助作用。

所述“多肽”包括药学上可接受的盐及其衍生物。例如，适合的药学上可接受的盐包括包含乙酸根、碳酸根、磷酸根、硫酸根、三氟乙酸根和氯抗衡离子的那些盐。适合的药学上可接受的衍生物包括酯和酰胺。

在一个实施方式中，具有伤口愈合性能的多肽是cathelicidin，或其片段、变体或融合体，所述片段、变体或融合体至少部分保留亲本cathelicidin的伤口愈合活性。

例如，cathelicidin可选自由人阳离子抗微生物蛋白(hCAP18；参见登记号：NP_004336和AAH55089)及其C-末端肽LL-37、PR39、prophenin和indolicidin组成的组。

人cathelicidin抗微生物蛋白hCAP18是人中唯一已知的cathelicidin，由保守的cathelin域和称为LL-37的可变C末端组成(Gudmundsson et al.，1996，EurJ Biochem 1238：325-32；Zanetti et al.，1995，FEBS Lett 374：1-5)。对全蛋白进行细胞外蛋白水解处理释放LL-37肽，LL-37肽具有广泛的抗微生物活性(Gudmundsson et al.，1995，Proc Natl Acad Sci USA 92：7085-9；Agerberth etal.，1995，Proc Natl Acad Sci USA 92：195-99)和对宿主细胞的作用，其中一些作用由G蛋白偶联受体甲酰化肽样受体1(FPRL1)介导(Yang et al.，2000，JExp Med 192：1069-74；Koczulla et al.，2003，J Clin Invest 111：1665-72)。hCAP18存在于白细胞中(Cowland et al.，1995，FEBS Lett 368：173-76)并在对其上调的皮肤和其它上皮细胞中表达，这种上调与炎症(Cowland et al.，1995，FEBS Lett 368：173-76；Frohm et al.，1997，J Biol Chem 272：15258-63)和损伤(Dorschner et al.，2001，J Invest Dermatol 117：91-97；Heilborn et al.，2003，JInvest Dermatol 120：379-89)相关并与先天性屏障保护中的作用一致。

在一个实施方式中，具有伤口愈合性能的多肽是人LL-37，其氨基酸序列如以下SEQ ID NO：1所示：

LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES

[SEQ ID NO：1]

因此，具有伤口愈合性能的多肽可包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。

本文所使用的术语“氨基酸”包括遗传编码的20种标准的氨基酸和其相应的“D”型立体异构体(与天然的“L”型相比)、Ω-氨基酸和其它天然存在的氨基酸、非常用氨基酸(例如α，α-双取代氨基酸、N-烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸(参见下文)。

然而，所述多肽或其片段、变体、融合体或衍生物优选包含L-氨基酸或由L-氨基酸组成。

除非另有明确说明，否则当特别列举一个氨基酸时，例如“丙氨酸”、“Ala”或“A”，所述术语指L-丙氨酸和D-丙氨酸。只要能够使多肽保持期望的功能性特性，其它非常用氨基酸也可以作为本发明产品所用多肽的合适组分。对于所表示的肽，适宜地，每一个编码的氨基酸残基都可以用与常用氨基酸的俗名对应的单个字母来表示。

在另一个实施方式中，具有伤口愈合性能的多肽是SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的生物活性片段、变体、融合体或衍生物。

所述“生物活性”是指所述片段、变体、融合体或衍生物至少部分保留了SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的伤口愈合活性。例如所述片段、变体、融合体或衍生物至少部分保留了LL-37增强上皮再生和/或伤口上皮细胞和/或伤口基质的愈合能力。可使用本领域熟知的方法测定对此类伤口愈合性能的保持性(如在WO 2004/067025中的公开，该专利通过引用并入本文)。

在另一个实施方式中，具有伤口愈合性能的多肽是LL-37的生物活性片段，其包含SEQ ID NO：1的至少10个连续氨基酸，或者由含SEQ ID NO：1的至少10个连续氨基酸组成，例如，SEQ ID NO：1的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36个连续氨基酸。因此，所述片段可包含从SEQ IDNO：1的N末端(即左端)起至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36个连续氨基酸。

因此，所述具有伤口愈合性能的多肽可包含LL-37片段或由LL-37片段组成，所述LL-37片段选自由LL-36、LL-35、LL-34、LL-33、LL-32、LL-31、LL-30、LL-29、LL-28、LL-27、LL-26、LL-25、LL-24、LL-23、LL-22、LL-21和LL-20组成的组(如在WO 2004/067025中的公开，该专利通过引用并入本文)。

在本发明第一方面的另一个实施方式中，具有伤口愈合性能的多肽包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的变体或由SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的变体组成。

所述多肽的“变体”包括保守或非保守的***、缺失和取代。例如，所述多肽的变体可以是非天然存在的变体。

尤其优选所述变体具有的氨基酸序列与SEQ ID NO：1的氨基酸序列或其片段具有至少50％的相同性，例如至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或至少99％的相同性。

可以利用合适的计算机程序(例如，University of Wisconsin GeneticComputing Group的GAP程序)测定两个多肽间序列相同性的百分比，并且可以理解，相同性的百分比是由序列已经进行最佳比对的多肽计算的。

或者，可以利用Clustal W程序(如Thompson et al.，1994，Nuc.Acid Res.22：4673-4680中的阐述，该文献的相关公开内容通过引用并入本文)进行比对。

所使用的参数可以如下：

快速两两比对参数：K-tuple(字)大小(K-tuple(word)size)：1；窗口大小(window size)：5；空位开放罚分(gap open penalty)：3；顶部对角线的数量(number of top diagonals)：5；打分方法：x百分数。

多重比对参数：空位开放罚分：10；空位延伸罚分(gap extension penalty)：0.05。

打分矩阵：BLOSUM。

或者，可以使用BESTFIT程序测定局部序列比对。

可以利用本领域熟知的蛋白质工程和定点诱变的方法(参见实施例；参见Molecular Cloning：a Laboratory Manual，3rd edition，Sambrook & Russell，2001，Gold Spring Harbor Laboratory Press，该文献中的相关公开内容通过引用并入本文)制备变体。

在本发明第一方面的另一个实施方式中，所述产品包含融合蛋白或由融合蛋白组成，其中所述融合蛋白的一部分与LL-37的氨基酸序列或其生物活性片段或变体相对应。

蛋白或多肽的“融合体”包括与任何其它多肽融合的多肽。例如，所述多肽可以与如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或蛋白A的多肽融合，以方便所述多肽的纯化。这种融合体的实例是本领域技术人员所熟知的。类似地，所述多肽可以与寡聚组氨酸标签(例如His6)融合或与由抗体识别的表位(例如本领域熟知的Myc标签表位)融合。与所述多肽的任何片段、变体或衍生物的融合体也包含在本发明的范围内。可以理解，优选保留期望特性(即抗肿瘤活性)的融合体(或其变体或衍生物)。还尤其优选所述融合体是适合用于本文所阐述的方法中的那些融合体。

例如，所述融合体可以包含赋予本发明所述多肽期望特性的其他部分，例如所述部分可用于检测或分离所述多肽，或促进所述多肽的细胞摄取。所述部分可以是，例如本领域技术人员熟知的生物素部分、放射性部分、具有荧光的部分(例如小荧光团或绿色荧光蛋白(GFP)荧光团)。所述部分可以是本领域技术人员已知的具有免疫原性的标签(例如Myc标签)，或者也可以是本领域技术人员已知的能够促进所述多肽的细胞摄取的亲脂性分子或多肽域。

技术人员可以理解，所述多肽或其片段、变体、融合体或衍生物可以包含一个或多个经修饰或经衍生化的氨基酸。

可以通过与功能性侧基反应获取一个或多个氨基酸的化学衍生物。这种衍生分子包括，例如其中的游离氨基基团已经被衍生形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苄氧基基团(carboxybenzoxy group)、叔丁氧羰基基团、氯代乙酰基基团或甲酰基基团的分子。可以对游离的羧基基团进行衍生以形成盐、甲基酯和乙基酯或其它类型的酯和酰肼。可以对游离的羟基基团进行衍生以形成O-酰基衍生物或O-烷基衍生物。化学衍生物还包括那些包含20种常用氨基酸的天然氨基酸衍生物的肽。例如，4-羟基脯氨酸可以取代脯氨酸，5-羟基赖氨酸可以取代赖氨酸，3-甲基组氨酸可以取代组氨酸，高丝氨酸可以取代丝氨酸，鸟氨酸可以取代赖氨酸。只要能够保持所需要的活性，衍生物还可以包括包含一个或多个添加或缺失的肽。所包括的其它修饰为酰胺化、氨基末端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸的酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如使用氨或甲胺)和类似的末端修饰。

本领域的技术人员还可以理解，也可以使用模拟肽化合物。因此，“多肽”包括具有伤口愈合活性的模拟肽化合物。术语“模拟肽”指模拟作为治疗剂的特定多肽的构象和期望特性的化合物。

例如，本文所述的多肽不仅包括通过肽键(-CO-NH-)结合氨基酸残基的分子，还包括肽键被反转的分子。可以利用本领域已知的方法(例如在Meziere et al.(1997)J.Immunol.159，3230-3237中阐述的方法，该文献的相关公开内容通过引用并入本文)，制备此类逆反异构(retro-inverso)模拟肽。这个方法包括制备在骨架而非侧链方向中具有变化的伪肽。包含NH-CO键而非CO-NH肽键的逆反异构肽更能抵抗蛋白水解作用。或者，本发明的多肽可以是其中的一个或多个氨基酸残基通过-_Y(CH₂NH)-键代替常规酰胺键进行连接的模拟肽化合物。

在另一个选择中，肽键可以完全省去，前提是使用适当的连接子部分，其保持氨基酸残基的碳原子之间的间距，尤其优选所述连接子部分与肽键具有基本相同的电荷分布和基本相同的平面性。

可以理解，可以容易地封闭所述多肽的N末端或C末端(例如通过酰胺化)，以帮助降低其对外在蛋白水解消化的敏感性。

还可以使用一些非编码氨基酸或修饰氨基酸(例如D-氨基酸和N-甲基氨基酸)对哺乳动物肽进行修饰。另外，可以通过共价修饰(例如环化作用)或通过引入内酰胺或其它类型的桥联(例如参见Veber et al.，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：2636 and Thursell et al.，1983，Biochem.Biophys.Res.Comm.111：166，此文献的相关公开内容通过引用并入本文)建立经推测具有生物活性的构象。

许多合成策略的一个共同之处在于向基于肽的框架中引入一些环状部分。所述环状部分限制了肽结构的构象空间，这常常引起所述肽对特定生物受体亲和力的提高。该策略的另一个优势在于，向肽引入环状部分还可以引起肽对细胞肽酶敏感性的降低。

因此，优选的多肽包含末端半胱氨酸氨基酸。这种多肽可以通过在末端半胱氨酸氨基酸中的巯基基团间形成二硫键而以杂环形式存在，也可以通过在末端氨基酸间形成酰胺肽键而以均环形式存在。如上所示，通过N末端和C末端半胱氨酸间的二硫键或酰胺键所形成的环化小肽可以降低蛋白水解作用并提高结构的刚性(这可能获得具有更高亲和力的化合物)，从而规避有时在线性肽中观察到的亲和力问题和半衰期问题。通过二硫键环化的多肽具有仍然可能对蛋白水解降解作用敏感的游离氨基和羧基末端，然而通过在N末端氨基和C末端羰基间形成酰胺键环化的肽则不再含有游离的氨基和羧基末端。因此，可以通过C-N键或二硫键来连接本发明的肽。

肽的环化方法并不以任何方式限制本发明，而且本发明包括其环状结构可以通过任何合适的合成方法获取的肽。因此，杂环键可以包括但不限于通过二硫键、硫桥或亚烷基形成的杂环键。在US5,643,872中公开了包括二硫键、亚烷基或硫桥在内的合成均环肽和杂环肽的方法。在US6,008,058中讨论并公开了其它环化方法的实例，该文献的相关公开内容通过引用并入本文。

合成环状的稳定模拟肽化合物的另一个方法是闭环复分解反应(RCM)。该方法包括合成肽前体的步骤和使该肽前体与RCM催化剂接触以产生构象受限的肽的步骤。合适的肽前体可以包含两个或更多个不饱和C-C键。可以利用肽的固相合成技术实施所述方法。在这个实施方式中，锚定在固相支撑物上的前体与RCM催化剂接触，然后从所述固相支撑物上切除产物以得到构象受限的肽。

D.H.Rich在Protease Inhibitors，Barrett and Selveson，eds.，Elsevier(1986，该文献的相关公开内容通过引用并入本文)中公开的另一个方法将过渡态类似物的概念应用于酶抑制剂设计中，从而设计了肽模拟物。例如，已知staline仲醇模拟了胃蛋白酶底物中易裂解酰胺键的四面体过渡态。

总之，众所周知可以使用末端修饰来降低对蛋白酶消化作用的敏感性，从而延长该肽在溶液中(尤其在可能存在蛋白酶的生物液体中)的半衰期。多肽的环化也是一种有用的修饰，并且由于通过环化作用形成的稳定结构并考虑到观察到的环状肽的生物活性，所以优选多肽环化。

因此，在一个实施方式中，所述多肽，或其片段、变体、融合体或衍生物是环状的。然而，在优选的实施方式中，所述多肽，或其片段、变体、融合体或衍生物是线性的。

在本发明第一方面使用的用于生产多肽、或其片段、变体、融合体或衍生物的方法在本领域是熟知的。便利地，所述多肽或其片段、变体、融合体或衍生物是重组多肽或包含重组多肽。

因此，可在适合的宿主中表达编码所述多肽或其片段、变体、融合体或衍生物的核酸分子(或多核苷酸)，并从所述宿主获得所述多肽。适合生产此类重组多肽的方法在本领域是熟知的(例如，参见Sambrook & Russell，2000，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Third Edition，Cold Spring Harbor，New York，此文献中的相关公开内容通过引用并入本文)。

简而言之，可以构建包含核酸分子的表达载体，其中所述表达载体能够在适当的宿主中表达由所述核酸分子编码的多肽。

还可以利用商购的体外翻译***在体外产生多肽，例如，利用兔网织红细胞裂解物或麦胚裂解物(可从Promega获取)在体外产生多肽。翻译***优选兔网织红细胞裂解物。可以方便地将所述翻译***和转录***偶联，例如TNT转录-翻译***(Promega)。此***的优点是在与翻译相同的反应中从编码DNA多核苷酸生产合适的mRNA转录本。

本发明还包括包含以上阐述的伤口愈合多肽的药学上可接受的酸或碱加成盐的产品。用于制备本发明中使用的上述碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒酸加成盐的酸，所述无毒酸加成盐即包含药学上可接受的阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸[即1，1′-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸)]盐等等。

药学上可接受的碱加成盐还可以用于生产所述多肽的药学上可接受的盐形式。可作为制备本质上是酸性的本发明化合物的药学上可接受的碱性盐的试剂而被使用的化学碱是那些与此类化合物形成无毒碱性盐的化学碱。这种无毒碱性盐包括但不限于衍生自此类药学上可接受的阳离子的无毒碱性盐，所述阳离子例如碱金属阳离子(例如钾和钠)、碱土金属阳离子(例如钙和镁)、铵或水溶性胺加成盐(例如N-甲基葡糖胺(N-methylglucamine，-meglumine))、低级烷醇胺和药学上可接受的有机胺的其它碱性盐等。

因此，在本发明的产品中，可以使用乙酸盐形式的LL-37或其片段。

本领域技术人员可以理解，在将其与伤口护理材料混合或涂覆(apply)到伤口护理材料之前，先将具有伤口愈合性能的多肽配制到任何适合的介质/缓冲剂例如PBS或乙醇中。

在本发明伤口护理产品的一个实施方式中，所述伤口护理材料与所述具有伤口愈合性能的多肽的重量比等于或大于10∶1，例如等于或大于30∶1、100∶1、1000∶1、2000∶1、5000∶1、10000∶1或大于50000∶1。例如，所述伤口护理材料与所述具有伤口愈合性能的多肽的重量比等于或大于10000∶1。

本发明伤口护理产品的实例可包含以下成分组合或由以下成分组合组成：

(a)所述伤口护理材料包含聚氨酯泡沫或由聚氨酯泡沫组成，且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37；

(b)所述伤口护理材料包含水状胶体敷料或由水状胶体敷料组成，且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37；

(c)所述伤口护理材料包含Alginate Felt、甲基纤维素凝胶或由AlginateFelt、甲基纤维素凝胶组成，且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37；

(d)所述伤口护理材料包含甲基纤维素凝胶或由甲基纤维素凝胶组成，且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37；和

(e)所述伤口护理材料包含***树胶水凝胶(***胶)或由***树胶水凝胶(***胶)组成，且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

在一个具体实施方式中，所述伤口护理材料不包含LL-37(或其片段)与形成双层的脂质(例如半乳糖脂)的复合物。

在本发明第一方面的另一个实施方式中，所述伤口护理产品还包含抗微生物多肽，例如选自由防御素(defensin)、短杆菌肽S(gramicidin S)、爪蟾抗菌肽(magainin)、天蚕素(cecropin)、富组蛋白(histatin)、hyphancin、肉桂霉素(cinnamycin)、burforin 1、parasin 1和鱼精蛋白，以及至少部分保留亲本蛋白质抗微生物活性的其片段、变体或融合体组成的组。

在本发明伤口护理产品的另一个实施方式中，所述具有伤口愈合性能的多肽(例如LL-37)在使用中缓慢释放。例如，所述伤口护理产品中包含的具有伤口愈合性能的多肽在使用的最初24小时内的释放小于50％，例如小于40％、30％、20％、10％或5％。可使用以下实施例中描述的方法测量释放率。

本发明的伤口护理产品可采用多种不同的形式，这取决于所使用的组成材料和所述产品的预期目的。然而，通常以敷料(dressing)的形式提供所述产品。例如，所述产品可采用聚氨酯泡沫、干燥无纺布片、冻干片、固体凝胶片、带、绳和粘性凝胶的形式。

在使用前，应将所述伤口护理产品灭菌并包装在不透过微生物的容器中。例如，可将所述伤口护理产品贮存在管内或其他合适的无菌敷药器内。

可使用本领域中熟知的技术实现灭菌，例如无菌生产和/或通过放射进行最终(即在生产之后)灭菌。

本领域技术人员可理解本发明的伤口护理产品可适合保持湿润的伤口环境。因此，所述产品可包含向伤口加湿或从伤口除去湿气的伤口护理材料。

有利的是，所述伤口护理产品能够阻止、消除、减轻或者减少伤口环境中的微生物生长。

应理解，可以对本发明的伤口护理产品的大小和形状进行调整(sized andshaped)以适合身体不同部位的伤口。例如，可以对所述伤口护理产品进行塑形(shape)以提供基本为平面(即平的)、凹面、凸面等的伤口敷料表面。

因此，所述伤口护理产品可以基本为平面的，其厚度(平均或最大)等于或小于20mm，例如等于或小于10mm、8mm、6mm、5mm、4mm、3mm、2mm或1mm。

在本发明第一方面的一个具体实施方式中，所述伤口护理产品包含伤口护理材料层和含有具有伤口愈合性能的多肽的膜，或者由伤口护理材料层和含有具有伤口愈合性能的多肽的膜组成，其中所述包含具有伤口愈合性能的多肽的膜贴在伤口护理材料层的朝向伤口一侧。

例如，所述伤口护理材料层可包含聚氨酯泡沫敷料、水状胶体片敷料、水凝胶片或非水凝胶片，或由聚氨酯泡沫敷料、水状胶体片敷料、水凝胶片或非水凝胶片组成。有利的是，所述伤口护理材料层能够吸收伤口渗出物。

可以将示例性伤口护理产品的包含具有伤口愈合性能的多肽的膜组分直接贴在(attach)所述伤口护理材料层的表面。或者，可以通过一个或多个中间层或膜(见下文)间接地贴合所述膜。

所述膜可通常包含成膜材料和具有伤口愈合性能的多肽。所述膜还可包含其他组分，例如增塑剂和着色剂。

适合的成膜材料在本领域是熟知的，例如合成聚合物、淀粉和多糖。例如，可由含水聚合物基质、纤维素衍生物、丙烯酸酯共聚物、树胶、多糖和聚乳酸聚合物形成膜。

优选所述膜是水溶性的。

可选择膜的组成以提供具体、可控的溶解速率。例如，所述膜可具有小于1小时的溶解时间(在伤口上或在水中测定)，例如小于30分钟、20分钟、10分钟或5分钟。可以通过选择适合的成膜材料控制溶解时间，例如多糖可提供快速溶解(＜10秒)，羟丙基甲基纤维素可提供中度溶解速度(约30秒)，而玉米淀粉可提供较慢的溶解(＞2分钟)。

膜的厚度通常等于或小于1mm，例如等于或小于0.8mm、0.6mm、0.4mm、0.2mm、0.1mm或0.05mm。

所述具有伤口愈合性能的多肽可在膜中均匀分布(例如，可在膜层形成之前向成膜材料(例如含水聚合物基质)中添加所述多肽)。

示例性伤口护理产品的膜组分可覆盖伤口护理材料层朝向伤口一侧的全部或仅覆盖部分。因此，所述膜可覆盖伤口护理材料层一侧表面积的至少30％，例如表面积的至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。

方便的是，所述膜覆盖伤口护理材料层的中心部分，其周围是暴露伤口护理材料层的周边区(参见图7)。

在一个实施方式中，所述膜是穿孔的。膜中的穿孔对于渗出性伤口特别有用，这是因为这些穿孔能够减少或阻止具有伤口愈合性能的多肽倒流到伤口护理材料上。因此，穿孔允许将最初的伤口渗出物吸收到伤口护理材料上，此后可从可溶性膜缓慢地将LL-37释放到伤口部位。

可根据伤口愈合性能来优化穿孔的程度和穿孔的大小。例如，穿孔可占至少10％、20％、30％、40％、50％或以上的膜表面积。单个穿孔可具有至少0.1mm²的平均大小，例如至少0.2mm²、0.5mm²、1mm²、2mm²、5mm²或更大。

在一个实施方式中，通过中间层间接地将包含具有伤口愈合性能的多肽的膜贴到伤口护理材料层上。所述中间层优选具有小于包含具有伤口愈合性能的多肽的膜的溶解速率。例如，所述中间层可具有大于5分钟的溶解时间(在伤口上或在水中测定)，例如大于10分钟、20分钟、30分钟或60分钟。

应理解，所述中间层也可以是穿孔的(象膜一样)。任选地，中间层中的穿孔与膜中的穿孔重合(即孔与孔对准)。然而，或者，中间层中的穿孔也可以偏离膜中的穿孔。

上述伤口护理产品设计的示例性实施方式包括以下：

(a)能够吸收伤口渗出物的伤口护理产品，其包含聚氨酯泡沫敷料和含有LL-37的无穿孔水溶性膜，其中所述含有LL-37的无穿孔水溶性膜贴在所述聚氨酯泡沫敷料与伤口接触的一侧。

(b)能够吸收伤口渗出物的伤口护理产品，其包含聚氨酯泡沫敷料和含有LL-37的穿孔水溶性膜，其中所述含有LL-37的穿孔水溶性膜贴在所述聚氨酯泡沫敷料与伤口接触的一侧。

(c)(a)或(b)的伤口护理产品，其中所述膜通过无穿孔水溶性中间层(溶解速率小于所述膜)间接地贴到聚氨酯泡沫敷料上；和

(d)(a)或(b)的伤口护理产品，其中所述膜通过穿孔水溶性中间层(溶解速率小于所述膜)间接地贴到聚氨酯泡沫敷料上。

图7中显示了此类伤口护理产品设计的实例。

本发明的第二方面提供了以上详述的伤口护理产品在治疗伤口中的应用。此类产品特别适合治疗慢性伤口，例如静脉性溃疡、糖尿病溃疡和压力性溃疡。

通常将伤口护理产品直接涂覆到伤口的表面。任选地，在伤口护理产品上部涂覆第二常规敷料。此外，在某些情况下，可在伤口和伤口护理产品之间涂覆透性抗粘敷料。

可理解，应以规律的间隔替换本发明的产品以促进愈合过程并预防感染。

本发明的第三方面提供了治疗伤口的方法，其包括使伤口接触上文详述的伤口护理产品。

在本发明的第四方面提供了生产伤口护理产品的方法，所述伤口护理产品包含伤口护理材料和具有伤口愈合性能的多肽。所述方法可包括：将所述伤口护理材料与所述多肽混合以使所述多肽分散在整个伤口护理材料中；这可以在伤口护理材料制备之前或制备期间完成。或者，可在制备出此伤口护理材料后，将具有伤口愈合性能的多肽涂覆到伤口护理材料的暴露面。又或者，将包含具有伤口愈合性能的多肽的膜贴到或涂覆到伤口护理材料上。

例如，在伤口护理产品包含藻酸盐伤口护理材料的情况下，可在伤口护理材料的制造之前、期间或之后添加所述具有伤口愈合性能的多肽。因此，在无纺布片的情况下，可在纺丝(例如湿纺)过程之前添加伤口愈合多肽，或者在冻干片的情况下，可在冻干过程之前添加。或者，可在制造伤口护理材料之后施用具有伤口愈合性能的多肽的水溶液或非水溶液，随后为干燥步骤(其可任选地为冻干或真空干燥)。

在伤口护理产品以水性纤维伤口护理材料为基础并且包含具有伤口愈合性能的多肽的情况下，可以按照与上述以藻酸盐伤口护理材料为基础的伤口护理产品相似的方式制造，不过用于伤口护理材料的起始成分不同。

在伤口护理产品以无定形水凝胶伤口护理材料为基础并且包含具有伤口愈合性能的多肽的情况下，可以按照不包括纺丝或干燥的相对直接的方式制造：可以在将形成凝胶的聚合物与溶剂混合以形成水凝胶期间或之后简单地添加多肽(任选地进行复合以得到形成双层的脂质)。

在伤口护理产品以水凝胶片伤口护理材料为基础并且包含具有伤口愈合性能的多肽的情况下，也可以按照相对直接的方式制造：可以在将形成凝胶的聚合物与溶剂混合期间或之后，但总是在此混合物通过热固化、交联或其他方法形成水凝胶片之前添加多肽(任选地进行复合以得到形成双层的脂质)。

在伤口护理产品以多层敷料为基础的情况下(例如，如图7所示)，可分别制造包含具有伤口愈合性能的多肽的膜，随后将其施加到伤口护理材料层。或者，也可通过喷涂、丝网印刷/辊涂(roller-coat kissing)、超声喷涂(ultrasonicspraying)和其他本领域已知的技术在伤口护理材料层上制备所述膜。

最后，本发明的第五方面提供了伤口护理试剂盒，所述伤口护理试剂盒包含以上定义的伤口护理材料和以上定义的具有伤口愈合性能的多肽。

将参考以下附图，在下述非限定性实施例中描述本发明的优选方面。

图1：从PU泡沫释放LL-37的水溶液或乙醇溶液

以25μg LL-37/cm²的浓度将溶于PBS或乙醇的LL-37吸收到PU泡沫中。每份制品切出1x1cm的小块，放置在包含3ml PBS的玻璃小管中，并在振荡下温育24小时。在多个时间点(10、20、45、120分钟和24小时)采集100μl的样品，并通过ELISA评估释放到溶液中的LL-37的量。将结果表示为释放到溶液中的LL-37％。

图2：从可商购的伤口愈合敷料释放LL-37

将溶于PBS的LL-37(250μl，100μg/ml)添加到～1cm²的不同可商购的伤口愈合敷料的上部。将此材料干燥，并评估在3ml PBS-1％BSA中温育24小时后释放的LL-37。将结果表示为释放到溶液中的LL-37％。

图3：从干燥并再水合的凝胶释放PBS-1％BSA中的LL-37

将LL-37水溶液(100μg/ml)与5％K-角叉菜胶、1％甲基纤维素、5％***树胶和1.6％羟丙基(HP)纤维素混合。在玻璃表面包被已知量的凝胶并干燥，然后使用3ml含1％BSA的PBS再水合。通过ELISA评估从凝胶释放的LL-37的量，并将结果表示为释放到使用3ml含1％BSA的PBS再水合溶液中的LL-37％。通过ELISA评估从凝胶释放的LL-37的量，并将结果表示为释放到溶液中的LL-37％。

图4：从干燥并再水合的甲基纤维素凝胶(由不同凝胶∶LL-37比例构成)释放LL-37

将LL-37水溶液(100μg/ml)与不同量的1％甲基纤维素混合以获得不同的重量∶重量比(300∶1、30∶1和3∶1)。在不存在凝胶的条件下使用LL-37(0∶1)，以作为对照。在玻璃表面包被已知量的凝胶并干燥，然后使用3ml含1％BSA的PBS再水合。通过ELISA评估从凝胶释放的LL-37的量，并将结果表示为释放到使用3ml含1％BSA的PBS再水合溶液中的LL-37％。通过ELISA评估从凝胶释放的LL-37的量，并将结果表示为释放到溶液中的LL-37％。

图5：人PBMC对多种释放样品的趋化性

使用Ficoll从新鲜血液分离人PBMC，并将其重悬在RPMI-1％BSA中。使细胞(5x10⁵个细胞/ml)向含150μl释放样品的PBS-1％BSA迁移1.5小时。随后，收集所有迁移的细胞，用荧光染料将DNA染色，并评估荧光性。每种条件检测一式四份，并将结果表示为带有标准偏差的平均相对荧光单位(RFU)。用白色柱形代表不含LL-37的对照样品。完整的样品编码请参阅表1。在使用相应的阴性对照时，使用双侧方差不等t检验，^*p＜0.05。柱形中的数字代表通过ELISA测定的LL-37浓度(ng/ml)。

图6：人PBMC对多种释放样品的趋化性

使用Ficoll从新鲜血液分离人PBMC，并将其重悬在RPMI-1％BSA中。进行如图5所示的趋化性试验。用白色柱形代表不含LL-37的对照样品。完整的样品编码请参阅表1。在使用相应的阴性对照时，使用双侧方差不等t检验，^*p＜0.05。柱形中的数字代表通过ELISA测定的LL-37浓度(ng/ml)。

图7：本发明伤口护理产品的示例性实施方式

(A)简单敷料的俯视图和侧视图，所述简单敷料包含伤口护理材料层(例如PU泡沫)，该伤口护理材料层的一侧贴有含有LL-37的水溶性膜。注意：敷料未按比例尺绘制(例如，膜的厚度过大)。

(B)改进型(A)简单敷料的俯视图和侧视图，其中膜层被穿孔。示意图显示伤口护理材料通过膜中的穿孔吸收伤口渗出物，随后从所述膜释放LL-37。

注意：敷料未按比例尺绘制(例如，穿孔的大小过大)。

(C)改进型(A)简单敷料的俯视图和侧视图，其中膜层通过中间层贴到伤口护理材料层，所述中间层的溶解速率低于含有LL-37的膜。

实施例：LL-37的配制、其从多种装置的释放的评价以及其生物活性的评估

介绍

LL-37是被称作cathelicidin的人抗微生物肽家族的唯一成员。LL-37源自人hCAP18蛋白，在多种细胞类型和组织中表达(Durr，Sudheendra et al.2006)。除了具有宽抗微生物谱之外，现在证明LL-37在宿主防御中发挥更广泛的作用，并且还具有伤口愈合性能(参见Kai-Larsen and Agerberth 2008和WO 2004/067025)。

在本发明的是一个实施方式中，提供了供患难治愈合或开放性伤口的人使用的III类医用装置。此医用装置可由涂覆/浸渍/印刷了合成生产的含LL-37制剂的敷料构成。

材料和方法

LL-37的配制

将LL-37吸收到聚氨酯泡沫中

将LL-37溶于乙醇或PBS中，并将1ml悬浮液滴加到2x2cm的聚氨酯(PU)泡沫(Brightwake，Kirkby-in-Ashfield，英国)块上。使样品在室温(RT)下干燥直至不能记录到进一步的失重。除非另有说明，使用100μg/ml的LL-37溶液，获得25μg LL-37/cm²的浓度。

在将其涂到2x2cm PU泡沫之前，还将LL-37与各种赋形剂混合。将溶于PBS的LL-37添加到干半乳糖脂中，并将所得分散液剧烈振荡1小时。半乳糖脂的浓度为0.2％(w/w)。将溶于水的LL-37添加到由含25％泊洛沙姆(Lutrol F127)的水组成的预凝胶(preformed gel)中。将约1g所得混合物在约60℃加热约10分钟，以蒸出醇。随后使用抹刀将制剂涂覆到2x2cm的PU块上。在所得制剂包含水的情况下，将PU泡沫在室温干燥至少24小时。

将LL-37涂覆/吸收到可商购的伤口愈合产品上/中

将溶于PBS的LL-37(250μl，100μg/ml)添加到～1cm²的以下不同的可商购的伤口愈合产品的上部：Duoderm(Convatec)、Mepilex(

Healthcare)、Melolin(Smith & Nephew)、Alginate Felt和Hydrocoll(AG Hartmann)(仅添加50μl LL-37溶液)。将所述材料在室温干燥18小时，随后在37℃干燥2小时。通过添加3ml PBS或包含1％BSA的PBS，测试24小时内从每份样品释放的LL-37。

将LL-37溶液和形成凝胶的赋形剂的混合物蒸发到玻璃表面上

将LL-37水溶液(100μg/ml)与1.6％羟丙基(HP)纤维素(Apoteket，Stockholm，瑞典)、5％K-角叉菜胶(Sigma，Stockholm，瑞典)、1％甲基纤维素(Apoteket)、5％***胶GO0020(Scharlau)混合。在玻璃表面包被已知量的凝胶并在室温下干燥24小时，随后在37℃干燥3小时。随后，使凝胶再水合，并在向每个小瓶中添加3ml PBS或包含1％BSA的PBS后，研究LL-37的释放。

LL-37从多种装置的释放

为了从包被的PU泡沫释放LL-37，切下1x1cm的样品，并称量以计算每个样品中LL-37的存在量。将每个PU泡沫样品放置在包含3ml PBS的15ml玻璃小瓶中，并在室温以及6rpm的恒定振荡下温育指定的时间。在多个时间间隔(10、20、45、120分钟和24小时)取出100μl释放样品以用于分析，并替换为100μl新鲜PBS。将释放样品在4℃贮存直至分析，通常24小时。

为了从用含LL-37的凝胶包被的玻璃释放LL-37，向每个小瓶中添加3mlPBS，在24小时后采集样品，并按照对以上样品的类似方式进行处理。

为了从含LL-37的商购伤口愈合产品释放LL-37，向每个小瓶中添加3mlPBS，在24小时后采集样品，并按照对以上样品的类似方式进行处理。

以释放液体中LL-37的总量除以样品中LL-37的负载量来计算释放。

从医用装置释放的人LL-37的检测和定量

使用基于Lindgreen及其同事研发的方法(Lindgreen 2004)的酶联免疫吸附试验(ELISA)对LL-37进行检测并定量。在2-8℃用含5μg/ml兔IgG抗LL-37抗体(Agrisera，瑞典)的200μl包被缓冲液(0.1M碳酸氢盐缓冲液，pH 9.0)包被中等结合能力的96孔板(Greiner Bio-one，Frickenhausen，德国)18至24小时。用200μl清洗缓冲液(0.01M磷酸盐缓冲液，pH 7.2；0.145MNaCl和0.2％Tween 20)清洗板3次，用200μl封闭溶液(含1％牛血清白蛋白[BSA，Sigma]的0.5M Tris-HCl，pH 7.5)封闭，并进行如上所述的清洗。向每个孔中添加LL-37标准品(6.25-2,000ng/ml)和样品(50μl)，随后添加150μl稀释缓冲液(0.01M PBS、0.145M NaCl、0.1％Tween 20和0.1％BSA)，一式两份。将板在2-8℃温育18-24小时。清洗后，添加200μl辣根过氧化物酶(POD)-偶联的鸡抗LL-37 IgY(在稀释缓冲液中以1/200稀释)(Agrisera)。在连续振荡下室温温育5小时后，清洗样品并通过添加100μl显色剂A和100μl显色剂B(TMB)(R&D Systems，Abingdon，英国)进行显色。通过添加50μl1M硫酸停止反应，并立即使用装配用于分析的SoftMax Pro软件(MolecularDevices)的VERSAmax微板读数器读取450nm处的吸光度(OD450nm)。

人外周血单核细胞的分离

通过Ficoll-Paque Plus(GE Healthcare，Uppsala，瑞典)离心从静脉血(在K₂ EDTA上收集)分离外周血单核细胞(PBMC)。简而言之，使用室温(RT)的不含Ca²⁺/Mg²⁺的磷酸盐缓冲液(PBS，Invitrogen，Merelbeke，比利时)将血液(30-50ml)稀释两倍，并将30ml稀释血液放置到15ml Ficoll-Paque Plus的上部。在室温下以340g离心30分钟后，吸出对应于单核细胞的条带，用PBS清洗两次，然后将其重悬于RPMI 1640培养基(Invitrogen)(包含glutamax并补充有100U/ml青霉素(Invitrogen)、100μg/ml链霉素(Invitrogen)和1％牛血清白蛋白(BSA，Sigma，Stochholm，瑞典)中。

趋化性试验

根据生产商的说明，使用配有3μm膜***物的QCM^TM趋化性96孔板(Millipore，Solna，Stockholm)检测趋化性。简而言之，将150μl化学引诱物测试样品分配到每个孔的下侧小室中，并将100μl的细胞悬浮液(5x10⁵或1x10⁶细胞/ml)分配到上侧小室中。使用白细胞介素-8(IL-8，R&D Systems)作为阳性对照(10和100ng/ml)，并使用RPMI-1％BSA或PBS-1％BSA作为阴性对照，以评估随机迁移。在RPMI-1％BSA中配制化学引诱物样品，或者在PBS中配制后补充1％BSA。根据生产商的说明，在37℃和5％CO₂下温育1.5或3小时后，从下侧小室和***物回收迁移的细胞。裂解细胞并在室温下使用绿色荧光染料(CyQuant GR dye，Molecular Probes)染色15分钟。将细胞裂解物(150μl)转移到96孔平底不透明微板(PerkinElmer，Upplands瑞典)中，并使用Wallac 1420荧光板读数器(Perkin Elmer)读取485/535nm的荧光。每种条件进行一式两份。结果表示为平均相对荧光单位(RFU)，或者在减去背景RFU后将每份样品的平均RFU除以适合阴性对照的平均RFU从而将其转化成趋化性指数。

试剂

人cathelicidin抗微生物肽LL-37(批号990/37/A和1013)(LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES[SEQ ID NO：1])得自于Polypeptide Laboratories A/S(Hillerod，丹麦)。除非另有说明，将批号1013用于所有的配制试验，而将批号990/37/A用于绘制ELISA的标准曲线。以1mg/ml将肽复溶在1x PBS，分成等份并在-20℃贮存备用。

结果

LL-37的配制

将LL-37配制到水溶液或非水溶液中，并吸收到多种支持物上，或者与凝胶混合。

将LL-37溶液(PBS或乙醇)吸收到PU泡沫中时，目测无法检测到PU泡沫的变化，但用于溶解LL-37的液体可在室温下2-3后被简单地除去。

除了Duoderm和hydrocoll之外，LL-37可被吸收进所有可商购的伤口愈合产品中。对于hydrocoll，必须使用体积较小的LL-37溶液，此溶液成功地在样品顶部干燥，在膜上留下像盐的斑点。藻酸盐样品在干燥后***，而其他两种材料的形状没有变化。

所有凝胶均可与LL-37溶液混合而不形成任何沉淀(目测)。

LL-37可从聚氨酯泡沫和可商购的伤口愈合敷料释放

在将LL-37配制到PBS、乙醇或半乳糖脂中，首先评估LL-37从PU泡沫的释放。在振荡条件下将每个包含25μg LL-37的1x1cm PU泡沫块温育在3ml PBS中，并在多个时间点(10、20、45、120分钟，和24小时)采集样品以通过ELISA测量LL-37的存在。图1中所示结果证明，当肽配制在PBS或乙醇中时，出现LL-37从PU泡沫的快速释放。释放在温育24小时后达到30％的最大值。当将LL-37分别配制在半乳糖脂(乙醇或PBS溶液)或泊洛沙姆(Lutrol)中时，没有观察到释放或观察到少量释放(1％)(数据未显示)。

在涂覆到可商购的伤口愈合敷料时，配制到PBS中的LL-37也能被释放(图2)。与包含25μg LL-37/cm²的其他敷料相比，从包含5μg LL-37/cm²的Hydrocoll产品(24小时后25％释放)观察到最佳释放。其他敷料，Alginate Felt、Mepilex和Melodin分别释放约10％、5％和2％的LL-37。

可从干燥并再水合的形成凝胶的赋形剂释放LL-37

将LL-37的水溶液(100μg/ml)与多种形成凝胶的产品混合，包被到玻璃表面上，干燥，随后在3ml PBS中再水合24小时。通过ELISA评价每份再水合凝胶中存在的LL-37，结果显示在图3中。不同凝胶释放的LL-37量不同，其中甲基纤维素是LL-37释放最高的凝胶(32％)。

为了评估凝胶的量是否影响LL-37的释放效率，进行试验，其中使用不同的凝胶：LL-37比例包被的玻璃小瓶(图4)。在这种情况下，使用甲基纤维素凝胶。将单独的LL-37(0∶1)在玻璃小瓶上干燥，以作为对照。在使用包含1％BSA的3ml PBS使干燥凝胶再水合后，通过ELISA测量LL-37的存在。惊人的是，凝胶的量越大，所得LL-37的释放越多(几乎20％的释放)，表明向LL-37溶液中添加凝胶不仅无害，反而实际上有利于其从装置/支持物(本文中为玻璃)的释放。因此，与在PBS中添加LL-37并干燥然后进行释放试验的情况相比，添加甲基纤维素增加了LL-37从固体支持物的释放。

释放的LL-37保持了其生物活性

一旦从各种装置释放出LL-37，立即使用趋化性试验评估LL-37的功能性，其中所述趋化性试验评估LL-37吸引人细胞的能力。由于在正常伤口愈合过程中早期出现炎性细胞的募集(Shai and Maibach 2005)，因此趋化性是伤口愈合研究中的重要相关功能。此外，LL-37表现出多种生物活性，包括趋化性能力(Kai-Larsen and Agerberth 2008)。

在温育1.5小时后，评价多个释放样品(表1)吸引PBMC(5x10⁵个细胞/ml)的能力。

表1：接受趋化性能力评估的样品列表

^*有关样品的完整描述参见材料和方法一节中“LL-37的配制”。

图5所示的结果证明，与分别从未处理的PU和未修饰的***树胶释放的样品相比，从用含LL-37的PBS包被的PU泡沫以及从与LL-37混合的***树胶释放的样品显著吸引了更多的PBMC。用包含LL-37的泊洛沙姆(Lutrol)包被的PU泡沫具有趋化性活性提高的趋势；然而此提高并不显著(p＝0.054)。此结果表明，LL-37包被的泡沫或将LL-37配制到凝胶中可将LL-37释放到悬液中，并且所释放的肽保持其生物活性。

为了证实这些结果并排除供体特异性的结果，使用来自不同捐赠者的血液进行二次试验。在这种情况下，评估从已吸收含LL-37的PBS(25μgLL-37/cm²)的两块PU泡沫的释放(图6)。因为已知一个样品包含高量的LL-37(4,500ng/ml)，所以还评估了稀释的该样品(1/4)的趋化性能力。

结论

结果证明，在与含水溶液接触时，可从预负载并干燥的敷料释放具有生物活性的LL-37。此外，如本文通过3μm大小孔的活性迁移所示例，从敷料释放的生物活性LL-37增强了白细胞的功能。

参考文献

Carretero，M.，M.J.Escamez，et al.(2008).″In vitro and in vivo woundhealing-promoting activities of human cathelicidin LL-37.″J Invest Dermatol128(1)：223-36.

De，Y.，Q.Chen，et al.(2000).″LL-37，the neutrophil gtanule-and epithelialcell-derived cathelicidin，utilizes formyl peptide receptor-like 1(FPRL 1)as areceptor to chemoattract human peripheral blood neutrophils，monocytes，and Tcells.″J Exp Med 192(7)：1069-74.

Durr，U.H.，U.S.Sudheendra，et al.(2006).″LL-37，the only humanmember of the cathelicidin family of antimicrobial peptides.″Biochim Biophys Acta 1758(9)：1408-25.

Heilborn，J.D.，M.F.Nilsson，et al.(2003).″The cathelicidin anti-microbialpeptide LL-37 is involved in re-epithelialization of human skin wounds and islacking in chronic ulcer epithelium.″J Invest Dermatol 120(3)：379-89.

Kai-Larsen，Y.and B.Agerberth(2008).″The role of the multifunctionalpeptide LL-37 in host defense.″Front Biosci 13：3760-7.

Kaplan，S.S.，R.E.Basford，et al.(1990).″Biomaterial associatedimpairment of local neutrophil function.″ASAIO Trans 36(3)：M172-5.

Lindgreen，P.(2004).″Development of LL37 ELISA for LL37Quantificationi n Human and Minipig Serum(R8).″76.

Nagaoka，I.，H.Tamura，et al.(2006).″An antimicrobial cathelicidin peptide，human CAP18/LL-37，suppresses neutrophil apoptosis via the activation offormyl-peptide receptor-like 1 and P2X7.″J Immunol 176(5)：3044-52.

Shai，A.and H.I.Maibach(2005).Wound healing and ulcers of the skin，Springer.

Shaykhiev，R.，C.Beisswenger，et al.(2005).″Human endogenous antibioticLL-37 stimulates airway epithelial cell proliferation and wound closure.″Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 289(5)：L842-8.

Sieber，V.K.，W.R.Otto，et al.(1995).″Cytotoxicity of wound dressingmaterials assessed using cultured skin equivalents.″Burns 21(4)：249-54.

Tokumaru，S.，K.Sayama，et al.(2005).″Induction of keratinocyte migrationvia transactivation of the epidermal growth factor receptor by the antimicrobialpeptide LL-37.″J Immunol 175(7)：4662-8.

Claims

1.伤口护理产品，其包含伤口护理材料和具有伤口愈合性能的多肽。

2.如权利要求1所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

3.如权利要求1或2所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料选自由藻酸盐、无定形水凝胶、片状水凝胶、水性纤维、泡沫、水状胶体、基于胶原的材料、基于透明质酸的材料、聚糖酐、聚糖酐/卡地姆和氧化再生纤维素及其混合物组成的组。

4.如权利要求3所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含藻酸盐或由藻酸盐组成。

5.如权利要求4所述的伤口护理产品，其为干燥无纺布片、冻干片、带或绳的形式。

6.如权利要求1至5中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品用于治疗高度渗出的伤口。

7.如权利要求3所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含无定形水凝胶或由无定形水凝胶组成。

8.如权利要求7所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶包含一种或多种形成水凝胶的聚合物，所述形成水凝胶的聚合物选自由合成聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇、泊洛沙姆嵌段共聚物等；半合成聚合物，例如纤维素醚，包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、甲基羟丙基纤维素和乙基羟乙基纤维素等；天然胶，例如***树胶、角叉菜胶、壳聚糖、果胶、淀粉和黄原胶等；和藻酸盐组成的组。

9.如权利要求8所述的伤口护理产品，其中所述一种或多种形成水凝胶的聚合物溶于水溶剂中。

10.如权利要求9所述的伤口护理产品，其中所述水溶剂选自由水、盐水、缓冲液和水/丙二醇组成的组。

11.如权利要求8所述的伤口护理产品，其中所述一种或多种形成水凝胶的聚合物溶于非水溶剂中。

12.如权利要求11所述的伤口护理产品，其中所述非水溶剂选自由甘油、丙二醇和聚乙二醇组成的组。

13.如权利要求7至12中任一项所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶是粘性凝胶。

14.如权利要求7至13中任一项所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶包含在管内或敷药器内。

15.如权利要求7至14中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品用于治疗无渗出的伤口。

16.如权利要求3所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含片状水凝胶或由片状水凝胶组成。

17.如权利要求16所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶包含一种或多种形成水凝胶的聚合物，所述形成水凝胶的聚合物选自由合成聚合物，例如聚氨酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇和泊洛沙姆嵌段共聚物等；半合成聚合物，例如纤维素醚，包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、甲基羟丙基纤维素和乙基羟乙基纤维素等；天然胶，例如***树胶、角叉菜胶、壳聚糖、果胶、淀粉和黄原胶等；和藻酸盐组成的组中。

18.如权利要求16或17所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶包含甲基纤维素或由甲基纤维素组成。

19.如权利要求16或17所述的伤口护理产品，其中所述水凝胶包含***树胶(***胶)或由***树胶(***胶)组成。

20.如权利要求16或17所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含水状胶体敷料或由水状胶体敷料组成。

21.如权利要求16至20中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品用于治疗无渗出的伤口。

22.如权利要求3所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含水性纤维或由水性纤维组成。

23.如权利要求22所述的伤口护理产品，其中所述水性纤维包含羧甲基纤维素或由羧甲基纤维素组成。

24.如权利要求2所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含泡沫或由泡沫组成。

25.如权利要求24所述的伤口护理产品，其中所述泡沫包含聚氨酯或由聚氨酯组成。

26.如上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是cathelicidin或者其片段、变体或融合体，所述片段、变体或融合体至少部分保留亲本cathelicidin的伤口愈合性能。

27.如权利要求26所述的伤口护理产品，其中所述cathelicidin选自由人阳离子抗微生物蛋白(hCAP18)及其C-末端肽LL-37、PR39、prophenin和indolicidin组成的组。

28.如权利要求26或27所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37或者其片段、变体或融合体，所述片段、变体或融合体至少部分保留LL-37的伤口愈合性能。

29.如权利要求28所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37片段或包含LL-37片段，所述LL-37片段选自由LL-36、LL-35、LL-34、LL-33、LL-32、LL-31、LL-30、LL-29、LL-28、LL-27、LL-26、LL-25、LL-24、LL-23、LL-22、LL-21和LL-20组成的组。

30.如权利要求28或29所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是乙酸盐。

31.如上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是在PBS或乙醇中配制的。

32.如上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料与所述具有伤口愈合性能的多肽的重量比等于或大于10∶1，例如等于或大于30∶1、100∶1、1000∶1、2000∶1、5000∶1、10000∶1或大于50000∶1。

33.如权利要求32所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料与所述具有伤口愈合性能的多肽的重量比等于或大于30∶1。

34.如权利要求32或33所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含甲基纤维素凝胶或由甲基纤维素凝胶组成。

35.如权利要求32或33所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

36.如权利要求1至35中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含聚氨酯泡沫或由聚氨酯泡沫组成，并且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

37.如权利要求1至35中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含水状胶体敷料或由水状胶体敷料组成，并且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

38.如权利要求1至35中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含Alginate Felt或由Alginate Felt组成，并且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

39.如权利要求1至35中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含甲基纤维素凝胶或由甲基纤维素凝胶组成，并且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

40.如权利要求1至35中任一项所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料包含***树胶水凝胶(***胶)或由***树胶水凝胶(***胶)组成，并且所述具有伤口愈合性能的多肽是LL-37。

41.如上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品还包含抗微生物多肽。

42.如权利要求41所述的伤口护理产品，其中所述抗微生物多肽选自由防御素、短杆菌肽S、爪蟾抗菌肽、天蚕素、富组蛋白、hyphancin、肉桂霉素、burforin 1、parasin 1和鱼精蛋白，以及至少部分保留亲本蛋白质抗微生物活性的上述多肽的片段、变体和融合体组成的组。

43.如上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述具有伤口愈合性能的多肽在使用中缓慢释放。

44.如权利要求43所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品中包含的具有伤口愈合性能的多肽在使用的最初24小时内的释放小于50％，例如小于40％、30％、20％、10％或5％。

45.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其形式选自由干燥无纺布片、冻干片、固体凝胶片、带、绳、泡沫和粘性凝胶组成的组。

46.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品是经灭菌的并包装在不透过微生物的容器中。

47.如权利要求46所述的伤口护理产品，其中所述不透过微生物的容器是管或其他敷药器。

48.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品用于使伤口环境保持湿润。

49.如权利要求48所述的伤口护理产品，其用于向伤口环境加湿。

50.如权利要求48所述的伤口护理产品，其用于从伤口环境中除去湿气。

51.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品能够阻止、消除、减轻或者减少伤口环境中的微生物生长。

52.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品能够增强上皮再生和/或伤口上皮和/或伤口基质的愈合。

53.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品能够通过非裂解机制增强上皮和/或基质细胞的增殖和/或迁移。

54.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品的大小和形状被调整至适合伤口部位。

55.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理产品基本为平面的(即平的)。

56.如权利要求55所述的伤口护理产品，所述产品的厚度等于或小于20mm，例如等于或小于10mm、8mm、6mm、5mm、4mm、3mm、2mm或1mm。

57.上述任一权利要求所述的伤口护理产品，其包含伤口护理材料层和含有具有伤口愈合性能的多肽的膜，其中所述含有具有伤口愈合性能的多肽的膜贴在所述伤口护理材料层朝向伤口的一侧。

58.如权利要求57所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料层包含聚氨酯泡沫敷料、水状胶体片敷料、水凝胶片或非水凝胶片，或者由聚氨酯泡沫敷料、水状胶体片敷料、水凝胶片或非水凝胶片组成。

59.如权利要求57或58所述的伤口护理产品，其中所述伤口护理材料层能够吸收伤口渗出物。

60.如权利要求57至59中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜直接贴到所述伤口护理材料层的表面。

61.如权利要求57至59中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜通过一个或多个中间层贴间接到所述伤口护理材料层朝向伤口的一侧。

62.如权利要求57至61中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜是水溶性的。

63.如权利要求57至62中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜的厚度等于或小于1mm，例如等于或小于0.8mm、0.6mm、0.4mm、0.2mm、0.1mm或0.05mm。

64.如权利要求57至63中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜覆盖了所述伤口护理材料层一侧的部分(而非全部)。

65.如权利要求64所述的伤口护理产品，其中所述膜覆盖了所述伤口护理材料层的中心部分，其周围是暴露伤口护理材料层的周边区。

66.如权利要求57至65中任一项所述的伤口护理产品，其中所述膜是穿孔的。

67.如权利要求61所述的伤口护理产品，其中所述中间层优选具有小于含有具有伤口愈合性能的多肽的膜的溶解速率。

68.如权利要求61或67所述的伤口护理产品，其中所述一个或多个中间层是穿孔的。

69.如权利要求68所述的伤口护理产品，其中所述中间层的穿孔与膜的穿孔重合(即孔与孔对准)。

70.如权利要求68所述的伤口护理产品，其中所述中间层的穿孔偏离膜的穿孔。

71.如权利要求57至70中任一项所述的伤口护理产品，其选自：

(a)能够吸收伤口渗出物的伤口护理产品，其包含聚氨酯泡沫敷料和含有LL-37的无穿孔水溶性膜，其中所述含有LL-37的无穿孔水溶性膜贴在所述聚氨酯泡沫敷料与伤口接触的一侧；

(b)能够吸收伤口渗出物的伤口护理产品，其包含聚氨酯泡沫敷料和含有LL-37的穿孔水溶性膜，其中所述含有LL-37的穿孔水溶性膜贴在所述聚氨酯泡沫敷料与伤口接触的一侧；

(c)(a)或(b)的伤口护理产品，其中所述膜通过无穿孔水溶性中间层(水溶性小于所述膜)间接地贴到所述聚氨酯泡沫敷料上；和

(d)(a)或(b)的伤口护理产品，其中所述膜通过穿孔水溶性中间层(水溶性小于所述膜)间接地贴到所述聚氨酯泡沫敷料上。

72.上述任一权利要求所述的伤口护理产品在治疗伤口中的应用。

73.如权利要求72所述的应用，其中所述伤口是慢性伤口。

74.如权利要求73所述的应用，其中所述慢性伤口选自静脉性溃疡、糖尿病溃疡和压力性溃疡组成的组。

75.如权利要求72至74中任一项所述的应用，其中所述伤口护理产品被直接施用到伤口表面。

76.治疗伤口的方法，其包括使所述伤口接触权利要求1至71中任一项所述的伤口护理产品。

77.生产权利要求1至71中任一项所述的产品的方法，其包括将伤口护理材料与具有伤口愈合性能的多肽组合。

78.如权利要求77所述的方法，其包括将所述伤口护理材料与所述具有伤口愈合性能的多肽混合，以使所述多肽分散在整个伤口护理材料中。

79.如权利要求77所述的方法，其包括将具有伤口愈合性能的多肽涂覆到所述伤口护理材料的暴露面。

80.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含藻酸盐伤口护理材料的伤口护理产品，其中在所述伤口护理材料的制造之前或期间添加所述具有伤口愈合性能的多肽。

81.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含藻酸盐伤口护理材料的伤口护理产品，其中在所述伤口护理材料的制造之后施加所述具有伤口愈合性能的多肽，然后为干燥步骤。

82.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含水性纤维伤口护理材料的伤口护理产品，其中在所述伤口护理材料的制造之前或期间添加所述具有伤口愈合性能的多肽。

83.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含水性纤维伤口护理材料的伤口护理产品，其中在所述伤口护理材料的制造之后施加所述具有伤口愈合性能的多肽，然后为干燥步骤。

84.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含无定形水凝胶伤口护理材料的伤口护理产品，其中在将形成凝胶的聚合物与溶剂混合以形成水凝胶期间或之后添加所述具有伤口愈合性能的多肽。

85.如权利要求77所述的方法，其用于生产包含水凝胶片伤口护理材料的伤口护理产品，其中在将形成凝胶的聚合物与溶剂混合期间或之后，但在形成水凝胶片之前添加所述具有伤口愈合性能的多肽。

86.如权利要求77所述的方法，其包括将含有具有伤口愈合性能的多肽的膜施加到伤口护理材料层的一侧。

87.伤口护理试剂盒，其包含权利要求1至25中任一项所定义的伤口护理材料和权利要求26至41中任一项所定义的具有伤口愈合性能的多肽。

88.伤口护理产品，其基本如本文中参考说明书和附图所述。

89.权利要求1至71中任一项所述的伤口护理产品的应用，其基本如本文中参考说明书和附图所述。

90.伤口治疗方法，其基本如本文中参考说明书和附图所述。

91.生产权利要求1至71中任一项所述的伤口护理产品的方法，其基本如本文中参考说明书和附图所述。

92.伤口护理试剂盒，其基本如本文中参考说明书和附图所述。