CN101716197B

CN101716197B - 一种南方红豆杉叶片的提取物及制备方法

Info

Publication number: CN101716197B
Application number: CN2009101570340A
Authority: CN
Inventors: 王强; 阮晓; 张莺莺
Original assignee: TAIKANG TAXUS CHINENSIS BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd NINGBO CITY
Current assignee: TAIKANG TAXUS CHINENSIS BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd NINGBO CITY
Priority date: 2009-12-30
Filing date: 2009-12-30
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2029-12-30
Also published as: CN101716197A

Abstract

本发明公开了一种南方红豆杉叶片的提取物及制备方法，该提取物为淡黄色粉末，该粉末中含有重量含量为65～70％的紫杉黄酮，紫杉黄酮包括下述5种成份：3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，紫杉黄酮中上述5种成分的总重量含量为40～60％，该提取物以新鲜的南方红豆叶片为原料，经过烘干、粉碎过筛、浸入乙醇溶剂、搅拌下超声提取、提取液减压浓缩去醇、氯仿萃取脱脂、水相浓缩干燥的制备方法制得；本发明是一种具有改善心微循环，抗心律失常，降低心肌氧耗等，对心血管***疾病的治疗和保健作用的南方红豆杉叶片的提取物和能耗低，提取时间短，杂质少，提取率较高的制备方法。

Description

一种南方红豆杉叶片的提取物及制备方法

技术领域

本发明涉及植物有效成分及提取技术，具体涉及一种南方红豆杉叶片的提取物及制备方法。

背景技术

从红豆杉属(genus Taxus)植物中分离获得的紫杉醇是第一种有效的天然抗癌药物，紫杉醇已广泛用于各类肿瘤的临床治疗，并越来越多地受到世界各国的重视。红豆杉药疗成份中除含有紫杉醇外，还含有一类具有重要药理活性的物质：紫杉黄酮。黄酮类化合物(Flavonoids)又称生物类黄酮(bioflavonoids)是一类低分子植物次生代谢物，广泛分布于蔬菜、水果和药用植物中。这类化合物有共同的母核C₆-C₃-C₆结构，目前已从植物材料中分离得到了几百种黄酮类化合物，而且新的化合物还在不断地被发现。按照取代基及其位置不同，可将其分为I苷元-芹菜素(Apigenin)为主体、II苷元-木犀草素(Luteolin)为主体、III苷元-山奈酚(Kaempferol)为主体、IV苷元-槲皮素(Quercetin)为主体、V柚皮素(Naringin)为主体等的双氢黄酮苷类(Bi-hydroflavonoids)化合物：

黄酮类物质的主要药理学作用为：对心脏血管的作用、抗炎及抗免疫作用、抗微生物作用、对消化性溃疡的作用和抗肿瘤作用。抗肿瘤作用研究发现，黄酮类化合物是通过促进肿瘤坏死因子、抑制致癌剂及抗氧化等多种途径发挥疗效的。目前从红豆杉中提取的紫杉黄酮及提取方法还未见专利和文献报道。

植物有效成分提取技术已有近5000年的历史，传统提取方法按照提取过程对能量需求方式的不同可以分为两大类。一类是加热提取法，主要有煎煮提取法、回流提取法和索氏提取法等不同方式；另一类是浸泡提取法，主要有浸渍提取法和渗漉提取法两种。传统提取方法存在着提取时间长、工艺繁复、效率低、工业污染大和对目标化合物提取无选择性等缺陷。近年来用超声波辅助提取植物有效成分重要的核心技术手段，超声波辅助提取技术是利用超声振动增加溶剂进入植物细胞的渗透性，强化被提取物在两相介质之间的传质速率。超声波振动还能产生空化气泡，气泡剧烈运动对细胞形成强大的剪切力，特别是气泡崩溃时形成局部冲击波和高速射流作用，能使植物细胞破裂，加速细胞内容物的释放；超声波萃取可在较低温度范围内进行，也能有效防止植物中目的成分降解，对萃取物具有高的选择性，提取时间短，萃取物纯度和萃取率均较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有改善心微循环，抗心律失常，降低心肌氧耗等，对心血管***疾病的治疗和保健作用的南方红豆杉叶片的提取物。

本发明还提供了该提取物的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种南方红豆杉叶片的提取物，该提取物为淡黄色粉末，该粉末中含有重量含量为65～70％的紫杉黄酮，所述紫杉黄酮包括下述5种成份：3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，所述紫杉黄酮中上述5种成分的总重量含量为40～60％，该提取物以新鲜的南方红豆叶片为原料，经过烘干、粉碎过筛、浸入乙醇溶剂、搅拌下超声提取、提取液减压浓缩去醇、氯仿萃取脱脂、水相浓缩干燥步骤制得。

紫杉黄酮含量检测方法为根据Al³⁺-芦丁二元络合物荧光光度法分析，激发光谱带宽3nm，激发波长λ_ex436nm，发射光谱带宽5nm，λ_em483nm，芦丁标准溶液荧光强度对相应浓度作图定量。

3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素5种成份的总含量的测定方法采用高效液相色谱法分析，色谱柱为Varian，Microsorb-MV100C18，检测波长360nm，流动相为甲醇/水＝55∶45，磷酸调pH＝2.5；柱温为25℃，流速为1.0ml/min，进样量为10μl，标准物质外标法定量。

该提取物为心血管***药物或保健食品的有效组成成份，即可以为心血管***药物的颗粒剂、片剂、胶囊、滴丸、软胶囊或针剂的有效成份，也可以为心血管***保健食品的有效成份。

一种南方红豆杉叶片的提取物的制备方法，包括下述步骤：

1、将新鲜南方红豆杉叶片，在温度为55～65℃条件下烘干20～30小时；

2、将上述烘干的南方红豆杉叶片粉碎成能通过0.45μm筛的为提取材料，称重；

3、将上述提取材料装入超声萃取釜中，再加入浓度为40～60％的乙醇，提取材料与乙醇的重量体积比(Kg/L)为1∶15～17；

4、接着在温度为35～55℃条件下，边搅拌边用它激式超声发声和径向振动柱状换能器超声提取20～30分钟，超声提取方式为每次超声3分钟和间隔2分钟超声一次，超声波功率为100W，超声频率为30-70kHz，超声提取完成后过滤得到提取液；它激式超声发声和径向振动柱状换能器为现有技术，其结构和工作原理在此不作介绍；

5、在上述提取液先减压浓缩去醇相，再将去醇相后的溶液用3倍体积的氯仿萃取脱脂，脱脂完毕水相浓缩干燥，得到含有紫杉黄酮的南方红豆杉叶片的提取物。减压浓缩去醇、氯仿萃取脱脂、浓缩干燥都是本领域常规技术，在此不详述。

与现有技术相比，本发明的优点在于一种南方红豆杉叶片的提取物，该提取物为淡黄色粉末，该粉末中含有重量含量为65～70％的紫杉黄酮，紫杉黄酮包括下述5种成份：3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，紫杉黄酮中上述5种成分的总重量含量为40～60％，该提取物以新鲜的南方红豆叶片为原料，经过烘干、粉碎过筛、浸入乙醇溶剂、搅拌下超声提取、提取液减压浓缩去醇、氯仿萃取脱脂、水相浓缩干燥步骤制得；该提取物可以抗血小板聚集和抗体外血栓形成，有活血化瘀改善心脏微循环的作用，也有抗心律失常，降低心肌氧耗的作用，同时能减慢心率、降低血压、减少冠脉阻力等作用，有利于心绞痛的缓解。因此本发明是一种具有改善心微循环，抗心律失常，降低心肌氧耗等，对心血管***疾病的治疗和保健作用的南方红豆杉叶片的提取物。本发明的制备方法具有无需高温，能耗低，提取时间短，杂质少，提取率较高的优点，叶片中紫杉黄酮的提取率达到98.76％。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例

将新鲜南方红豆杉叶片50kg，经55～65℃烘干20～30h，粉碎，过0.45μm筛，装入超声萃取釜中，加入40～60％乙醇750～850L，搅拌混合，于35～55℃温度条件下，边气升式搅拌边用它激式超声发声和径向振动柱状换能器超声提取20～30min，超声波功率为100W，超声频率为33kHz，超声提取方式为每次超声3min，每间隔2min超声一次，经总共4～6次超声提取后过滤，得到提取液，提取液先减压浓缩去醇，再将去醇相后的溶液用3倍体积的氯仿萃取脱脂，脱脂后干燥得到含有紫杉黄酮的南方红豆杉叶片的提取物，该提取物中含有重量含量为65～70％的紫杉黄酮，紫杉黄酮中包括下述5种成份：3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，紫杉黄酮中上述5种成分的总重量含量为40～60％。紫杉黄酮含量采用Al³⁺-芦丁二元络合物荧光光度法分析测得。5种成份的总含量采用高效液相色谱法测定。该实施例中南方红豆杉叶片中紫杉黄酮提取率可达98.76％。

实验例1

以SD大鼠为实验对象，每日予上述实施例中的提取物4.4g(生药)/kg(鼠)为给药组，用生理水溶解灌胃给药，7天后与对照组(生理盐水等容量灌胃7天)同时静脉取血，以腺苷二磷酸钠盐(ADP)为诱导剂，按Born比浊法测各组血小板聚集百分率，并同时取心脏血，在血栓形成仪上形成血栓，结果显示，给药组与对照组比较，1min血小板聚集率有明显减小，差异有统计学意义(P＜0.05)，血栓长度也有明显缩短(P＜0.05)。说明提取物能有效抑制ADP诱导的血小板聚集和抗体外血栓形成，有活血化瘀，改善微循环的作用。

实验例2

以大白鼠为实验对象，每日予上述实施例中的提取物4.4g(生药)/kg(鼠)为给药组，用生理水溶解灌胃给药，8天后与对照组(生理盐水等容量灌胃8天)同时注射肾上腺素和氯化钙诱发心律失常，结果给药组与对照组相比有明显的拮抗心律失常作用(P＜0.05)。在对心功能的影响的实验中发现，提取物静脉注射能显著拮抗去甲肾上腺素升高血压的作用，并对组织胺引起血压降低有一定的回升作用，其中对反映心脏前后负荷的LVEDP、BP指标均明显降低，而HR无明显变化，这种作用是通过扩张阻力血管和容量血管，使动脉血压和左室舒张末压下降，降低心脏的前后负荷。

实验例3

以犬为实验对象，予上述实施例中的提取物4.4g(生药)/kg(犬)用生理水溶解灌胃给药为给药组，等容量生理盐水灌胃为对照组，灌胃后给药组与对照组同时分离冠状动脉左旋支以MFV-110型电磁流量计探头测冠脉血流量并计算冠脉阻力，以Unistat型血氧计测心肌耗氧量。结果显示，给药组5min心肌耗氧量，耗氧指数明显降低，给药后45min心肌耗氧量下降最显著，与给药前及对照组比皆有显著性差异(P＜0.01和(P＜0.001)，说明提取物对犬冠脉血流量无明显影响。大剂量组有降低冠脉阻力的作用，与给药前及对照组比较皆有显著性差异(P＜0.05)，说明提取物可降低心肌氧耗，维持心肌对能量的需求，由于并不减少冠脉血流量，因此提高了心脏的泵功效率。同时该药减慢心率、降低血压、减少冠脉阻力等作用，也有利于心绞痛的缓解。

Claims

1.一种南方红豆杉叶片的提取物，其特征在于该提取物为淡黄色粉末，该粉末中含有重量含量为65～70％的紫杉黄酮，所述紫杉黄酮包括下述5种成份：3-O-芦丁-槲皮素、3-O-芦丁-山奈酚、3-O-芦丁-杨梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，所述紫杉黄酮中上述5种成分的总重量含量为40～60％，该提取物以新鲜的南方红豆叶片为原料，经过烘干、粉碎过筛、浸入浓度为40～60％的乙醇溶剂、搅拌下超声提取、提取液减压浓缩去醇、氯仿萃取脱脂、水相浓缩干燥步骤制得。

2.权利要求1所述的一种南方红豆杉叶片的提取物，其特征在于该提取物为心血管***药物或保健食品的有效组成成份。

3.权利要求1所述的一种南方红豆杉叶片的提取物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

1)将新鲜南方红豆杉叶片，在温度为55～65℃条件下烘干20～30小时；

2)将上述烘干的南方红豆杉叶片粉碎成能通过0.45μm筛的为提取材料，称重；

3)将上述提取材料装入超声萃取釜中，再加入浓度为40～60％的乙醇，提取材料与乙醇的重量体积比(Kg/L)为1∶15～17；

4)接着在温度为35～55℃条件下，边搅拌边用它激式超声发声和径向振动柱状换能器超声提取20～30分钟，超声提取方式为每次超声3分钟和间隔2分钟超声一次，超声波功率为100W，超声频率为30-70kHz，超声提取完成后过滤得到提取液；

5)在上述提取液先减压浓缩去醇相，再将去醇相后的溶液用3倍体积的氯仿萃取脱脂，脱脂完毕水相浓缩干燥，得到含有紫杉黄酮的南方红豆杉叶片的提取物。