CN101707982A - 一种福氏紫薇组织培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne组织培养繁殖方法，包括以下步骤：首先进行福氏紫薇茎段外植体消毒，消毒后接种于诱导培养基中进行芽的分化诱导，控制培养温度在黑暗中培养，然后在光照下进行正常培养，将所得福氏紫薇嫩梢切割后接入继代培养基中进行继代培养，最后将福氏紫薇无菌苗接入生根培养基中进行生根培养，得到福氏紫薇无菌苗。通过该方法能够有效的解决福氏紫薇资源短缺的问题。
Description
技术领域
本发明涉及福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne.组织培养繁殖方法，属于木本植物种苗繁殖的技术领域。
背景技术
福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne.属千屈菜科、紫薇属Lagerstroemia，落叶小乔木，高3～5米。树干光滑，棕红褐色(7～8月间树干脱皮时)。奇数羽状复叶，小叶5～9枚，椭圆形，革质。圆锥花序着生枝顶，花乳白色，花期6～7月。果近球形，果期9～10月。阳性树种，稍耐阴，喜温暖湿润的环境，耐干旱，喜肥沃、较湿润、排水良好的石灰性土壤，较耐水湿。是集观树形、树姿、树干、叶片、花及花序为一身的优良园林观赏树种，可用作行道树、庭荫树、小区绿化的骨干树种等。
本种树冠圆伞形，树干光洁，斑驳的树皮色泽似血，花序大而美丽，为不可多得观花、观茎干树种，可孤植或丛植于草坪边缘、湖畔、建筑物前，或列植于道路两侧，生长较快，耐修剪，抗污染，适宜城市街道、广场绿地、住宅区绿地、公路绿岛等景观绿化。
目前该品种种苗数量在国内非常少，相关研究表明福氏紫薇的种子繁殖和扦插繁殖也十分困难，因此福氏紫薇资源非常缺乏，且应用量很大。
木本植物组织培养研究起步于20世纪50年代初，直到70年代后期才得到较大的发展。目前，不完全统计有90多属300多种木本植物经组织培养获得再生植株。而关于紫薇属植物组织培养的研究，国内外报道很少。仅见杨彦伶等报道以紫薇(Lagerstroemia indica)嫩茎为外植体进行快速繁殖(见林业科技开发，2005年2期，紫薇组织培养技术)，而关于福氏紫薇的组织培养研究尚未见有报道。
综上所述，本发明一种福氏紫薇组织培养繁殖方法是解决福氏紫薇资源短缺的重要途径之一，对福氏紫薇的开发和推广利用都具有着非常重要的意义。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是公开福氏紫薇的组织培养繁殖方法。
本发明的目的是解决福氏紫薇资源短缺。
本发明一种福氏紫薇组织培养繁殖方法采用如下的技术方案：
A)芽的分化诱导：选取福氏紫薇的一年生扦插苗外植体消毒，用清水冲洗干净，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液摇床上振荡消毒15-20min，流水冲洗20-30min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒50-60s，立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次振荡3-5min。取消毒后的外植体切割的茎段1.0-2cm长，其中每个茎段带一个腋芽，将茎段接种于诱导培养基中进行芽的分化诱导。诱导培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.1mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0。控制培养温度在20-26℃，首先在黑暗中培养20-26h，然后进行光照时间10-16h/天培养25-35天，得福氏紫薇嫩梢。
B)继代培养与增殖：将A)中所得福氏紫薇嫩梢切割后接入继代培养基；MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0，进行继代培养25-35天，培养温度20-26℃，光照时间10-16h/天，光照强度为1600-2000Ix。培养25-35天，所得福氏紫薇无菌苗株，再切割后接入继代培养基：MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0，进行继代培养25-35天，培养温度20-26℃，光照时间10-16h/天，光照强度为1600-2000Ix，得到继代无菌苗带8-11个腋芽的茎段。
C)根的诱导：将继代培养的无菌苗切成带3个腋芽的小段，接入生根壮苗培养基MS+6-BA0.05mg/L+IBA1.0mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0，控制温度在20-26℃，光照时间10h/天，光强2000lx的条件下，进行培养10d-15d后生根率达80％，至此获得带根无菌苗株。
本发明相对现有技术的有益效果为：采用组织培养的方法对福氏紫薇进行繁殖，能够有效的得到大量的福氏紫薇无菌苗，解决福氏紫薇资源短缺的问题；通过对外植体、诱导培养基、继代培养基及生根培养基的选取，能够使得萌发率达到60-80％，增殖率达到10-15倍，生根率达到80％，能够高效的得到福氏紫薇无菌苗。
具体实施方式
实施例一
1、选取50株茁壮的福氏紫薇一年生扦插苗。剪取地上嫩梢部分，去除叶片，以茎段为外植体，每茎段带一腋芽，长约2cm。将外植体用清水冲洗干净，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液摇床上振荡消毒15-20min。流水冲洗20-30min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒50-60s，立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次振荡3-5min。将消毒灭菌过的外植体两端分别切除0.5cm，以去除受伤部分。接入诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.1mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，同时控制培养基pH为5.8-6.0，每瓶接3株，共接入70瓶，在温度20-26℃，光照时间10h/天，光强2000lx的条件下，进行培养。
2、外植体接入培养基5天后，腋芽开始萌动。至30天时，萌发率达60％，共获得126株不带根的初代无菌苗。无菌苗株高约4cm，每株茎上带有已萌动的腋芽3至6个。将叶片去除，主干切为带芽茎段，每段带一个腋芽。接入继代增殖培养基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，同时控制培养基pH为5.8-6.0，培养5天后，腋芽开始陆续出梢，30天后，增殖率达到11倍，即每株继代苗上平均含有11个已萌动的腋芽。
3、将第1次继代增殖得到的继代无菌苗切为带2至3个腋芽的茎段，得到茎段600段。进行第2次继代，5天后腋芽开始出梢，30天后得到平均带有8个腋芽的无菌苗580株。重复进行第3次继代，得到茎段2200段，30天后获得平均带有6个腋芽的继代无菌苗约2100株。
4、将经过3次继代的无菌苗切成带3个腋芽的小段，接入生根壮苗培养基MS+6-BA0.05mg/L+IBA1.0mg/L，共接入4200株，培养条件同上。培养10天后，开始生根，15天后生根率达80％，至此获得带根无菌苗3360株。
实施例二
1、选取30株茁壮的福氏紫薇一年生扦插苗。剪取地上部分，去除叶片，以茎段为外植体，每茎段带一腋芽，长约2cm。将外植体用清水冲洗干净，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液摇床上振荡消毒15-20min。流水冲洗20-30min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒50-60s，立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次振荡3-5min。将消毒灭菌过的外植体两端分别切除0.5cm，以去除受伤部分。接入诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.1mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，同时控制培养基pH为5.8-6.0，每瓶接3株，共接入50瓶。在温度20-26℃，光照时间16h/天，光强1600lx的条件下，进行培养。
2、外植体接入培养基5天后，腋芽开始萌动。至35天时，萌发率达70％，共获得105株不带根的初代无菌苗。无菌苗平均株高4.5cm，每株茎上带有已萌动的腋芽3至6个。将叶片去除，主干切为带芽茎段，每段带一个腋芽。接入继代增殖培养基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L加琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，同时控制培养基pH为5.8-6.0，培养5天后，腋芽开始陆续出梢，30天后，增殖率达到10倍，即每株继代苗上平均含有10个已萌动的腋芽。
3、将第1次继代增殖得到的继代无菌苗切为带2至3个腋芽的茎段，得到茎段510段。进行第2次继代，5天后腋芽开始出梢，30d后得到平均带有8个腋芽的无菌苗500株。重复进行第3次继代，得到茎段1900段，30天后获得平均带有6个腋芽的继代无菌苗约1800株。
4、将经过3次继代的无菌苗切成带3个腋芽的小段，接入生根壮苗培养基MS+6-BA0.05mg/L+IBA1.0mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，同时控制培养基pH为5.8-6.0，在温度20-26℃，光照时间10h/天，光强2000lx的条件下，进行培养，培养10天后开始生根，15天后生根率达81％，至此获得含根无菌苗4374株。
Claims (5)
1.一种福氏紫薇组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
A)芽的分化诱导：选取福氏紫薇的一年生扦插苗外植体消毒，取消毒后的外植体切割为1.0-2cm长的茎段，其中每个茎段带一个腋芽，将茎段接种于诱导培养基中进行芽的分化诱导，控制培养温度在20-26℃，首先在黑暗中培养20-26h，然后进行光照时间10-16h/天，培养25-35天，得福氏紫薇嫩梢；
B)继代培养与增殖：将步骤A)中所得福氏紫薇嫩梢切割后接入继代培养基中进行继代培养25-35天，培养温度20-26℃，光照时间10-16h/天，光照强度为1600-2000Ix，得到带8-11个腋芽的继代无菌苗；
C)根的诱导：将步骤B)所得经过继代的无菌福氏紫薇试管苗切成带3个腋芽的小段，接入生根培养基中进行生根培养10-15天，培养温度20-26℃，光照时间10-16h/天，光照强度为1600-2000Ix，至此获得含根无菌苗。
2.根据权利要求1所述的一种福氏紫薇组织培养繁殖方法，其特征在于，步骤A)中的外植体消毒过程为：用清水冲洗干净，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液摇床上振荡消毒15-20min，流水冲洗20-30min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒50-60s，立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次振荡3-5min。
3.根据权利要求1所述的一种福氏紫薇组织培养繁殖方法，其特征在于，步骤A)中采用的诱导培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.1mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0。
4.根据权利要求1所述的一种福氏紫薇组织培养繁殖方法，其特征在于，步骤B)中采用的继代培养基为：MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l，培养基pH为5.8-6.0。
5.根据权利要求1所述的一种福氏紫薇组织培养繁殖方法，其特征在于，步骤C)中采用的生根培养基为：MS+6-BA0.05mg/L+IBA1.0mg/L+琼脂6.5g/l，蔗糖30g/l。培养基pH为5.8-6.0。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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Granted publication date: 20110907 Termination date: 20121118 |