CN101822160B - 油茶组培继代芽嫁接育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的一种油茶组培继代芽嫁接育苗方法，是以优质油茶组培继代芽为接穗，油茶种子萌发胚芽为砧木，通过劈接或斜接嫁接方法，在温度10～35℃，空气湿度100％，塑料薄膜密封的棚内培养出新的完整植株。砧木种子用润沙在4～5℃冰库内储存，能适应嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，分批催芽，成活率为75％～95％。本方法具有繁殖速度快、育苗量大、方法简单、操作容易，材料消耗少，同时子代能够保持母株的优良遗传特性，并解决了已有的油茶无性繁殖方法如扦插繁殖、芽苗砧嫁接育苗所需要大量的良种枝条和良种芽条问题，能满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系优质高产油茶种苗的需求。
Description
技术领域：
本发明属于植物无性快繁技术领域，涉及一种油茶组培继代芽嫁接育苗方法。
背景技术：
油茶(Camellia oleifera Abel)是山茶科(Theacae)山茶属(Camellia)植物，油茶种子含油量高，是我国特有的食用油料树种，与油橄榄、油棕，椰子并称世界四大食用木本油料树种，以其种子提取的茶油，油酸和亚油酸为主的不饱和脂肪酸含量占90％以上，与橄榄油相媲美，被誉为“东方橄榄油”。茶油中没有胆固醇，食后不会使人体血清中的胆固醇增加，不易引起人体血管硬化和血压增加，并耐储藏，不易酸败，不会产生引起人体致癌的黄曲霉素。近年国际粮农组织已将我国野生茶油，列为重点推广的健康型食用油。我国的油茶主产区，集中分布于广西、湖南、江西、浙江、福建、广东、湖北、贵州、安徽、云南、重庆、河南、四川和陕西等17个省区市。目前这些油茶主产地共有油茶林面积超过4500万亩，仅广西就有600万亩。国家***等三部门印发的《全国油茶产业发展规划(2009-2020年)》，提出将力争使我国油茶种植总规模达到7000万亩。在“十一五”期间，国家***利用农业综合开发项目资金，重点扶持建设50个油茶高产示范基地。
传统的油茶繁殖技术，将油茶种子直接播于苗床，培育1～2年，以裸根苗出圃，这是常规育苗方法。其不足之处是：1、林木良莠不齐，产量低，每亩产茶油仅3～4公斤；2、挂果晚，移栽造林后，需8年才能挂果，10午以上才能收获，15年以上才能进入丰产期；3、杭性弱，主要有炭疽病、软腐病和烟煤病等；4、繁殖苗木困难，采用种子直播繁殖成活率仅20％左右。
油茶的无性繁殖方法主要有接扦插繁殖、插叶育苗、芽苗砧嫁三种：扦插繁殖是无性繁殖中最简便易行的方法，是选取品种优良，粗壮通直、腋芽健全、叶片完整的1年生以内的春梢、夏梢做插穗育苗；油茶插叶育苗技术则是选择5～15年生的健壮母树，摘其向阳外缘树冠三分之一处的叶片，春插要摘过冬老叶，夏秋两季要选择当年生的基部叶，春秋季插叶面向南，夏插的叶面向北育苗；油茶芽苗砧嫁接技术是选普通油茶大粒种子，在室内沙床催芽育苗作嫁砧，选用生长粗壮、腋芽明显、无病虫危害的当年生枝条的饱满油茶芽作接穗，一穗一芽与苗砧嫁接。
中国专利CN1258434A的油茶高产无性系繁殖技术。是在现有油茶群体林中连续三年进行测产选优后无性系化建立优树收集圃，经过1～2年观测和连续4年测产，选择茶果产量高的优树建立高产无性系采稳固，然后采集枝条剪切成单个茶树芽稼接在油条籽培育成的芽苗上培育两年即成高产油茶树苗。
中国专利CN 101530063A的一种油茶无性系组培快繁方法。具体操作如下：(1)将获得的无菌苗转移到继代培养基上进行增殖，培养基用300ml的广口瓶分装，每瓶30ml，封口膜包扎，在121℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌20min。培养条件的筛选：在培养温度为25土2℃，光照1500～2000Lx，每日光照时间为12h的培养室中培养。(2)将增殖获得的无菌苗转移到壮苗培养基上进行壮苗，培养基用300ml的广口瓶分装，每瓶30ml，封口膜包扎，在121℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌20min。培养条件同(1)。(3)将无菌苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，并将其基部在KIBA溶液中浸泡，将苗木扦插于一次性塑料杯中，杯中基质由黄心土、炭化谷壳灰、细沙按一定比例配制，杯口使用封口膜覆盖保湿，将杯子置于具间歇喷雾设施的温室大棚中生根管理，温度保持20～30℃，喷雾间歇时间10分钟，喷雾时间10秒，生根率87％。其特征在于：植株的形成是在同一个体上，通过外源激素诱导，植株器官极性分化而形成。即利用芽器官在无菌，人为控制营养、温度和光照强度条件下，添加一定的外源激素，诱导生根而形成的。
中国专利CN 101611688A的油茶幼砧嫁接容器苗的繁殖方法。繁殖方法按以下步骤进行操作：(1)培育幼砧，具体操作如下：①圃地选择：选择有水源或浇灌条件以及便于管理的地方作园地；②做好苗床并进行容器摆放：将圃地平整并划分好苗床与步道后，再将装有营养土的容器整齐靠紧地摆放在苗床上；②种子处理：播种前进行育砧种子的选种、消毒和催芽，种子选用油茶物种中的普通油茶种子：④播种育砧：种子催芽后于每年12月份至次年2月份在容器内播种；⑤砧木管理：播种后定期淋水保湿，待苗木出土后进行肥水管理和病虫害的防治；(2)嫁接繁殖，具体操作如下：①搭建荫棚：培育砧木的苗圃地于嫁接前搭好荫棚以各遮荫；②嫁接：以4-6个月的幼苗为砧木，采用半木质化至木质化的油茶优良无性系枝条作接穗，在油条适宜物候期进行嫁接；②保湿：嫁接后立即拱罩保湿，罩内湿度保持在80％一90％；④嫁接后管理：做好及时除萌、肥水管理和病虫害的防治。
由以上所述可知，传统的油茶繁殖技术，将油茶种子直接播种育苗。由于油茶是异花授粉植物，在长期的有性繁殖过程中变异较大，优劣差异悬殊，难以保持母株的优良性状，一般6～8年始果，是导致油茶低产的主要原因之一。而已有的油茶无性繁殖的方法，如接扦插繁殖、插叶育苗和芽苗砧嫁的育苗，需要大量的良种芽条，因良种的芽条有限，难以满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系的需求。为了克服种子直播质量差和已有无性繁殖方法需要大量的良种芽条的繁殖技术不足，本发明的组培继代芽嫁接育苗方法，是油茶质良种苗快速无性繁殖的好方法。本方法具有繁殖速度快、方法简单、操作容易，材料消耗少，不受季节和地域限制的特点，可以在短期内批量生产遗传稳定性较高的组培继代芽接穗，同时子代能够保持母株的优良遗传特性。
发明内容：
本发明的目的：为了解决上述现有技术中存在的问题，开发油茶优良无性系高效组培快繁技术，旨在提供一种油茶组培继代芽嫁接育苗方法。
本发明的技术方案是：利用植物受伤后具有愈伤能力，幼嫩组织愈伤能力更强的机理，以优质的油茶组培芽为接穗，优质种子萌发的胚芽为砧木，采用劈接或斜接的嫁接方法，利用锡箔绑扎接口，使接穗和砧木的皮层紧密的愈合形成完整植株的技术。
本发明是这样实现的：
油茶组培继代芽嫁接育苗方法，包括选种、催芽、培养、嫁接、育苗和出圃操作工序，具体操作步骤如下：
(1)选种：选用无病虫害、颗粒大而饱满的优质种子；
(2)催芽：种子经消毒处理后，用砂子育种、如果需要量大，可以采用冰库冷藏分批催芽；
(3)培养：以优质的油茶当年生芽器官为外植体，消毒接种获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养；
(4)嫁接：采用优质油茶组培继代芽为接穗，以种子萌发的胚芽为砧木，采取劈接方法或斜接方法嫁接；
(5)育苗：搭建180cm高的遮荫棚，遮荫度75％，荫棚下建立60cm高塑料薄膜密封的小拱棚将油茶嫁接苗培育；
(6)出圃：接穗生长高15cm以上可出圃造林。
以上所述的用砂子育种、冰库冷藏分批催芽的过程，是在地上垫一层14～16cm厚的湿沙、均匀撒上一层种子，再盖沙3cm厚，定期喷水保湿催芽，嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，种子用润沙在4～5℃冰库内冷藏储存，采取分批催芽。
以上所述的将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养的过程，是将培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶60～80ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min，培养室采用1000～5000Lx的自然散射光的光照。
以上所述的采取劈接方法或斜接方法嫁接的过程，是将继代培养30～40d，芽长1.5～7cm，含叶片2～10张，腋芽1～10个的壮芽剪下用湿润的纱布包盖，用手术刀将接穗基部削成两个对称的斜面或者由左向右切一个斜面成为0.4～1.0cm长的楔形或者成45°的斜面，采取劈接方法或斜接方法，把高3～10cm，含真叶2～8张的种子胚芽进行切削，将组培继代芽接种于种子萌发的胚芽上，用锡箔绑扎嫁接口，培养形成完整植株。
以上所述的油茶嫁接苗培育的过程，是控制塑料薄膜密封棚内的温度10～35℃，空气湿度100％，在前10d内，每隔2d揭开塑料薄膜1次，时间为5～30min，往后每天揭开1次，时间为10～90min，及时灌水，水分勿触及接口，及时清除砧木的萌芽，嫁接40～50d可以揭开薄膜，60～80d时去除锡箔，适当施复合肥，浓度0.05～3％，视苗木的生长，由稀到浓。
以上所述的劈接方法，用手术刀切除砧木顶芽，自上而下在砧木的中心劈一刀，深度为0.6～1cm，撬开砧木劈口，将接穗自上而下***砧木，最后用锡箔绑扎严紧。
以上所述的斜接方法，用手术刀切除砧木顶芽，自右向左对砧木削1个成45°的斜切面，接穗斜面和砧木斜面芽的边沿对齐相接，最后用锡箔绑扎严紧。
本发明优点及积极效果：
1、本发明的油茶组培继代芽嫁接育苗方法。以优质油茶组培继代芽为接穗，种子萌发的胚芽为砧木，通过劈接或斜接嫁接方法，将组培继代芽的形成层与砧木的形成层紧密结合，利用锡箔绑扎接口，在温度10～35℃，空气湿度100％，塑料薄膜密封的棚内培养出新的完整植株，可以在短期内批量生产遗传稳定性较高的组培继代芽嫁接苗，子代能够保持母株的优良遗传特性。同时解决了已有的油茶无性繁殖方法如扦插繁殖、芽苗砧嫁接育苗所需要大量的良种枝条和良种芽条问题，能满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系优质高产油茶种苗的需求。
2、砧木种子用润沙在4～5℃冰库内储存，能适应嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，采取分批催芽。采用本方法嫁接，成活率为75％～95％。具有繁殖速度快、育苗量大、方法简单、操作容易，材料消耗少，不受季节和地域限制的特点，能适应我国油茶产业发展的需要。
具体实施方式：
下面结合实施例，对本发明的油茶组培继代芽嫁接育苗方法进一步描述。
实施例1
嫁接时间为4月，油茶采收时，选择当地适应性强，生长良好的油茶种源种子作砧木。选出无病虫害的大粒饱满种子，经消毒处理后，在地上垫一层15cm厚的湿沙、均匀撒上一层种子，再盖沙3cm厚，定期喷水保湿催芽，胚根长约2cm时，将种子移至9cm×13cm的容器内或育苗床上培养。嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，种子用润沙在4℃冰库内储存，采取分批催芽。用优质的油茶组培继代芽器官为外植体，消毒获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养。培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶70ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min，培养室采用1500～4000Lx的自然散射光的光照。
以油茶组培继代芽为接穗，油茶胚芽为砧木。采用劈接方法进行嫁接。接穗为培养35d的组培继代芽，芽长2～6cm，含叶片2～10张，腋芽2～10个，剪切后用湿润的纱布包盖待用；砧木为饱满种子萌发的胚芽，高6～10cm，含真叶5～8张。用手术刀将接穗基部削成两个对称的斜面，使之成为0.5cm长的楔形。要求切面平直、光滑、清洁，枝皮不能翘起。用手术刀切除砧木顶芽，留一张叶片。用力自上而下在砧木的中心劈一刀，深度为0.6～1cm，撬开砧木劈口，将接穗自上而下***砧木，注意使接穗和砧木的皮层(形成层)对齐并使其紧密的吻合，最后用锡箔绑扎严紧，置于塑料棚的上方搭建180cm高的遮阴棚，遮阴度75％的荫棚下建立60cm高塑料薄膜密封的小拱棚内，保持100％的空气湿度，培养40～44d，接穗和砧木的接口愈合形成完整植株。嫁接后前10d每隔2d揭开塑料薄膜1次，时间8～10min，往后每天打开薄膜1次，时间40～60min，及时灌水，塑料棚内保持温度20～30℃，100％的空气湿度，水分勿触及接口。及时清除砧木的萌芽。嫁接15～20d穗芽开始萌动，23～28d穗芽新叶生长，表明接穗和砧木切口已经愈合，此时揭开薄膜，注意保持营养杯或苗床基质湿润。嫁接70～72d，苗木伤口完全愈合，进入正常生长，可以去除锡箔，适当施复合肥，浓度0.05～3％，视苗木的生长，由稀到浓。穗芽生长高15cm以上时，可以出圃造林。嫁接成活率达95％。
实施例2
嫁接时间为2月，油茶采收时，选择当地适应性强，生长良好的油茶种源种子作砧木。选出无病虫害的大粒饱满种子，经消毒处理后，在地上垫一层约15厘米厚的湿沙、均匀撒上一层种子，再盖沙3cm厚，定期喷水保湿催芽，胚根长约2cm时，将种子移至9cm×13cm的容器内或育苗床上培养。嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，种子用润沙在4.5℃冰库内储存，采取分批催芽。用优质的油茶组培继代培养，芽器官为外植体，消毒获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养。培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶70ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.0kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min，培养室采用1000～3000Lx的自然散射光的光照。
以油茶组培继代芽为接穗，油茶胚芽为砧木。采用劈接和斜接方法进行嫁接。接穗为培养40d的组培继代芽，芽长1～5cm，含叶片1～8张，腋芽1～8个，剪切后用湿润的纱布包盖待用；砧木为饱满种子萌发的胚芽，高5～8cm，含真叶4～6张。用手术刀将接穗基部削成由左向右切一个斜面，使之成为0.4～0.5cm长的45°的斜面。切面平直、光滑、清洁，枝皮不能翘起。用手术刀切除砧木顶芽，留一张叶片。斜接法：用力自右向左对砧木削1个成45°的斜切面，接穗斜面和砧木斜面相接，注意使接穗和砧木的皮层(形成层)对齐并使其紧密的吻合，最后用锡箔绑扎严紧，置于塑料棚的上方搭建180cm高的遮阴棚，遮阴度75％的荫棚下建立60cm高塑料薄膜密封的小拱棚内，保持100％的空气湿度，培养42～46d，接穗和砧木的接口愈合形成完整植株。嫁接后前10d每隔2d揭开塑料薄膜1次，时间6～8min，往后每天打开薄膜1次，时间30～50min，及时灌水，塑料棚内保持温度10～25℃，100％的空气湿度，水分勿触及接口。及时清除砧木的萌芽。正常情况下，嫁接30～35d穗芽开始萌动，45～50d穗芽新叶生长，表明接穗和砧木切口已经愈合，此时揭开薄膜，注意保持营养杯或苗床基质湿润。嫁接75～80d，苗木伤口完全愈合，进入正常生长，去除锡箔，适当施复合肥，浓度0.05～3％，视苗木的生长，由稀到浓。穗芽生长高15cm以上时，可以出圃造林。嫁接成活率92％。
实施例3
嫁接时间为6月，油茶采收时，选择当地适应性强，生长良好的油茶种源种子作砧木。选出无病虫害的大粒饱满种子，经消毒处理后，在地上垫一层16cm厚的湿沙、均匀撒上一层种子，再盖沙3cm厚，定期喷水保湿催芽，胚根长约2cm时，将种子移至9cm×13cm的容器内或育苗床上培养。嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，种子用润沙在4～5℃冰库内储存，采取分批催芽。用优质的油茶组培继代培养，芽器官为外植体，消毒获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养。培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶70ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min，培养室采用2000～5000Lx的自然光的光照。
以油茶组培继代芽为接穗，油茶胚芽为砧木。采用劈接和斜接方法进行嫁接。接穗为培养32d的组培继代芽，芽长3～7cm，含叶片3～8张，腋芽2～6个，剪切后用湿润的纱布包盖待用；砧木为饱满种子萌发的胚芽，高3～6cm，含真叶2～5张。用手术刀将接穗基部削成两个对称的斜面或者由左向右切一个斜面，使之成为0.4cm长的楔形。切面平直、光滑、清洁，枝皮不能翘起。用手术刀切除砧木顶芽，留一张叶片。劈接法：用力自上而下在砧木的中心劈一刀，深度为0.6～0.8cm，撬开砧木劈口，将接穗自上而下***砧木，注意使接穗和砧木的皮层(形成层)对齐并使其紧密的吻合，最后用锡箔绑扎严紧，置于塑料棚的上方搭建180cm高的遮阴棚，遮阴度75％的塑料薄膜密封的棚内，保持100％的空气湿度，培养40～50d，接穗和砧木的接口愈合形成完整植株。嫁接后前10d，每隔1d揭开塑料薄膜1次，时间20～30min，往后每天打开薄膜1次，时间60～90min，及时灌水，塑料棚内保持温度20～35℃，100％的空气湿度，水分勿触及接口。及时清除砧木的萌芽。正常情况下，嫁接15～20d穗芽开始萌动，25～30d穗芽新叶生长，表明接穗和砧木切口已经愈合，此时揭开薄膜，注意保持营养杯或苗床基质湿润。嫁接60d苗木伤口完全愈合，进入正常生长，去除锡箔，适当施复合肥，浓度0.05～3％，视苗木的生长，由稀到浓。穗芽生长高15cm以上时，可以出圃造林。嫁接成活率75％。
Claims (2)
1.一种油茶组培继代芽嫁接育苗方法，包括选种、催芽、培养、嫁接、育苗和出圃操作工序，其特征在于：具体操作步骤如下：
(1)选种：选用无病虫害、颗粒大而饱满的优质种子；
(2)催芽：种子经消毒处理后，用砂子育种、冰库冷藏分批催芽，是在地上垫一层14～16cm厚的湿沙、均匀撒上一层种子，再盖沙3cm厚，定期喷水保湿催芽，嫁接数额大，贮种量多，嫁接逐日进行，种子用润沙在4～5℃冰库内冷藏储存，采取分批催芽；
(3)培养：以优质的油茶当年生芽器官为外植体，消毒接种获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养，是将培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶60～80ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.1kg.cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min，培养室采用1000～5000Lx的自然散射光的光照；
(4)嫁接：采用优质油茶组培继代芽为接穗，以种子萌发的胚芽为砧木，采取劈接方法或斜接方法嫁接，是将继代培养30～40d，芽长1.5～7cm，含叶片2～10张，腋芽1～10个的壮芽剪下用湿润的纱布包盖，用手术刀将接穗基部削成两个对称的斜面或者由左向右切一个斜面成为0.4～1.0cm长的楔形或者成45°的斜面，采取劈接方法或斜接方法，把高3～10cm，含真叶2～8张的种子胚芽进行切削，将组培继代芽接种于种子萌发的胚芽上，用锡箔绑扎嫁接口，培养形成完整植株；
(5)育苗：搭建180cm高的遮荫棚，遮荫度75％，荫棚下建立60cm高塑料薄膜密封的小拱棚将油茶嫁接苗培育；
(6)出圃：接穗生长高15cm以上可出圃造林。
2.根据权利要求1所述的油茶组培继代芽嫁接育苗方法，其特征在于：所述的油茶嫁接苗培育，是控制塑料薄膜密封棚内的温度10～35℃，空气湿度100％，在前10d内，每隔2d揭开塑料薄膜1次，时间为5～30min，往后每天揭开1次，时间为10～90min，及时灌水，水分勿触及接口，及时清除砧木的萌芽，嫁接40～50d可以揭开薄膜，60～80d时去除锡箔，适当施复合肥，浓度0.05～3％，视苗木的生长，由稀到浓。
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