CN101675080A - ***模拟肽衍生物及其可药用盐和其制备方法与用途 - Google Patents

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Abstract

提供了一种通式为(I)的***模拟肽衍生物及其可药用盐以及它们的制备方法，其中R1、R2、R3、R4、R5、n1、n2如说明书所定义。还提供了一种含有通式(I)的***模拟肽衍生物及其可药用盐的药物组合物。提供的***模拟肽衍生物及其可药用盐或含有***模拟肽衍生物及其可药用盐的药物组合物可在治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病中广泛应用。R1－R2－(CH2)n1－R3－(CH2)n2－R4－R5 (I)。

Description

***模拟肽衍生物及其可药用盐和其制备方法与用途
技术领域
本发明涉及一种能够和***受体结合并激活***受体 或者能起***激动作用的***模拟肽衍生物及可药用盐， 具体地说， 本发明涉及一种经活性甲氧基聚乙二醇修饰的***模拟肽 衍生物及其制备方法； 还涉及了使用上述模拟肽衍生物及可药用盐治疗以缺乏红 细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的方法。 技术背景
***（erythropoietin, EP0)是一种糖蛋白激素，分子量约 34kD。 血浆中存在的***由 165个氨基酸组成， 糖基化程度很高， 糖基成分 主要是唾液酸。 根据碳水化合物含量不同， 天然存在的***分为两种 类型即 α型和 β型， 其中， α型含 34%的碳水化合物， β型含 26°/。的碳水化合物。 两种类型在生物学特性、 抗原性及临床应用效果上均相同。 人类*** 基因位于 7号染色体长 22区。 1985年其 cDNA被成功克隆， 并利用基因重组技术 开始大批量生产重组人*** ( recombinant human erythropoietin, rHuEPO),广泛用于临床。应用重组 DNA技术已经生物合成出***（Egrie, JC, Strickland, TW, Lane, J等（986) 免疫生物学 （1腿 unobiol) 72 : 213-224)， 其是***到中国仓鼠的卵巢组织细胞 (CH0细胞） 中并且表达的克隆的人促红细胞 生成素基因的产物。 天然存在的人***首先翻译成含有 166个氨基酸 并且 166位是精氨酸的多肽链。 在翻译后修饰中用羟肽酶裂解掉 166位精氨酸。 没有糖基的人 EP0 的多肽链的分子量是 18236Da .在完整的***分子 中， 糖基占整个分子量的大约 40% ( J. Biol. Chem. 262 : 12059)。
***是最早应用于临床的细胞因子， 是迄今所知作用最单一、 且 安全可靠的升血红蛋白制剂。 对于肾贫血、 再生障碍性贫血、 多发性骨髓瘤及阵 发性夜间血尿等均有一定疗效； 此外， 应用***还可减少手术中的输 血量， 并能在一定程度上纠正由恶性肿瘤、 化疗及类风湿性关节炎引起的贫血。 由于***主要由肾小管内皮细胞产生，.肾性疾患引起的贫血是促红细 胞生成素的首选适应证；***纠正肾性贫血的疗效几乎 100%，但并不 能改善肾功能。 ***的治疗安全、 有效， 适合长期治疗， 也能避免血 源紧张。 在 2006年的全球生物技术药市场上， ***类的重组药物占了 119亿美元， 有巨大的市场容量。 早在 1989年， 美国 FDA就正式批准重组人促红素 （EP0GEN)用于肾性贫血的 治疗， 但直到 1992年才在我国上市。 我国慢性肾炎的年发病率约为 0. 25%， 其中 相当一部分患者最终会转为肾衰， 每年的肾性 贫血患者约 50 -60万。 根据保守 的用药量估算， 如果按当前的价格 30-40元 /支， 加上癌症相关性贫血等其他病人 的用药， 国内市场容量约 12-16亿元甚至更大 (病人平均体重按 50Kg计算）。 自 20 世纪 90年代后期， ***已进入我国重点城市医院畅销药品行列， 2003 年在全国重点城市样本医院用药金额 6213万元， 排名第 56位。 2004年， 全国重 点城市样本医院购药金额增长到 8049万元， 同比增长了 30%。
***作为一种作用于骨髓造血细胞， 促进红系祖细胞增生、 分化， 最终成熟的内分泌激素， 对机体供氧状况发挥重要 的调控作用。 在胚胎早期， 促 红细胞生成素由肝生成， 然后逐渐向肾转移， 出生后主要由肾小管***分泌。
在***诱导红组细胞分化过程中， 球蛋白被诱导， 这能使细胞吸 收更多的铁合成功能性的血红蛋白， 这种功能性的血红蛋白可以和成熟的红血球 中的氧结合， 因此， 红血球和血红蛋白在提供机体氧方面扮演了极其重要的角色。 这一过程是由***与红组细胞的表面受体之间的相互作用引起的。
当人体处于健康状态时， 组织可以从已经存在的红血球中吸收足够多的氧， 此时体内的***浓度很低， 这种正常的较低的***浓度完 全可以刺激促进由于年龄的问题而正常损失的红细胞 ά
当循环***中的依靠红细胞进行氧输送的水平被降低进而出现缺氧情况时， ***在体内的数量将会增加， 机体缺氧状态可以由以下原因引起的- 过量的辐射、 因高纬度或长期昏迷造成的氧摄入量减少、 各种类型的贫血等等。 作为对组织处于缺氧压力的应答， ***水平的提高可以刺激红组细胞 的分化达到提高红细胞生成的能力。 当体内的红细胞的数量大于正常组织的需求 时， 循环***中***的水平被降低。 正是由于***对于红 细胞的生成有着至关重要的作用， 因此这类激素对于治疗和诊断以红细胞生成低 下和缺陷为特征的血液病方面有着很广泛的前景。 最近的研究为推测促红细胞生 成素疗法在多种疾病、 紊乱和血液学异常情况中的效用提供了基础， 这些疾病包 括： 慢性肾衰竭 (CRF)患者贫血症的治疗中使用***和在艾滋病和接受 化疗的癌症患者贫血症的治疗中使用*** (Danna， RP, Rudnick, SA， Abels , RI， 于： MB， Garni ck编著， 临床应用中的***一国际展望 (Erythropoietin in Clinical Applications— An International Perspective. Marcel Dekker； 1990 :p301- 324)。
***的部分生物学效应可以通过和细胞膜表面的受体内在作用来 调节。 起先， 使用从小鼠的脾脏里分离出的未成熟的红细胞来研究细胞表面结合 的***蛋白时发现， 这种蛋白是由两种多聚肽组成， 其分子量大约为 85000〜100000KD (Sawyer, et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 : 3690-3694) 由比较详细的叙述。 ***的结合位点的数目也被计算出来了， 大约每 个细胞膜含有 800〜1000个位点。 在这些结合位点中大约有 300个结合位点的 Kd 水平为 90pM， 而剩下的结合位点的结合力比较弱， 大约有 570pM.有研究表明从感 染了 friend病毒贫血株的小鼠的脾脏红细胞对 EP0的响应情况发现， 大约有 400 个结合位点， 其中 Kd水平高的为 ΙΟΟρΜ, Kd水平低的为 800pM。
随后的工作就是两种***受体被单个基因翻录， 这个基因已经被 克隆。 例如， 小鼠和人的***受体的 DMA序列以及编码肽的序列在 W090/08822中已经有叙述。 目前的模型表明***结合到促红细胞生成 素受体导致了两个***受体的活化和二聚， 这种二聚进一步导致了信 号传导的开始。
***克隆基因的应用更有助于帮助寻找这些重要受体的激动剂和 拮抗剂。 某种程度上能够作用***受体的肽已经被确定和叙述。 特别 是确定了一组含有主要肽段的肽， 这些肽可以和***受体结合并能刺 激***细胞的分化增殖。但是能够刺激红细胞增殖分化的肽的 EC50却 很低， 在 20ηΜ和 250ιιΜ之间。 因此这些肽在临床应用上受到了较大的限制， 为了 克服现有技术的不足， 本发明提供了一种生物活性更好， 生物利用度更高的促红 细胞生成素模拟肽衍生物及其可药用盐以及它们的制备方法 发明内容
本发明在于提供一种生物活性更好， 生物利用度更高的***模拟 肽衍生物及其可药用盐以及它们的制备方法。
本发明目的还在于提供一种含上述***模拟肽衍生物及其可药用 盐的药物组合物， 用于治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的 疾病。
本发明公开了一种通式为（I)的具有体内生物活性的***模拟肽 衍生物及其可药用盐，
R〖- - (C¾)„厂1¾- (CH2) n2-R -R5
(I)
其中 Rt 、 选自具有体内生物学活性的***模拟肽单体肽及其类似物； 、 n2的数目各自独立的选自 0〜10的整数； R2、 选自- C0、 - CH2; R3选自 0、 S、 C 、 N (C¾) n3NHRB , NC0(C¾)„4NHR6、 CH0C0NH (C¾) n5NH¾ , CHSC0N(C )„5NH 或 CHNHC0N (C¾)„5NHR6 ;其中 n3的数目选自 1〜10的整数， 的数目选自 2〜10的整数， n5的数目选自 2〜10的整数， R6选自 H或甲氧基聚乙二醇衍生物。
在本方案中， 一个优选实施方案是： 、 R5各自独立的选自通式为 YAX GX TWXJJ 的具有体内生物学活性的***模拟肽单体肽及其 类似物， 其中每个氨基酸均由一个标准单字母表示， 、 的氨基酸序列可以是一 致或不一致， 进一步优选 R,、 的氨基酸序列是一致的， 并且 R,、 R5的 N末端被乙 酰化； 、 ¾ 、 X.,、 Χ5 、 、 Υ3各自独立的选自 20个遗传性编码的 L-氨基酸或非 天然氨基酸中的任意一个； 、 Y2各自独立的选自 20个遗传性编码的 L-氨基酸或 非天然氨基酸中任意一个或由这些氨基酸所组成的肽段； Xt、 X7选自 C、 K、 D、 E、 Orn或 Hoc。
对上述优选的实施方案进一步优化， 、 R5是通过二硫键或酰胺键环化的环肽； 其中 、 R5如果是通过二硫键环化的环肽， 、 ¾分别独立的选自 C或 Hoc ; 同样， 如果是通过酰胺键环化的环肽， X,、 X7分别独立的选自 K、 D、 E或 0rn。 在本方案中， 包括上述优选的实施方案中， Y3优选自 K、 Η或 R， 进一步优选 在本方案中， 包括上述优选的实施方案中， ^、 的氨基酸序列长度进一步优 化， 即优选自 13〜40个氨基酸， 再优选的是 22个氨基酸， 更优选但不限于具有 下述结构的环肽， 最优选但不限于 N0 : 1〜N0 : 8环肽， 即
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【 2】 n 为 1， 、 是- CO, R3选自 CO (C¾)„ 6， 是 2， 是 H或甲氧基聚 乙二醇衍生物。
【3】 ηι，η2为 2, R2、 是- C¾, R3选自 CH0C0NH(C¾)n5NH ， 是2， 1¾是 1或甲 氧基聚乙二醇衍生物。
【 4】 n n2为 1， R2、 R4是- C ， R3选自选自 NCO (CH2) n4NHRe， 是 2， R6是 H或甲氧 基聚乙二醇衍生物。
上述四个优选的实施方案属于并列关系， 不存在包含或递进关系。
对上述四个优选实施方案，我们可以分别进一步优化， 是甲氧基聚乙二醇衍生物， 最优选 是甲氧基聚乙二醇衍生物， 其中甲氧基聚乙二醇衍生物的分子量选自 5， 000〜： L00， 000道尔顿， 甲氧基聚乙二醇衍生物的结构选自分枝型或线型。
本方案中， 我们可通过进一步综合优选， 可分别获得下列四个优选实施方案： 【1】 n 为 2， 、 R5选自 SEQ ID N0:1~SEQ ID N0:8, R2、 R4选自- C0、 一 CH2， R3选自 CH0C0NH(C )n5NHRe， 其中 选自 2〜10， 优选 2; R6是结构为线型、 分子 量为 20， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物。
【2】 为 1， R【、 R5选自 SEQ ID N0:1〜SEQ ID NO :8, R2、 选自- C0、 —(¾， R3选自 NC0(CH2)n4NHR6， 其中 n4选自 2〜10， 优选 2; 是结构为线型、 分子量为 20， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物。
【3】 ， 为 2， Rt、 R5选自 SEQ ID N0:1〜SEQ ID N0:8, R2、 R4选自- C0、 — C ， 选自 CH0C0NH(CH2)n5NHR6， 其中 n5选自 2〜10， 优选 2; R6是结构为分枝型、 分 子量为 40， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物。
[4] , n2为 1， 、 R5选自 SEQ ID N0:1〜SEQ ID N0:8， R2、 R4选自- C0、 一 C , 选自 NC0(C¾)n4NHR6， 其中 n4选自 2〜10， 优选 2; Re是结构为分枝型、 分子量 为 40， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物。
其中， 最终优选的***模拟肽衍生物及其可药用盐的结构选自：
本发明提供的***模拟肽衍生物属于两性化合物， 所属领域技术 人员通过公知技术可使用酸性或碱性化合物与之反应成盐， 通常采用的形成酸加 成盐的酸为：
盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 硫酸、 磷酸、 对甲苯磺酸、 甲磺酸、 草酸、 对溴苯 基磺酸、 碳酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 苯甲酸、 乙酸； 盐包括硫酸盐、 焦硫酸盐、 三 氟乙酸盐、 亚硫酸盐、 亚硫酸氢盐、 磷酸盐、 磷酸氢盐、 磷酸二氢盐、 偏磷酸盐、 焦磷酸盐、 盐酸盐、 溴化物、 碘化物、 乙酸盐、 丙酸盐、 辛酸盐、 丙烯酸盐、 甲 酸盐、 异丁酸盐、 己酸盐、 庚酸盐、 丙炔酸盐、 草酸盐、 丙二酸盐、 丁二酸盐、 辛二酸盐、 富马酸盐、 马来酸盐、 丁炔一 1， 4一二酸盐、 己炔一 1， 6—二酸盐、 苯甲酸盐、 氯苯甲酸盐、 甲基苯甲酸盐、 二硝基苯甲酸盐、 羟基苯甲酸盐、 甲氧 基苯甲酸盐、 苯乙酸盐、 苯丙酸盐、 苯丁酸盐、 柠檬酸盐、 乳酸盐、 Y—羟基丁 酸盐、 甘醇酸盐、 酒石酸盐、 甲磺酸盐、 丙磺酸盐、 奈一 1一磺酸盐、 奈一 2—磺 酸盐、 扁桃酸盐等， 优选三氟乙酸盐。
碱性物质也可以和***模拟肽衍生物成盐， 这些碱性物质包括铵， 碱 金属或碱土金属的氢氧化物， 以及碳酸盐、 碳酸氢盐， 典型的有氢氧化钠、 氢氧 化钾、 氢氧化铵、 碳酸钠、 碳酸钾等。
本发明还公开了上述***模拟肽衍生物及其可药用盐的制备方案， 包 括以下步骤：
( 1 )用基因工程或化学合成的方法制备 Rt、 R5， ^选自有*** 生物学功能的模拟肽单体肽及其类似物，
(2)制备通式为 ( II ) 的功能小分子
R「 CO- (CH2)„-Z2- (C¾)„2- C0-R8
, (II ) 其中 r、 n2的数目各自独立的选自 0〜10的整数；
R7、 选自 OH或 H;
选自 0、 S、 C¾、 N (C )。風、 NC0 (C )„7NHR9、 CH0C0NH (CH2)„8NHRg、 CHSC0N (C¾) n8NHRg或 CHNHC0N (CH 8NHR9，其中 的数目选自 1〜10的整数， n7的数 目选自 2〜10的整数， n8的数目选自 2〜10的整数， R9选自 Boc或 Cbz，
( 3 )将 、 R5与通式为 （II ) 的功能小分子进行衍生， 制备得通式（ΠΙ )化 合物；
R.-R2- (CH2) nl-Z2- (CH2) n2-R4-R5
( III ) ,
其中 、 各自独立地选自 - CO或- CH2，
(4 ) 脱去 Boc或 Cbz后， 与活性甲氧基聚乙二醇通过共价键连接。
本发明还涉及了一种的药物组合物， 包含：
( 1 ) 治疗量的上述的一种通式为（I)的***模拟肽衍生物及其可药用 ±κ .，
( 2) 药学可接受的药物载体。
本发明还公开了药物用途方案， 即使用含有上述任意的治疗量的促红细胞生 成素模拟肽衍生物及其可药用盐用于治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或 缺陷为特征的疾病。 特别是治疗下述疾病： 末期肾功能衰竭或透析； AIDS相关性 贫血， 自身免疫性疾病， 或恶性肿瘤； 囊性纤维变性； 早期早熟性贫血； 与慢性 炎性疾病相关的贫血； 脊髓损伤； 急性失血； 衰老和伴有异常红细胞产生的肿瘤 疾病。
本发明提供的***模拟肽衍生物及其可药用盐能够明显刺激小鼠 外周血网织红细胞计数的升高， 说明它们刺激红细胞生成， 同时还能够大大延长 偶联物在体内的半衰期。 ***模拟肽衍生物和***蛋白对 成熟的红细胞、 血细胞压积、 血红蛋白含量没有明显的影响， 对外周血白细胞计 数液没有明显影响。
***模拟肽单体肽的合成采用的是固相合成技术， 其基本原理是： 先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子 树脂相连， 然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护 基并同过量的活化羧基组分反应， 接长肽链。 重复 （缩合一洗涤一去保护一洗涤 —下一轮缩合）操作， 达到所要合成的肽链长度， 最后将肽链从树脂上裂解下来， 经过纯化等处理， 即得所要的多肽。 其中缩合和去保护反应步骤的中间控制采取 的是茚三酮检测的方法， 即当树脂肽链上有游离的氨基时， 经茚三酮试剂检测会 显蓝色， 没有游离氨基时不显色（茚三酮试剂本身为黄色）。 因此在进行缩合反应 完毕后， 通过茚三酮检测， 如果显黄色（茚三酮试剂本身的颜色）， 则说明本步偶 合完毕可以进行下一个氨基酸的偶合前的脱保护操作， 如果显蓝色， 则证明肽链 上还有些游离氨基， 需进一歩的重复偶合或改变现有的缩合剂直至树脂肽经茚三 酮检测为黄色。
举体肽的环化方法是本领域技术人员所熟知的， 二硫键的环化主要是通过氧 化剂使得单体肽中氨基酸侧链巯基氧化成二硫键， 具体的方法有将单体肽放置于 DMS0溶液中， 或者放置于浓度为 5%的碳酸氨胺溶液中自动氧化， 或者加入 12在 醋酸溶液中氧化， 优选加入 12在醋酸溶液中氧化。 酰胺键的环化主要是通过单体 肽中氨基酸侧链的羧基和氨基在缩合剂存在的情况下形成酰胺键， 加入的缩合剂 为本领域技术人员所公知， 通常有 DIC、 EDC、 HATU、 Pybop等。
二聚肽的合成主要是通过***模拟肽单体肽氨基酸残基侧链上的 氨基与功能小分子形成- NH-C -键或者 -NH- CO-键的形式连接， 本领域的技术人员 可以很容易合成功能小分子， 并将其与单体肽环肽通过已知的技术连接。
将二聚肽与活性甲氧基聚乙二醇衍生物进行衍生， 反应体系可以选择在有机 溶剂或可利用的缓冲体系里进行， 在有机溶剂里进行二聚肽的聚乙二醇化反应时， 可以加入但并不限于以下适量的碱， 如三乙胺、 二异丙基乙胺、 吡啶、 2， 4， 6三 甲基吡啶。 在缓冲体系里进行聚乙二醇化衍生反应时， 缓冲体系可以选择已知的 可利用的各种缓冲液， 优选 pH7. 7磷酸盐缓冲液。
通过本领域公知的各种测试可以测定***或本发明提供的促红细 胞生成素模拟肽衍生物及其可药用盐的生物学活性。 体内活性的测试通过小鼠皮 下注射***及本发明提供的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 连续三天， 然后处死小鼠， 取全血进行外周血细胞及网织红细胞计数， 血细 胞计数采用全自动血球计数仪计数。 对猕猴静脉注射进行药效学研究， 单次给药 剂量 1. 35mg/kg, 作为对比药物使用的***蛋白给药剂量为 240 μ /kg， 每周三次， 连续给药六周， 采集血样进行相关血液学指标分析。
本发明中使用到的代号与结构对应表：
附图说明
图 1 : ***模拟肽衍生物（HH- EP0- 018) 对猕猴血细胞压积的影响。 图 2: ***模拟肽衍生物 （HH- EP0- 018)对猕猴血红蛋白含量的影响 ( 具体实施方式
为了更详细地说明本发明， 给出下列实例。 但本发明的范围并非限定于此。 实施例一： ***模拟肽衍生物单体肽的合成
***模拟肽衍生物单体肽的合成采用的是固相多肽合成的方法， 这类多肽合成方法在许多文献中都有报道，可参见 stewart，J.M.,and Young,J.D.,solid phase peptide synthesis 2d edition,novabioc em peptide synthesis notes.本发明提供白勺 ***模拟肽衍生物单体肽采用手工合成的方法， 树脂为 rink amind resin, 所用的氨基酸衍生物的 α氨基由 Fmoc (芴甲酰羰基）保护， 半胱氨酸侧链 巯基、 谷胺酰胺侧链氨基、 组氨酸侧链咪唑基由 Trt (三苯甲基） 保护、 精氨酸侧 链胍基由 Pbf (2,2,4,6,7-五甲基二氢化苯并呋喃一 5—磺酰基）保护， 色氨酸侧链 吲哚基、赖氨酸侧链氨基由 Boc (叔丁氧羰基）保护， 苏氨酸侧链羟基、酪氨酸侧 链苯酚基、丝氨酸侧链羟基由 tBu (叔丁基）保护。 将所要合成***模 拟肽衍生物单体肽肽链的 C末端氨基酸的羧基以共价键的结构同高分子的不溶性 树脂（rink amind resin)相连， 然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份 经过 20%六氢吡啶 /DMF溶液脱去氨基保护基， 然后和过量的氨基酸衍生物反应， 接长肽链。 重复 （缩合一洗涤一去保护一洗涤一下一轮缩合） 操作， 达到所要合 成的肽链长度，最后用三氟乙酸：水： 乙二硫醇、三异丙基硅烷 =92. 5: 2. 5： 2. 5： 2. 5混合溶液将肽链从树脂上裂解下来，经***沉降得到***模拟肽衍 生物单体肽粗品， 单体肽粗品使用 C18反相制备柱分离纯化， 即得所要的促红细 胞生成素模拟肽衍生物单体肽。 其中缩合和去保护反应步骤的中间控制釆取的是 茚三酮检测的方法， 即当树脂肽链上有游离的氨基时， 经茚三酮试剂检测会显蓝 色， 没有游离氨基时不显色 （茚三酮试剂本身为黄色）。 因此在进行缩合反应完毕 后， 通过茚三酮检测， 如果显黄色 （茚三酮试剂本身的颜色）， 则说明本步偶合完 毕可以进行下一个氨基酸的偶合前的脱保护操作， 如果显蓝色， 则证明肽链上还 有些游离氨基， 需进一步的重复偶合或改变现有的缩合剂直至树脂肽经茚三酮检 测为黄色。 实施例二： 功能小分子 (LG-1)的制备
第一步： LG-l-A的制备
将亚胺基二乙酸二乙酯 (10.0g，52.8mmol), Boc- β -丙氨酸 (10.0g,52.8mmol),溶 于 lOOmL二氯甲烷中,加入 DIC (8.0mL,52.8mmol),室温搅拌过夜,过滤反应液，滤液 依次用 100ml饱和 NaHC03， 50ml0.5N的 HC 容液， 100ml饱和食盐水洗涤， 分 出有机层， 有机层用无水 MgS04干燥。 过滤有机层， 浓缩， 得无色油状液体 第二步： LG-1-B的制备
将 17克 LG-1-A溶于 lOOmLMeOH: THF= 1 : 1混合液， 再加入 25mL水，
5g NaOH ( 125mmol)c室温搅拌 2h后用 6N HCl溶液调 pH值到 1。用乙酸乙酯萃 取反应液 4次。 有机层用盐水洗搽， 无水硫酸镁干燥， 减压浓缩得到白色半固体。 产物用 50mL二氯甲烷溶解， 加入 300mL正己烷， 溶液呈白色浆状。减压浓缩得 白色固体 LG-1-B: 14g (收率约 90% )。 第三步： LG-1-C的制备
将 7gLG-l-B (23mmol)溶解在 80ml四氢呋喃中， 搅拌下加入 4.6g N,N-甲氧 基甲基胺盐酸盐 （46mmol)和 5.1g三乙胺 (51mmol)， 再加入 4.4g DIC (32mmol)， 4.7g HOBT (32mmol), 室温搅拌反应过夜。 次日， 反应液倒入水中， 350ml乙酸乙 酯提取， 有机层依次用 200ml 2N HC1水溶液， 200ml饱和碳酸氢钠溶液，100ml 饱和食盐水洗涤,分出有机层， 有机层用无水硫酸镁干燥 2小时后过滤， 滤液经减 压浓缩得油状物. 再经柱层析， 收集目标产物 LG-1-C:4.2 g， 收率： 70%。 第四步： LG-1的制备
将 4.0gLG-l-C (10.2mmol)加入 60ml四氢呋喃中溶解，冰盐浴冷却至零度，加 入 LiAlH4(340mg,8.9mmol),在零度反应 30分钟后， 依次加入水 4ml， 15 NaOH 水溶液 4ml,过滤反应液， 滤饼用四氢呋喃洗涤， 浓缩至干， 硅胶柱层析得 LG-l: 1.63g(6mmol,收率： 58.8%)
将 4g LG-l-B ( 13mmol)溶于 lOOmL Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入羟基琥珀 酰亚胺 （3.1g， 21mmol), DIC (4mL, 26mmol)和 DMAP (4-二甲基氨基吡啶） ( 12mg, 0.08mmol)o 搅拌过夜， 减压浓缩反应液。 残余物溶于 80ml乙酸乙酯， 滤去不溶物。有机相依次用 40ml饱和碳酸氢钠溶液， 40ml饱和食盐水， 40ml 0.5N 的 HC1溶液， 40ml饱和食盐水洗涤一次， 分出有机层并用无水硫酸镁干燥。过滤 有机层， 滤液减压浓缩， 得白色固体 LG-2: 4.4g (收率约为 68% )。 实施例四： 功能小分子（LG-3) 的制备 第一步： LG-3-A的制备
7. Og戊酮庚二酸 (0.04mol：)溶解在 100ml甲醇中， 搅拌下加入 5%CsC03甲 醇溶液， 控制加入的量使得反应液的 pH为 8.5左右 （精密 pH试纸测定）， 加毕 后搅拌 30分钟，然后过滤反应液，滤液真空浓缩得油状物,将油状物用约 100ml 的 DMS0,升温至 60°C， 加入 14g(0.08mol)溴苄， 反应 8小时后， 过滤反应液， 固体 用少量***洗涤， 母液中加入 400ml***， 用 200ml饱和食盐水洗涤三次， 分出 有机层并用无水硫酸镁干燥 2小时后过滤，滤液减压浓缩至原体积的 1/5时，置于 一 20度冰柜中析晶过夜。 次日， 滤出固体， 干燥， 得白色固体 LG-3-A:10.5g。 （收 率 74%) 第二步： LG-3-B的制备
将 2g LG-3-A (0.0056mOl)溶于 20ml四氢呋喃中， 溶液保持内温在小于 -10度， 搅拌加入 626mgNaBH4 (0. 0168mol)， 反应 l h后. 加入 200ml冷冻***， 随后加 入 150ml饱和碳酸氢钠水溶液终止反应. 静止分层， 有机层用饱和食盐水洗涤一 次后用无水 Na2S04干燥 2小时后过滤,滤液减压浓缩， 得 LG- 3- B： 1 .9g (收率： 94.6% )。 第三步： LG-3-C的制备
将 3.2g LG-3-B (0.009mol)溶解在 50ml二氯甲烷中，零度以下搅拌加入 4.34g 三乙胺（0.043mol)。 将 1.33g(0.0045mol)三光气溶解在 25ml二氯甲烷中， 然后滴 加到上述溶液中， 1小时后加入 2.8g叔丁氧羰基乙二胺。反应 3h后， 用冰乙酸将 反应液调至中性， 此时有沉淀生成， 滤去沉淀， 滤液经减压浓缩至干后加入*** 溶解， 再用 50ml水洗涤三次， 50ml饱和食盐水洗涤一次。分出有机层并用无水硫 酸镁干燥 2小时后过滤， 滤液减压浓缩得油.油状物经硅胶柱层析纯化 （流动相： 石油醚： 乙酸乙脂 = 10:1 )。 合并收集目标产物， 浓缩得白色固体 LG-3-C: 1.5g (收 率 38.8%)。 第四步： LG-3-D的制备
将 13g LG-3-C (0.031mol)溶解在 8ml甲醇中， 搅拌下加入约 200mgl0%钯碳， 常压通入¾反应 4h后， 滤去活性碳， 滤液经浓缩后得油状物 LG-3- D :8.28g (收 率： 96.7% )。 第五步： LG-3的制备
将 5g LG-3-D ( 0.018mol ) 溶解在 lOmlTHF 中， 加入 4.7g 对硝基苯酚 (0.043mol), 搅拌下加入 DIC 4.2g(0.043)溶液。 搅拌反应过夜。 次日， 滤出产生的 沉淀， 滤饼用少量乙酸乙酯洗涤， 滤液经减压浓缩至干， 向残余物中加入 100ml 乙酸乙酯并使其溶解，再用 50ml饱和食盐水洗涤一次,分出有机层并用无水硫酸镁 干燥 2小时后过滤， 滤液减压浓缩得油状物. 油状物经硅胶柱层析纯化 （洗脱剂: 正己焼 /乙酸乙酯 20:1 = 10:1 ).合并收集目标产物，减压浓缩至干得白色固体 LG-3: 3.5g (收率: 32%)。 实施例五： 功能小分子（LG-4) 的制备
第一步： LG-4-A的制备
将 5g LG-3-D (0.018mol)溶解在 60mlTHF中， 搅拌下加入 3.51g Ν,Ν-甲氧 基甲基胺盐酸盐（0.036mol)和 4.0g三乙胺（0.04mol)， 再加入 3.4g DIC (0.027mol) 和 3.65g HOBT (0.027mol), 室温搅拌反应过夜。次日， 将反应液冲入 200ml水中， 用乙酸乙酯提取二次，每次 200ml。合并有机层并依次用 50ml 2N HC1溶液、 100ml 饱和 NaHC03溶液, 100ml饱和食盐水洗涤一次，分出有机层并用无水硫酸镁干燥 2 小时后过滤， 滤液减压浓缩得油状物. 油状物经柱层析纯化（洗脱剂:正己垸 /乙酸 乙酯 10:1 ). 合并目标组分并将减压浓缩得白色固体 LG-4-A: 6.24g (收率： 80%)。 第二步： LG-4的制备
将 4.0g LG-4-A (9mmol)加入 50ml四氢呋喃中溶解，冰盐浴冷却至零度下加入 300mg LiAlH4(7.9mmol),保持零度反应 30分钟后， 向反应液中依次加入 0.3ml水， 0.9ml 15 %NaOH溶液， 0.3ml水,此时产生沉淀， 过滤出沉淀物， 滤饼用 20ml四氢 呋喃洗涤一次，合并滤液并经减压浓缩至干，残余物经柱层析纯化得 1.65g LG-4(收 率： 55.5%)。 实施例六： HH- EPO-005的制备
HH-EPO-005 第一步： SEQ ID NO : 5环肽的制备
将 9g***模拟肽衍生物单体肽 SEQ ID N0: 5 (按照实施例给出的方 法合成)溶于 3000ml 20%冰醋酸中， 然后缓慢滴加 5%碘甲醇溶液， 直到黄色不消 失为止。反应液直接进行制备纯化， 采用反相色谱法， 用十八烷基硅烷键合硅胶为 色谱柱填充齐 il( aters SymmetryShieldTM RP18 3.5μπι, 4.6* 100mm),柱温 60Ό, 检测波长为 214nm; 以水 （含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸） 的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥得 SEQ ID N0: 5环肽 3.0g (收率: 15.6%) 第二步： HH- EP0- 005的制备
将 SEQ ID ：5环肽3.(^(1.2211^01)， 溶解在 150ml N，N—二甲基甲酰胺中， 加入三乙胺 147mg(1.46mmol), 368mg功能小分子（LG-3 ) (0.61mmol), 室温搅拌 反应 6小时后减压浓缩出部分 Ν,Ν—二甲基甲酰胺， 向残余物中加入 200ml***， 冰箱放置 2小时后离心， 真空干燥得白色固体， 再将此白色固体溶解在 50ml 20 %三氟乙酸 /二氯甲垸溶液中，室温搅拌 30分钟后减压浓缩出部分溶剂，残余物加 入 200ml的***， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得白色固体， 白色固体经反相 色谱法制备纯化， 用十八垸基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂（Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι, 4.6*100mm), 柱温 60°C，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-005 :1.0g (收率约 33%)。
] 8 实施例七： HH- EPO- 006的制备
HH-EPO-006
第一步： SEQ ID N0 : 6环肽的制备
将 9g***模拟肽衍生物单体肽 SEQ ID N0 : 6 (按照实施例给出的方 法合成)溶于 3000ml 20%冰醋酸中， 然后缓慢滴加 5%碘甲醇溶液， 直到黄色不消 失为止。反应液直接进行制备纯化，釆用反相色谱法， 用十八垸基硅烷键合硅胶为 色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μπι， 4.6* 100mm),柱温 60°C, 检测波长为 214nm; 以水 （含 0.05%的三氟乙酸） 和乙腈 （含 0.05%的三氟乙酸） 的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥得 SEQ ID N0: 6环肽 3.0g (收率- 15.3%) 第二步： HH- EP0-006的制备
将 SEQ ID N0 : 6环肽 3.0g(1.23mmol)， 溶解在 150ml Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入三乙胺 147mg(1.46mmol), 368mg功能小分子（LG-3 ) (0.61mmol), 室温搅拌 反应 6小时后减压浓縮出部分 DMF， 向残余物中加入 200ml***， 冰箱放置 2小 时后离心， 真空干燥得白色固体， 再将此白色固体溶解在 50ml 20 %三氟乙酸 / 二氯甲垸溶液中， 室温搅拌 30分钟后减压浓缩出部分溶剂， 残余物加入 200ml的 ***， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得白色固体， 白色固体经反相色谱法制备 纯化， 用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μιη, 4.6* 100mm), 柱温 60°C，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸） 和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸 出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-006： 0.98g(收率约 32.7% 实施例八： HH- EPO- 007的制备
HH-EPO-007 第一步： SEQ ID N0: 7环肽的制备
将 9g***模拟肽衍生物单体肽 SEQ ID N0: 7 (按照实施例一给出的 方法合成)溶于 3000ml 20%冰醋酸中， 然后缓慢滴加 5%碘甲醇溶液， 直到黄色不 消失为止。反应液直接进行制备纯化， 采用反相色谱法， 用十八烷基硅烷键合硅胶 为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι, 4.6* 100mm), 柱温 60 °C，检测波长为 214nm; 以水 （含 0.05%的三氟乙酸） 和乙腈 （含 0.05%的三氟乙 酸） 的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻千 燥得 SEQ ID N0: 7环肽 3.15g (收率: 16.4%) 第二步： HH- EP0- 007的制备
将 SEQ ID N0: 7环肽 3.0g(1.22mmol)， 溶解在 150ml N,N—二甲基甲酰胺中， 加入三乙胺 147mg(1.46mmol), 368mg功能小分子（LG-3 ) (0.61mmol), 室温搅拌 反应 6小时后减压浓缩出部分 Ν,Ν—二甲基甲酰胺， 向残余物中加入 200ml***， 冰箱放置 2小时后离心， 真空干燥得白色固体， 再将此白色固体溶解在 50ml 20 %三氟乙酸 /二氯甲烷溶液中， 室温搅拌 30分钟后减压浓缩出部分溶剂，残余物加 入 200ml的***， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得白色固体， 白色固体经反相 色谱法制备纯化， 用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂（Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι, 4.6* 100mm), 柱温 60°C,检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-007 :1.0g (收率约 33%)。 实施例九： HH- EPO- 008的制备
HH-EPO-008 第一步： SEQ ID N0: 8环肽的制备
将 27g***模拟肽衍生物单体肽 SEQ ID N0: 8 (按照实施例一给出 的方法合成)溶于 3000ml 20%冰醋酸中， 然后缓慢滴加 5%碘甲醇溶液， 直到黄色 不消失为止。反应液直接进行制备纯化， 采用反相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅 胶为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι, 4.6* 100mm), 柱温 60°C,检测波长为 214nm; 以水 （含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈 （含 0.05%的三氟 乙酸） 的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻 干燥得 SEQ ID N0: 8环肽 9.3g (收率: 15.7%) 第二步： HH- EP0-008的制备
将 SEQ ID N0:8环肽 3.0g(1.22mmol)， 溶解在 150ml Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入三乙胺 147mg(1.46mmol), 368mg功能小分子（LG-3 ) (0.61mmol), 室温搅拌 反应 6小时后减压浓缩出部分 Ν,Ν—二甲基甲酰胺， 向残余物中加入 200ml***， 冰箱放置 2小时后离心， 真空干燥得白色固体， 再将此白色固体溶解在 50ml 20 %三氟乙酸 /二氯甲烷溶液中，室温搅拌 30分钟后减压浓缩出部分溶剂，残余物加 入 200ml的***， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得白色固体， 白色固体经反相 色谱法制备纯化， 用十八垸基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂（Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μπι, 4.6* 100mm), 柱温 60°C，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分，减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-008 :1.12g(收率约 33%)。 实施例十： HH-EP0-008A的制备
HH-EPO-008A 将 SEQ ID NO: 8环肽 3.0g(1.22mmol)，溶解在 150ml 20mmol乙酸缓冲液 (pH5.0) 中， 再加入 201mg功能小分子（LG-4) (0.61mmol)和 10ml乙腈， 室温搅拌反应 30分钟后， 反应液经反相色谱法制备纯化， 用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填 充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηα, 4.6* 100mm),柱温 60°C,检测波长 为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸） 的不同比 例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-008A： 0.75g (收率约 25%)。 实施例 ""一： HH-EP0-008B的制备
Ac-GGTYS-C-HFGALTWV-C-RPQRG-betaA-NH
S-
Ac-GGTYS-p-HFGALTWV-C-RPQRG-betaA-N s- -S
HH-EPO-008B
将 SEQ ID NO : 8环肽 3.Og(l .22mmol) , 溶解在 150ml Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入三乙胺 147mg(1.46mmol), 322mg功能小分子（LG- 2) (0.61mmol), 室温搅拌 反应 6小时后减压浓缩出部分 Ν,Ν—二甲基甲酰胺， 向残余物中加入 200ml***， 冰箱放置 2小时后离心， 真空干燥得白色固体， 再将此白色固体溶解在 50ml 20 %三氟乙酸 /二氯甲烷溶液中，室温搅拌 30分钟后减压浓缩出部分溶剂，残余物加 入 200ml的***， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得白色固体， 白色固体经反相 色谱法制备纯化， 用十八垸基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂（Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μη , 4.6* 100mm), 柱温 6(TC，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-008 :1.3g (收率约 43 实施例十二： HH- EPO- 008C的制备
HH-EPO-008C 将 SEQ ID ：8环肽3.(¾(1.2211111101)，溶解在 150ml 20mmol乙酸缓冲液 (pH5.0) 中， 再加入 165mg功能小分子（LG- 1 ) (0.61mmol)和 10ml乙腈， 室温搅拌反应 30分钟后， 反应液经反相色谱法制备纯化， 用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填 充齐 U(Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι, 4.6* 100mm),柱温 60°C，检测波长 为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈（含 0.05%的三氟乙酸） 的不同比 例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-008C： 0.8g (收率约 27%)。 实施例十三： HH- EP0- 018的制备
将 0.5g HH-EPO-008 (0.98mmol)溶解在 100ml Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入 39.6mg三乙胺（0.196mmol)， 3.8g mPEG2-OSU(40K) (0.96mmol)，室温搅拌 6小 时。 将反应液直接冲析入 600ml冷***中， 析出固体， 冰箱放置 2小时后离心， 经千燥得 HH-EPO- 018粗品。 采用反相色谱法纯化 HH-EPO- 018粗品， 用十八烷 基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂（Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι , 4.6* 100mm), 柱温 60°C,检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈 (含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部 分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO- 018： 1.8g (收率约 47%)。 实施例十四： HH EP0-018A的制备
将 0.5g HH- EPO- 008 (0.98mmol)溶解在 100ml Ν,Ν—二甲基甲酰胺中， 加入 39.6mg三乙胺（0.196mmol)， 3.8g mPEG2-OSU(40K) (0.96mmol)，室温搅拌 6小 时。 将反应液直接冲析入 600ml冷***中， 析出固体， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得 HH-EPO-018粗品。 采用反相色谱法纯化 HH-EPO-018粗品， 用十八垸 基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μπι , 4.6*100mm), 柱温 6(TC,检测波长为 214mii; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈 (含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部 分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO-018A : 1.5g (收率约 39%)。 实施例十五： HH-EP0-018B的制备
将 0.5g HH-EPO-008 (0.98mmol)溶解在 100mlN，N—二甲基甲酰胺中， 加入 39.6mg三乙胺 （0.196mmol), 3.8g mPEG2-OSU(4 (0.96mmol)，室温搅拌 6小 时。 将反应液直接冲析入 600ml冷***中， 析出固体， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得 HH- EPO-018粗品。 采用反相色谱法纯化 HH-EPO-018粗品， 用十八烷 基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μιη， 4.6* 100mm), 柱温 60°C，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈 (含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分， 减压蒸出大部 分乙腈后经冷冻千燥 HH-EPO-018： 1.7g (收率约 45%)。 实施例十六： HH-EP0-018C的制备
(A
将 0.5g HH- EPO-008 (0.98mmol)溶解在 100ml N，N—二甲基甲酰胺中， 加入 39.6mg三乙胺（0.196mmol)， 3.8g mPEG2-OSU(40K) (0.96mmol)，室温搅拌 6小 时。 将反应液直接冲析入 600ml冷***中， 析出固体， 冰箱放置 2小时后离心， 经干燥得 HH- EPO-018粗品。 釆用反相色谱法纯化 HH-EPO-018粗品， 用十八烷 基硅垸键合硅胶为色谱柱填充剂 (Waters SymmetryShield™ RP18 3.5μηι， 4.6*100mm), 柱温 60°C，检测波长为 214nm; 以水（含 0.05%的三氟乙酸）和乙腈 (含 0.05%的三氟乙酸）的不同比例为流动相， 合并收集目标组分，减压蒸出大部 分乙腈后经冷冻干燥 HH-EPO- 018： 1.4g (收率约 37%)。 实施例十七： ***模拟肽衍生物对小鼠的作用
实验目的：
评价并比较***模拟肽衍生物及***蛋白对小鼠红细 胞生成的影响。 材料及方法- ***模拟肽衍生物 HH- EPO- 001、 HH-EPO-002. HH-EPO-003 , HH-EPO-004、 HH-EPO-005、 HH-EPO-006、 HH-EPO-007、 HH-EPO-008、 HH-EPO-015、 HH-EPO-016, HH-EPO-017, HH-EPO-018 由江苏豪森药业股份有 限公司提供； EPO: 购自沈阳三生制药有限责任公司； 昆明种小鼠， 购自中科院上 海实验动物中心， 体重 25〜30g， 早， 各组动物数： 10只。
小鼠皮下注射***模拟肽衍生物及***蛋白， 连续三 天， 然后处死小鼠， 取全血进行外周血细胞及网织红细胞计数， 血细胞计数用全 自动血球计数仪计数。 结果与讨论：
按照目前的给药方案， ***模拟肽衍生物及***蛋白 均能明显刺激小鼠外周血网织红细胞计数的升高， 说明它们刺激红细胞生成 (见表 一)。 ***模拟肽衍生物和***蛋白对成熟的红细胞、 血细 胞压积、 血红蛋白含量没有明显的影响 （见表二）， 对外周血白细胞计数液没有明 显影响 （见表三）。 表一、 ***模拟肽衍生物对小鼠网织红细胞生成的影响
分组 小鼠 给药剂量和方案 网织红细胞计数
(只） ( X 109/L,x±SD) control 10 0.1%BSA in NS 136.9±5. 6
HH-EPO-005 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 947.2± 14. 7
HH-EPO-006 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 515.0±22. 7 HH-EPO-007 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 553.5±26.6
HH-EPO-008 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 908.1 ±21.7
HH-EPO-015 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1146.9±176.6
HH-EPO-016 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1796.4±3(H.4
HH-EPO-017 】0 4.5mg/kg,sc,dl-3 1208.9±178.5
HH-EPO-018 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 2000.6±272.0
HH-EPO-018A 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1889.3±252.0
HH-EPO-018B 10 4.5mg/kg，sc,dl-3 ]969.7±312.0
HH- EPO-018C 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1879.3 ±162.0
EPO 10 5 g/kg,sc，dl-3 483.9±146.5 表二、 ***模拟肽衍生物对小鼠红细胞生成、 血细胞压积、 血 含量的影响
分组 小鼠 给药剂量和方案 红细胞计数 血细胞压积 血红蛋白
(只） ( X 10 LL, X ( ) (%)
±SD)
control 10 0.1%BSA in NS 9.6±0.5 48.2±3.0 ί4.8±0.7
HH-EPO-005 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 10.1±0.6 54·4±3· 2 16.3±0· 9
HH-EPO-006 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.6±0.5 50.5±2.8 153±0· 9
HH-EPO-007 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.1 ±3.1 49.4±17.1 14.8±4.8
HH-EPO-008 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.6±0.2 54.0±1.7 16·1±0.5
HH-EPO-015 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 10.0±0.40 54.57±2.50 15.01±0.57
HH-EPO-016 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9·88±0·42 56.50±2.95 13.24±4.2
HH-EPO-017 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.70±0.30 55.84±2.33 14.93±0.55
HH-EPO-018 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.69±0.33 56.97±3.13 13.22±2.66
HH-EPO-018A 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.44 ±0.65 54.47±2.61 14.35±1.35
HH-EPO-018B 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.77±0.51 55·71±3.31 13·72±2.35
HH-EPO-018C 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 9.59±0.53 54.98±2.83 13.86±2.47
5ng/kg,sc,dl-3 9.0±0.6 46.2±2.7 14.3±0·7
表三、 ***模拟肽衍生物对小鼠血小板、 白细胞生成的影响
分组 小鼠 给药剂量和方案 血小板 (Χ103/μί) 白细胞 （X10¼iL)
(只）
control 10 0.1%BSA inNS 1078.0±151.2 5.1±1·5
HH-EPO-005 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1957.8±349.5 4.2±1·2
HH-EPO-006 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1087.8±118.5 4.1±1.2
HH-EPO-007 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 2082.1 ±863.9 3·6±0·8
HH-EPO-008 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1685.5±351.3 2.9±0.5
HH-EPO-015 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1106.6±170.03 4.32 + 1.29 HH-EPO-016 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1275.88±239. 90 5.06土 1. 41
HH-EPO-017 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1109.60± 130. 73 4.25 ± 1. 65
HH-EPO-018 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 ]317.50±461. 06 4.11 ± 1· 31
HH-EPO-018A 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1432.50±453. 05 4.23 ± 1· 23
HH-EPO-018B 】0 4.5mg/kg,sc,dl-3 1337.70±363. 06 4.07± 1. 23
HH-EPO-018C 10 4.5mg/kg,sc,dl-3 1355.50±331. 07 4.21 ± 1. 34
EPO 10 5^ig/kg,sc,dl-3 1306.8± 170. 4.0±0. 9 实施例十八： ***模拟肽衍生物对猕猴的作用 实验目的：
评价***模拟肽衍生物对猕猴红细胞生成的影响。 材料及方法- ***模拟肽衍生物 ΗΗ-ΕΡΟ- 018， 由江苏豪森药业股份有限公司提供； ***： 购自沈阳三生制药有限责任公司。使用前以含 0.1 %BSA的生理 盐水稀释。
猕猴， 体重 5.5〜8.5kg， 雌雄不限， 购自苏州西山中科实验动物中心。猕猴根据基 础血红蛋白分组，每组三只。 HH-EPO-018 1.35mg/kg,静脉注射一次； EPO 240μ/1¾, 三次 /周， 连续给药五周， 每周测 1〜2次血液学指标。 结果及讨论：
HH-EPO-018单次静脉注射导致猕猴外周血血红蛋白含量上升， 血细胞压积升高， 说明 HH-EPO-018刺激血红蛋白生成， 该刺激作用在给药 35天后达到顶峰， 随后 缓慢下降， 对血红蛋白的刺激作用大约为 33 %。 阳性对照***同样升 高猕猴外周血血红蛋白含量， 升高血细胞压积， 其作用在停药后缓慢减弱。 按照 目前的给药方案， HH-EPO-018和***对猕猴血红蛋白生成的刺激作用 相当 （见附图 1、 2)。 实施例十九： 评价并比较***模拟肽衍生物 HH-EPO-015、 HH-EPO-018, HH-EPO-018B与阳性对照 AF37702对小鼠生成作用的影响 材料及方法： HH-EPO-015、 HH-EPO-018, HH-EPO-018B, AF37702 , 均由江 苏豪森药业股份有限公司提供。其中 AF37702也是***模拟肽衍生物， 为 Affymax公司产品 (商品名： Hematide)。 样品使用前以含 0.1% BSA的生理盐配 制。 昆明种小鼠， 购自中国科学院上海实验动物中心， 体重 25 ±2 g， 早， 各组动 物数： 10 只。 动物经适应后， 皮下注射 HH-EPO-015、 HH-EPO-018、 HH-EPO-018B、 AF37702, 第 1 次给药后第 6天处死小鼠， 取全血进行外周血细 胞及网织红细胞计数。 血细胞计数用 ADVIA全自动血球计数仪计数。
结果与讨论： HH-EPO-015、 HH-EPO-018, HH-EPO-018B, AF37702 单次皮下注 射均明显升高小鼠外周血网织红细胞百分比及计数；其中 HH- EPO-018B作用相对 较强； HH-EPO-018、 AF37702作用次之； HH-EPO- 015 作用最弱； HH-EPO-018、 AF37702作用基本相当 （见表四）。 HH-EPO- 015、 HH-EPO-018、 HH-EPO-018B、 AF37702 升高小鼠外周血血细胞压积和血红蛋白含量， 它们作用基本相当， 但对 小鼠外周血红细胞计数均没有明显影响 （见表五）。
表四： HH-EPO- 015、 HH-EPO-018、 HH-EPO-018B、 AF37702 对小鼠外周血网织 红细胞生成的影响
分组 小鼠 给药剂量和方案 %网织红细胞 网织红细胞计数
(只） (x士 SD) ( X 109/L，x±SD) control 10 0.1%BSA in NS 2.8± 1. 0 195.0±73.1
HH-EPO-015 10 2.5mg/kg,sc,dl 6.9±2.1 ** 511.9±191.7**
HH-EPO- 015 10 5.0 mg/kg,sc,dl 8.9±2.4** 558.9±230.5**
HH-EPO-018 10 2.5mg/kg,sc,dl 16.2±3.5** 1137.3±240.2**
HH-EPO-018 10 5.0 mg/kg,sc,dl 16.0±3.2** 1113.2±210.7**
HH-EPO-018B 10 2.5mg/kg,sc,dl 19.0±8.9** 1336.5±629.0**
HH-EPO-018B 10 5.0 mg/kg,sc,dl 20.0±5.3** 1440.3±416.5**
AF37702 10 2.5mg/kg,sc,dl 13.5±4.1** 865.2±291.4**
AF37702 10 5.0mg/kg,sc,dl 17.2±5.3** 1202.8±355.4** **P<0. 01 vs control 表五： HH- EP0- 015、 HH- EPO- 018、 HH- EP0_018B、 AF37702对小鼠外周血红细胞生 成、 血细胞压积、 血红蛋白含量的影响
分组 小鼠 给药剂量和方案 红细胞计数 血细胞压积 血红蛋白
(只） ( X l( VuL,x±SD) ( X 109/L,x士 SD) (g/dL) control 10 0.1%BSA inNS 6.9±0.5 38.6±2.8 12.5±0.9
HH-EPO-015 10 2.5mg/kg,sc,dl 7.5±0.3 42.7±1.8* 14.3±0.6**
HH-EPO-015 10 5.0 mg/kg,sc,dl 6.3±1.7 36.5±9.9 13.1±4.5
HH-EPO-018 10 2.5mg/kg,sc,dl 7.0±0.3 40.6±1.6 13.3±2.2
HH-EPO-018 10 5.0 mg/kg,sc,d 1 7.0±0.3 41.5±1.2* 14.2±0.8**
HH-EPO- 018B 10 2.5mg/kg,sc,dl 6.6±1.4 39.0±7.7 14.2±0.6**
HH-EPO-018B 10 5.0 mg/kg,sc,d 1 7.0±0.4 41.6±2.6* 14.4±0.9**
AF37702 10 2.5mg/kg,sc,dl 7.1±0.4 41.9±3.1* 14.1±1.1**
AF37702 10 5.0mg/kg,sc,dl 7.2±0.3 42.5±3.4* 14.0±0.8**
*P〈0. 05， **P〈0. 01 vs control

Claims (1)

  1. 权利要求书:
    1、 一种通式为（I)的***模拟肽衍生物及其可药用盐，
    Ri-R2- (C¾) n ~R- (C¾)„2-R4-R6
    (I)
    其中 、 R5选自***模拟肽单体肽及其类似物； n,、 n2各自独立地选 自 0〜10的整数； 、 各自独立地选自 - CO或- C ; R3选自 0、S、-C -、N (CH2)„3NHR6、 NC0 (C )„,,NHR6、 CH0C0NH (C )„5NHR6、 CHSC0N (C ) n5NHR6或 CHNHC0N (CH2) n5NH ，其中 n:i选自 1〜10的整数， 选自 2〜10的整数， 选自 2〜10的整数， RB选自 H或甲 氧基聚乙二醇衍生物。
    2、 根据权利要求 1所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征在 于 R,、 各自独立的选自通式为 YAX GX^TWX YA的***模拟肽单 体肽或其类似物， 其中该类似物中每个氨基酸均由一个标准单字母表示； 、 、 、 X5 、 Xe、 Y3各自独立的选自 20个遗传性编码的 L-氨基酸或非天然氨基酸中的 任意一个； Υ,、 Υ2各自独立的选自 20个遗传性编码的 L-氨基酸或非天然氨基酸中 任意一个或由这些氨基酸所组成的肽段； XL、 选自 C、 K、 D、 E、 Orn或 Hoc。
    3、 根据权利要求 2所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征在 于 R,、 Rs的氨基酸序列是一致的或不一致的。
    4、 根据权利要求 1〜3任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 其特征在于 R,、 R5的 N末端被乙酰化。 5、 根据权利要求 1〜4任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 其特征在在于 、 为形成二硫键的环肽。
    6、 根据权利要求 2所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征在 于¥3选自 K、 11或1?， 优选 ¥3是1^。
    7、 根据权利要求 1〜6任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐，其特征在于 R,、 的氨基酸序列的长度为 13〜40个氨基酸， 优选为 22个氨基 酸。 8、 根据权利要求 1〜7任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 其特征在于 、 R5选自具有如下序列 SEQ ID Nol- No30结构的环肽:
    Ac-GGLYADHYGPITWVKQPLRGGK-NH2(SEQ lDNO:l)
    Ac-GGLYADHYGPITWV-0rn-QPLRGGK-NH2(SEQ ID NO :2)
    Ac-GGLYAKHYGPITWVDQPLRGG -NH2(SEQ ID NO :3)
    Ac-GGLYA-Orn-HYGPlTWVDQPLRGGK-NH2(SEQ ID NO :4)
    Ac-GGTYSCHFGPLTWVCRPQRG- J3 Ala- K-NH2(SEQ ID NO:5)
    Ac-GGTYSC-Nle-FGPLTWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO:6)
    Ac-GGTYSCHFGSLTWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO:7)
    Ac-GGTYSCHFGALTWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO :8)
    Ac-GGLYADHYGPMTWVKQPLRGG -NH2(SEQ ID NO :9)
    Ac-GGLYADHYGPMTWV-Orn-QPLRGGK-NH2(SEQ ID NO:] 0)
    Ac-GGLYA-Orn-HYGPMTWVDQPLRGG -NH2(SEQ ID NO:l 1)
    Ac-GGTYSKHFGPMTWVORPQRG- Ala- K-NH2(SEQ ID NO :12)
    Ac-GGTYSCHFGPITWVCRPQRG- β Ala- K-NH2(SEQ ID NO :13)
    Ac-GGTYsiHFGPMTWV¾oc-RPQRG- 0 Ala- K-NH2(SEQ ID NO: 14) Ac-GGTYSCHFGPITWV-Hoc-RPQRG- β Ala- K-NH2(SEQ ID NO: 15) Ac-GGTYS(i-Nle-FGPMTWV-lkoc-RPQRG- 0 Ala-K-NH2(SEQ ID NO :16) Ac-GGTYSii- e-FGPITWviRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO :17)
    Ac-GGTYSCHFGPLTWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO: 18)
    β Ala-K-NH2(SEQ ID NO :19)
    Ac-GGTYSKHFGSMTWVERPQ G- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO:20)
    Ac-GGTYR(isMGPMTWV0LPMAGGK-NH2(SEQ ID NO :21)
    AC-GGTYR SMGPLTWV¾LPMAGGK-NH2(SEQ ID NO:22)
    Ac-GGTYSCHFGAMTWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO:23)
    Ac-GGTYSCHFGAITWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO:24)
    Ac-GGTYSCHFGPITWVCRPQRG- β Ala-K-NH2(SEQ ID NO :25)
    AC-GGTYS0HFGPLTWV(1:RPQRG- ^ Ala-K-NH2(SEQ ID NO:26)
    Ac-GGMYSCRMGPMTWVCGPSRGGK-NH2(SEQ ID NO :27)
    Ac-GGMYSCRMGPLTWVCGPSRGGK-NH2(SEQ ID NO:28)
    Ac-GGTYSCHFGPLTWV-Hoc-RPQRG- β Ala- K-NH2(SEQ ID NO :29)或 Ac-GGTYS-Hoc-HFGPLTWVCRPQRG- β Ala- K- H2(SEQ ID NO:30)。 9、 根据权利要求 1〜7任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 其特征在于 R,、 R5各自独立的选自具有如下序列 SEQ ID Nol- No8结构的环肽，
    Ac-GGLYADHYGPITWV^QPLRGGK-NH2(SEQ ID N0:1)
    Ac-GGLYADHYGPITWV-Orn-QPLRGGK- H2(SEQ ID NO :2)
    Ac-GGLYAiHYGPITWV0QPLRGG - H2(SEQ ID NO :3)
    Ac-GGLYA-Om-HYGPIT VDQPLRGGK-NH2(SEQ ID NO :4)
    Ac-GGTYSCHFGPLTWVCRPQ G- β Ala- K-NH2(SEQ ID NO: 5)
    Ac-GGTYsi-Nle-FGPLTWviRPQRG- β Ala-K- H2(SEQID NO :6)
    Ac-GGTYSCHFGSLTWVCRPQRG- & Ala-K-NH2(SEQ ID NO:7)或
    Ac-GGTYSCHFGALTWVCRPQRG- β Ala-K-爾 2(SEQ ID NO :8)。 10、根据权利要求 1〜9任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用 盐， 其特征在于所述的***模拟肽衍生物选自下列肽， 其中
    ru，n2是 2， R2、 是 C0， 是 CH0C0NH (C¾) n5NH ， 是2；
    nb 是 1， R2、 是- CO, R3是 NC0 (C¾) n4NHR6) 是 2；
    是2， R2、 R4是- (¾, 是 CH0C0NH (CH2) n5NHR6， n5是 2; 或者
    ， 是1， R2、 C ，R3是 Ν∞((¾) η4ΝΗ , η4是 2。
    11、根据权利要求 10任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征在于！^是！"!。 12、根据权利要求 10任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征在于 R6是甲氧基聚乙二醇衍生物， 优选甲氧基聚乙二醇衍生物分子量为 5， 000〜100， 000道尔顿。
    13、 根据权利要求 12所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐， 其特征 在于所述的甲氧基聚乙二醇衍生物的结构为分枝型或线型， 优选甲氧基聚乙二醇 衍生物的结构为线型、 分子量为 20， 000道尔顿， 或者甲氧基聚乙二醇衍生物的 结构为分枝型、 分子量为 40， 000道尔顿。
    14、 根据权利要求 1〜13任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药 用盐，其特征在于所述的***模拟肽衍生物选自下列肽， 其中
    , 是 2， R(、 选自序列350 10 ：1〜380：0^0: 8, 、 选自- C0或一 CH2， R3 是 CH0C0NH (CH2)„5NHR6，其中 选自 2〜10的整数； R6是结构为线型、分子量为 20， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物；
    r ,n2是 1， R5选自序列SEQIDN0:1〜SEQIDN0:8， R2、 选自- CO或一 C R3 是 NC0(CH , ，其中 选自 2〜10的整数； 是结构为线型、分子量为 20， 000 道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物；
    n n2是 2, 、 R5选自序列 SEQ ID 1〜SEQ ID 8， R2、 R„选自- CO或一 CH2， R3是 CH0C0NH(C¾)n5NHRe, 其中 n5选自 2〜10的整数； 是结构为分枝型、分子量为 40， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物； 或者
    n n2是 1， 、 R5选自序列 SEQIDN0:1〜SEQIDN0:8， R2、 R4选自- CO或一 C¾， R3 ?¾NC0(C¾)n,NHR6, 其中 选自 2〜10的整数； 是结构为分枝型、 分子量为 40， 000道尔顿的甲氧基聚乙二醇衍生物。
    15、 根据权利要求 1〜14任意一项所述的***模拟肽衍生物及其可药 用盐， 其特征在于所述的***模拟肽衍生物及其可药用盐为
    20v)IGSAo(3OJla≥AVV de2MU0 I- 16、一种制备权利要求 1〜15任意一项所述的***模拟肽衍生物及其 可药用盐的方法， 包括以下歩骤：
    (1)制备 R,H、 R5H, 其中 R,、 R5选自***模拟肽单体肽及其类似物，
    (2)制备通式为 (Π) 的功能小分子
    RT-C0- (CH2)„-Z2- (C ) n2-C0-R8
    (II)
    其中 n,、 各自独立地选自 0〜10的整数；
    R7、 R8选自 OH或 H;.
    Z2选自 0、 S、 C 、 N (CH2) n6NHR9、 NCO (C )„7NHR9、 CH0C0NH (C )„8NHR9、 CHSC0N (CH2) η8ΝΗ¾ 或 CHNHC0N(C )n8NHRa， 其中 为选自 1〜10的整数， n7为选自 2〜10的整数， 为选自 2〜10的整数， Rg选自 Boc或 Cbz,
    (3)将 Rt、 与通式为 （II) 的功能小分子进行酰胺化反应或还原胺化反应， 制 备得通式 （III) 化合物，
    R「R CH2)NL- Z2 (CH 2- (111)，
    其中 R2、 各自独立地选自- CO或 - C¾，
    (4)脱去 Boc或 Cbz后， 与活性甲氧基聚乙二醇衍生物进行酰胺化反应。
    17、 根据权利要求 16所述的制备方法， 其特征在于所述的通式 （II) 中， r、 是 1或 2， R7、 R8选自 0H ， Z2选自 。（(^ ^！！！^或 CH0C0NH(C )n8NHR9， n7 选自 2~10的整数， 选自 2〜10的整数， 是 Boc; 或者
    、 是 1或 2， R7、 R8选自 H ， Z2选自 NC0(C )n7NHR9或 CH0C0NH(CH2) n8NHR9, n7 选自 2〜10的整数， 选自 2〜10的整数， 是80 18、 一种药物组合物， 包含：
    (1)治疗量的如权利要求 1〜15任一项所述的***模拟肽衍生物及其 可药用盐， 和
    (2)药学可接受的药物载体。 19、 根据权利要求 1〜15 中任一项所述的***模拟肽衍生物及其可药 用盐在制备用于治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的 药物中的用途。
    20、根据权利要求 18所述的药物组合物在制备用于治疗以缺乏红细胞生成素或红 细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的用途。 21、 根据权利要求 19或 20所述的用途， 其特征在于所述缺乏红细胞生成素或红 细胞群缺少或缺陷为特征的疾病是末期肾功能衰竭或透析； AIDS相关性贫血， 自 身免疫性疾病， 或恶性肿瘤； 囊性纤维变性； 早期早熟性贫血； 与慢性炎性疾病 相关的贫血； 脊髓损伤； 急性失血； 衰老和伴有异常红细胞产生的肿瘤疾病。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103570834A (zh) * 2012-07-19 2014-02-12 江苏豪森药业股份有限公司 甲氧基聚乙二醇修饰的***模拟肽衍生物

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2709648A4 (en) * 2011-05-19 2015-04-08 Geysen Hendrik M COMPOUNDS FOR BINDING TO THE ERYTHROPOIETIN RECEPTOR
WO2013158871A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of erythropoietin and derivatives for treating hypertension
CN103450348B (zh) * 2012-05-29 2016-03-30 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 一种***模拟肽、其制备方法和用途
CN103536900B (zh) * 2012-07-16 2017-06-16 江苏豪森药业集团有限公司 含有***模拟肽的药物组合物
WO2014149477A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for achieving therapeutically effective doses of anti-cd47 agents
CN104231039A (zh) * 2013-06-08 2014-12-24 江苏豪森药业股份有限公司 用于合成***模拟肽衍生物的功能小分子及其制备方法
CN105085653B (zh) * 2015-08-26 2019-01-08 天津药物研究院有限公司 一种***模拟肽及其制备方法和应用
CN106608913B (zh) * 2015-10-22 2020-05-05 天津药物研究院有限公司 一种1，2，3-丙三酸偶联的epo拟肽衍生物及其制备方法和应用
CN106608912B (zh) * 2015-10-22 2019-09-20 天津药物研究院有限公司 一种脂肪二羧酸偶联的epo模拟肽衍生物及其制备方法和应用
CN105367629B (zh) * 2015-11-09 2019-01-08 天津药物研究院有限公司 一种***模拟肽以及其制备方法和用途
CN106928338A (zh) * 2015-12-31 2017-07-07 杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司 ***肽及衍生物和聚合物、制备方法和应用
KR20230048469A (ko) 2016-07-12 2023-04-11 헥살 아게 시알산 잔기의 감소된 아세틸화율을 갖는 당단백질
CN108236717A (zh) * 2016-12-27 2018-07-03 江苏豪森药业集团有限公司 聚乙二醇连接臂与所修饰多肽药物的偶合物
KR102073886B1 (ko) 2019-05-02 2020-02-05 주식회사 미래와바다 잘피이식용 다공질 패널
CN114601916B (zh) * 2022-04-12 2024-04-16 江苏豪森药业集团有限公司 一种培化西海马肽注射制剂及其制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990008822A1 (en) 1989-02-03 1990-08-09 Genetics Institute, Inc. Erythropoietin receptor
JP4050314B2 (ja) * 1995-06-07 2008-02-20 オーソ ファーマシューティカル コーポレイション エリトロポエチン受容体に結合する化合物およびペプチド
EP0964702B1 (en) 1996-08-02 2006-10-04 Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. Polypeptides having a single covalently bound n-terminal water-soluble polymer
ATE291436T2 (de) * 2000-05-15 2005-04-15 Hoffmann La Roche Flüssige arzneizubereitung enthaltend ein erythropoietin derivat
CN1169827C (zh) * 2001-08-07 2004-10-06 沈阳三生制药股份有限公司 一种增强多肽在体内稳定性药物的生产方法及其应用
AU2004238870B8 (en) 2003-05-12 2010-04-15 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
MXPA05012315A (es) 2003-05-12 2006-04-18 Affymax Inc Compuestos poli(etilenglicol) modificados novedosos y usos de los mismos.
SI1625156T1 (sl) 2003-05-12 2013-02-28 Affymax, Inc. Peptidi, ki se veĹľejo k eritropoetinskemu receptorju
CN100362019C (zh) * 2004-03-02 2008-01-16 成都生物制品研究所 聚乙二醇修饰后具有体内生理活性的重组***
WO2006062685A2 (en) * 2004-11-11 2006-06-15 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
US20090005292A1 (en) * 2004-11-11 2009-01-01 Affymax, Inc. Novel Peptides that Bind to the Erythropoietin Receptor

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103570834A (zh) * 2012-07-19 2014-02-12 江苏豪森药业股份有限公司 甲氧基聚乙二醇修饰的***模拟肽衍生物

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