CN101658491B - 一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种羊膜滴眼液及其制备方法,是以羊膜匀浆上清液为主要活性成分,再加入海藻糖、玻璃酸或其盐、肝素或其盐、氯化钠、苯扎溴铵、维生素等物质。本发明眼科给药***具有良好的润滑作用,可提供防粘连的表面;作为给药***添加其它药理活性成分,可增加药液的黏度,延长药物在眼表面的存留时间,提高药物的生物利用度,减小药物的毒副作用,降低药物的刺激性,并具有缓释作用。本发明羊膜滴眼液是一个有效的眼用新药,具有良好的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及一种针对角膜碱烧伤的眼科用药,尤其涉及一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液。
背景技术
众知,羊膜移植作为重建眼表的一项新技术,在国内外得到逐渐的推广应用。羊膜移植已广泛应用于角膜碱烧伤并取得较好的治疗效果。但是,羊膜是一种暂时性的生物覆盖物,存在以下几方面的欠缺:
(1)在移植后1-2周,羊膜移植片自行溶解、脱落、移位、感染;
(2)较长久贴附于角膜表面,沉积于前弹力层为轻度浑浊,持续三个月之久;
(3)术后外形欠佳,影响美观;
(4)移植后的羊膜长期存在能否成为受体组织组成部分尚缺乏直接证据。
来自《现代医药卫生》的《人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究》这篇文章简述了一种治疗兔角膜碱烧伤的人羊膜匀浆上清液的研制方法,羊膜匀浆上清液比羊膜移植经济、方便、效果佳。其制备方法是在超净台上将羊膜在PBS液中清洗3次,约10~15分钟,取适当大小称湿重,按1∶1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆,每冲程30秒。取出匀浆按1∶5加PBS液于离心管中离心2000r/min,10分钟,取上清液备用(1小时内用)。随后加入细胞冻存液放入-80℃冰箱过夜,再放入液氮中冻存。但目前由于羊膜匀浆不稳定,只能短时间内使用,还未用于临床。
玻璃酸存在于人体,是由普糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖为双糖单位组成的直接粘多糖。玻璃酸多以其钠盐即玻璃酸钠(英文:sodium hyaluronate)的形式存在和应用。玻璃酸基本为一化学惰性物质,其具有独特的黏弹性和非牛顿流体的特性,并具有重要的药理作用和生理功能,如:
1.智能保湿作用:玻璃酸被称为理想的天然保湿因子,其分子中的羧基和其它极性基团可以与水形成氢键而结合大量的水。而且,玻璃酸还可以根据环境的湿度,自动调节吸水量。这种智能保湿作用可使眼表始终保持最佳湿度;
2.润滑作用:玻璃酸溶液具有良好的黏弹性,在低幢击频率即切变速率下,溶液呈黏性,可减少组织间的摩擦,在高窗机频率即高切变速率下,溶液呈弹性,可避免组织损伤;
3.修复、促进愈合作用:玻璃酸是创伤无疤痕修复中不可或缺的物质,其可抑制炎症反应,修复眼表损伤;
4.生物粘附性:玻璃酸与其它高分子聚合物相比,相同的溶液黏度甚至较低的黏度却能使药物获得较高的生物利用度,其原因在于玻璃酸与眼球表面黏蛋白具有一种特殊的亲和力,即生物黏附。玻璃酸分子中的亲水性官能团可与黏蛋白相互作用,从而延缓药物的消除;
5.铺展润湿能力:玻璃酸作为一种黏多糖,其分子结构、性质与泪液中的粘性糖蛋白具有相似之处,易与和泪液发生作用。在增加药液黏度的同时,因具有与泪液相近的表面张力,从而有利于药物与泪液混合,使药液在角膜表面均匀地铺展,增强药物的作用;
6.缓释作用:玻璃酸具有使药物缓释的作用,是由其分子特异性所决定的。药物可通过非共价方式镶嵌在玻璃酸的大分子网状结构中,玻璃酸分子犹如一个动态的分子筛,连同药物较长时间附着于眼球表面;
7.非牛顿流体特性:合成高分子聚合物等物质虽可增加药液的黏度,延长药液在眼表的滞留时间从而提高疗效,然而所用合成高分子聚合物溶液基本上为牛顿流体,当黏度增大到一定程度,会使眼睛产生黏糊不适的感觉。而玻璃酸溶液为非牛顿流体,具有独特的黏弹性,当眼睛眨动时,由于高切变速率而黏度降低,克服了合成高分子聚合物等增粘剂存在的不足。
海藻糖具有多种生物特性,例如:1.抗干燥特性(“水替代”作用):海藻糖是一种在脱水作用中起关键保护作用的双糖,它能使许多生物在异常条件下,如高温、脱水、冷冻、干燥时仍能保持原有的活性,提高细胞的抗干燥能力。研究发现海藻糖可以抑制因干燥导致的体外培养人角膜上皮细胞死亡;
2.稳定生物膜的作用:人的眼表也是生物膜,海藻糖可通过降低相变温度,使在脱水条件下的膜脂仍能处于液晶状态,从而起到保护生物膜的作用;
3.对蛋白质等生物分子的保护作用:海藻糖对脱水干燥的生命物质有明显的保护作用,即使在极度干燥的环境中,其还能很好的稳定蛋白质等生物分子,使其不受破坏;
4.制剂稳定剂和保鲜剂的作用:海藻糖作为稳定剂和保鲜剂已有广泛应用。
发明内容
为了克服羊膜移植术后可能会发生植片排斥反应、植片脱落、移位溶解、感染等并发症和羊膜匀浆上清液的不稳定性、保留时间短等缺点,本发明的目的在于提供一种以羊膜匀浆上清液为主要活性成分的滴眼液。
为了达到上述目的,本发明采用如下技术方案:
本发明提供一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液,其是以羊膜匀浆上清液为主要活性成分,再加入海藻糖、玻璃酸或其盐、肝素或其盐、氯化钠、苯扎溴铵、维生素。
所述羊膜滴眼液的处方是:每100ml注射用水中,包括海藻糖1-2g,玻璃酸或其盐0.5-1.5g,肝素或其盐4000-6000单位,氯化钠0.3-0.9g,苯扎溴铵0.001-0.003g,维生素E 0.05-0.15g,羊膜匀浆上清液1-3μl。
优选的,所述羊膜滴眼液的处方是:每100ml注射用水中,包括海藻糖1.5g,玻璃酸或其盐1.0g,肝素或其盐5000单位,氯化钠0.6g,苯扎溴铵0.002g,维生素E 0.1g,羊膜匀浆上清液2μl。
所述羊膜滴眼液的pH值为5.0-9.0,优选为6.5-7.5。所述滴眼液可以采用磷酸/磷酸盐缓冲对、硼酸/硼酸盐缓冲对、盐酸或氢氧化钠来调节pH值,优选盐酸。
其中,本发明涉及的玻璃酸,包括玻璃酸及其盐,即玻璃酸钠或其它玻璃酸的盐,优选为玻璃酸钠。
本发明所涉及的肝素,包括肝素及其盐,优选为肝素钠或肝素钾。
本发明羊膜滴眼液的配方合理,主要体现在:1)海藻糖等小分子物质优先与蛋白质表面的水分子结合,使蛋白质的溶剂化层半径减少,分子结构更紧密,构象更稳定,有利于抵御外界极端环境的影响,增强蛋白质的稳定性。2)玻璃酸及其盐有使角膜上皮细胞抗干燥的作用,是很好的保湿剂;也可增加药物的生物利用度,还可减轻药物的生物利用度,还可减轻药物对眼的刺激,促进眼部创伤的愈合,迅速缓解眼部不适症状。3)由于碱性成纤维细胞生长因子功能区上有肝素结合区,是碱性氨基酸的富集区,这些带电荷的碱性残基可与带负电荷的肝素结合发挥作用。人类bFGF结合肝素分子肝素后,其三级结构的构象发生变化,使蛋白质溶解度温度提高,结构更加稳定。且肝素还可以抑制蛋白酶对bFGF的水解,延长bFGF的半衰期。此外,肝素钠或肝素钾具有抗炎作用,可抑制免疫刺激或非免疫刺激诱导的肥大细胞的活化,抑制其释放炎性物质。因此,它们可用于治疗慢性结膜炎和过敏性结膜炎。另外,肝素钠或肝素钾还可抑制细菌在眼表面的吸附,可用于急性细菌性结膜炎的预防。与肾上腺皮质激素和非甾体抗炎药相比,肝素钠具有生物相容性好、不引起眼内压升高和长期使用安全等优点,是一种较理想的治疗药物。
本发明还提供所述羊膜滴眼液的制备方法,是将玻璃酸或其盐浸入占总量1/4的注射用水中,使其溶解备用;取占总量1/2的注射用水,依次溶解肝素或其盐、海藻糖、氯化钠、苯扎溴铵、维生素E,必要时可加热,再加入所述玻璃酸或其盐的溶液,再将羊膜匀浆上清液加入上述溶液,补加注射用水至体积,搅拌均匀,调pH值在5.0-9.0(优选为6.5-7.5),再用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后即得本发明滴眼液。
其中,所述羊膜匀浆上清液是采用如下方法制备得到:在超净台上将羊膜在PBS液中清洗3次,约10~15分钟,取适当大小称湿重,按1∶1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆,每冲程30秒。取出匀浆按1∶5加PBS液于离心管中离心2000r/min,10分钟,取上清液备用;
所述调pH值是采用磷酸/磷酸盐缓冲对、硼酸/硼酸盐缓冲对、盐酸或氢氧化钠,优选盐酸。pH值优选在6.5-7.5之间。
本发明所述羊膜滴眼液可以用于治疗角膜碱烧伤,治疗眼部化学伤,治疗翼状胬肉术后、青光眼滤过术后、角膜上皮缺损等眼部疾病。
本发明的有益效果是与羊膜移植相比,羊膜滴眼液具有制作方便、操作简单、技术难度不高等优势。从患者角度来讲,该羊膜滴眼液携带使用方便、风险小、费用低。进一步与现有的羊膜匀浆上清液相比,本发明滴眼液含有多种活性物质,具有良好的稳定性和生物利用度:本发明眼科给药***具有良好的润滑作用,可提供防粘连的表面;作为给药***添加其它药理活性成分,可增加药液的黏度,延长药物在眼表面的存留时间,提高药物的生物利用度,减小药物的毒副作用,降低药物的刺激性,并具有缓释作用。该滴眼液是一个有效的眼用新药,具有良好的临床应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明,应该理解的是,这些实施例仅用于例证的目的,决不限制本发明的保护范围。
海藻糖购自北京蓝博斯特生物技术有限公司;型号:CHLO7-25G;规格:50mg/ml。
肝素钠购自上海灿溪海灿溪经贸有限公司;型号:JL011800278;规格:1g。
玻璃酸钠购自上海其胜生物制剂有限公司;产品标准号:YZB/国0077-2005;规格:1.0ml/支;标示质量浓度:15mg/ml。
维生素E购自武汉远城科技发展有限公司;规格:食品级、医药级。
羊膜匀浆上清液的制备:在超净台上将羊膜在PBS液中清洗3次,约10~15分钟,取适当大小称湿重,按1∶1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆,每冲程30秒。取出匀浆按1∶5加PBS液于离心管中离心2000r/min,10分钟,取上清液备用。
实施例1
处方:海藻糖1.5g,玻璃酸钠1.0g,肝素钠5000单位,氯化钠0.6g,苯扎溴铵0.002g,维生素E 0.1g,羊膜匀浆上清液2μl,注射用水加至100ml。
将玻璃酸钠浸入适量(约占总量的1/4)注射用水中,使其溶解备用;取约占总量1/2的注射用水,依次溶解肝素钠、海藻糖、氯化钠、苯扎溴铵、维生素E,必要时可加热,再加入玻璃酸钠溶液,再将制备得到的羊膜匀浆上清液加入上述溶液,补加注射用水至体积,搅拌均匀,用盐酸调节pH至6.5-7.5,再用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后即得本发明滴眼液。
实施例2
处方:海藻糖1g,玻璃酸钠0.5g,肝素钾4000单位,氯化钠0.3g,苯扎溴铵0.001g,维生素E 0.05g,羊膜匀浆上清液1μl,注射用水加至100ml。
将玻璃酸钾浸入适量(约占总量的1/4)注射用水中,使其溶解备用;取约占总量1/2的注射用水,依次溶解肝素钾、海藻糖、氯化钠、苯扎溴铵、维生素,必要时可加热,再加入玻璃酸钾溶液,再将制备得到的羊膜匀浆上清液加入上述溶液,补加注射用水至体积,搅拌均匀,用磷酸/磷酸盐缓冲液调节pH至5.0-6.5,再用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后即得本发明滴眼液。
实施例3
处方:海藻糖2g,玻璃酸钠1.5g,肝素钠6000单位,氯化钠0.9g,苯扎溴铵0.003g,维生素E 0.15g,羊膜匀浆上清液3μl,注射用水加至100ml。
将玻璃酸钠浸入适量(约占总量的1/4)注射用水中,使其溶解备用;取约占总量1/2的注射用水,依次溶解肝素钠、海藻糖、氯化钠、苯扎溴铵、维生素,必要时可加热,再加入玻璃酸钠溶液,再将羊膜匀浆上清液加入上述溶液,补加注射用水至体积,搅拌均匀,用盐酸调节pH至7.5-9.0,再用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后即得本发明滴眼液。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,对本发明而言仅仅是说明性的,而非限制性的。本专业技术人员理解,在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变,修改,甚至等效,但都将落入本发明的保护范围内。
Claims (12)
1.一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液,其特征在于是以羊膜匀浆上清液为主要活性成分,再加入海藻糖、玻璃酸或其盐、肝素或其盐、氯化钠、苯扎溴铵、维生素E;
所述羊膜匀浆上清液是采用如下方法制备得到:在超净台上将羊膜在PBS液中清洗3次,10~15分钟,取适当大小称湿重,按1∶1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆,每冲程30秒;取出匀浆按1∶5加PBS液于离心管中离心2000r/min,10分钟,取上清液备用。
2.根据权利要求1所述的羊膜滴眼液,其特征在于其处方是:每100ml注射用水中,包括海藻糖1-2g,玻璃酸或其盐0.5-1.5g,肝素或其盐4000-6000单位,氯化钠0.3-0.9g,苯扎溴铵0.001-0.003g,维生素E0.05-0.15g,羊膜匀浆上清液1-3μl。
3.根据权利要求2所述的羊膜滴眼液,其特征在于其处方是:每100ml注射用水中,包括海藻糖1.5g,玻璃酸或其盐1.0g,肝素或其盐5000单位,氯化钠0.6g,苯扎溴铵0.002g,维生素E 0.1g,羊膜匀浆上清液2μl。
4.根据权利要求1-3任一项所述的羊膜滴眼液,其特征在于所述滴眼液的pH值为5.0-9.0。
5.根据权利要求4所述的羊膜滴眼液,其特征在于所述滴眼液的pH值为6.5-7.5。
6.根据权利要求1-3任一项所述的羊膜滴眼液,其特征在于采用磷酸/磷酸盐缓冲对或硼酸/硼酸盐缓冲对或盐酸或氢氧化钠来调节pH。
7.根据权利要求6所述的羊膜滴眼液,其特征在于采用盐酸来调节pH。
8.根据权利要求1-3任一项所述的羊膜滴眼液,其特征在于所述玻璃酸或其盐为玻璃酸钠;所述肝素或其盐为肝素钠或肝素钾。
9.一种制备权利要求1-3任一项所述的羊膜滴眼液的方法,其特征在于是将玻璃酸或其盐浸入占总量1/4的注射用水中,使其溶解备用;取占总量1/2的注射用水,依次溶解肝素或其盐、海藻糖、氯化钠、苯扎溴铵、维生素E,必要时可加热,再加入所述玻璃酸或其盐的溶液,再将羊膜匀浆上清液加入上述溶液,补加注射用水至体积,搅拌均匀,调pH值在5.0-9.0,再用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后即得滴眼液。
10.根据权利要求9所述的羊膜滴眼液的制备方法,其特征在于所述调pH值是采用磷酸/磷酸盐缓冲对、硼酸/硼酸盐缓冲对、盐酸或氢氧化钠;pH值在6.5-7.5之间。
11.根据权利要求10所述的羊膜滴眼液的制备方法,其特征在于所述调pH值是采用盐酸。
12.权利要求1-3任一项所述的羊膜滴眼液在制备治疗角膜碱烧伤,治疗眼部化学伤,治疗翼状胬肉术后、青光眼滤过术后、角膜上皮缺损这些眼部疾病的药物制剂中的应用。
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