CN101623394A - 一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途。本发明的裸花紫珠提取物是从裸花紫珠叶中提取的含有裸花紫珠总黄酮类化合物和鞣质类化合物的提取物。所述的提取物是将裸花紫珠叶用水、稀醇或稀酮提取，提取液浓缩后，经大孔吸附树脂柱层析纯化所得。本发明裸花紫珠提取物的纯度高，具有抑菌、止血、镇痛、收敛的作用。

Description

一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途

技术领域

本发明涉及中药制药领域，具体涉及一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途。

背景技术

裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.exArn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，我国广东、广西也有分布。国外主要分布于印度、越南和马来西亚。其根、叶可入药，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿，驱风祛湿之功效，主治化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、创伤出血等症，外用治烧、烫伤及外伤出血等。

目前已有裸花紫珠片、裸花紫珠栓、裸花紫珠合剂等，现行工艺为水煎煮两次，再浓缩、过滤、干燥成干浸膏，工艺简单粗糙，却沿用了近30年，对中药提取、浓缩、干燥等工艺的方法和参数的合理性未作研究，而且，现行产品均以单一的总黄酮类成分作为质量控制标准，质量标准有待进一步提高。

因此，本发明所要解决的技术问题在于对裸花紫珠叶进行进一步的深入研究，从而提供一种活性成分含量更高，更为合理、有效的裸花紫珠提取物。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种裸花紫珠提取物，该提取物包含裸花紫珠总黄酮类化合物和鞣质类化合物。

所述提取物中黄酮类化合物的含量为50％～90％，鞣质的含量为5％～20％。其中，总黄酮类化合物包括木犀草素、芹菜素和木犀草苷的至少一种。

本发明的另一个目的是提供一种上述裸花紫珠提取物的制备方法。该制备方法包括下列步骤：

1).在裸花紫珠药材中加入水、稀醇或稀酮溶剂，加热煎煮，倒出煎液，过滤得滤液；

2).将所得滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；

3).将乙醇洗脱液浓缩，得裸花紫珠提取物。

其中，步骤2)中的大孔吸附树脂为聚苯乙烯类大孔吸附树脂，所述聚苯乙烯类大孔吸附树脂优选JD-1、D101、AB-8、X-5或D402，树脂柱的径高比为1∶5～1∶10。

本发明的又一个目的是公开了将上述裸花紫珠提取物与药学上可接受的辅料制备而成的制剂，该制剂优选喷雾剂、片剂、胶囊、口服液或颗粒剂。

本发明的再一个目的是公开了上述裸花紫珠提取物在制备用于抑菌、止血、镇痛或收敛的药物中的应用。

本发明的裸花紫珠提取物不仅含有总黄酮类成分，而且含有鞣质类成分，总有效成分的含量相对提高；提取物的制备工艺也相对简单，收率较高；所得裸花紫珠提取物还具有显著的抑菌、止血、镇痛、收敛的作用。

具体实施方式

实施例一

取100kg裸花紫珠药材，加水1500kg，浸泡30分钟，加热煮沸120分钟，倒出煎液，药渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸60分钟，合并三次煎液，过滤，滤液通过比表面积为350～450m²/g、骨架密度为1～1.2g/ml，平均孔径为35～65nm，空隙率为60～68％的JD-1(WLD)型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1∶5，弃去流出液，用5倍柱体积的水洗涤柱体，弃去洗涤液，用10％的乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。收集洗脱液，回收乙醇后减压浓缩至相对密度为1.2，冷冻干燥，检验分装即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱用5％的盐酸乙醇进行再生。

提取物的收率为2.53％，其中，经UV定量分析(分析方法按照公知方法进行操作)，总黄酮含量为50％，总鞣质含量20％。

实施例二

取100kg裸花紫珠药材，加稀醇1000kg，浸泡50分钟，加热煮沸90分钟，倒出煎液，药渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸90分钟，合并三次煎液，过滤，滤液通过比表面积为350～450m²/g、骨架密度为1～1.2g/ml，平均孔径为35～65nm，空隙率为60～68％的D101型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1∶7，弃去流出液，用4倍柱体积的水洗涤柱体，弃去洗涤液，用50％乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。收集洗脱液，回收乙醇后减压浓缩至相对密度为1.1，冷冻干燥，检验分装即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱用10％氢氧化钠碱液洗涤后再用5％盐酸乙醇进行再生。

裸花紫珠提取物的收率为3.23％，其中，经UV定量分析，总黄酮含量为81.17％，总鞣质含量12.23％。

实施例三

取100kg裸花紫珠药材，加稀酮2000kg，浸泡40分钟，加热煮沸60分钟，取出煎液，药渣再煎2次，每次加水1000kg，煮沸60分钟，合并三次煎液，过滤，滤液通过比表面积为350～450m²/g、骨架密度为1～1.2g/ml，平均孔径为35～65nm，空隙率为60～68％的AB-8型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1∶10，弃去流出液，用6倍柱体积的水洗涤柱体，弃去洗涤液，用90％乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。收集洗脱液，回收乙醇后减压浓缩至相对密度为1.08，冷冻干燥，检验分装即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱用10％氢氧化钠碱液洗涤后再用5％盐酸乙醇进行再生。

裸花紫珠提取物的收率为3.03％，其中，经UV定量分析，总黄酮含量为90％，总鞣质含量5％。

实施例四  片剂制备

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例一方法制得)，淀粉80g，糊精5g混合均匀，加入10％淀粉浆制软材，用14目尼龙筛网制粒，60～70℃通风干燥，16目筛整粒，加硬脂酸镁1.5g，羧甲基淀粉钠5g混匀，压制成1000片，包衣即得。成人口服每日2～5次，每次1～10片。

实施例五  胶囊制备

将本发明裸花紫珠提取物100g(实施例二方法制得)，淀粉78g，硬脂酸镁2g混匀，直接用全自动胶囊填充机填充成1000粒，抛光即得。成人口服每日2～5次，每次1～10粒。

实施例六  口服液制备

将本发明裸花紫珠提取物20g(实施例一方法制得)，与蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸钠2g及蒸馏水300ml混合，加热至85～90℃，搅拌使溶解，保温30分钟，滤过，滤液加水稀释至1000ml，搅匀，灌封(每支10毫升)，灭菌即得。成人口服每日2～5次，每次1～5支。

实施例七  颗粒剂制备

取本发明裸花紫珠提取物10g(实施例二方法制得)、糊精20g、蔗糖100g及乙醇适量，混匀，过十目筛制成颗粒，于60～70℃干燥，整粒，分装即得，每包重5g，成人口服每日2～5次，每次1～5包。

实施例八  喷雾剂制备

取本发明裸花紫珠提取物2g(实施例三方法制得)，黄原胶10mg，糜蛋白酶100IU，生理盐水稀释到1000ml，在无菌条件下，根据上述组方量的要求，将裸花紫珠有效部位与生理盐水、黄原胶、糜蛋白酶混合，搅拌均匀，制成混悬液；经含量分析合格后，在避菌条件下，将上述溶液用定量加液装置分装，即得。

实施例九

本发明裸花紫珠提取物的有关药效试验如下：

1、抑菌作用

通过体外抑菌实验，以最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)指标评价本发明制备的裸花紫珠提取物对常见菌株的抗菌作用。

菌液制备：挑取斜面菌种接种于20％牛浸汁培养基中，37℃培养过夜，再用20％牛浸汁培养基将菌液稀释至10cfu/ml，立即接种。

MIC测定：采用液体试管连续稀释法，用20％牛浸汁培养基将样品作连续对倍稀释。将1.0ml加入灭菌试管中，每管加入0.05ml标准新鲜菌液，并设菌株对照及溶媒对照组，37℃培养18～24小时，观察细菌生长情况，以无菌生长的最高稀释度为MIC。

MBC测定：采用平板划线接种法，从被判为MIC及MIC相邻两管的培养基中挑取培养液接种至10％血清MH肉汤琼脂平板上，37℃培养18～24小时，以生长菌落数≤5个的最高稀释度为MBC。

上述试验结果见表一。

表一裸花紫珠提取物体外抗菌试验结果

本发明制备的裸花紫珠提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、肺炎球菌、乙型链球菌和幽门螺旋杆菌均有不同程度的抑制和杀灭作用。

2、止血作用

用本发明制备的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三个剂量组，生理盐水组，药物溶媒组和原裸花紫珠水提液。将180只健康昆明小白鼠随机分6组(每组30只，雌雄各半)，每日灌胃给予相应药物，连续7天。末次给药1小时后按如下步骤开始实验。

(1)对小鼠出血时间(BT)的影响

采用一次尾静脉注射给药方式，给药后30分钟用非常锋利的剪刀在小鼠尾尖部向上约1cm处快速剪断尾部，并立即用秒表记时，同时不断用滤纸吸流出的血液。从剪尾开始至出血停止这段时间即为小鼠剪尾出血时间。

(2)对小鼠凝血时间(CT)的影响

用毛细玻管插人小鼠内毗球后静脉丛，深约4～5mm，自血液流进管内计时，注满毛细管后平放于桌上，每隔30秒折断两端约0.5cm，并缓慢向左右拉开，仔细观察折断处有无血凝丝出现，出现血丝时停表即为血液凝固时间。

(3)对小鼠血液凝固***PT、APTT和FIB的影响

摘小鼠眼球取血，采2ml血置于含有3.8％枸橼酸钠抗凝剂的负压试管中，用ACT-200型凝血功能检测仪检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)及纤维蛋白原定量(FIB)。

(4)对小鼠血小板计数的影响

摘小鼠眼球取血，采0.5ml血置于含有EDTA抗凝剂的负压试管中，用血球记数仪检测血小板计数。

(5)试验结果

通过上述实验，测得小鼠出血时间(BT)、凝血时间(CT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)和纤维蛋白原定量(FIB)的实验数据见下表二。

表二本发明裸花紫珠提取物对小鼠止血作用的试验结果

(均数±标准差，N＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与正常对照组比较。

以上结果证明，本发明制备的裸花紫珠提取物均能缩短BT、CT和APTT及降低FIB含量，具有明显的止血作用。

3、镇痛作用

(1)醋酸所致小鼠扭体反应(扭体实验)

将健康昆明小鼠随机分成6组(每组10只)，即用本发明制备的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三个剂量组，生理盐水组，药物溶媒组(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液组。每日灌胃给予相应药物，连续7天。末次给药后1小时，各组分别腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，观察并记录注射醋酸后15分钟内出现扭体反应(腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)的时间及次数，实验结果见表三。

表三裸花紫珠提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

(均数±标准差，N＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶媒组比较。

(2)热板实验

将健康昆明小鼠称重标记6组(每组10只)，即用本发明制备的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三个剂量组，生理盐水组，药物溶媒组(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液。采用热板法，热板温度为(55±0.5)℃，给药前先测定各鼠的正常痛反应(放入热板至小鼠舔后足时间，若在5～30秒内不舔后爪者弃置不用)。然后，每日按0.42g/kg剂量灌胃给予相应药物，连续7天。末次给药1小时后再测定各鼠的正常痛反应，并计算小鼠给药前后痛阈提高百分率，结果见表四。

表四裸花紫珠提取物对小鼠热板痛阈的影响

(均数±标准差，N＝10)

注：每日灌胃给予小鼠药物，连续7天。^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶媒组比较。

上述实验表明，本发明制备的裸花紫珠提取物在小鼠扭体试验中均能延长扭体反应出现时间及减少扭体次数，在热板试验，本发明制备的裸花紫珠提取物均能增加痛阈提高百分率。

4、收敛作用

选健康家兔60只，随机分为6组(每组10只，雌雄各半)，即用本发明制备的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三个剂量组，生理盐水组，药物溶媒组(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液。实验前将所选家兔均在背部擦伤，形状呈圆形，面积直径约3cm，致局部出现显著的糜烂渗液表现。每天观察一次局部的反应情况，并测量伤口面积、记录渗出量的多少及消失时间，最后计算愈合率，即愈合面积/第2天创面愈合面积，结果见表五和表六。

表五裸花紫珠提取物对家兔伤口愈合面积的影响

(均数±标准差，N＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与正常对照组比较。

表六裸花紫珠提取物对家兔伤口愈合率的影响

(均数±标准差，N＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与正常对照组比较。

本发明制备的裸花紫珠提取物中、高剂量组均能显著增加伤口愈合面积，提高伤口愈合率。

Claims (10)

1.一种裸花紫珠提取物，其特征在于该提取物包含裸花紫珠总黄酮类化合物和鞣质类化合物。

2.根据权利要求1所述的裸花紫珠提取物，其特征在于所述提取物中总黄酮类化合物的含量为50％～90％，鞣质的含量为5％～20％。

3.根据权利要求1或2所述的裸花紫珠提取物，其特征在于所述的总黄酮类化合物包括木犀草素、芹菜素和木犀草苷中的至少一种。

4.一种权利要求1或2所述的裸花紫珠提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

1).在裸花紫珠药材中加入水、稀醇或稀酮溶剂，加热煎煮，倒出煎液，过滤得滤液；

2).将所得滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；

3).将乙醇洗脱液浓缩，得裸花紫珠提取物。

5.根据权利要求4所述的裸花紫珠提取物的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯类大孔吸附树脂。

6.根据权利要求5所述的裸花紫珠提取物的制备方法，其特征在于所述的聚苯乙烯类大孔吸附树脂为JD-1、D101、AB-8、X-5或D402。

7.根据权利要求4所述的裸花紫珠提取物的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的大孔吸附树脂柱的径高比为1∶5～1∶10。

8.一种由权利要求1或2所述的裸花紫珠提取物与药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

9.根据权利要求8所述的制剂，其特征在于所述制剂为喷雾剂、片剂、胶囊、口服液或颗粒剂。

10.权利要求1或2所述的裸花紫珠提取物在制备用于抑菌、止血、镇痛或收敛的药物中的应用。