CN101589062A - 与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供与抗原结合蛋白尤其是与胰高血糖素受体特异性结合的抗体相关的组合物和方法。本发明提供编码该抗原结合蛋白和抗体的核酸以及制备和使用该类抗体的方法，包括通过给予需要治疗的受试者该类抗体以治疗和预防2型糖尿病和相关病症的方法。

Description

与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法
相关申请的参考
本申请要求2006年12月20日申请的美国临时申请序列号60/846202和2007年8月30日申请的美国临时申请序列号60/968977的权益，依据其完整的公开内容并以参考形式并于本文。
发明领域
本发明涉及与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法
发明背景
胰高血糖素是胰α细胞中由激素原转化酶2的细胞特异表达从其原型加工而成的29氨基酸激素(Furuta等，J.Biol.Chem.276：27197-27202(2001))。在禁食情况下，胰高血糖素分泌增加以响应葡萄糖水平的降低。增加的胰高血糖素分泌通过促进肝糖原分解和葡萄糖异生刺激葡萄糖生产。因此胰高血糖素平衡了胰岛素在维持动物正常葡萄糖水平中的作用。
胰高血糖素受体(GCGR)是G蛋白偶联受体(GCGR)促胰液素亚族(B族)的成员。胰高血糖素受体主要在肝(其可调节肝葡萄糖输出)和肾(反应其在葡萄糖异生中的作用)表达。胰高血糖素受体在肝脏中的活化刺激腺苷酸环化酶的活性和磷酸肌醇转活，其可接着引起葡萄糖异生酶表达增加，包括磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、果糖-1，6-二磷酸酶(FBPase-1)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)。此外，胰高血糖素信号可活化糖原磷酸化酶并抑制糖原合成酶。
研究显示更高的基础胰高血糖素水平和食后胰高血糖素分泌抑制缺乏可促成人糖尿病病症(Muller等，N Eng J Med 283：109-115(1970))。靶向胰高血糖素产生或功能可为控制和降低血糖的方法。持续需要提供II型糖尿病的有效疗法。本发明通过提供治疗II型糖尿病和相关疾病的新颖组合物和方法解决了这一需要。
发明概述
一方面，本发明提供了分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一：a.包含选自以下序列的轻链CDR3：i.与选自L1-L23的轻链CDR3序列(SEQ ID NOs：72；74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100)相差总共不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；ii.L Q X21 N S X22 P L T(SEQ ID NO：208)，iii.Q A W D S X23T V X24(SEQ ID NO：209)；和b.包含选自以下序列的重链CDR3序列：i.与选自H1-H23的重链CDR3序列(SEQ ID NO：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199)相差总共不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列；ii.E X25 X26 X27 Y D I L T G Y X28 X29 Y Y G X30 D V(SEQ ID NO：210)iii.X31 G G G F D Y(SEQ ID NO：211)；或c.(a)的轻链CDR3序列和(b)的重链CDR3序列；其中X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，X22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，X24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基，X27为组氨酸残基或酪氨酸残基，X28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，X30为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，X31为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
另一方面，该分离的结合蛋白进一步包括选自以下的氨基酸序列：a.选自以下的轻链CDR1序列：i.与L1-L23CDR序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1；ii.R S X1 QS L L D X2 X3 D G T Y T L D(SEQ ID NO：200)；iii.R A S Q X4 I R N DX5 G(SEQ ID NO：201)；以及iv.S G D K L G D K Y X6 C(SEQ ID NO：202)；其中X1为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，X3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，X4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，X5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基，X6为缬氨酸残基或丙氨酸残基，b.选自以下的轻链CDR2序列：i.与L1-L23的CDR2序列(SEQ IDNOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2；ii.A A S SL X9 S(SEQ ID NO：204)；和iii.Q X10 X11 K R P S(SEQ ID NO：205)；其中X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，X10为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X11为苏氨酸残基或丝氨酸残基；c.选自以下的重链CDR1序列：i.与H1-H23的CDR1序列(SEQ ID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1，ii.X7 Y X8 M H(SEQ ID NO：203)，其中X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基；以及d.选自以下的重链CDR2：与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和63)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2；ii.X12 I W X13 D G S X14 K Y Y X15 D S VK G(SEQ ID NO：206)；以及iii.X16 I S X17 D G S X18 K Y X19 X20 D S VK G(SEQ ID NO：207)；其中X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，X13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，X14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，X15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，X16为缬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X17为组氨酸残基或天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X18为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基，X19为酪氨酸残基或丝氨酸残基，X20为丙氨酸残基或甘氨酸残基，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包括选自以下的氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1；b，与L1-L23的CDR2序列(SEQ IDNOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQ IDNOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；以及f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、和199)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.L1-L23的轻链CDR2序列，SEQ IDNOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.H1-H23的重链CDR1序列，SEQID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：a.L1-L23的轻链CDR1序列，SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41；b.L1-L23的轻链CDR3序列，SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100；c.H1-H23的重链CDR2序列，SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163；和d.与H1-H23的CDR3序列(SEQID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在又另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：a.H1-H23的重链CDR3序列，SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的两个氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQ IDNOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的三个氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的四个氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差最多不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差最多不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的五个氨基酸序列：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的结合蛋白包含：a.与L1-L23的CDR1序列(SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQ ID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQ IDNOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离抗原结合蛋白包含以下之一：a.包含以下的轻链可变结构域：i.选自SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的轻链CDR1序列；选自SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的轻链CDR2序列；和iii.选自SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的轻链CDR3序列；b.包含以下的重链可变结构域：i.选自SEQ ID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122的重链CDR1序列；ii.选自SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重链CDR2序列；和iii.选自SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重链CDR3序列；或c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
在另一方面，该分离的抗原结合蛋白包含：选自以下的轻链可变结构域：i.包含与选自L1-L23(SEQ ID NOs：213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的轻链可变结构域序列具有至少80％同一性的序列的氨基酸；ii.由与编码L1-L23(SEQ ID NOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的轻链可变结构域序列的多聚核苷酸至少80％同一性的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；iii.由在中等严格条件下与由L1-L23(SEQ ID NOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的轻链可变结构域序列组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；b.选自以下的重链可变结构域序列：i.与H1-H23(SEQ IDNOs：259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重链可变结构域序列至少80％相同的氨基酸序列；ii.由与编码H1-H23(SEQ ID NOs：258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、和302)的重链可变结构域序列的多聚核苷酸序列至少80％相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；iii.由可在中等严格条件下与由H1-H23(SEQ ID NOs：258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302)的重链可变结构域序列组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c.(a)的轻链结构域和(b)的重链结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
在一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白包含：a.选自L1-L23(SEQ ID NOs：213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的轻链可变结构域序列：b.选自H1-H23(SEQ ID NOs：259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重链可变结构域序列；或c，(a)的轻链结构域和(b)的重链结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
在另一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白包含选自以下的轻链可变结构域和重链可变结构域的组合：L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白进一步包括：SEQ ID NO：305的轻链恒定序列；SEQ ID NO：307的轻链恒定序列；SEQ ID NO：309的重链恒定序列；SEQ ID NO：305的轻链恒定序列；SEQ ID NO：309的重链恒定序列；或SEQ ID NO：307的轻链很顶序列以及SEQ ID NO：309的重链恒定序列。
一方面，该分离的抗原结合蛋白选自人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原-结合抗体片段、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、Fab片段、F(fa’)x片段、结构域抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgG4抗体，其在绞链区至少具有一处可减少形成内H链二硫键趋势的突变。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为人类抗体。
另一方面，该分离的抗原结合蛋白当与人胰高血糖素受体结合时：a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活或c与所述参比抗体竞争结合，其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L11H11、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的轻链和重链可变结构域序列的组合。
另一方面，提供了分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时：a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活或c.与所述参比抗体竞争结合，其中所述参比抗体包含选自A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-11、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22的轻链和重链可变结构域序列的组合。
另一方面，提供了分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时：a.特异性结合至人胰高血糖素的Ser80至Ser119；b.以90nM或更低的IC50值降低胰高血糖素信号传导；c.降低动物模型的血糖；d.a和b，或e.a、b和c。在一个实施方案中，该动物模型为ob/ob动物模型。
在另一方面，提供了包含该抗原结合蛋白与药学可接受的载体混合的药用组合物。在另一个实施方案中，该药用组合物包含与药学可接受载体混合的分离的人类抗体。
在另一方面，提供了包含编码本发明抗原结合蛋白的轻链可变结构域、重链可变结构域或二者的多聚核苷酸的分离的核酸分子。在一个实施方案中，该多聚核苷酸包含轻链可变结构域多聚核苷酸序列L1-L23，SEQ ID NOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256，重链可变结构域多聚核苷酸序列H1-H23，SEQ ID NO：258、260、262、264、266、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302，或二者。
也提供了包含本发明多聚核苷酸的载体。在一个实施方案中该载体为表达载体。也提供了包含该载体的宿主细胞。也提供了可生产本发明抗原结合蛋白质的杂交瘤。进一步提供了制备本发明抗原结合蛋白的方法，其包括在允许细胞表达本发明抗原结合蛋白的条件下培养该宿主细胞。
也提供了降低受试者血糖的方法，包括给予受试者治疗有效量的药用组合物。也提供了提高受试者葡萄糖耐受的方法，包括给予受试者治疗有效量的药用组合物。也提供了通过给予受试者治疗有效量的药用组合物治疗受试者中II型糖尿病和相关病症的方法。在另一个实施方案中，该相关病症选自高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、脂肪代谢障碍和代谢综合症。也提供了本发明药用组合物在制备用于降低血糖、预防或治疗II性糖尿病包括高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、脂肪代谢障碍和代谢综合症的药物中的应用。
附图简述
图1显示了以1或3mg/kg(n＝10动物/组)的剂量单次注射抗体A-3或抗体A-4后与注射缓冲液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、48、96、120、144、192和240小时测量血糖。
图2显示了以1或3mg/kg(n＝10动物/组)的剂量单次注射抗体A-3或抗体A-9后与注射缓冲液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、72、120、192和240小时测量血糖。
图3显示了口服葡萄糖耐量试验(GTT)的结果，显示了单次皮下注射溶媒(vehicle)和抗体9(A9)之前(GTT1和GTT2)和之后(GTT3、4和5)的曲线下(AUC)葡萄糖水平。
图4显示了可与标记抗体A-3(可克服(surmountable)抗体)竞争结合的未标记抗体。
图5显示了可与标记抗体A-3(部分可克服抗体)部分竞争结合的未标记抗体。
图6显示了不可与标记抗体A-3(可克服抗体)竞争结合的未标记抗体。
图7显示了四种抗GCGR抗体与构建自人GCGR和人GLP-1受体的嵌合受体的结合研究结果。
发明详述
本发明涉及抗原结合蛋白例如可与人胰高血糖素受体(GCGR)特异性结合的抗体。这些包括可抑制或阻断胰高血糖素与人GCGR结合并降低胰高血糖素经受体信号传导的抗原结合蛋白。在一个实施方案中提供了包括拮抗性抗体的可降低动物模型血糖的人类抗体。该抗原结合蛋白可用于治疗糖尿病和相关疾病。
本发明进一步提供与可特异性结合至人胰高血糖素受体的抗原结合蛋白相关的组合物、试剂盒和方法。也提供了核酸分子及其衍生物和片段，其包含编码与胰高血糖素受体结合的多肽的全部或部分的多聚核苷酸，例如编码全部或部分抗胰高血糖素受体抗体、抗体片段或抗体衍生物的核酸。本发明进一步提供包含该类核酸的载体和质粒以及包含该类核酸和/或载体和质粒的细胞和细胞系。所提供方法包括，例如，制备、鉴定或分离与人GCGR结合的抗原结合蛋白例如抗GCGR抗体的方法，测定该抗原结合蛋白是否与GCGR结合的方法、制备包含与人GCGR结合的抗原结合蛋白的组合物例如药用组合物的方法，以及将与GCGR结合的抗原结合蛋白给予受试者的方法，治疗由GCGR介导的病症以及体内或体外调节与胰高血糖素信号传导相关的生物活性的方法。
定义
使用标准的单字母或三字母缩写表明多聚核苷酸和多肽序列。除非另外指明，多肽序列的氨基端在左而它们的羧基端在右，单链核酸序列和双链核酸序列的上游链的5′端在左而它们的3′端在右。多肽的具体部分可由氨基酸残基编号表示，例如氨基酸80至119，或由该位点的实际残基表示例如Ser80至Ser119。也可通过解释其与参比序列的差异描述具体的多肽或多聚核苷酸序列。具体轻链和重链可变结构域的多聚核苷酸和多肽可表示为L1(“轻链可变结构域1”)，H1(“重链可变结构域1”)。包含轻链和重链的抗原结合蛋白或抗体可通过结合轻链的名称和重链可变结构域的名称表示。例如，“L4H7”表示包含L4轻链可变结构域和H7重链可变结构域的抗体。
除非本文另外定义，与本文相关的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员所理解的含义。进一步，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数并且复数含义术语应包括单数含义。通常，与本文所述细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质核酸化学以及杂交相关的命名法和技术为本领域熟知和经常使用的。本发明的方法和技术通常根据本领域已知的常规方法以及本说明书引用和讨论的各种普通和更具体的参考文献所描述的进行，除非另外说明。参见，例如，Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)和Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology，GreenePublishing Associates(1992)，以及Harlow and Lane Antibodies：ALaboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，N.Y.(1990)，均以参考形式并于本文。酶反应和纯化技术根据操作说明进行，如本领域通常完成或本文所述。与本文描述的分析化学、合成有机化学和医学和药学化学相关的术语学以及实验操作和技术均为本领域熟知和普遍使用者。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和给药以及患者的治疗。
以下术语，除非另外指明，应理解为具有以下含义：术语“分离的分子”(其中所述分子为例如多肽、多聚核苷酸或抗体)为就其来源或衍生源而言(1)与在天然状态下与其相伴的天然相关组分分离，(2)基本与同种的其它分子游离(3)由不同种细胞表达或(4)不天然存在。因此，化学合成或由与其天然来源的细胞不同的细胞体系表达的分子将与天然相关组分“分离”。也可使用本领域已知的纯化技术通过分离使分子基本与其天然相关组分游离。例如，可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定多肽样品的纯度并使用本领域熟知的技术将凝胶染色以观察该多肽。对于某些目的，可使用HPLC或其它本领域熟知的纯化方法提供更高的分辨率。
术语“胰高血糖素抑制剂”和“胰高血糖素拮抗剂”可交替使用。均为可检测地抑制胰高血糖素信号传导的分子。由抑制剂引起的抑制不需为完全抑制只要可使用测定法检测。例如，下文实施例4中描述的基于细胞的测定法显示了可用于测定胰高血糖素信号传导抑制的测定法。
术语“肽”、“多肽”和“蛋白”均指包含两个或多个通过肽键相互连接的氨基酸的分子。这些术语涵盖例如天然和人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物(例如突变蛋白、变异体和融合蛋白)以及转录后或否则为共价或非共价修饰的蛋白。肽、多肽或蛋白可为单体或多聚体。
如本文使用的术语“多肽片段”指与对应的全长蛋白相比具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段长度可为例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200个氨基酸。片段长度可为例如最多1000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或10个氨基酸。片段可在其一端或两端进一步包含一个或多个附加氨基酸，例如，来自不同天然蛋白质的氨基酸序列(例如，Fc或亮氨酸拉链结构域)或人工氨基酸序列(例如，人工接头序列)。
本发明多肽包括以任何原因和经任何方法修饰的多肽，例如，以：(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的亲和性，(4)改变结合亲和性以及(4)赋予或修饰其它物理化学或功能性质。类似物包含多肽的突变蛋白。例如，可在天然序列(例如在形成分子内接触的结构域之外的多肽部分)中进行单个或多个氨基酸替换(例如，保守氨基酸替换)。“保守氨基酸替换”为不显著改变母体序列结构特性者(例如，替换氨基酸不应破坏母体序列中出现的螺旋或干扰其它赋予母体序列特性或对其功能是必须的二级结构类型)。领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton编辑，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to ProteinStructure(C.Branden and J.Tooze，eds.，Garland Publishing，New York，N.Y.(1991))；和Thornton等，Nature 354：105(1991)，均以参考形式并于本文。
本发明也提供了GCGR抗原结合蛋白的非肽类似物。非肽类似物普遍用于提供与模板肽具有相似性质的药物。这些非肽化学物类型被称作“模拟肽(peptide mimetics)”或“拟肽(peptidomimetics)”。Fauchere，J.Adv.Drug Res.15：29(1986)；Veber和Freidinger TINS第392页(1985)；以及Evans等，J.Med.Chem.30：1229(1987)，均以参考形式并于本文。与治疗用肽结构相似的模拟肽可用于产生相等的治疗或预防效果。通常，拟肽与范例多肽的结构相似(即具有期望生物化学性质或药理学活性的多肽)，例如人类抗体，但是具有一个或多个任选被选自--CH2NH--、--CH2S--、--CH2--CH2--、--CH＝CH-(顺式和反式)、--COCH2--、--CH(OH)CH2--、和--CH2SO--的连接通过本领域熟知的方法取代的肽连接。用相同类型的D-氨基酸***取代一致序列的一个或多个氨基酸(例如，D-赖氨酸取代L-赖氨酸)也可用于生成更稳定的肽。此外，可通过本领域已知的方法(Rizo and Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992)，以参考形式并于本文)例如通过添加可形成将肽环化的分子间二硫键的内部半胱氨酸残基生成包含一致序列或基本相同的一致序列变异体的拘束肽(constrained peptides)。
多肽(例如抗体)的“变异体”包含相对于另一多肽序列在氨基酸序列中***、缺失和/或替换了一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。本发明的变异体包括融合蛋白。
多肽的“衍生物”为经化学修饰的多肽(例如，抗体)，例如通过与其它化学部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白)结合、磷酸化和糖基化。除非另外说明，术语“抗体”包括除包含两个全长重链和两个全长轻链的抗体外的其衍生物、变异体、片段和突变蛋白，其实例见下文。
“抗原结合蛋白”为包含与抗原结合部分并任选为允许抗原结合部分采取促进该抗原结合蛋白与该抗原结合的构象的支架或框架部分的蛋白。抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。该抗原结合蛋白可包含例如可选择的蛋白支架或具有移植CDRs或CDRs衍生物的人工支架。该支架包括但不限于包含被引入的例如以稳定化该抗原结合蛋白的三维结构的抗体衍生支架以及包含例如生物相容性多聚体的全合成支架。参见，例如，Korndorfer等，2003，Proteins：Structure，Function，andBioinformatics，Volume 53，Issue 1：121-129；Roque等，2004，Biotechnol.Prog.20：639-654。此外，可使用模拟肽抗体(“PAMs”)以及基于模拟抗体的支架，其如支架一样利用纤维蛋白连接素。
抗原结合蛋白可具有例如天然免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”为四聚体分子。在天然的免疫球蛋白中，各四聚体由两个相同的多肽链对组成，各对具有一个“轻”(约25kDa)和一个“重”链(约50-70kDa)。各链的氨基端包括约100至110或更多氨基酸的可变结构域，主要与抗原识别相关。各链的羧基端部分确定了主要与效应器作用相关的恒定区。人的轻链分为κ和λ轻链。重链分为μ、δ、α或ε，并确定了抗原的同种型，例如分别为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变和恒定区由约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链也包括约10多个氨基酸的“D”区。参见，Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.，编辑，第2版.Raven Press，N.Y.(1989))(其完整内容以参考形式并于本文用于任何目的)。各轻/重链对的可变区形成抗体结合位点，这样一个完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。
天然免疫球蛋白链显示出由三个高度可变区连接的相对保守骨架区(FR)的相同基本结构，也被称作互补决定区或CDRs。从N端到C端，轻和重链均包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。各结构域氨基酸的分配与Kabat等在Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版.，US Dept.of Health and Human Services，PHS，NIH，NIH Publication no.91-3242，1991中的定义一致。
除非另外指明，“抗体”指完整的免疫球蛋白或其可与完整抗体竞争特异性结合的抗原结合部分。可由重组DNA技术或通过酶或化学裂解完整抗体生产抗原结合部分。抗原结合部分包括，尤其是，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、结构域抗体(dAbs)，包括互补决定区(CDRs)的片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双链抗体(diabodies)、三链抗体(triabodies)、四链抗体(tetrabodies)和至少包含足以赋予多肽特异抗原结合的免疫球蛋白的一部分的多肽。
Fab片段为具有VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；F(ab’)2片段为具有两个在铰链区由二硫键连接的Fab片段的二价片段；Fd片段具有VH或VL结构域；dAb片段具有VH结构域、VL结构域，或VH或VL结构域的抗原结合片段(美国专利号6846634、6696245，美国专利申请公开号05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958，Ward等，Nature 341：544-546，1989)。
单链抗体(scFv)为其中的VL和VH区由接头(例如，合成的氨基酸残基序列)连接以形成连续蛋白质的抗体，其中该接头足够长以允许该蛋白链折叠回自身并形成单价抗原结合位点(参见，例如，Bird等，1988，Science 242：423-26and Huston et al.，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-83)。双链抗体为包含两个多肽链的二价抗体，其中各多肽链包含由接头连接的VH和VL结构域，该接头很短以致于不允许两个结构域在相同链上的配对，因此允许各结构域与另一多肽链上的互补结构域配对(参见，例如，Holliger等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-48，和Poljak et al.，1994，Structure 2：1121-23)。如果双链抗体的两个多肽链是相同的，那么由它们配对得到的双链抗体将具有相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可用于制备具有不同抗原结合位点的双链抗体。相似地，三链抗体和四链抗体分别为包含三个和四个多肽链的抗体并分别形成三个和四个抗原结合位点，其可相同或不同。
可使用Kabat等在Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版.，US Dept.of Health and Human Services，PHS，NIH，NIHPublication no.91-3242，1991中描述的方法鉴定给定抗体的互补决定区(CDRs)和骨架区(FR)。可向分子中共价或非共价并入一个或多个CDRs使其成为抗原结合蛋白。抗原结合蛋白可以较大多肽链并入CDR(s)。可将CDR(s)共价连接至另一多肽链，或非共价并入CDR(s)。CDRs允许抗原结合蛋白与具体的相关抗原特异性结合。
抗原结合蛋白可有一个或多个结合位点。如果多于一个结合位点，该结合位点可与另一个相同或不同。例如，天然人免疫球蛋白通常具有两个相同的结合位点，而“双特异性”或“双功能”抗体具有两个不同的结合位点。
术语“人类抗体”包括具有一个或多个来源于人免疫球蛋白序列的可变和恒定区的所有抗体。在一个实施方案中，所有的可变和恒定结构域均来源于人免疫球蛋白序列(全人类抗体)。可经多种方法制备这些抗体，其实例描述于下文，包括通过用相关抗原免疫小鼠，该小鼠被基因修饰以表达来源于人重和/或轻链编码基因的抗体。
人源化抗体含有与来源于非人种抗原序列具有一个或多个氨基酸替换、缺失和/或添加差异的序列，这样与非人种抗体相比当给予人受试者时人源化抗体较不会诱导免疫应答，和/或诱导较不严重的免疫应答。在一个实施方案中，突变非人种抗原的重和/或轻链的骨架和恒定结构域的某些氨基酸以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，来自人类抗体的恒定结构域与非人种的可变结构域融合。在另一个实施方案中，改变非人类抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基以降低给予人受试者时非人类抗体可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残基对于该抗体与其抗原的免疫特异性结合不是关键性的，或者对氨基酸序列的改变为保守改变这样人源化抗体与抗原的结合不会显著差于非人类抗体与该抗原的结合。如何制备人源化抗体的实例见美国专利号6054297、5886152和5877293。
术语“嵌合抗体”指包含来自一种抗体的一个或多个区域和来自一个或多个其它抗体的一个或多个区域的抗体。在一个实施方案中，一个或多个CDRs来源于人抗GCGR抗体。在另一实施方案中，所有的CDRs来源于人抗GCGR抗体。在另一个实施方案中，将来自多于一个人抗GCGR抗体的CDRs混合并在嵌合抗体中配对。举例而言，嵌合抗体可包含来自第一个人抗GCGR抗体轻链的CDR1，第二个人抗GCGR抗体轻链的CDR2和CDR3，以及第三个人抗GCGR抗体的CDRs。进一步，该骨架区可来源于相同的抗GCGR抗体之一，来自一个或多个不同的抗体，例如人类抗体或来自人源化抗体。在嵌合抗体的一个实例中，重和/或轻链的一部分与来自具体物种的抗体相同、同源或由其衍生，或属于具体的抗体类别或亚类，而该链的剩余部分与来自另一物种的抗体或多个抗体相同、同源或由其衍生，或属于另一抗体类别或亚类。也包括显示期望生物学活性(即与人胰高血糖素受体特异性结合的能力)的该类抗体的片段。
“中和抗体”或“抑制抗体”指经例如实施例4描述的基于细胞的测定法检测抑制胰高血糖素与人胰高血糖素受体结合，和/或抑制或降低胰高血糖素信号传导的抗体。该抑制不需为完全抑制，在一个实施方案中，其可将结合或信号传导降低至少20％。在进一步的实施方案中，结合或信号传导至少降低了30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％和99.9％。
本领域普通技术人员根据本说明书的教导并使用本领域熟知的技术可轻易制备抗体片段或类似物。优选的片段或类似物的氨基和羧基端出现在功能结构域交界的附近。可通过与将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库对比鉴定结构和功能结构域。计算机对比方法可用于鉴定序列基序或预测在其它结构和/或功能已知的蛋白质中出现的蛋白构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法为已知。参见，例如，Bowie等，1991，Science 253：164。
“CDR移植抗体”为包含一个或多个来源于具体物种或同种型的抗体的CDRs以及相同物种或同种型的另一抗体的骨架的抗体。
“多特异性抗体”为可识别一个或多个抗原上的多于一种表位的抗体。该类型抗体的亚类为可识别相同或不同抗原上的两个不同表位的“双特异抗体”。
包括与抗原“特异性结合”抗体的抗原结合蛋白质，如果以10-7M或更低(100nM或更低)的解离常数(Kd或对应Kb，如下文所述)测定的高结合亲和力与抗原结合。与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白可与其它物种的胰高血糖素受体以相同或不同的亲和力结合。
“抗原结合结构域”、“抗原结合区”或“抗原结合位点”为包含与抗原相互作用的氨基酸残基(或其它部分)并有助于抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的抗原结合蛋白质的部分。对与其抗原特异性结合的抗体而言，这将包括至少部分的至少一个其CDR结构域。
“表位”为与抗原结合蛋白(例如，通过抗体)结合的分子部分。表位可包含分子的非连续部分(例如，在多肽中，在多肽的一级序列中不连续的氨基酸残基在该多肽的三级和四级结构中相互足够接近以致于被一个抗原结合蛋白结合)。
两个多聚核苷酸或两个多肽序列的“相同百分比”由使用GAP计算机程序(GCG Wisconsin Package，version 10.3(Accelrys，San Diego，CA)的一部分)使用其默认参数比较序列测定。
术语“多聚核苷酸”、“寡聚核苷酸”和“核酸”可在全文中交替使用并包括DNA分子(例如，cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸类似物(例如，肽核酸和非天然核苷酸类似物)生成的DNA或RNA类似物及其杂交体。核酸分子可为单链或双链。在一个实施方案中，本发明的核酸分子包含编码本发明抗体或其片段、衍生物、突变蛋白或变异体连续的开放阅读框。
如果它们的序列可反向平行排列则两个单链多聚核苷酸是相互“互补的”，这样一个多聚核苷酸中的各核苷酸与另一多聚核苷酸中的互补核苷酸相反，不会引入空隙并且各序列的5′或3′端没有未配对的核苷酸。如果两个多聚核苷酸可在中等严格条件下相互杂交那么一个多聚核苷酸与另一多聚核苷酸“互补”。因此，一个多聚核苷酸可与另一多聚核苷酸互补，但并不是它的互补序列。
“载体”为可用于将与其相连的另一核酸引入细胞的核酸。载体的一种类型为“质粒”，其指可连接附加核酸区段的线性或环状双链DNA分子。载体的另一类型为病毒载体(例如，复制缺陷逆转录病毒、腺病毒和腺病毒伴随病毒)，其中可将附加DNA区段引入病毒基因组。某些载体可在它们被引入的宿主细胞中自主复制(例如，包含细菌复制起点的细菌载体以及游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞时整合入宿主细胞的基因组中并因此与宿主基因组一起复制。“表达载体”为可引导所选多聚核苷酸表达的载体类型。
如果调控序列影响核苷酸序列的表达(例如，表达水平、时间或位点)那么核苷酸序列与调控序列“可操作地相连”。“调控序列”为可影响与其可操作相连的核酸的表达(例如，表达水平、时间或位点)的核酸。调控基因，例如，直接对受调控核酸发挥作用或通过一个或多个其它分子(例如，与调控序列和/或核酸结合的多聚核苷酸)的作用。调控序列的实例包括启动子、增强子和其它表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。调控序列的进一步实例描述于例如Goeddel，1990，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA and Baron et al.，1995，Nucleic Acids Res.23：3605-06。
“宿主细胞”为用于表达核酸例如本发明核酸的细胞。宿主细胞可为原核生物，例如大肠杆菌，或者其可为真核生物，例如单细胞真核生物(例如，酵母或其它真菌)、植物细胞(例如烟草或番茄植物细胞)、动物细胞(例如，人细胞、猴细胞、仓鼠细胞、大鼠细胞、小鼠细胞或昆虫细胞)或杂交瘤。通常，宿主细胞为可用多肽编码核酸转化或转染的培养细胞，其可接着在宿主细胞中表达。短语“重组宿主细胞”可用于表述用预期表达的核酸转化或转染的宿主细胞。宿主细胞也可为包含该核酸但是不以期望水平表达的细胞，除非向该宿主细胞引入了调控序列这样其与核酸可操作地相连。应理解的是术语宿主细胞不仅指具体的受试者细胞也指该细胞的子代或可能的子代。由于例如突变或环境影响后续世代会出现某些修饰，该子代事实上可能与母体细胞不同但是仍然属于本文使用的术语范围。
胰高血糖素受体
胰高血糖素受体(GCGR)属于7-跨膜受体家族，其通过异源三聚体鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)与一个或多个胞内信号传导途径偶联(Jelinek等，Science 259：1614-1616(1993)，Segre et al.，TrendsEndocrinol.Metab 4：309-314(1993))。如本文所使用“胰高血糖素受体”和“GCGR”可交替使用。这一家族的其它成员包括胰泌素、胰高血糖素样肽(GLP-1)、血管活性肠肽(VIP)和生长激素释放因子的受体。这些受体具有高度同源的结构特点包括相对较大的胞外N端结构域以及一系列的跨膜、胞内和胞外结构域。
在一个实施方案中，可选择本发明的抗原结合剂结合表达于细胞上的膜结合胰高血糖素受体并通过胰高血糖素受体抑制或阻断胰高血糖素信号传导。在一个实施方案中，本发明的抗原结合剂与人胰高血糖素受体特异性结合。在进一步的实施方案中，与人胰高血糖素受体结合的抗原结合蛋白也可与其它物种的胰高血糖素受体结合。下文中的实施例提供生成与人膜结合胰高血糖素受体结合的全人类抗体，在进一步的实施方案中与其它物种的胰高血糖素受体结合。
已知数个物种的胰高血糖素受体的多聚核苷酸和多肽序列。表1显示了人、小鼠和大鼠的序列。本文鉴定了食蟹猴(cynomolgus)的胰高血糖素受体序列并列于下文。
表1：胰高血糖素受体
  人(Homo sapiens)多聚核苷酸(SEQ ID NO：1)登录号BC1048541   gtgcagcccc tgccagatgt gggaggcagc tagctgccca gaggcatgcc cccctgccag61  ccacagcgac ccctgctgct gttgctgctg ctgctggcct gccagccaca gtgcccctcc121 gctcaggtga tggacttcct gtttgagaag tggaagctct acggtgacca gtgtcaccac181 aacctgagcc tgctgccccc tcccacggag ctggtgtgca acagaacctt cgacaagtat241 tcctgctggc cggacacccc cgccaatacc acggccaaca tctcctgccc ctggtacctg301 ccttggcacc acaaagtgca acaccgcttc gtgttcaaga gatgcgggcc cgacggtcag361 tgggtgcgtg gaccccgggg gcagccttgg cgtgatgcct cccagtgcca gatggatggc421 gaggagattg aggtccagaa ggaggtggcc aagatgtaca gcagcttcca ggtgatgtac481 acagtgggct acagcctgtc cctgggggcc ctgctcctcg ccttggccat cctggggggc
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  人(Homo sapiens)氨基酸(SEQ ID NO：2)477aa；登录号.EAW89684Met Pro Pro Cys Gln Pro Gln Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys GlnPro Gln Val Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr GlyAsp Gln Cys His His Asn Leu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn ArgThr Phe Asp Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser CysPro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val Phe Lys Arg Cys Gly ProAsp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys GlnMet Asp Gly Glu Glu Ile Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Phe Gln ValMet Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu Ala Ile Leu GlyGly Leu Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile His Ala Asn Leu Phe Ala Ser Phe ValLeu Lys Ala Ser Ser Val Leu Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg Thr Arg Tyr Ser Gln Lys IleGly Asp Asp Leu Ser Val Ser Thr Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys Arg Val AlaAla Val Phe Met Gln Tyr Gly Ile Val Ala Asn Tyr Cys Trp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr
  Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala Thr Leu Pro Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr LeuGly Ile Gly Trp Gly Ala Pro Met Leu Phe Val Val Pro Trp Ala Val Val Lys Cys Leu PheGlu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp Trp Ile Leu Arg PhePro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe Ile Phe Val Arg Ile Val Gln Leu Leu ValAla Lys Leu Arg Ala Arg Gln Met His His Thr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys SerThr Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe Val Thr Asp GluHis Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Ala Lys Leu Phe Phe Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe GlnGly Leu Leu Val Ala Val Leu Tyr Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu ArgArg Arg Trp His Arg Trp Arg Leu Gly Lys Val Leu Trp Glu Glu Arg Asn Thr Ser AsnHis Arg Ala Ser Ser Ser Pro Gly His Gly Pro Pro Ser Lys Glu Leu Gln Phe Gly Arg GlyGly Gly Ser Gln Asp Ser Ser Ala Glu Thr Pro Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala GluSer Pro Phe
  小鼠(Mus musculus)多聚核苷酸(SEQ ID NO：3)登录号BC50579881   cgcgaggagc gcagccctag ccccggcgac tgagcacacc tgaggagagg tgcacacact61  ctgaggacct aggtgtgcaa cctctgccag atgtggggcg tggctaccca gaggcatgcc121 cctcacccag ctccactgtc cccacctgct gctgctgctg ttggtgctgt catgtctgcc181 agaggcaccc tctgcccagg taatggactt tttgtttgag aagtggaagc tctatagtga241 ccaatgccac cacaacctaa gcctgctgcc cccacctact gagctggtct gtaacagaac301 cttcgacaag tactcctgct ggcctgacac ccctcccaac accactgcca acatttcctg361 cccctggtac ctaccttggt accacaaagt gcagcaccgc ctagtgttca agaggtgtgg421 gcccgatggg cagtgggttc gagggccacg ggggcagccg tggcgcaacg cctcccaatg481 tcagttggat gatgaagaga tcgaggtcca gaagggggtg gccaagatgt atagcagcca541 gcaggtgatg tacaccgtgg gctacagtct gtccctgggg gccttgctcc ttgcgctggt601 catcctgctg ggcctcagga agctgcactg cacccgaaac tacatccatg ggaacctgtt661 tgcgtccttt gtgctcaagg ctggctctgt gttggtcatc gattggctgc tgaagacacg721 gtacagccag aagattggcg atgacctcag tgtgagcgtc tggctcagtg acggggcgat781 ggccggctgc agagtggcca cagtgatcat gcagtacggc atcatagcca actattgctg841 gttgctggta gagggcgtgt acctgtacag cctgctgagc cttgccacct tctctgagag901 gagcttcttt tccctctacc tgggcattgg ctggggtgcg cccctgctgt ttgtcatccc
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  小鼠(Mus musculus)氨基酸(SEQ ID NO：4)485aa登录号AAH57988Met Pro Leu Thr Gln Leu His Cys Pro His Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Leu Ser CysLeu Pro Glu Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr SerAsp Gln Cys His His Asn Leu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn ArgThr Phe Asp Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Pro Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser CysPro Trp Tyr Leu Pro Trp Tyr His Lys Val Gln His Arg Leu Val Phe Lys Arg Cys Gly ProAsp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly Gln Pro Trp Arg Asn Ala Ser Gln Cys GlnLeu Asp Asp Glu Glu Ile Glu Val Gln Lys Gly Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Gln Gln ValMet Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu Val Ile Leu LeuGly Leu Arg Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr Ile His Gly Asn Leu Phe Ala Ser Phe ValLeu Lys Ala Gly Ser Val Leu Val Ile Asp Trp Leu Leu Lys Thr Arg Tyr Ser Gln Lys IleGly Asp Asp Leu Ser Val Ser Val Trp Leu Ser Asp Gly Ala Met Ala Gly Cys Arg ValAla Thr Val Ile Met Gln Tyr Gly Ile Ile Ala Asn Tyr Cys Trp Leu Leu Val Glu Gly Val
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  大鼠(Rattus norvegicus)多聚核苷酸(SEQ ID NO：5)登录号.NM 1720921   gaattcgcgg ccgccgccgg gccccagatc ccagtgcgcg aggagcccag tcctagaccc61  agcaacctga ggagaggtgc acacaccccc aaggacccag gcacccaacc tctgccagat121 gtgggggggt ggctacccag aggcatgctc ctcacccagc tccactgtcc ctacctgctg181 ctgctgctgg tggtgctgtc atgtctgcca aaggcaccct ctgcccaggt aatggacttt241 ttgtttgaga agtggaagct ctatagtgac cagtgccacc acaacctaag cctgctgccc301 ccacctactg agctggtctg caacagaact ttcgacaagt actcctgctg gcctgacacc361 cctcccaaca ccactgccaa catttcctgc ccctggtacc taccttggta ccacaaagtg421 cagcaccgcc tagtgttcaa gaggtgtggg cctgatgggc agtgggttcg agggccacgg481 gggcagtcat ggcgcgacgc ctcccaatgt cagatggatg atgacgagat cgaggtccag541 aagggggtag ccaagatgta tagcagctac caggtgatgt acactgtggg ctacagtctg601 tccctggggg ccttgctcct ggcgctggtc atcctgctgg gcctcaggaa gctgcactgc661 acccggaact acatccacgg gaacctgttc gcgtccttcg tgctcaaggc tggctctgtg721 ctggtcattg attggctgct caagacacgc tatagccaga agattggaga tgacctcagt781 gtgagcgtct ggctcagtga tggggcggtg gctggctgca gagtggccac agtgatcatg841 cagtacggca tcatagccaa ctactgctgg ttgctggtgg agggtgtgta cctgtacagc
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  大鼠(Rattus norvegicus)氨基酸(SEQ ID NO：6)489aa，登录号.NM 172092Met Leu Leu Thr Gln Leu His Cys Pro Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Leu Ser CysLeu Pro Lys Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr SerAsp Gln Cys His His Asn Leu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn ArgThr Phe Asp Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Pro Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser CysPro Trp Tyr Leu Pro Trp Tyr His Lys Val Gln His Arg Leu Val Phe Lys Arg Cys Gly ProAsp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly Gln Ser Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys GlnMet Asp Asp Asp Glu Ile Glu Val Gln Lys Gly Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Tyr Gln ValMet Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu Val Ile Leu LeuGly Leu Arg Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr Ile His Gly Asn Leu Phe Ala Ser Phe ValLeu Lys Ala Gly Ser Val Leu Val Ile Asp Trp Leu Leu Lys Thr Arg Tyr Ser Gln Lys IleGly Asp Asp Leu Ser Val Ser Val Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys Arg Val Ala
  Thr Val Ile Met Gln Tyr Gly Ile Ile Ala Asn Tyr Cys Trp Leu Leu Val Glu Gly Val TyrLeu Tyr Ser Leu Leu Ser Ile Thr Thr Phe Ser Glu Lys Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu CysIle Gly Trp Gly Ser Pro Leu Leu Phe Val Ile Pro Trp Val Val Val Lys Cys Leu Phe GluAsn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp Trp Ile Leu Arg Ile Pro ValLeu Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe Ile Phe Val Arg Ile Ile His Leu Leu Val Ala Lys LeuArg Ala His Gln Met His Tyr Ala Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Arg Ser Thr Leu ThrLeu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe Val Thr Asp Glu His Ala GlnGly Thr Leu Arg Ser Thr Lys Leu Phe Phe Asp Leu Phe Phe Ser Ser Phe Gln Gly LeuLeu Val Ala Val Leu Tyr Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ala Glu Leu Leu Arg ArgTrp Arg Arg Trp Gln Glu Gly Lys Ala Leu Gln Glu Glu Arg Met Ala Ser Ser His Gly SerHis Met Ala Pro Ala Gly Thr Cys His Gly Asp Pro Cys Glu Lys Leu Gln Leu Met SerAla Gly Ser Ser Ser Gly Thr Gly Cys Glu Pro Ser Ala Lys Thr Ser Leu Ala Ser Ser LeuPro Arg Leu Ala Asp Ser Pro Thr
  食蟹猴(Macaca fascicularis)多聚核苷酸(SEQ ID NO：7)＞cyno-20042028417-contig1(32bp-1465bp，直接)1434bpatgcccccctgtcagccacgtcgacccctgctactgttgctgctgctgctggcctgccagccacaggccccctccgctcaggtgatggacttcctgtttgagaagtggaaactctacggtgaccagtgtcaccacaacctgagcctgctgcccccccccacggagctggtctgtaacagaaccttcgacaagtattcctgctggccagacacccccgccaataccacagccaacatctcctgcccctggtacctgccttggcaccacaaagtgcaacaccgcttcgtgttcaagagatgcgggcccgatggtcagtgggtgcgtggaccccgggggcagccttggcgtgacgcctctcagtgccagatggacggcgaggagcttgaggtccagaaggaggtggctaagatgtacagcagcttccaggtgatgtacacggtgggctacagcctgtccctgggggccctgctcctcgccttggccatcctggggggcatcagcaagctgcactgcacccgcaacgccatccacgcgaacctgtttgtgtccttcgtgctgaaggccagctccgtgctggtcatcgatgggctgctcaggacccgctacagccagaagattggcgacgacctcagtgtcagcatctggctcagtgatggagcggtggccggctgccgtgtggccgcggtgttcatgcaatatggcgtcgtggccaactactgctggctgctggtggagggcctgtacctgcacaacctgctgggcctggccaccctccctgagaggagcttcttcagcctctacctgggcatcggctggggtgcccccatgctgttcatcatcccctgggtggtggtcaggtgtctgttcgagaacatccagtgctggaccagcaatgacaacatgggcttctggtggatcctgcggttccccgtcttcctggccatcctgatcaacttcttcatcttcatccgcattgttcacctgcttgtggccaagctgcgggcgcgggagatgcaccacacagactacaagttccgactggccaagtccacactgaccctcatccccctgctgggtgtccacgaagtgatcttcgccttcgtgacggacgagcacgcccag
  ggcaccctgcgcttcgccaagctcttcttcgacctcttcctcagctccttccagggcctgctggtggctgtcctctactgcttcctcaacaaggaggtgcagtcggaacttcggcggcattggcaccgctggcgcctgggcaaagtgctgcaggaggagcggggcaccagcaaccacaagaccccatctgcgcctggccaaggccttcctggcaagaagctgcagtctgggaggggtggtggcagccaggactcatctgcggagatccccttggctggtggcctccctaggttggctgagagccccttctga
  食蟹猴(Macaca fascicularis)氨基酸(SEQ ID NO：8)478aaMet Pro Pro Cys Gln Pro Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Cys GlnPro Gln Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr GlyAsp Gln Cys His His Asn Leu Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn ArgThr Phe Asp Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile SerCys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val Phe Lys Arg CysGly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser GlnCys Gln Met Asp Gly Glu Glu Leu Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser SerPhe Gln Val Met Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala LeuAla Ile Leu Gly Gly Ile Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile His Ala Asn LeuPhe Val Ser Phe Val Leu Lys Ala Ser Ser Val Leu Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg ThrArg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly Asp Asp Leu Ser Val Ser Ile Trp Leu Ser Asp GlyAlaVal Ala Gly Cys Arg Val Ala Ala Val Phe Met Gln Tyr Gly Val Val Ala Asn Tyr CysTrp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala Thr Leu Pro GluArg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly Trp Gly Ala Pro Met Leu Phe Ile IlePro Trp Val Val Val Arg Cys Leu Phe Glu Asn Ile Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp AsnMet Gly Phe Trp Trp Ile Leu Arg Phe Pro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe PheIle Phe Ile Arg Ile Val His Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala Arg Glu Met His HisThr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly ValHis Glu Val Ile Phe Ala Phe Val Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Phe AlaLys Leu Phe Phe Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu TyrCys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu Arg Arg His Trp His Arg Trp Arg LeuGly Lys Val Leu Gln Glu Glu Arg Gly Thr Ser Asn His Lys Thr Pro Ser Ala Pro GlyGln Gly Leu Pro Gly Lys Lys Leu Gln Ser Gly Arg Gly Gly Gly Ser Gln Asp Ser SerAla Glu Ile Pro Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala Glu Ser Pro Phe
抗原结合蛋白
一方面，本发明提供与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白(例如，抗体、抗体片段、抗体衍生物、抗体突变蛋白和抗体变异体)。在一个实施方案中该抗原结合蛋白为人类抗体。
根据本发明的抗原结合蛋白包括与人胰高血糖素受体结合并通过胰高血糖素受体抑制胰高血糖素信号传导的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白的IC50值为90nM或更低。另一方面，该抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合，抑制信号传导并显示出治疗性生物作用，例如降低动物模型的血糖或提高动物模型的葡萄糖清除率(耐受)。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为与胰高血糖素受体特异性结合并通过胰高血糖素受体抑制信号传导的人类抗体。在另一实施方案中，该抗原结合蛋白为与胰高血糖素受体特异性结合、通过胰高血糖素受体抑制信号传导并可以降低血糖或提高动物模型的葡萄糖清除率(耐受)的人类抗体。
在一个实施方案中，该抗原结合蛋白(例如，抗体)包含与下文表2中A1-A23的CDR序列各相差5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失的序列。如本文所使用，与下文表2所示的CDR序列最多不超过例如四个氨基酸添加、替换和或缺失的CDR序列指与下文表2中的序列相比具有4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失的序列。
在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含一个或多个下文所示的CDR一致序列(consensus sequences)。提供了轻链CDR1、CDR2、CDR3和重链CDR1、CDR2和CDR3的一致序列。
抗原结合蛋白(抗体)A1-A23的轻链CDRs以及示例性抗原结合蛋白(抗体)A1-A23的重链CDRs见表2。A-1至A-23对应于下文的L1至L23以及下文的H1至H23。也显示了编码CDRs氨基酸序列的多聚核苷酸序列。
表2
轻链L1至L23
  Ab   CDR1   CDR2  CDR3
  A-1NA   aggtctagtcagagcctcttggatagagatgatggagac   Acgctttcctatcgggcctct(SEQ ID NO：42)  atgcaacgtatagagtttccattcact
  acctatttggac(SEQ ID NO：9)  (SEQ ID NO：71)
  AA   RSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQ ID NO：10)  TLSYRAS(SEQ ID NO：43)  MQRIEFPFT(SEQ ID NO：72)
  A-2NA   aggtctagtcagagcctcttggatagtgctgatggagacacctatttggac(SEQ ID NO：11)  acgctttcctatcgggcctct(SEQ ID NO：42)  atgcaacgtatagagtttccattcact(SEQ ID NO：71)
  AA   RSSQSLLDSADGDTYLD(SEQ ID NO：12)  TLSYRAS(SEQ ID NO：43)  MQRIEFPFT(SEQ ID NO：72)
  A-3NA   cgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQ ID NO：13)  gctgcatccagtttgcaaagt(SEQ ID NO：44)  ctacagcataatagtaaccctctcact(SEQ ID NO：73)
  AA   RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)  AASSLQS(SEQ ID NO：45)  LQHNSNPLT(SEQ ID NO：74)
  A-4NA   cgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQ ID NO：13)  gctgcatccagtttgcaaagt(SEQ ID NO：44)  ctacagcataatagtaaccctctcact(SEQ ID NO：73)
  AA   RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)  AASSLQS(SEQ ID NO：45)  LQHNSNPLT(SEQ ID NO：74)
  A-5NA   cgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQ ID NO：13)  gctgcctccagtttgcaaagt(SEQ ID NO：46)  ctacagcataatagtgacccgctcacc(SEQ ID NO：75)
  AA   RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)  AASSLQS(SEQ ID NO：45)  LQHNSDPLT(SEQ ID NO：76)
  A-6NA   agggccagtcagagtgttagcagcaactacttagcc(SEQ ID NO：15)  ggtgcatccagcagggccact(SEQ ID NO：47)  caacaatatggtaactcaccattcact(SEQ ID NO：77)
  AA   RASQSVSSNYLA  GASSRAT  QQYGNSPFT
  (SEQ ID NO：16)  (SEQ ID NO：48)   (SEQ ID NO：78)
  A-7NA   cgggcaagtcaggacattagaaatgattttggc(SEQ ID NO：17)  gctgcatccagtttacaaagt(SEQ ID NO：44)   ctacagcaaaatagttacccgctcact(SEQ ID NO：79)
  AA   RASQDIRNDFG(SEQ ID NO：18)  AASSLQS(SEQ ID NO：45)   LQQNSYPLT(SEQ ID NO：80)
  A-8NA   gggtctactcagagcctcttggatagtgatgatggagacacctatttggac(SEQ ID NO：19)  acgctttcctatcgggcctct(SEQ ID NO：42)   atgcaacgtatagagtttccattcact(SEQ ID NO：71)
  AA   RSTQSLLDSDDGDTYLD(SEQ ID NO：20)  TLSYRAS(SEQ ID NO：43)   MQRIEFPFT(SEQ ID NO：72)
  A-9NA   cgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQ ID NO：13)  gctgcatccagtttggaaagt(SEQ ID NO：49)   ctacagcataatagtaaccctctcact(SEQ ID NO：73)
  AA   RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)  AASSLES(SEQ ID NO：50)   LQHNSNPLT(SEQ ID NO：74)
  A-10NA   caggcgagtcaggacattagtaagtatttaaat(SEQ ID NO：21)  gatgcatccaatttggaaaca(SEQ ID NO：51)   caacagtatggtaatctcccgatcacc(SEQ ID NO：75)
  AA   QASQDISKYLN(SEQ ID NO：22)  DASNLET(SEQ ID NO：52)   QQYGNLPIT(SEQ ID NO：76)
  A-11NA   tctggagataaattgggggataaatatgtttgc(SEQ ID NO：23)  caaacttccaagcggccctca(SEQ ID NO：53)   caggcgtgggacagcaacactgtgatt(SEQ ID NO：77)
  AA   SGDKLGDKYVC(SEQ ID NO：24)  QTSKRPS(SEQ ID NO：54)   QAWDSNTVI(SEQ ID NO：78)
  A-12NA   tctggagataaattgggggataaatatgtttgc(SEQ ID NO：23)  caaacttccaagcggccctca(SEQ ID NO：53)   caggcgtgggacagcagcactgtggtt(SEQ ID NO：79)
  AA   SGDKLGDKYVC(SEQ ID NO：24)   QTSKRPS(SEQ ID NO：54)   QAWDSSTVV(SEQ ID NO：80)
  A-13NA   tctggagataaattgggggataaatatgcttgc(SEQ ID NO：25)   caatctaccaagcggccctca(SEQ ID NO：55)   caggcgtgggacagcagcactgtggta(SEQ ID NO：81)
  AA   SGDKLGDKYAC(SEQ ID NO：26)   QSTKRPS(SEQ ID NO：56)   QAWDSSTVV(SEQ ID NO：80)
  A-14NA   acccgcagcagtggcagcattgtcagcaactttgtgcaa(SEQ ID NO：27)   gaggataaccaaagaccctct(SEQ ID NO：57)   cagtcttatgataccagcaatcaggtg(SEQ ID NO：82)
  AA   TRSSGSIVSNFVQ(SEQ ID NO：28)   EDNQRPS(SEQ ID NO：58)   QSYDTSNQV(SEQ ID NO：83)
  A-15NA   actggaatcacctccaacatcggaagcaatactgtacac(SEQ ID NO：29)   agtaataatcagcggccctca(SEQ ID NO：59)   gcagcatgggatgacagcctgaatggtccggtg(SEQ ID NO：84)
  AA   TGITSNIGSNTVH(SEQ ID NO：30)   SNNQRPS(SEQ ID NO：60)   AAWDDSLNGPV(SEQ ID NO：85)
  A-16NA   tctggaagcaggtccaacatcggaagtaattatgtatac(SEQ ID NO：31)   aggaataatcagcggccctca(SEQ ID NO：61)   gcagcatgggatgacagcctgagtaggccggta(SEQ ID NO：86)
  AA   SGSRSNIGSNYVY(SEQ ID NO：32)   RNNQRPS(SEQ ID NO：62)   AAWDDSLSRPV(SEQ ID NO：87)
  A-17NA   actgggagcagctccaacatcggggcaggttatgctgtacac(SEQ ID NO：33)   gataacaacaatcggccctca(SEQ ID NO：63)   cagtcctatgacagcagcctgagtgctata(SEQ ID NO：88)
  AA   TGSSSNIGAGYAVH(SEQ ID NO：34)   DNNNRP(SEQ ID NO：64)   QSYDSSLSAI(SEQ ID NO：89)
  A-18   aagtctagtcagagcctcct   gaagtttcctaccggttctct   atgcaaaatatacagcctc
  NA   gcatagtgatggaaagaactatttgttt(SEQ ID NO：35)   (SEQ ID NO：65)   ctctcacc(SEQ ID NO：90)
  AA   KSSQSLLHSDGKNYLF(SEQ ID NO：36)   EVSYRFS(SEQ ID NO：66)   MQNIQPPLT(SEQ ID NO：91)
  A-19NA   aggtctagtcagagcctcctgcatagtaatggatacaactatttggat(SEQ ID NO：37)   ttgggttctaatcgggcctcc(SEQ ID NO：67)   atggaagctcttcaaactatgtgcagt(SEQ ID NO：92)
  AA   RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO：38)   LGSNRAS(SEQ ID NO：68)   MEALQTMCS(SEQ ID NO：93)
  A-20NA   cgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQ ID NO：39)   gctgcatccagtttgcaaagt(SEQ ID NO：44)   ctacagcataatagttaccctcgcagt(SEQ ID NO：94)
  AA   RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)   AASSLQS(SEQ ID NO：45)   LQHNSYPRS(SEQ ID NO：95)
  A-21NA   cgggcgagtcagggtattagcagctggttagcc(SEQ ID NO：40)   gctgcatccagtttgcaaagt(SEQ ID NO：44)   caacaggctaacagtttcccgctcact(SEQ ID NO：96)
  AA   RASQGISSWLA(SEQ ID NO：41)   AASSLQS(SEQ ID NO：45)   QQANSFPLT(SEQ ID NO：97)
  A-22NA   aggtctagtcagagcctcttggatagagatgatggagacacctatttggac(SEQ ID NO：9)   acgctttcctatcgggcctct(SEQ ID NO：42)   atgcaacgtatagagtttccattcactt(SEQ ID NO：98)
  AA   RSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQ ID NO：10)   TLSYRAS(SEQ ID NO：43)   MQRIEFP FT(SEQ ID NO：72)
  A-23NA   cgggcgagtcagggtattagcagctggttagcc   actgcatccactttgcaaagt(SEQ ID NO：69)   caacagtctaacagtttcccgctcact
(SEQ ID NO：40)   (SEQ ID NO：99)
  AA RASQGISSWLA(SEQ ID NO：41)  TASTLQS(SEQ ID NO：70)   QQSNSFPLT(SEQ ID NO：100)
重链H1至H23
  Ab   CDR1   CDR2   CDR3
  A-1NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   tctatatggtatgatggaagtaataaatattatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：123)   cttggtggtggttttgactac(SEQ ID NO：164)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   SIWYDGSNKYYVDSVKG(SEQ ID NO：124)   LGGGFDY(SEQ ID NO：165)
  A-2NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   tttatatggtatgatggaagtgaaaaatattatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：125)   atgggaggcggctttgactac(SEQ ID NO：166)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   FIWYDGSEKYYVDSVKG(SEQ ID NO：126)   MGGGFDY(SEQ ID NO：167)
  A-3NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   gttatgtggtatgatggaagtaataaagactatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：127)   gaaaaagatcattacgacattttgactggttataactactactacggtctggacgtc(SEQ ID NO：168)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   VMWYDGSNKDYVDSVKG(SEQ ID NO：128)   EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQ ID NO：169)
  A-4NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   gttatgtggtatgatggaagtaataaagactatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：127)   gaaaaagatcattacgacattttgactggttataactactactacggtctggacgtc(SEQ ID NO：168)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   VMWYDGSNKDYVDSVKG(SEQ ID NO：128)   EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQ ID NO：169)
  A-5NA   acctatgggatgcac(SEQ ID NO：103)   gttatatcagatgatggaagtcataaatactctgcagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：129)   gaggagacgtattacgatattttgactggctatcatcactactacggtatggacgtc(SEQ ID NO：170)
  AA   TYGMH(SEQ ID NO：104)   VISDDGSHKYSADSVKG(SEQ ID NO：130)   EETYYDILTGYHHYYGMDV(SEQ ID NO：171)
  A-6NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   gaaatatggaatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQ IDNO：131)   gagcctcagtattacgatattttgactggttatgataactactacggtatggacgtc(SEQ ID NO：172)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   EIWNDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO：132)   EPQYYDILTGYDNYYGMDV(SEQ ID NO：173)
  A-7NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：105)   gtgatatcacatgatggaagtgataaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：133)   gaaaaaccgtattacgatattttgactggttatttctactactatggtatggacgtc(SEQ ID NO：174)
  AA   SYDMH(SEQ ID NO：106)   VISHDGSDKYYADSVKG(SEQ ID NO：134)   EKPYYDILTGYFYYYGMDV(SEQ ID NO：175)
  A-8NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   ggtatatggtatgatggaaggaataaatactatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：135)   ttagcagtggcctttgactac(SEQ ID NO：176)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   GIWYDGRNKYYVDSVKG(SEQ ID NO：136)   LAVAFDY(SEQ ID NO：177)
  A-9NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   gttatgtggtatgatggaagtaataaagactatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：127)   gaaaaagatcattacgacattttgactggttataactactactacggtctggacgtc(SEQ ID NO：168)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   VMWYDGSNKDYVDSVKG(SEQ ID NO：128)   EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQ ID NO：169)
  A-10NA   agcaactatgctgcttggaac(SEQ ID NO：107)   aggacatactacaggtccaagtggtataatgattatgcagtatctgtgagaagt(SEQ ID NO：137)   gaagatggcagtggctggtacggtgcttttgacatc(SEQ ID NO：178)
  AA   SNYAAWN(SEQ ID NO：108)   RTYYRSKWYNDYAVSVRS(SEQ ID NO：138)   EDGSGWYGAFDI(SEQ ID NO：179)
  A-11NA   agctatgacatgcac(SEQ ID NO：109)   tttatatcagatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：139)   gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQ ID NO：180)
  AA   SYDMH(SEQ ID NO：106)   FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQ ID NO：140)   DQYDILTGYSSDAFDI(SEQ ID NO：181)
  A-12NA   agctatgacatgcac(SEQ ID NO：109)   tttatatcagatgatggaagtaataaatattatggagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：141)   gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQ ID NO：180)
  AA   SYDMH(SEQ ID NO：106)   FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQ ID NO：140)   DQYDILTGYSSDAFDI(SEQ ID NO：181)
  A-13NA   agctatgacatgcac(SEQ ID NO：109)   gttatatcatatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggc   gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQ ID NO：180)
  (SEQ ID NO：142)
  AA   SYDMH(SEQ ID NO：106)   VISYDGSNKYYGDSVKG(SEQ ID NO：143)   DQYDILTGYSSDAFDI(SEQ ID NO：181)
  A-14NA   aactatggcatgcac(SEQ ID NO：110)   gttatatggtatgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：144)   gcctattacgatattttgactgattacccccagtatgactactactacggtatggacgtc(SEQ ID NO：182)
  AA   NYGMH(SEQ ID NO：111)   VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO：145)   AYYDILTDYPQYDYYYGMDV(SEQ ID NO：183)
  A-15NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   cttatatcatttgatggaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：146)   gatgggtattacgatattttgactggttatgaggatgatgcttttgatatc(SEQ ID NO：184)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   LISFDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO：147)   DGYYDILTGYEDDAFDI(SEQ ID NO：185)
  A-16NA   ggctactatttgcac(SEQ ID NO：112)   tggatcatccctgacagtggtggcacaaagtatgcacagaagtttcagggc(SEQ ID NO：148)   gaagggtttcattacgatattttgactggttcctacttctactactacggtatggacgtc(SEQ ID NO：186)
  AA   GYYLH(SEQ ID NO：113)   WIIPDSGGTKYAQKFQG(SEQ ID NO：149)   EGFHYDILTGSYFYYYGMDV(SEQ ID NO：187)
  A-17NA   agctatggtatcagt(SEQ ID NO：114)   tggatcggcgtttacaatggtcacacaaaatatgcacagaagttceagggc(SEQ ID NO：150)   agggtagcagtggctgggtactttgactac(SEQ ID NO：188)
  AA   SYGIS(SEQ ID NO：   WIGVYNGHTKYAQKFQG   RVAVAGYFDY(SEQ ID NO：189)
  115)   (SEQ ID NO：151)
  A-18NA   aagtctagtcagagcctcctgcatagtgatggaaagaactatttgttt(SEQ ID NO：116)   gaagtttcctaccggttctct(SEQ ID NO：152)   atgcaaaatatacagcctcctctcacc(SEQ ID NO：190)
  AA   KSSQSLLHSDGKNYLF(SEQ ID NO：117)   VIWYDGSHKYYEDSVKG(SEQ ID NO：153)   VGYGSGWYEYYYHYGMDV(SEQ ID NO：191)
  A-19NA   agctatggcatgcac(SEQ ID NO：101)   attatatggtctgatggaattaacaaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：154)   gagagaggcctctacgatattttgactggttattataactactacggtattgacgtc(SEQ ID NO：192)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)   IIWSDGINKYYADSVKG(SEQ ID NO：155)   ERGLYDILTGYYNYYGIDV(SEQ ID NO：193)
  A-20NA   ggctataccttgaac(SEQ ID NO：117)   aacattaatagtaggagtagtctcatatactacacagactctgtgaagggc(SEQ ID NO：156)   gatcagtataactggaactactactacggtatggacgtc(SEQ ID NO：194)
  AA   GYTLN(SEQ ID NO：118)   NINSRSSLIYYTDSVKG(SEQ ID NO：157)   DQYNWNYYYGMDV(SEQ ID NO：195)
  A-21NA   agctatgccatgaac(SEQ ID NO：119)   tacattggtagtagtagtagtgccatatactacggagactctgtgaagggc(SEQ ID NO：158)   tatagaagtggctggtcccccctctttgacttc(SEQ ID NO：196)
  AA   SYAMN(SEQ ID NO：120)   YIGSSSSAIYYGDSVKG(SEQ ID NO：159)   YRSGWSPLFDF(SEQ ID NO：197)
  A-22   agctatggcatgcac   tctatatggtatgatggaagtaa   cttggtggtggttttgactac
  NA   (SEQ ID NO：101)  taaatattatgtagactccgtgaagggc(SEQ ID NO：160)   (SEQ ID NO：164)
  AA   SYGMH(SEQ ID NO：102)  SIWYDGSNKYYVDSVKG(SEQ ID NO：161)   LGGGFDY(SEQ ID NO：165)
  A-23NA   agatatgccatgaac(SEQ ID NO：121)  tacattggtagtagtagtagtgccatatactacgcagactctgtgaagggc(SEQ ID NO：162)   tatagcagtggctggtcccccctctttgactac(SEQ ID NO：198)
  AA   RYAMN(SEQ ID NO：122)  YIGSSSSAIYYADSVKG(SEQ ID NO：163)   YSSGWSPLFDY(SEQ ID NO：199)
CDR一致序列
轻链CDR1
1组
RSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQ ID NO：10)
RSSQSLLDSADGDTYLD(SEQ ID NO：12)
RSTQSLLDSDDGDTYLD(SEQ ID NO：20)
          X1                            X2   X3
R    S    S    Q    S    L    L    D    R    D    D    G    T    Y    T    L    D
          T                             S    A
i.R S X1 Q S L L D X2 X3 D G T Y T L D(SEQ ID NO：200)
X1为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，
X3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，
2组
RASQDIRNDFG(SEQ ID NO：18)
RASQGIRNDLG(SEQ ID NO：14)
                    X4                       X5
R    A    S    Q    G    I    R    N    D    L    G
                    D                        F
ii.R A S Q X4 I R N D X5G(SEQ ID NO：201)
X4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，
X5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基.
3组
SGDKLGDKYVC(SEQ ID NO：24)
SGDKLGDKYAC(SEQ ID NO 26)
                                             X6
S    G    D    K    L    G    D    K    Y    V    C
                                             A
iii.S G D K L G D K Y X6 C(SEQ ID NO：202)
X6为缬氨酸残基或丙氨酸残基
重链CDR1
1组
TYGMH-(SEQ ID NO：104)
SYGMH-(SEQ ID NO：102)
SYDMH-(SEQ ID NO：106)
  X7   X8
  S   Y   G   M   H
  T   D
i.X7 Y X8 M H(SEQ ID NO：203)
X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，
轻链CDR2
1组
AASSLQS(SEQ ID NO：45)
AASSLES(SEQ ID NO：50)
                         X9
A    A    S    S    L    Q    S
                         E
i.A A S S L X9 S(SEQ ID NO：204)
X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，
2组
QTSKRPS(SEQ ID NO：54)
QSTKRPS(SEQ ID NO：56)
     X10  X11
Q    T    S    K    R    P    S
     S    T
ii.Q X10 X11 K R P S(SEQ ID NO：205)
X10为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X11为苏氨酸残基或丝氨酸残基，
重链CDR2
1组
SIWYDGSNKYYVDSVKG(SEQ ID NO：124)
FIWYDGSEKYYVDSVKG(SEQ ID NO：126)
VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO：145)
EIWNDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO：132)
X12            X13                 X14                 X15
S    I    W    Y    D    G    S    N    K    Y    Y    V    D    S    V    K    G
F              N                   E                   A
V
E
i.X12 I W X13 D G S X14 K Y Y X15 D S V K G(SEQ ID NO：206)
X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，
X13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，
X14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，
X15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，
2组
VISHDGSDKYYADSVKG(SEQ ID NO：134)
FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQ ID NO：140)
VISYDGSNKYYGDSVKG(SEQ ID NO：143)
VISDDGSHKYSADSVKG(SEQ ID NO：130)
X16            X17                 X18            X19  X20
V    I    S    H    D    G    S    D    K    Y    Y    A    D    S    V    K    G
F              D                   N              S    G
        Y               H
ii.X16 I S X17 D G S X18 K Y X19 X20 D S V K G(SEQ ID NO：207)
X16为丙氨酸残基或苯并氨酸残基，
X17为组氨酸残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，
X18为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基，
X19为酪氨酸残基或丝氨酸残基，
X20为丙氨酸残基或甘氨酸残基，
轻链CDR3
1组
LQHNSDPLT(SEQ ID NO：76)
LQQNSYPLT(SEQ ID NO：80)
LQHNSNPLT(SEQ ID NO：74)
          X21            X22
L    Q    H    N    S    N    P    L    T
          Q              D
                         Y
i.L Q X21 N S X22 P L T(SEQ ID NO：208)
X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，
X22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，
2组
QAWDSNTVI(SEQ ID NO：78)
QAWDSSTVV(SEQ ID NO：80)
               X23            X24
Q    A    W    D    S    N    T    V    I
                         S              V
ii.Q A W D S X23 T V X24(SEQ ID NO：209)
X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，
X24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，
重链CDR3
1组
EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQ ID NO：169)
EETYYDILTGYHHYYGMDV(SEQ ID NO：171)
EPQYYDILTGYDNYYGMDV(SEQ ID NO：173)
EKPYYDILTGYFYYYGMDV(SEQ ID NO：175)
     X25  X26  X27                                    X28  X29                 X30
E    K    D    H    Y    D    I    L   T    G    Y    N    Y    Y    Y    G    L    D    V
     E    T    Y                                      H    H                   M
     P    Q                                           D    N
        P                                           F
i.E X25 X26 X27 Y D I L T G Y X28 X29 Y Y G X30 D V(SEQ IDNO：210)
X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，
X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基，
X27为组氨酸残基或酪氨酸残基，
X28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基，
X29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，
X30为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，
2组
LGGGFDY(SEQ ID NO：165)
MGGGFDY(SEQ ID NO：167)
X31
L    G    G    G    F    D    Y
M
ii.X31 G G G F D Y(SEQ ID NO：211)
X31为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基。
另一方面，本发明提供包含选自L1-L23的轻链可变区或选自H1-H23的重链可变区及其片段、衍生物、突变蛋白或变异体的抗原结合蛋白。可用名称“LxHy”表示该类抗原结合蛋白，其中“x”对应于轻链可变区并且“y”对应于重链可变区。例如，L2H1指具有包含如下文表3所示L2氨基酸序列的轻链可变区和包含H1氨基酸序列的重链可变区的抗原结合蛋白。本发明抗原结合蛋白包括例如包含选自组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、H17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H2的轻链和重链可变结构域的组合。在一个实施方案中，该抗体为人类抗体。
表3也提供了编码示例性GCGR抗体的可变轻链和可变重链结构域的氨基酸序列的多聚核苷酸(DNA)序列。
表3
抗GCGR可变区多聚核苷酸序列和氨基酸序列
                                                           
轻链可变区多聚核苷酸和氨基酸序列
L1(A-1)
gatattgtgctgacccagactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgc
Figure A20078004297300541
Figure A20078004297300542
tggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctat
Figure A20078004297300543
ggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggcactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgc
Figure A20078004297300551
ttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQ ID NO：212)
DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISC
Figure A20078004297300552
WYLQKPGQSPQLLIYGVPDRFSGSGSGTDFSLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A20078004297300554
FGPGTKVDIK(SEQ ID NO：213)
L2(A-2)
agactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgc
Figure A20078004297300555
Figure A20078004297300556
tggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctat
Figure A20078004297300557
Figure A20078004297300558
ggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcagacactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa
(SEQ ID NO：214)
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC
Figure A200780042973005510
WYLQKPGQSPQLLIY
Figure A200780042973005511
GVPDRFSGSGSDTDFSLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A200780042973005512
FGPGTKVDIK(SEQ ID NO：215)
L3(A-3)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A200780042973005513
Figure A200780042973005514
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat
Figure A200780042973005515
Figure A200780042973005516
ggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctgaagattttgtaacttattactgt
Figure A200780042973005517
ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
(SEQ ID NO：216)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
Figure A200780042973005518
WYQQKPGKAPKRLIY
Figure A200780042973005519
Figure A200780042973005520
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPEDFVTYYC
Figure A200780042973005521
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：217)
L4(A-4)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A200780042973005522
Figure A200780042973005523
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat ggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtctgcagcctgaagattttgcaacttattactgt
Figure A20078004297300562
ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
(SEQ ID NO：218)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
Figure A20078004297300563
WYQQKPGKAPKRLIY
Figure A20078004297300565
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC
Figure A20078004297300566
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：219)
L5(A-5)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatttgtaggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A20078004297300567
Figure A20078004297300568
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgctctat
Figure A20078004297300569
Figure A200780042973005610
ggggtcccatcaaggttcagcggcagtgggtctgggtcagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgt
Figure A200780042973005611
ttcggccaagggacacgactggagattaaa
(SEQ ID NO：220)
DIQMTQSPSSLSAFVGDRVTITC
Figure A200780042973005612
WYQQKPGKAPKRLLY GVPSRFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFATYYC
Figure A200780042973005615
FGQGTRLEIK
(SEQ ID NO：221)
L6(A-6)
gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtttccaggggaaagagccaccctctcctgc
Figure A200780042973005616
Figure A200780042973005617
tggtaccagcagaaatctggccaggctcccaggctcctcatctat
Figure A200780042973005618
Figure A200780042973005619
ggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgt
Figure A200780042973005620
ttcggccctgggaccaatgtggatatcaaa
(SEQ ID NO：222)
EIVLTQSPGTLSLFPGERATLSC
Figure A200780042973005621
WYQQKSGQAPRLLIY
Figure A200780042973005622
Figure A200780042973005623
GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC
Figure A200780042973005624
FGPGTNVDIK
(SEQ ID NO：223)
L7(A-7)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccgtcacttgc
Figure A20078004297300571
Figure A20078004297300572
tggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat
Figure A20078004297300573
Figure A20078004297300574
ggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgt
Figure A20078004297300575
ttcgggggagggaccaaggtggaaatcaaa
(SEQ ID NO：224)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTVTC
Figure A20078004297300576
WYQQKPGKAPKRLIY
Figure A20078004297300578
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC
Figure A20078004297300579
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：225)
L8(A-8)
gatattgtgatgacccagactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgc
Figure A200780042973005710
Figure A200780042973005711
tggtacctgcagaagccggggcagtctccacagctcctgatctatggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggcactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgc
Figure A200780042973005713
ttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa
(SEQ ID NO：226)
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC
Figure A200780042973005714
WYLQKPGQSPQLLIY
Figure A200780042973005715
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A200780042973005716
FGPGTKVDIK
(SEQ ID NO：227)
L9(A-9)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A200780042973005717
Figure A200780042973005718
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat
Figure A200780042973005720
ggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctgaagattttgtaacttattactgt
Figure A200780042973005721
ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
(SEQ ID NO：228)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKRLIY
Figure A20078004297300582
Figure A20078004297300583
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSVQPEDFVTYYC
Figure A20078004297300584
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：229)
L10(A-10)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtgggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A20078004297300585
Figure A20078004297300586
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctcatctac
Figure A20078004297300588
ggggtcccatcaaggttcagtggaagtggatctgggacagattttactttcaccatcagcagcctgcagcctgaagatattgcaacatattactgt
Figure A20078004297300589
ttcggccaagggacacgactggagagtaaa
(SEQ ID NO：230)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
Figure A200780042973005810
WYQQKPGKAPKLLIY
Figure A200780042973005812
GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC
Figure A200780042973005813
FGQGTRLESK
(SEQ ID NO：231)
L11(A-11)
tcctatgagctgactcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc
Figure A200780042973005815
tggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtgctggtcatctat
Figure A200780042973005817
gggatccctgagcggttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：232)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITC
Figure A200780042973005819
WYQQKPGQSPVLVIY
Figure A200780042973005820
Figure A200780042973005821
GIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC
Figure A200780042973005822
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：233)
L12(A-12)
tcctatgagctgactcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc
Figure A200780042973005823
Figure A200780042973005824
tggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtgctggtcatctat
Figure A200780042973005825
Figure A200780042973005826
gggatccctgagcggttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：234)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITC
Figure A20078004297300592
WYQQKPGQSPVLVIY
Figure A20078004297300593
Figure A20078004297300594
GIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC
Figure A20078004297300595
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：235)
L13(A-13)
tcctatgagctgactcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc
Figure A20078004297300596
Figure A20078004297300597
tggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtactggtcatctat
Figure A20078004297300598
Figure A20078004297300599
gggatccctgagcgtttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：236)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCWYQQKPGQSPVLVIY
Figure A200780042973005912
Figure A200780042973005913
GIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC
Figure A200780042973005914
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：237)
L14(A-14)
aattttatgctgactcagccccactctgtgtcggagtctccggggaagacggtaaccatctcctgc
Figure A200780042973005915
Figure A200780042973005916
tggtaccagcagcgcccgggcagttcccccaccactgtgatctat
Figure A200780042973005917
Figure A200780042973005918
ggggtccctgatcggttctctggctccatcgacagctcctccaactctgcctccctcaccatctctggactgaagactgaggacgaggctgactactactgt
Figure A200780042973005919
ttcggcggagggaccaagctgaccgtcctg
(SEQ ID NO：238)
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISC
Figure A200780042973005920
WYQQRPGSSPTTVIY
Figure A200780042973005921
Figure A200780042973005922
GVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYC
Figure A200780042973005923
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：239)
L15(A-15)
cagtctgtcctgactcagccacccccagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcgtgt
Figure A20078004297300601
Figure A20078004297300602
tggtaccagcagttcccaggaacggcccccaaactcctcatctat
Figure A20078004297300603
Figure A20078004297300604
ggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccagtctgaggatgaggctgattattactgt
Figure A20078004297300605
ttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：240)
QSVLTQPPPASGTPGQRVTISCWYQQFPGTAPKLLIY
Figure A20078004297300607
Figure A20078004297300608
GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC
Figure A20078004297300609
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：241)
L16(A-16)
cagtctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgt
Figure A200780042973006010
tggtaccaacagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctat ggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgt
Figure A200780042973006014
ttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：242)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISC
Figure A200780042973006015
WYQQLPGTAPKLLIY
Figure A200780042973006016
Figure A200780042973006017
GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYC
Figure A200780042973006018
FGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：243)
L17(A-17)
cagtctgtgctgacgcagccgccctcagtgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcctgc
Figure A200780042973006019
Figure A200780042973006020
tggtaccagcagcttccaggaacagcccccaaactcctcatctat
Figure A200780042973006022
ggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgc
Figure A200780042973006023
ttcggcggagggaccaagctgaccgtccta
(SEQ ID NO：244)
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISC
Figure A20078004297300611
WYQQLPGTAPKLLIY
Figure A20078004297300612
Figure A20078004297300613
GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCFGGGTKLTVL
(SEQ ID NO：245)
L18(A-18)
aatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgc
Figure A20078004297300615
Figure A20078004297300616
tggtacctacagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat
Figure A20078004297300617
ggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttctcattgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcttcggccaagggacacgactggagattaaa
(SEQ ID NO：246)
NIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC
Figure A20078004297300619
WYLQKPGQSPQLLIY
Figure A200780042973006110
GVPDRFSGSGSGTDFSLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A200780042973006111
FGQGTRLEIK
(SEQ ID NO：247)
L19(A-19)
ggtattgtgctgactcagtctccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgc
Figure A200780042973006112
Figure A200780042973006113
tggtacttgcagaagccagggcagtctccgcagctcctgatctat
Figure A200780042973006114
ggggtccctgacaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgc
Figure A200780042973006115
tttggccaggggaccaagctggagatcaag
(SEQ ID NO：248)
GIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCWYLQKPGQSPQLLIY
Figure A200780042973006117
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A200780042973006118
FGQGTKLEIK
(SEQ ID NO：249)
L20(A-20)
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc
Figure A200780042973006119
Figure A200780042973006120
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat
Figure A200780042973006121
ggggtcccatctaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcaacctgcagcctgaagattttgcaacttattactgt
Figure A20078004297300621
tttggccaggggaccaagctggagatcaaa
(SEQ ID NO：250)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
Figure A20078004297300622
WYQQKPGKAPKRLIY
Figure A20078004297300623
Figure A20078004297300624
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYC
Figure A20078004297300625
FGQGTKLEIK
(SEQ ID NO：251)
L21(A-21)
gacatccagatgacccagtctccatcttccgtgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgt
Figure A20078004297300626
Figure A20078004297300627
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctaatctat
Figure A20078004297300628
Figure A20078004297300629
ggggtcccatcacggttcagcggcagtgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttactattgt
Figure A200780042973006210
ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
(SEQ ID NO：252)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC
Figure A200780042973006211
WYQQKPGKAPKLLIY
Figure A200780042973006212
Figure A200780042973006213
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
Figure A200780042973006214
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：253)
L22(A-22)
gatattgtgctgacccagactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgc
Figure A200780042973006216
tggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggcactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa
(SEQ ID NO：254)
DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISC
Figure A200780042973006219
WYLQKPGQSPQLLIY
Figure A200780042973006220
GVPDRFSGSGSGTDFSLKISRVEAEDVGVYYC
Figure A200780042973006221
FGPGTKVDIK
(SEQ ID NO：255)
L23(A-23)
gacatccagatgacccagtctccatcttccgtgtctgcgtctgtaggggacagagtcaccatcacttgt
Figure A20078004297300632
tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctat
Figure A20078004297300633
Figure A20078004297300634
ggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttactattgt
Figure A20078004297300635
ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa
(SEQ ID NO：256)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC
Figure A20078004297300636
WYQQKPGKAPKLLIY
Figure A20078004297300637
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
Figure A20078004297300639
FGGGTKVEIK
(SEQ ID NO：257)
重链可变区多聚核苷酸和氨基酸序列
H1(A-1)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggaatcaccttcagttgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006311
Figure A200780042973006312
cgattcaccatcttcagagacaattccaagaaaacgctgtatctgcaaatgaacaggctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006313
tggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：258)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGITFS
Figure A200780042973006314
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006315
Figure A200780042973006316
RFTIFRDNSKKTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAR WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：259)
H2(A-2)
caggtgcaactggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggaatcaccttcagt
Figure A200780042973006319
tgggtccgccagggtccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006320
Figure A200780042973006321
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006322
Figure A200780042973006323
tggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：260)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGITFS
Figure A20078004297300641
WVRQGPGKGLEWVA
Figure A20078004297300642
Figure A20078004297300643
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A20078004297300644
Figure A20078004297300645
WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：261)
H3(A-3)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A20078004297300646
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A20078004297300647
Figure A20078004297300648
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaaccgcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300649
Figure A200780042973006410
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：262)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSWVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006412
RFTISRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006414
Figure A200780042973006415
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：263)
H4(A-4)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A200780042973006416
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006417
Figure A200780042973006418
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaaccgcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006420
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcct
(SEQ ID NO：264)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006421
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006422
Figure A200780042973006423
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006424
Figure A200780042973006425
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：265)
H5(A-5)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagt
Figure A20078004297300651
tgggtccgccaggctccaggcaagggtctggagtgggtggca
Figure A20078004297300652
Figure A20078004297300653
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagaactgaggactcggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300654
Figure A20078004297300655
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：266)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A20078004297300656
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A20078004297300657
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTEDSAVYYCAR
Figure A20078004297300659
Figure A200780042973006510
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：267)
H6(A-6)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A200780042973006511
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006512
Figure A200780042973006513
cgattcaccatctccagagacaatcccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattattgtgcgaga
Figure A200780042973006514
Figure A200780042973006515
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：268)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006516
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006517
Figure A200780042973006518
RFTISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006519
Figure A200780042973006520
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：269)
H7(A-7)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagt
Figure A200780042973006521
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006522
Figure A200780042973006523
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgagcagtttgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006524
Figure A200780042973006525
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：270)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006526
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006528
RFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006529
Figure A200780042973006530
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：271)
H8(A-8)
caggtgcagttggcggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtacagcgtctggaatcaccttcagt
Figure A20078004297300661
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A20078004297300662
cgattcaccatctccagagacaattccaagaaaacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagg
Figure A20078004297300665
tggggccagggaactttggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：272)
QVQLAESGGGVVQPGRSLRLSCTASGITFS
Figure A20078004297300666
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A20078004297300668
RFTISRDNSKKTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A20078004297300669
Figure A200780042973006610
WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：273)
H9(A-9)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A200780042973006611
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006612
Figure A200780042973006613
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaaccgcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006614
Figure A200780042973006615
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：274)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006616
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006617
Figure A200780042973006618
RFTISRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006619
Figure A200780042973006620
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：275)
H10(A-10)
caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaggccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctct
Figure A200780042973006621
tggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctggga
Figure A200780042973006623
cgaacaaccatcaacccagacacatccaagaaccagttctccctgcagttgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtacaaga
Figure A200780042973006624
Figure A200780042973006625
tggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
(SEQ ID NO：276)
QVQLQQSGPGLVRPSQTLSLTCAISGDSVS
Figure A20078004297300671
WIRQSPSRGLEWLG
Figure A20078004297300672
RTTINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCTR
Figure A20078004297300673
Figure A20078004297300674
WGQGTMVTVSS
(SEQ ID NO：277)
H11(A-11)
caggtgcaactggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctgggagcaccttcagatgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A20078004297300676
Figure A20078004297300677
cgattgaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300678
tggggccaagggacaatggtcaccgtctcttc
(SEQ ID NO：278)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGSTFRWVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006711
Figure A200780042973006712
RLTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006713
Figure A200780042973006714
WGQGTMVTVSS
(SEQ ID NO：279)
H12(A-12)
caggtgcaactggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctgggagcaccttcaga
Figure A200780042973006715
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006716
Figure A200780042973006717
cgattgaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattattgtgcgaga
Figure A200780042973006719
tggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
(SEQ ID NO：280)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGSTFRWVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006721
Figure A200780042973006722
RLTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006723
Figure A200780042973006724
WGQGTMVTVSS
(SEQ ID NO：281)
H13(A-13)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggaagcaccttcaga
Figure A200780042973006725
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006726
Figure A200780042973006727
cgattgaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300681
tggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
(SEQ ID NO：282)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGSTFR
Figure A20078004297300683
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A20078004297300685
RLTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A20078004297300686
Figure A20078004297300687
WGQGTMVTVSS
(SEQ ID NO：283)
H14(A-14)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A20078004297300688
gggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006811
Figure A200780042973006812
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：284)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006813
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006814
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006815
Figure A200780042973006816
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：285)
H15(A-15)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaagtccctgagactctcctgtgcagtctctggattcatcttcagt
Figure A200780042973006817
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006818
Figure A200780042973006819
cgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006821
tggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca
(SEQ ID NO：286)
QVQLVESGGGVVQPGKSLRLSCAVSGFIFS
Figure A200780042973006822
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006823
Figure A200780042973006824
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973006826
WGQGTMVTVSS
(SEQ ID NO：287)
H16(A-16)
caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggatacaccttcacc
Figure A20078004297300691
tgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga
Figure A20078004297300692
Figure A20078004297300693
agggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacttggagctgagcaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300694
Figure A20078004297300695
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：288)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT
Figure A20078004297300696
WVRQAPGQGLEWMG
Figure A20078004297300697
RVTMTRDTSISTAYLELSRLRSDDTAVYYCAR
Figure A20078004297300699
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：289)
H17(A-17)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttacc
Figure A200780042973006910
tgggcgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga
Figure A200780042973006912
agagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccatattttactgtgcgaga
Figure A200780042973006913
Figure A200780042973006914
tggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：290)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT
Figure A200780042973006915
WARQAPGQGLEWMG
Figure A200780042973006916
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAIFYCAR
Figure A200780042973006917
Figure A200780042973006918
WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：291)
H18(A-18)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A200780042973006919
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A200780042973006920
Figure A200780042973006921
cgattcaccatctccagagacaattctaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgacgacacgggtgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973006922
Figure A200780042973006923
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：292)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973006924
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973006925
Figure A20078004297300701
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRADDTGVYYCAR WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：293)
H19(A-19)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagt
Figure A20078004297300704
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtgaca
Figure A20078004297300705
Figure A20078004297300706
cgattcaccatatccagagacaattccaagaacacgctgaatctgcaaatgaacagtttgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300707
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：294)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
Figure A20078004297300709
WVRQAPGKGLEWVT
Figure A200780042973007010
Figure A200780042973007011
RFTISRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973007012
Figure A200780042973007013
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：295)
H20(A-20)
gaggtgcagctggtggagtctgggggagacttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagt
Figure A200780042973007014
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttca
Figure A200780042973007015
Figure A200780042973007016
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagacgaggacacggctgtgtatttctgtgcgaga
Figure A200780042973007017
Figure A200780042973007018
tggggccaagggaccacggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：296)
EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFS
Figure A200780042973007019
WVRQAPGKGLEWVS
Figure A200780042973007021
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYFCAR
Figure A200780042973007022
WGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO：297)
H21(A-21)
gaggtgcggctggtggagtctgggggagacttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagt
Figure A200780042973007024
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatttca
Figure A200780042973007025
Figure A200780042973007026
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagacgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A20078004297300711
Figure A20078004297300712
tggggccagggaagcctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：298)
EVRLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFS
Figure A20078004297300713
WVRQAPGKGLEWIS
Figure A20078004297300714
Figure A20078004297300715
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR
Figure A20078004297300716
WGQGSLVTVSS
(SEQ ID NO：299)
H22(A-22)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcagcgtctggaatcaccttcagt
Figure A20078004297300718
tgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggca
Figure A20078004297300719
cgattcaccatcttcagagacaattccaagaaaacgctgtatctgcaaatgaacaggctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973007111
tggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：300)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGITFS
Figure A200780042973007112
WVRQAPGKGLEWVA
Figure A200780042973007113
Figure A200780042973007114
RFTIFRDNSKKTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAR
Figure A200780042973007115
Figure A200780042973007116
WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：301)
H23(A-23)
gaggtgcggctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtacagcctctggattccccttcaat
Figure A200780042973007117
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttca
Figure A200780042973007119
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagatgaagacacggctgtgtattactgtgcgaga
Figure A200780042973007120
Figure A200780042973007121
tggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
(SEQ ID NO：302)
EVRLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFPFN
Figure A200780042973007122
WVRQAPGKGLEWVS
Figure A200780042973007123
Figure A200780042973007124
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR
Figure A200780042973007126
WGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO：303)
本发明抗原结合蛋白的具体实施方案包含与一个或多个上文所列CDRs和/或FRs(骨架区)的氨基酸序列相同的一个或多个氨基酸序列。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链CDR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链CDR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链CDR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链FR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链FR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链FR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链FR4序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR4序列。
在另一个实施方案中，至少一个抗原结合蛋白的CDR3序列与来自A1-A23的CDR3序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失，如上文表2和3所示。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的轻链CDR3序列与上述A1-A23的轻链CDR3序列的差异不得超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失并且抗原结合蛋白的重链CDR3序列与上文所述A1-A23的重链CDR3序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白进一步包含1、2、3、4或5个CDR序列，各序列独自与A1-A23的CDR序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸差异。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白包含上文所列轻链可变区的CDRs和重链可变区的CDRs。在另一实施方案中，抗原结合蛋白包含上文所述的1、2、3、4、5和/或6个一致CDR序列。在进一步的实施方案中，该抗原结合蛋白包含L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23中任何之一的CDRs。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为人类抗体。
在一个实施方案中，该抗原结合蛋白(例如抗体或抗体片段)包含轻链可变结构域，其包含与选自L1-L23的轻链可变结构域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸差异的氨基酸序列，其中各该序列的差异独立为一个氨基酸残基的缺失、***或替换。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含与选自L1-L23的轻链可变结构域至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含与下文所列L1-L23多聚核苷酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％相同的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含在中等条件下与编码选自L1-L23的轻链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含在严格条件下与编码选自L1-L23的轻链可变结构域的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本发明提供包含重链可变结构域的抗原结合蛋白，该可变结构域包含选自H1-H23的重链可变结构域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基存在差异的氨基酸序列，其中各该序列差异独立为一个氨基酸的缺失、***或替换。在另一个实施方案中，该重链可变结构域包含与选自H1-H23的重链可变结构域序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该重链可变结构域包含在中等严格条件下与编码选自H1-H23的重链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，该重链可变结构域包含在严格条件下与编码选自H1-H23的重链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。
附加实施方案包括包含组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23的抗原结合蛋白。
本发明的抗原结合蛋白(例如，抗体、抗体片段和抗体衍生物)可包含本领域已知的任何恒定区。轻链恒定区可为例如κ或λ型轻链恒定区，例如人κ或λ型轻链恒定区。重链恒定区可为例如α、δ、ε、γ或μ型重链恒定区，例如人α、δ、ε、γ或μ型重链恒定区。在一个实施方案中，该轻链或重链恒定区为天然恒定区的片段、衍生物、变异体或突变蛋白。
已知从相关抗体衍生不同亚类或同种型抗体的技术，即亚类转换(subclass switching)。因此，可从IgM抗体衍生IgG抗体，反之亦然。这类技术允许制备具有给定抗体(母体抗体)的抗原结合性质的新抗体，但是也显示与母体抗体不同的抗体同种型或亚类相关的生物学性质。也可应用重组DNA技术。可在该操作中应用编码具体抗体多肽的已克隆DNA，例如编码期望同种型的抗体恒定结构域的DNA。也可参见Lanitto等，Methods Mol.Biol.178：303-16(2002)。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白进一步包含恒定轻链κ或λ结构域或这些的片段。轻链恒定区序列和它们的编码多聚核苷酸提供于表4。在另一个实施方案中，本发明抗原结合蛋白进一步包含重链恒定结构域或其片段，例如提供于表4的IgG重链恒定区。
在一个实施方案中，人轻链IgG2形式和抗体A-9和A-3的重链氨基酸序列列于下文的SEQ ID NO：310、SEQ ID NO：311、SEQ ID NO：312和SEQ ID NO：311。
表4
轻链恒定区
多聚核苷酸(κ)
cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgt
tgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaat
cgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcacc
ctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctg
agctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQ ID NO：304)
氨基酸(κ)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA
LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ
GLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：305)
多聚核苷酸(λ)
ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaagg
ccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcag
ccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagc
agctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaa
gggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca(SEQ ID NO：306)
氨基酸(λ)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSS
PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEG
STVEKTVAPTECS(SEQ ID NO：307)
重链恒定区
多聚核苷酸
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcg
gccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctga
ccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgacc
gtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaag
gtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga
ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtg
cgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggt
gcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcac
cgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagc
ccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccc
catcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcg
acatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctg
gactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac
gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccg
ggtaaa
(SEQ ID NO：308)
氨基酸
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT
SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV
DKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV
VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLT
VVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPP
SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLD
SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
GK(SEQ ID NO：309)
轻链A-9IgG2形式
MDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCR
ASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLESGVPSRFSGSGSGTEF
TLTISSVQPEDFVTYYCLQHNSNPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP
PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR
GEC
(SEQ ID NO：310)
重链A-9IgG2形式
MEFGLSWVFLVALLRGVQCQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG
FTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVMWYDGSNKDYVDSVKGRFTI
SRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAREKDHYDILTGYNYYYGL
DVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP
EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTY
TCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKD
TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE
QFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ
PENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL
HNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：311)
轻链A-3IgG2形式
MDMRVPAQLLGLLLLWFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCR
ASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEF
TLTISSVQPEDFVTYYCLQHNSNPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP
PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE
QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR
GEC(SEQ ID NO：312)
重链A-3IgG2形式
MEFGLSWVFLVALLRGVQCQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG
FTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVMWYDGSNKDYVDSVKGRFTI
SRDNSKNTLYLQMNRLRAEDTAVYYCAREKDHYDILTGYNYYYGL
DVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP
EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTY
TCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKD
TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE
QFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ
PENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL
HNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：311)
本发明抗原结合蛋白(例如抗体)包括例如包含组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H15、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23并具有期望表型(例如，IgA、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE和IgD)以及其Fab或F(ab’)2片段的那些。而且，如果期望IgG4，也需要如Bloom等，1997，Protein Science 6：407(以参考形式并于本文)所述在铰链区引入一个点突变以减轻形成IgG4抗体中不均一性的内H链二硫键的趋势。
抗体和抗体片段
在一个实施方案中该抗原结合蛋白为抗体。术语“抗体”指完整抗体或其抗原结合片段，如定义部分所广泛描述。抗体可包含完整的抗体分子(包括具有全长重和/或轻链的多克隆、单克隆、嵌合、人源化或人类抗体)或包含其抗原结合片段。抗体片段包括F(ab’)2、Fab、Fab’、Fv、Fc和Fd片段，并可整合入单结构域抗体、单链抗体、最大抗体(maxibodies)、微抗体(minibodies)、内抗体(intrabodies)、二链抗体、三链抗体、四链抗体、v-NAR和bis-scFv(参见，例如Hollinger andHudson，2005，Nature Biotechnology，23，9，1126-1136)。也包括抗体多肽例如美国专利号6703199中所公开的那些，包括纤维结合素多肽单抗体。其它抗体多肽公开于美国专利出版物2005/0238646，其为单链多肽。在一个实施方案中，本发明该抗体包含上文表2所列的至少一个CDR或一致CDR。
定义部分定义了嵌合抗体和人源化抗体并可通过已知技术制备。在一个实施方案中，人源化单克隆抗体包含鼠抗体的可变结构域(全部或部分其抗原结合位点)和人类抗体的恒定结构域。或者，人源化抗体可包含鼠单克隆抗体的抗原结合位点和来源于人类抗体的可变结构域片段(缺失抗原结合位点)。基因工程单克隆抗体的生产方法包括Riechmann等，1988，Nature 332：323，Liu等，1987，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 84：3439，Larrick等，1989，Bio/Technology 7：934和Winter等，1993，TIPS 14：139中所述。在一个实施方案中，该嵌合抗体为CDR移植抗体。人源化抗体的技术描述于例如美国专利号5869619、5225539、5821337、5859205、6881557，Padlan等，1995，FASEB J.9：133-39，Tamura等，2000，J.Immunol.164：1432-41，Zhang，W等，MolecularImmunology.42(12)：1445-1451，2005；Hwang W.等，Methods.36(1)：35-42，2005；Dall’Acqua WF等，Methods 36(1)：43-60，2005；和Clark，M.，Immunology Today.21(8)：397-402，2000。
本发明抗体也可为全长人单克隆抗体。可通过本领域普通技术人员熟悉的技术生成全长人单克隆抗体。该类方法包括但是不限于Epstein Barr Virus(EBV)转染人外周血细胞(例如包含B淋巴细胞)、体外免疫人B细胞、携带被***的人免疫球蛋白基因的经免疫转基因小鼠的脾细胞融合、从人免疫球蛋白V区噬菌体文库中分离或其它本领域已知并基于本文公开内容的操作。
已研发出在非人动物中生成人单克隆抗体的方法。举例而言，已制备了通过各种途径将一个或多个内源免疫球蛋白基因灭活的小鼠。已将人免疫球蛋白基因引入小鼠取代被灭活的小鼠基因。在这一技术中，将人重和轻链基因座的元件引入来源于包含内源重链和轻链基因座的靶向断裂的胚胎干细胞的小鼠株(也可参见Bruggemann等，Curr.Opin.Biotechnol.8：455-58(1997)。例如，人免疫球蛋白转基因可为小基因构建体或酵母人工染色体上的转位子，其经过在小鼠淋巴样组织中的B细胞特异DNA重排和超突变。
动物中生产的抗体整合了由引入动物中的人遗传物质编码的人免疫球蛋白多肽链。在一个实施方案中，用适当的GCGR免疫原免疫非人类动物例如转基因小鼠。适当GCGR免疫原的实例为如下文实施例中描述的富含受体的细胞膜部分。另一实例为SEQ ID NO：2的胞外结构域。
生产技术实例和使用转基因动物生产人或部分人类抗体描述于美国专利5814318、5569825和5545806，Davis等，Production of humanantibodies from transgenic mice，Lo，ed.Antibody Engineering：Methodsand Protocols，Humana Press，NJ：191-200(2003)，Kellermann等，2002，Curr Opin Biotechnol.13：593-97，Russel et al.，2000，Infect Immun.68：1820-26，Gallo et al.，2000，Eur J Immun.30：534-40，Davis等，1999，Cancer Metastasis Rev.18：421-25，Green，1999，J Immunol Methods.231：11-23，Jakobovits，1998，Advanced Drug Delivery Reviews 31：33-42，Green et al.，1998，J Exp Med.188：483-95，Jakobovits A，1998，Exp.Opin.Invest.Drugs.7：607-14，Tsuda等，1997，Genomics.42：413-21，Mendez等，1997，Nat Genet.15：146-56，Jakobovits，1994，Curr Biol.4：761-63，Arbones等，1994，Immunity.1：247-60，Green等，1994，Nat Genet.7：13-21，Jakobovits等，1993，Nature.362：255-58，Jakobovits等，1993，Proc Natl Acad Sci USA.90：2551-55.Chen，J.，M.Trounstine，F.W.Alt，F.Young，C.Kurahara，J.Loring，D.Huszar.“Immunoglobulin generearrangement in B-cell deficient mice generated by targeted deletion ofthe JH locus.”International Immunology 5(1993)：647-656，Choi等，1993，Nature Genetics 4：117-23，Fishwild等，1996，Nature Biotechnology 14：845-51，Harding等，1995，Annals of the New York Academy of Sciences，Lonberg等，1994，Nature 368：856-59，Lonberg，1994，TransgenicApproaches to Human Monoclonal Antibodies in Handbook ofExperimental Pharmacology 113：49-101，Lonberg等，1995，InternalReview of Immunology 13：65-93，Neuberger，1996，NatureBiotechnology 14：826，Taylor等，1992，Nucleic Acids Research 20：6287-95，Taylor等，1994，International Immunology 6：579-91，Tomizuka等，1997，Nature Genetics 16：133-43，Tomizuka等，2000，Proceedings ofthe National Academy of Sciences USA 97：722-27，Tuaillon等，1993，Proceedings of the National Academy of Sciences USA 90：3720-24，andTuaillon等，1994，Journal of Immunology 152：2912-20.；Lonberg等，Nature 368：856，1994；Taylor等，Int.Immun.6：579，1994；美国专利号5877,97；Bruggemann等，1997Curr.Opin.Biotechnol.8：455-58；Jakobovits等，1995 Ann.N.Y.Acad.Sci.764：525-35。此外，涉及(Abgenix，now Amgen，Inc.)的方案描述于例如U.S.05/0118643以及WO 05/694879、WO 98/24838、WO 00/76310和美国专利7064244。
例如将被免疫转基因小鼠的淋巴样细胞与骨髓瘤细胞融合以生产杂交瘤。用于生成杂交瘤的融合方法的骨髓瘤细胞优选为非抗体生产，其具有高融合效率以及使它们可可在仅支持期望融合细胞(杂交瘤)生长的选择培养基中生长的酶缺陷。用于该类融合的适当细胞系的实例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag 41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7和S194/5XX0Bul；用于大鼠融合的细胞系实例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。用于细胞融合的其它细胞系为U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。
淋巴样(例如脾)细胞和杂交瘤细胞可在膜融合促进剂(例如聚乙二醇或非离子去污剂)存在下结合数分钟，然后低密度接种至支持杂交瘤而不支持未融合骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。一种筛选培养基为HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)。经过足够时间之后，通常约一至两周，可观察到细胞集落。分离单集落，可使用各种本领域已知即本文描述的免疫测定法检测细胞产生抗体与人GCGR的结合活性。克隆该杂交瘤(例如，通过有限稀释克隆或通过软琼脂挑斑分离)，筛选并培养可生产对人GCGR具有特异性的抗体的阳性克隆。可从杂交瘤培养物的上清中分离来自杂交瘤培养物的单克隆抗体。
另一种生成本发明人类抗体的方法包括通过EBV转化永生化人外周血细胞。参见，例如美国专利号4464456。可通过本文提供的免疫检测方法例如ELISA鉴定生可特异性结合人GCGR的单克隆抗体的永生化B细胞系(或类成淋巴细胞)，然后通过标准的克隆技术分离。可将已转化细胞系与鼠杂交瘤融合提高可生产抗GCGR抗体的类成淋巴细胞的稳定性(参见，例如，Glasky等，Hybridoma 8：377-89(1989))。又另一种生成人单克隆抗体的方法为体外免疫，其包括用人GCGR初次免疫人脾B细胞，然后将已初次免疫的B细胞和杂交融合配体融合。参见。例如1991J.Immunol.147：86-95。
在一些实施方案中，筛选生产抗人GCGR抗体的B细胞并根据本领域已知(WO 92/02551；美国专利5627052；Babcook等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843-48(1996))及本文所述的分子生物学技术从B细胞克隆轻链和重链可变区。可从脾、***或外周血样品中通过筛选生产与GCGR特异性结合的抗体从被免疫小鼠分离B细胞。也可从人例如外周血样品中分离B细胞。检测生产具有期望特异性的抗体的单个B细胞的方法为本领域已知，例如，通过空斑形成、荧光激活细胞分选术、体内激活然后检测特异抗体及类似方法。筛选特异抗体生产B细胞的方法包括例如在包含人GCGR的软琼脂中制备B细胞的单细胞混悬液。由B细胞生产的特异抗体的结合导致复合物的形成，其可以免疫沉淀物可见。筛选了生产期望抗体的B细胞后，可根据本领域已知或本文描述的方法通过分离或扩增DNA或mRNA克隆特异抗体基因。
获得本发明抗体的附加方法为噬菌体展示。参见，例如，Winter等，1994Annu.Rev.Immunol.12：433-55；Burton等，1994Adv.Immunol.57：191-280。可在噬菌体载体中建立人或鼠免疫球蛋白可变区基因组合文库，该噬菌体载体可用于筛选与TGF-β结合蛋白或其变异体或片段特异性结合的Ig片段(Fab、Fv、sFv或其多聚体)。参见，例如，美国专利号5223409；Huse等，1989Science 246：1275-81；Sastry等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：5728-32(1989)；Alting-Mees等，Strategies inMolecular Biology 3：1-9(1990)；Kang等，1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：4363-66；Hoogenboom等，1992J.Molec.Biol.227：381-388；Schlebusch等，1997Hybridoma 16：47-52以及本文引用的参考文献。例如，可将包含编码Ig可变区的多个多聚核苷酸序列的文库***丝状噬菌体例如M13或其变异体的基因组中，与编码噬菌体衣壳蛋白的序列在同一框架中。融合蛋白可为衣壳蛋白与轻链可变区结构域和/或重链可变区结构域的融合。根据具体的实施方案，免疫球蛋白Fab片段也可展示于噬菌体颗粒(参见，例如美国专利号5698426)。
也可在λ噬菌体中制备重链和轻链免疫球蛋白cDNA表达文库，例如使用λlmmunoZapTM(H)和λImmunoZapTM(L)载体(Stratagene，LaJolla，California)。简而言之，从B细胞群中分离mRNA并用于在λImmunoZap(H)和λImmunoZap(L)载体中生成重链和轻链免疫球蛋白cDNA表达文库。可单独筛选这些载体或共表达以形成Fab片段或抗体(参见上文的Huse等；也参见上文的Sastry等)。接着可将阳性空斑转化成允许从大肠杆菌高水平表达单克隆抗体片段的非裂解质粒。
在一个实施方案中，使用核苷酸引物扩增在杂交瘤中表达相关单克隆抗体的基因的可变区。这些引物可由本领域普通技术人员合成或从商业来源购买(参见，例如Stratagene(La Jolla，California)，其销售鼠和人可变区引物包括VHa、VHb、VHc、VHd、CH1、VL和CL区的引物)。这些引物可用于扩增重链或轻链可变区，然后将其分别***载体例如ImmunoZAPTMH或ImmunoZAPTML(Stratagene)中。然后将这些载体引入大肠杆菌、酵母或哺乳动物为基础的表达***。可使用这些方法生产大量包含VH和VL结构域融合的单链蛋白(参见，Bird等，Science 242：423-426，1988).
一旦使用上述任何免疫和其它技术获得了根据本发明生产抗体的细胞，可根据本文所述标准方法通过分离并从其扩增DNA或mRNA将特异抗体基因克隆。测序从其生产的抗体并鉴定CDRs，可如之前所述对编码CDRs的DNA进行操作以生成根据本发明的其它抗体。
本发明的抗原结合蛋白优选在本文描述的基于细胞的测定法中和/或本文描述的体内测定法中调节胰高血糖素信号传导和/或交叉阻断本申请所述抗体之一的结合和/或经本申请所述抗体之一被结合GCGR交叉阻断。因此可使用本文所述测定法鉴定该类结合剂。
在一些实施方案中，通过首先鉴定在本文描述的基于细胞的和/或体内测定法中与过表达GCGRs的细胞结合和/或中和和/或交叉阻断本申请描述的抗体和/或经本申请描述的抗体之一被结合GCGR交叉阻断的抗体以生成抗体。
本领域技术人员应理解的是一些蛋白质，例如抗体，可能进行可多种转录后修饰。这些修饰的类型和程度取决于用于表达该蛋白的宿主细胞系以及培养条件。该类修饰包括糖基化作用、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺作用的变化。由于羧肽酶的作用频繁修饰导致羧端碱性残基(例如赖氨酸或精氨酸)的丢失(如Harris，R.J.Journal of Chromatography 705：129-134，1995中所述)。
生产鼠单克隆抗体的可选择方法为将杂交瘤细胞注入同系基因小鼠的腹膜腔，例如经处理(例如姥鲛烷初次免疫)促进形成包含单克隆抗体的腹水的小鼠。可通过多种已确立的技术分离和纯化单克隆抗体。该类分离技术包括使用蛋白A-琼脂糖的亲和色谱法、分子排阻色谱法和离子交换色谱法(参见，例如，Coligan第2.7.1-2.7.12页和第2.9.1-2.9.3页；Baines等，“Purification of Immunoglobulin G(IgG)，”Methods in Molecular Biology，第10卷，第79-104页(The Humana Press，Inc.1992))。可使用基于抗体的特殊性质(例如，重链或轻链同种型、结合特异性等)筛选的适当配基通过亲和色谱法纯化单克隆抗体。固定化于固体载体的适当配基的实例包括蛋白A、蛋白G、抗恒定区(轻链或重链)抗体、抗独特型抗体以及TGF-β结合蛋白或其片段或变异体。
可使用抗体结合位点中央的互补决定区(CDRs)的分子进化分离亲和性增加的抗体，例如对c-erbB-2亲和性增加的抗体，如Schier等，1996，J.Mol.Biol.263：551所述。因此，该类技术可用于制备人胰高血糖素受体的抗体。
例如可在检测是否存在胰高血糖素受体的体外或体内测定法中使用针对人胰高血糖素受体的抗原结合蛋白。
尽管人类、部分人类或人源化抗体可适用于许多应用，尤其是涉及将抗体给予人类受试者，但是其它类型的抗原结合蛋白也适用于某些应用。本发明的非人类抗体可来源于例如任何生产抗体的动物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驴或非人灵长类(例如猴子，如食蟹猴或猕猴)或猿(例如猩猩))。本发明的非人类抗体可用于例如体外或基于细胞培养的应用中，或其它任何应用，其中不发生对本发明抗体的免疫应答、不显著、可以预防、不关心或期望。下文的实施例2描述了鼠抗体的生成。在一个实施方案中，将本发明的非人类抗体给予非人受试者。在另一个实施方案中，该非人类抗体不会在非人受试者中引起免疫应答。在另一个实施方案中，非人类抗体来自与非人受试者相同的种属，例如将本发明的小鼠抗体给予小鼠。可通过用期望免疫原免疫该种属的动物生产具体种属的抗体或使用人工体系生成该种属的抗体(例如，细菌或基于噬菌体展示体系用于生成具体物种的抗体)或通过例如用另一物种的恒定区取代抗体的恒定区将一个物种的抗体转化成另一物种的抗体，或通过取代抗体的一个或多个氨基酸残基这样其与来自其它物种的抗体序列更相似。在一个实施方案中，该抗体为嵌合抗体，其包含来源于两个或多个不同物种的抗体的氨基酸序列。
也可通过任何传统技术制备抗体。例如，可从天然表达这些抗体的细胞将其纯化(例如，可从生产抗体的杂交瘤将其纯化)或使用本领域任何已知的技术在重组表达***中生产。参见，例如，MonoclonalAntibodies，Hybridomas：A New Dimension in Biological Analyses，Kennet等(编辑)，Plenum Press，New York(1980)；和Antibodies：ALaboratory Manual，Harlow and Land(编辑)，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，(1988)。这在下文的核酸部分讨论。
可通过任何已知技术制备抗原结合蛋白并筛选期望性质。一些技术涉及分离编码相关抗原结合蛋白(例如，抗胰高血糖素受体抗体)的多肽链(或其部分)的核酸，并通过重组DNA技术操作核酸。该核酸可与另一相关核酸融合或经修饰(例如通过诱变或其它传统技术)以添加、缺失或替换一个或多个氨基酸残基。
当需要提高根据本发明包含一个或多个上述CDRs的抗体的亲和性时，可通过多种亲和成熟方案包括维持CDRs(Yang等，J.Mol.Biol.，254，392-403，1995)、链替换(Marks等，Bio/Technology，10，779-783，1992)、使用大肠杆菌的突变株(Low等，J.Mol.Biol.，250，350-368，1996)DNA重排(Patten等，Curr.Opin.Biotechnol.，8，724-733，1997)、噬菌体展示(Thompson等，J.Mol.Biol.，256，7-88，1996)以及其它PCR技术(Crameri等，Nature，391，288-291，1998)。所有这些亲和力成熟方法讨论于Vaughan等，Nature Biotechnology，16，535-539，1998中。
抗体片段
在另一方面本发明提供本发明抗胰高血糖素受体片段。该片段可完全由抗体衍生序列组成或可包含附加序列。抗原结合片段的实例包括Fab、F(ab’)2、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和结构域抗体。其它实例提供于Lunde等，2002，Biochem.Soc.Trans.30：500-06。
可经氨基酸桥(短肽接头)连接重链和轻链可变结构域(Fv区)形成单链抗体，从而得到单多肽链。已通过将编码肽接头的DNA融合在编码两个可变结构域多肽(VL和VH)的DNAs之间制备该单链FVs(scFvs)。所得多肽可折叠回自身形成抗原结合单体，或它们可形成多聚体(例如，二聚体、三聚体或四聚体)，取决于两个可变结构域之间的柔性接头的长度(Kortt等，1997，Prot.Eng.10：423；Kortt等，2001，Biomol.Eng.18：95-108)。通过组合包含多肽的不同VL和VH，可形成与不同表型结合的多体scFvs(Kriangkum等，2001，Biomol.Eng.18：31-40)。已研发的用于生产单链抗体的技术包括美国专利号4946778；Bird，1988，Science 242：423；Huston等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879；Ward等，1989，Nature 334：544，de Graaf等，2002，Methods Mol Biol.178：379-87中描述的那些。来源于本文提供的抗体的单链抗体包括但不限于包含可变结构域组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23的scFvs，均涵盖于本发明。
也可通过抗体的蛋白水解作用例如根据传统方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整的抗体获得来源于抗体的抗原结合片段。举例而言，可用胃蛋白酶酶裂解抗体提供称作F(ab’)2的5S片段生产抗体片段。可使用巯基还原剂进一步裂解这一片段产生3.5S Fab’单价片段。可选择性的，可使用巯基保护基团进行该裂解反应得到二硫键的裂解。作为可选择的，使用木瓜蛋白酶的酶裂解直接产生两个单价Fab片段和一个Fc片段。这些方法描述于例如Goldenberg，美国专利号4,331,647，Nisonoff等，Arch.Biochem.Biophys.89：230，1960；Porter，Biochem.J.73：119，1959；Edelman等，Methods in Enzymology 1：422(AcademicPress 1967)；以及Andrews，S.M.和Titus，J.A.Current Protocols inImmunology(Coligan J.E.等，编辑)，John Wiley & Sons，New York(2003)，第2.8.1-2.8.10页和第2.10A.1-2.10A.5页。其它裂解抗体的方法，例如制备重链以形成单价重-轻链片段(Fd)，进一步裂解片段或也可使用其它酶、化学或基因技术，只要片段与可被该完整抗体识别的抗原结合。
另一种形式的抗体片段为包含一个或多个抗体互补决定区(CDRs)的肽。可通过构建编码相关CDR的多肽获得CDRs。例如可通过使用聚合酶链式反应用抗体生成细胞的mRNA作为模板合成可变区制备该类多肽(参见，例如，Larrick等，Methods：A Companion to Methods inEnzymology 2：106，1991；Courtenay-Luck，“Genetic Manipulation ofMonoclonal  Antibodies，”Monoclonal  Antibodies：Production，Engineering and Clinical Application，Ritter等.(编辑)，166页(Cambridge University Press 1995)；和Ward等，“Genetic Manipulationand Expression of Antibodies，”Monoclonal Antibodies：Principles andApplications，Birch等，(编辑)，137页(Wiley-Liss，Inc.1995))。该抗体片段可进一步包含本文所述抗体的至少一个可变结构域。因此，例如，V区结构域可为单体并且是VH或VL结构域，其可以如下文所述的至少等于1x10-7M或更低的亲和度独立与胰高血糖素受体结合。
该可变区结构域可为任何天然可变结构域或其基因工程形式。基因工程形式指使用重组DNA工程技术生产的可变区结构域。该基因工程形式包括例如通过向特异抗体的氨基酸序列***、缺失或改变从特异抗体可变区产生的。具体实例包括包含只含一个CDR以及任选来自一个抗体的一个或多个框架氨基酸和来自另一抗体的可变区结构域剩余部分的基因工程可变区结构域。
可变区结构域可与至少一个其它抗体结构域或其片段在C端氨基酸共价连接。因此，举例而言，存在于可变区结构域的VH结构域可与免疫球蛋白CH1结构域或其片段相连。相似地，VL结构域可与CK结构域或其片段相连。以这种方式，例如，该抗体可为Fab片段，其中抗原结合结构域包含它们的C端分别与CH1和CK结构域共价连接的联合VH和VL结构域。可用其它氨基酸延长CH1结构域，例如以提供铰链区或如Fab’片段中的部分铰链结构域或提供其它结构域，例如抗体CH2和CH3结构域。
抗原结合蛋白的衍生物和变异体
例如可通过随机诱变或通过定点诱变(例如寡聚核苷酸诱导的定点诱变)改变编码对应于氨基酸序列A1-A23的核苷酸序列L1-L23和H1-H23以产生与未突变多聚核苷酸相比包含一个或多个具体核苷酸替换、缺失或***的经改变的多聚核苷酸。用于产生该类改变的技术实例描述于Walder等，1986，Gene 42：133；Bauer等，1985，Gene 37：73；Craik，BioTechniques，January 1985，12-19；Smith等，1981，GeneticEngineering：Principles and Methods，Plenum Press；以及美国专利号4518584和4737462。这些和其它方法可用于产生例如与未衍生化抗体相比具有期望性质例如亲和性、亲和力或对胰高血糖素受体的特异性增强、体内或体外活性或稳定性增强或体内副作用降低的抗胰高血糖素受体抗体的衍生物。
本发明领域的其它抗胰高血糖素受体抗体衍生物包括抗胰高血糖素受体抗体或其片段与它蛋白或多肽的共价或聚集结合物，例如通过表达包含与抗胰高血糖素受体抗体多肽的N端或C端融合的异源多肽的重组融合蛋白。例如，该结合肽可为异源信号(或引导)多肽，例如酵母α因子前导肽或例如表位标签的肽。包含融合蛋白的抗原结合蛋白可包含被添加以辅助抗原结合蛋白的纯化或鉴定的肽(例如多聚组氨酸)。抗原结合蛋白也可与FLAG肽连接，如Hopp等，Bio/Technology 6：1204，1988和美国专利5011912所述。FLAG肽具有高抗原性并提供被特异单克隆抗体(mAb)可逆结合的表位，允许已表达重组蛋白的快速检测和方便纯化。可商业购买(Sigma，St.Louis，MO)用于制备其中FLAG肽与给定多肽融合的融合蛋白的试剂。在另一个实施方案中，包含一个或多个抗原结合蛋白的寡聚体可用作胰高血糖素受体拮抗剂或用更高级的寡聚体。寡聚体可以是共价连接的或非共价连接的二聚体、三聚体或更高的寡聚体形式。可使用包含两个或更多个抗原结合蛋白的寡具体，其中一个实例为同型二聚体。其它寡聚体包括异二聚体、同型三聚体、异三聚体、同型四聚体、杂四聚体等。
一个实施方案是针对包含多个抗原结合蛋白的寡聚体，它们通过与抗原结合蛋白融合的肽部分之间的共价或非共价相互作用连接。该类肽可为肽接头(spacers)或具有促进寡聚化作用性质的肽。亮氨酸拉链和某些来源于抗体的多肽为可促进抗原结合蛋白寡聚化的肽，如下文详细描述。
在具体的实施方案中，寡聚体包含两个至四个抗原结合蛋白。寡聚体的抗原结合蛋白可为任何形式，如上文所述任何形式，例如变异体或片段。优选地，该寡聚体包含具有胰高血糖素受体结合活性的抗原结合蛋白。
在一个实施方案中，使用来源于免疫球蛋白的多肽制备寡聚体。制备包含一些与抗体衍生多肽(包括Fc结构域)的不同部位融合的异源多肽已描述于例如Ashkenazi等，1991，PNAS USA 88：10535；Byrn等，1990，Nature 344：677；和Hollenbaugh等，1992“Construction ofImmunoglobulin Fusion Proteins”，Current Protocols in Immunology，Suppl.4，第10.19.1-10.19.11页。本发明的一个实施方案是针对包含两个由融合抗胰高血糖素受体抗体的胰高血糖素结合片段与抗体的Fc区产生的融合蛋白的二聚体。可通过以下方式制备二聚体：例如在适当的表达载体中***编码融合蛋白的基因融合，在用重组表达载体转化的宿主细胞中表达该融合基因并允许已表达融合蛋白像抗体分子一样组装，其中Fc部分之间的链间二硫键形成二聚体。
如本文所使用术语“Fc多肽”包括来源于抗体Fc区的天然和突变蛋白形式的多肽。也包括包含促进二聚体化的铰链区的该类多肽的截短形式。包含Fc部分(以及由其形成的寡聚体)的融合蛋白提供了在蛋白A或蛋白G柱子上进行亲和层析法方便纯化的优势。
PCT申请WO 93/10151(以参考形式并于本文)中一种适当的Fc多肽为从N端铰链区延伸至人IgG1抗体的Fc区的天然C端的单链多肽。另一种可用的Fc多肽为美国专利5457035和Baum等，1994，EMBOJ.13：3992-4001中描述的Fc突变蛋白。该突变蛋白的氨基酸序列与WO 93/10151中所示天然Fc序列的氨基酸序列相同，除了氨基酸19从亮氨酸变为丙氨酸，氨基酸20从亮氨酸变为谷氨酰胺以及氨基酸22从甘氨酸变为丙氨酸。该突变蛋白表现出对Fc受体的亲和力降低。在其它实施方案中，抗胰高血糖素受体抗体的重链和/或轻链可被取代为抗体重链和/或轻链的可变部分。
或者，该寡聚体为包含多个抗原结合蛋白的融合蛋白，包含或不包含接头肽(spacer peptides)。这些适当的接头肽描述于美国专利4751180和4935233。
制备寡聚抗原结合蛋白的另一种方法涉及使用亮氨酸拉链。亮氨酸拉链结构域为促进它们所存在的蛋白寡聚化作用的肽。最初发现亮氨酸拉链存在于数种DNA结合蛋白中(Landschulz等，1988，Science240：1759)，此后发现存在于各种不同蛋白中。在已知的亮氨酸拉链中为可二聚体化或三聚体化的天然肽或其衍生物。适用于生产可溶寡聚蛋白的亮氨酸拉链结构域的实例描述于PCT申请WO 94/10308，来源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉链描述于Hoppe等，1994，FEBSLetters 344：191，以参考形式并于本文。允许与其融合的异源蛋白稳定三聚体化的经修饰的亮氨酸拉链的使用描述于Fanslow等，1994，Semin.Immunol.6：267-78。在一种方法中，在适当的宿主细胞中表达包含与亮氨酸拉链肽融合的抗胰高血糖素受体抗体片段或衍生物的重组融合蛋白，从培养物上清中收集可溶寡聚抗胰高血糖素受体抗体片段或其衍生物。
在另一个实施方案中，该抗体衍生物可包含至少本文公开的CDRs之一。举例而言，可将一个或多个CDR整合入已知的抗体骨架区(IgG1，IgG2等)或与适当的载体结合以增强其半衰期。适当载体包括但不限于Fc、白蛋白、转铁蛋及类似物质。这些和其它适当的载体为本领域已知。该结合CDR肽可为单体、二聚体、四聚体或其它形式。在一个实施方案中，一个或多个水溶性多聚体在结合剂的一个或多个特异位点结合，例如在氨基端。在一个实例中，抗体衍生物包含一个或多个水溶性多聚体附着物包括但不限于聚乙二醇、聚氧乙烯二醇或聚丙二醇。参见，例如，美国专利号4640835、4496689、4301144、4670417、4791192和4179337。在一些实施方案中，衍生物包含一个或多个一甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纤维素或其它基于碳水化合物的聚合物，聚(N-乙烯基吡咯酮)-聚乙二醇、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇，以及该类聚合物的混合物。在一些实施方案中，一个或多个水溶性聚合物与一个或多个侧链随机结合。在一些实施方案中。PEG可提高结合剂例如抗体的治疗作用。一些该类方法描述于例如美国专利号6133426，其以参考形式以任何目的并于本文。
应当理解的是本发明抗体可具有至少一个氨基酸替换，只要该抗体保留了结合特异性。因此，抗体结构的修饰包含于本发明范畴。这些可包括不破坏抗体胰高血糖素受体结合能力的氨基酸替换，其可为保守或非保守的。保守氨基酸替换可包括非天然氨基酸残基，其通常经化学肽合成整合而不是生物***合成。这些包括拟肽和其它反向或倒转形式的氨基酸部分。保守氨基酸替换也可涉及用非天然残基替换天然氨基酸残基这样对该位点氨基酸残基的极性或电荷作用很小或没有作用。非保守替换可涉及一类氨基酸或氨基酸类似物的一个成员与具有不同物理性质(例如，体积、极性、疏水性、电荷)的另一类氨基酸的成员交换。该被替换的残基可引入与非人类抗体同源的人类抗体区，或引入该分子的非同源区。
而且，本领域技术人员可生成在各期望氨基酸残基上包含氨基酸替换的待测变异体。可使用本领域技术人员已知的活性测定法筛选该类变异体。该类变异体可用于收集关于适当变异体的信息。举例而言，如果发现某一氨基酸残基可引起活性破坏、非期望的降低或不当的活性，可避免具有该类变化的变异体。换言之，基于从这些常规试验收集的信息，本领域技术人员可轻松确定应避免进一步替换(单独或与其它突变组合)的氨基酸。
技术人员可使用已知技术确定如本文所列的多肽的适当变异体。在一些实施方案中，本领域技术人员可通过靶向对于活性不重要的区域鉴定经改变后不会破坏活性的分子适当区域。在一些实施方案中，可鉴定在相似多肽中保守的残基或分子部分。在一些实施方案中，甚至可保守替换对于生物活性或结构重要的区域而不破坏生物活性或不会不利作用于多肽结构。此外，本领域技术人员可考察结构-功能研究鉴定对活性或结构重要的相似多肽中的残基。鉴于这一对比，可预测对应于在相似蛋白中对活性或结构重要的氨基酸残基的蛋白质中氨基酸残基的重要性。本领域技术人员可为这些经预测重要的氨基酸残基选择化学相似氨基酸替换。
本领域技术人员也可分析与相似多肽的结构相关的三维结构和氨基酸序列。鉴于该类信息，本领域技术人员可预测就三维结构而言抗体的氨基酸残基比对。在一些实施方案中，本领域技术人员可选择不对经预测在蛋白质表面的氨基酸残基进行显著改变，因为该类残基可能参与与其它分子的重要相互作用。许多科学出版物致力于二级结构的预测。参见，Moult J.，Curr.Op.Biotech.，7(4)：422-427(1996)，Chou等，Biochemistry，13(2)：222-245(1974)；Chou等，Biochemistry，113(2)：211-222(1974)；Chou等，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.，47：45-148(1978)；Chou等，Ann.Rev.Biochem.，47：251-276和Chou等，Biophys.J.，26：367-384(1979)。此外，目前可使用计算机程序辅助预测二级结构。举例而言，序列同一性大于30％或相似性大于40％的两个多肽或蛋白质通常具有相似的结构拓扑学。近期蛋白结构数据库(PDB)的增长增强了二级结构的可预测性，包括多肽或蛋白结构中潜在的折叠数量。参见，Holm等，Nucl.Acid.Res.，27(1)：244-247(1999)。已表明(Brenner等，Curr.Op.Struct.Biol.，7(3)：369-376(1997))在给定多肽或蛋白质中存在有限数量的折叠并且一旦确定了临界数量的结构，结构预测将变得显著更加精确。
预测二级结构的其它方法包括“穿接(threading)”(Jones，D.，Curr.Opin.Struct.Biol.，7(3)：377-87(1997)；Sippl等，Structure，4(1)：15-19(1996))，“图谱分析(profile analysis)”(Bowie等，Science，253：164-170(1991)；Gribskov等，Meth.Enzym.，183：146-159(1990)；Gribskov等，Proc.Nat.Acad.Sci.，84(13)：4355-4358(1987))和“进化联系(evolutionary linkage)”(参见Holm，supra(1999)，and Brenner，supra(1997))。在一些实施方案中，抗体变异体包括糖基化变异体，其中与母体多肽的氨基酸序列相比改变了糖基化位点的数量和/或类型。在一些实施方案中，变异体与天然蛋白质相比具有更多或更少数量的N连接糖基化位点。或者，去除该序列的替换可移除现有的N连接糖链。也提供了N连接糖链的重排，其中去除了一个或多个N连接糖链位点(通常为天然存在的那些)并创造了一个或多个新的N连接位点。其它优选抗体变异体包括半胱氨酸变异体，与母体氨基酸序列相比其中缺失或由另一氨基酸(例如丝氨酸)替换一个或多个半胱氨酸残基。当抗体必须折叠成生物活性构象时(例如在分离可溶包涵体之后)可用半胱氨酸变异体。半胱氨酸变异体通常比天然蛋白质具有较少的半胱氨酸残基，并通常具有偶数个半胱氨酸以最小化未配对半胱氨酸引起的相互作用。
本领域技术人员可在需要该类替换时确定期望的氨基酸替换(保守或非保守)。在一些实施方案中，氨基酸替换可用于鉴定人胰高血糖素受体抗体的重要残基或者增加或降低本文所述人胰高血糖素受体抗体的亲和力。
根据一些实施方案，优选的氨基酸替换为以下：(1)降低蛋白质水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改变形成蛋白质复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力和/或(4)赋予或修饰该类多肽上的其它物理化学或功能性质。根据一些实施方案，可在天然存在序列中(在一些实施方案中，在形成分子间接触的结构域之外的多肽部分)进行单个或多个氨基酸替换(在一些实施方案中为保守氨基酸替换)。在一些实施方案中，保守氨基酸替换通常不会本质上改变母体序列的结构特性(例如，替换氨基酸不应破解存在于母体序列中的螺旋或干扰特征化母体序列的其它类型二级结构)。本领域认可的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton，编辑，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze，eds.，GarlandPublishing，New York，N.Y.(1991))；以及Thornton等，Nature 354：105(1991)，其以参考形式并于本文。
在一些实施方案中，本发明抗体可与多聚体、脂类或其它部分(moieties)化学键合。
抗原结合试剂可包含至少一个本文描述的CDRs，其掺入生物相容性骨架结构中。在一个实例中，该生物相容性骨架结构包含足以形成构象稳定结构支持或骨架或支架的多肽或其部分，其可在局限的表面区域展示可与抗原结合的一个或多个氨基酸序列(例如，CDRs、可变区等)。该类结构可为天然存在多肽或多肽“折叠”(结构基序)，或相对与天然多肽或折叠可具有一个或多个修饰，例如氨基酸添加、缺失或替换。这些支架可来源于任何物种(或多于一个物种)的多肽，例如，人类、其它哺乳动物、其它脊椎动物、无脊椎动物、细菌或病毒。
生物可溶性骨架结构通常是基于蛋白质支架或骨架而不是免疫球蛋白结构域。举例而言，可使用基于纤维结合素、锚蛋白、脂质运载蛋白(lipocalin)、新抑癌蛋白、细胞色素b、CP1锌指蛋白、PST1、卷曲螺旋、LACI-D1、Z结构域和淀粉酶抑肽结构域(参见，例如，Nygren和Uhlen，1997，Current Opinion in Structural Biology，7，463-469)。
此外，本领域技术人员可认识到适当的结合剂包括这些抗体的部分，例如一个或多个重链CDR1、CDR2、CDR3，轻链CDR1、CDR2和CDR3，如本文所具体公开。至少一个重链CDR1、CDR2、CDR3、CDR1，CDR2和CDR3区具有至少一个氨基酸替换，只要该抗体保留了非替换CDR的结合特异性。该抗体的非CDR部分可为非蛋白分子，其中该结合剂交叉阻断本文公开的抗体与人GCGR的结合和/或抑制经该受体的胰高血糖素信号传导。该抗体的非CDR部分可为非蛋白质分子，其中该抗体在竞争结合测定法中显示出与至少抗体A1-A23之一所显示相似的与人GCGR肽的结合类型，和/或中和胰高血糖素的活性。抗体的非CDR部分可由氨基酸组成，其中该抗体为重组结合蛋白或合成肽，并且该重组结合蛋白交叉阻断本文公开的抗体与人GCGR的结合和/或中和体内或体外胰高血糖素活性。抗体的非CDR部分可由氨基酸组成，其中该抗体为重组抗体，并且该重组抗体在竞争结合测定法中显示出与至少抗体A1-A23之一所显示相似的与人GCGR肽的结合类型，和/或中和胰高血糖素信号传导。
核酸
一方面，本发明提供分离的核酸分子。该核酸分子包含例如编码全部或部分抗原结合蛋白的多聚核苷酸，例如本发明抗体的一条链或两条链，或其片段、衍生物、突变蛋白或变异体；足以用作杂交探针的多聚核苷酸；PCR引物或用于鉴定、分析、突变或扩增编码多肽的多聚核苷酸的测序引物；用于抑制多聚核苷酸表达的反义核酸以及其互补序列。该核酸可为任何长度。例如它们的长度可为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多个核苷酸，和/或包含一个或多个附加序列，例如调控序列，和/或是较大核酸例如载体的一部分。该核酸可为单链或双链并包含RNA和/或DNA核苷酸以及其人工变异体(例如，肽核酸)。
可从经GCGR抗原免疫的小鼠B细胞中分离编码抗体多肽(例如，重链或轻链、仅可变结构域或全长)的核酸。可通过常规方法例如聚合酶链式反应(PCR)分离该核酸。
编码重链和轻链可变区的核酸序列如上文所示。熟练的技术人员可理解由于遗传密码的简并性，本文公开的各多肽序列可由更多数量的其他核酸序列编码。本发明提供编码本发明抗原结合蛋白的各简并核苷酸序列。
本发明进一步提供在具体杂交条件下与其他核酸(例如，包含任何A1-A14的核苷酸序列的核酸)杂交的核酸。杂交核酸的方法为本领域熟知。参见，例如，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley& Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6。如本文定义，例如，中等严格条件使用包含5X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)的预洗溶液、0.5％SDS、1.0mMEDTA(pH 8.0)、约50％甲酰胺的杂交缓冲液、6X SSC和55℃的杂交温度(或其他相似的杂交溶液，例如包含约50％甲酰胺的，以42℃杂交)，并且洗脱条件为60℃，使用0.5X SSC、0.1％SDS。严格杂交条件在6X SSC中于45℃杂交，然后于68℃在0.1X SSC、0.2％SDS中洗涤一次或多次。此外，本领域技术人员可操作杂交和/或洗涤条件以增加或降低杂交严格度这样包含相互之间至少65、70、75、80、85、90、95、98或99％同源的核苷酸序列的核酸通常仍可以相互杂交。影响杂交条件选择的基本参数和设计适当条件的指导列于例如Sambrook，Fritsch和Maniatis(1989，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，第9和11章；Current Protocols in Molecular Biology，1995，Ausubel等编辑，JohnWiley & Sons，Inc.，第2.10和6.3-6.4节)并可由具有本领域普通技术的人员基于例如DNA的长度和/或碱基组成轻松确定。可通过突变在核酸中引入变化，藉此导致其编码的多肽(例如，抗原结合蛋白)氨基酸序列的变化。可使用本领域已知的任何技术引入突变。在一个事实方案中，使用例如定点诱变方案改变一个或多个具体氨基酸残基。在另一个实施方案中，使用例如随机诱变方案改变一个或多个随机选择的残基。无论其如何生成，可表达突变多肽并筛选期望性质。
可将突变引入核酸而不显著改变其编码多肽的生物学活性。例如，可进行引起非必需氨基酸残基处氨基酸替换的核苷酸替换。在一个实施方案中，突变本文为L-1-L-23和H-1至H-23提供的核苷酸序列或其片段、变异体或衍生物这样其编码包含本文所示L-1至L-23和H-1至H-23的氨基酸残基的一个或多个缺失或替换，成为两个或多个序列相异的残基。在另一个实施方案中，诱变作用在本文所示L-1至L-23和H-1至H-23的一个或多个氨基酸残基附近***一个氨基酸成为两个或多个序列相异的残基。或者，可将一个或多个突变引入核酸以选择性改变其编码多肽的生物学活性(例如，与GCGR结合)。例如，该突变可在数量上或性质上改变生物学活性。量变的实例包括增加、降低或消除该活性。质变的实例包括改变抗原结合蛋白的抗原特异性。
在另一方面，本发明提供适于用做引物或检测本发明核酸序列的杂交探针的核酸分子。本发明的核酸分子可仅包含编码本发明全长多肽的核酸序列的一部分，例如，可用作探针或引物或编码本发明多肽活性部分的片段(例如，GCGE结合部分)的片段。
基于本发明核酸序列的探针可用于检测该核酸或相似核酸，例如编码本发明多肽的转录物。该探针可包含标记基团，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。该类探针可用于鉴定表达该多肽的细胞。
在另一方面本发明提供包含编码本发明多肽或其部分的核算的载体。载体的实例包括但是不限于质粒、病毒载体、非游离基因哺乳动物载体和表达载体，例如重组表达载体。
本发明的重组表达载体可包含适于该核酸在宿主细胞中表达的形式的本发明核酸。该重组表达载体包括一个或多个调控序列，基于用于表达的宿主细胞进行筛选，其与该预表达的核酸序列可操作性相连。调控序列包括引导核苷酸序列在多个种类宿主细胞中组成型表达的(例如，SV40早期基因增强剂、劳斯氏肉瘤病毒启动子和细胞巨化病毒启动子)，引导仅在某些宿主细胞中核苷酸序列的表达的(例如，组织特异调控序列，参见Voss等，1986，Trends Biochem.Sci.11：287，Maniatis等，1987，Science 236：1237，其完整内容以参考形式并于本文)以及引导核苷酸序列响应具体处理或条件的诱导型表达的(例如，哺乳动物细胞中的金属硫堇启动子和原核和真核***二者中的四环霉素反应(tet-sesponsive)启动子和/或链霉素反应启动子(同前))。本领域技术人员应理解表达载体的设计取决于例如用于转化的宿主细胞的选择、所需蛋白表达水平等因素。本发明的表达载体可引入宿主细胞，藉此生产由本文所述核酸编码的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。
另一方面，本发明提供可引入本发明表达载体的宿主细胞。宿主细胞可为任何原核或真核细胞。原核宿主细胞包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如大肠杆菌或杆菌。更高级的真核细胞包括昆虫细胞、酵母细胞以及哺乳动物源的确立细胞系。适当哺乳动物宿主细胞系的实例包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或它们的衍生物例如VeggieCHO和在无血清培养基中生长的相关细胞系(参见Rasmussen等，1998，Cytotechnology 28：31)或CHO株DXB-11，其缺失DHFR(参见Urlaub等，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-20)。其它CHO细胞系包括CHO-K1(ATCC#CCL-61)、EM9(ATCC#CRL-1861)，和UV20(ATCC#CRL-1862)。其它宿主细胞包括猴肾细胞的COS-7系(ATCCCRL 1651)(参见Gluzman等，1981，Cell 23：175)、L细胞、C127细胞、3T3细胞(ATCC CCL 163)，AM-1/D细胞(描述于美国专利序列号6210924)、HeLa细胞、BHK(ATCC CRL 10)细胞系、来源于非洲绿猴肾细胞系CV1的CV1/EBNA细胞系(ATCC CCL 70)(参见McMahan等，1991，EMBO J.10：2821)、人胚肾细胞例如293，293EBNA或MSR 293、人上皮A431细胞、人Colo205细胞、其它经转化灵长动物细胞系、正常二倍体细胞、来源于初生组织体外培养物的细胞株、初移植体、HL-60、U937、HaK或Jurkat细胞。用于细菌、真菌、酵母和哺乳细胞宿主的适当克隆和表达载体描述于Pouwels等(Cloning Vectors：ALaboratory Manual，Elsevier，New York，1985)。
可通过传统转化或转染技术将载体DNA引入原核或真核细胞中。对于稳定的哺乳动物转染而言，取决于使用的表达载体和转染技术，已知只有一小部分细胞可将外源DNA整合入它们的基因组中。为了鉴定和筛选这些整合子，通常将编码筛选标记(例如抗生素抗性)的基因与所关注基因一起引入宿主细胞。优选的筛选标记包括可赋予药物(如G418、潮霉素和甲氨喋呤)抗性的那些。在其它方法中可通过药物筛选鉴别包含被引入核酸的稳定转染细胞(例如，整合了筛选基因的细胞可存活，而其它细胞则死亡)。
可在提高多肽表达的条件下培养已转化细胞，可通过常规蛋白纯化方法回收多肽。一种该纯化方法描述于下文实施例。预用于本文的多肽包括基本同源的重组哺乳动物抗胰高血糖素受体抗体多肽，其基本不含污染性内源材料。
抗原结合蛋白的活性
一方面，本发明提供抗原结合蛋白，尤其是能与人胰高血糖素受体特异性结合的人类、人源化或嵌合抗体。该类抗体包括可减少或中和胰高血糖素信号传导(由例如实施例4描述的基于细胞的功能测定法检测)的拮抗或中和抗体。在一个实施方案中，抗原结合蛋白，例如本发明的人类抗体的IC50值为90nM或更低；在另一个实施方案中，IC50值为80nM或更低；在另一个实施方案中，70nM或更低；在另一个实施方案中，60nM或更低；在另一个实施方案中，50nM或更低；在另一个实施方案中，40nM或更低；在另一个实施方案中，30nM或更低；在另一个实施方案中，25nM或更低。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白例如本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合，而且其IC50值与参比抗体基本相似。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白具有由下述实施例所描述的测定法(或相似测定法)检测的与参比抗体基本相似的Kb(或Kd)。在本文中，术语“基本相似”意为与参比抗体的IC50或Kb(或Kd)可比或约100％、99％、98％、97％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％或50％。参比抗体包括，例如，具有重链和轻链组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L11H11、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21及L22H22的抗体。在一个实施方案中，参比抗体包括A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-11、A-12、A-13、A-15、A-21及A-22。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白例如本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合，并能降低动物模型的血糖。在一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低2％；在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低5％；在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低10％；在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低15％，在另一个实施方案中为20％，在另一个实施方案中为25％或更多。血糖降低量由剂量控制。对于动物或人类患者而言，治疗有效剂量是为将血糖降低至正常范围的剂量。示例动物模型为ob/ob小鼠，如下文实施例6所描述。在另一个实施方案中，本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合并提高动物模型的葡萄糖清除率。示例动物模型为食蟹猴，如下文实施例7所描述。提高葡萄糖清除率指在动物或人类患者口服葡萄糖后血糖降低所需的时间量，为葡萄糖耐受的量度。它可由标准试验例如口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检测，如下文实施例所描述。本发明的抗原结合蛋白可提高动物模型的葡萄糖清除率。此外，抗原结合蛋白可改善其它与2型糖尿病和高血糖症相关的体内指标，包括但不限于空腹糖耐量、血脂异常和代谢综合症。
与人胰高血糖素受体结合
在一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竞争结合的抗原结合蛋白，其中参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L11H11、L12H12、L13H13、L15H15、L17H17、L21H21和L22H22的轻链和重链结构域的组合。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竞争结合的人类抗体，其中该参比抗体为A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-11、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22。在另一方面，本发明提供与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合的人类抗体。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竞争结合的人类抗体，其中参比抗体与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合。在另一个实施方案中，本发明提供与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合的人类抗体，其IC50值为90nM或更低，在另一个实施方案中为80nM或更低，在另一个实施方案中为70nM或更低，在另一个实施方案中为60nM或更低，在另一个实施方案中为50nM或更低，在另一个实施方案中为40nM或更低，在另一个实施方案中为30nM或更低，在另一个实施方案中为25nM或更低，由例如实施例4所述测定法检测。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竞争结合至人胰高血糖素受体的抗体，其中参比抗体为A-3。
在又一实施方案中，抗原结合蛋白在结合至人胰高血糖素受体时：以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；和/或与所述参比抗体交叉竞争结合至人胰高血糖素受体，其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L11H11、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21合L22H22的轻链和重链可变结构域序列。
在又一实施方案中，所提供分离的人源抗体在结合至人胰高血糖素受体时：以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；和/或与所述参比抗体交叉竞争结合至人胰高血糖素受体，其中所述参比抗体选自A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-11、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22。
在又一实施方案中，所提供分离的人源抗体在结合至人胰高血糖素受体时：a.与人胰高血糖素受体的氨基酸Ser80-Ser119部分特异性结合；b.以90nM或更低的IC50降低胰高血糖素信号传导；c.降低动物模型的血糖；或(a)和(b)，或(a)、(b)和(c)。
如下检测与抗体交叉竞争的能力。下面的实施例8描述了采用A-3作为参比抗体的示例性竞争结合测定法。所测抗体为可克服(可与A-3竞争结合)、部分可克服(仅部分竞争结合)及非可克服抗体(不能与A-3竞争结合)。结果如图4-6所示。
此外，人类抗体A-3和其它人类抗体的结合位点经构建人GCGR和GLP-1受体的嵌合受体检测，如下文实施例9所述。如下所述及如图7所示，采用嵌合受体的检测表明对于抗体A-3，人胰高血糖素受体氨基酸Ser80-Ser117区域是结合必需且足够的。此外，人GCGR包含3对半胱氨酸。对于抗体A-3，结合需要第二和第三对半胱氨酸而不是第一对。这与抗体A-18、A-21和A-10是相反的，它们仅在3对半胱氨酸均完整时结合。
适应症
糖尿病尤其是2型糖尿病及其并发症已经成为全世界日益严重的问题。通常，该疾病由胰脏β细胞胰岛素生成受损引起。在2型糖尿病(此疾病最常见的形式)中，人们认为遗传和环境因素联合引起β细胞衰竭，使得在跟多个体中引起胰岛素分泌和活性受损以及胰岛素抵抗。一般认为肥胖症是促使成人甚至儿童中2型糖尿病增加的病症。人们还认为血脂异常，或者异常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)均与2型糖尿病相关。
2型糖尿病的特征为肌肉和其它器官不能响应正常循环浓度的胰岛素。随后胰脏β细胞分泌胰岛素增多，即高胰岛素血症的病症。最终β细胞无法再补偿，导致葡萄糖耐量降低、空腹葡萄糖浓度受损、慢性高血糖和组织损伤。此外，人们认为早发2型糖尿病与血脂异常，或者异常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)有关。代谢综合症患者都表现血脂异常和高血糖症。
本发明提供抗原结合蛋白，尤其是可与胰高血糖素受体体内结合、降低动物模型血糖浓度的人类抗体。抗原结合蛋白还可改善葡萄糖耐量。在一个实施方案中，本发明提供具有体内效价的完全人类抗体。对ob/ob小鼠单次注射抗体的作用可在注射后数天内降低血糖，为高血糖、2型糖尿病以及相关病症提供了有效、持久的治疗。单次注射抗体也可改善在下文所述食蟹猴上进行的葡萄糖耐量试验(GTT)中血样的葡萄糖清除率(改善葡萄糖耐量)。本发明的抗原结合蛋白，尤其是人类抗体可用于降低血液或血浆葡萄糖，改善葡萄糖耐量降低，改善空腹葡萄糖水平以及改善血脂异常。这样，本发明的抗原结合蛋白，尤其是人类抗体可用于治疗高血糖症、2型糖尿病、代谢综合症和包括血脂异常的其它相关症状。此外，已显示降低血糖可在某些情况下用于预防和治疗具体的癌症例如结肠癌，如Richardson等，Nature ClinPract Oncol 2：48-53(2005)，Giovannucci等，Gastroenterology 132：2208-2225(2007)，Krone等，Integrative Cancer Ther 4(1)：25-31(2005)，Chang等，Diabetologia 46(5)：595-607(2003)，Jee等，Yonsei Med J 46(4)：449-55(2005)所述。
治疗方法
另一方面，治疗受试者的方法，包括给予治疗剂量的本发明提供的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白为人类抗体。本文中，术语“受试者”指哺乳动物，包括人类，可与术语“患者”交替使用。人类抗体可用于治疗、控制或预防以患者体内过量胰高血糖素和/或血糖为特点的病症或症状。这些病症包括高血糖症、代谢综合症和2型糖尿病。术语“治疗”包括减轻或预防至少一种症状或病症的其它方面，或者减轻疾病严重性，等等。本发明的抗原结合蛋白尤其是人类抗体不需要产生完全治愈的效果，或根除疾病的所有症状或表现，即可构成有效治疗剂。如相关领域所公认，作为治疗剂的药物可减少给定疾病状态的严重程度，但不需消除疾病的所有表现即可被认为是有效的治疗剂。相似地，预防给药治疗不需在预防症状出现上完全有效即可构成有效预防剂。只减少疾病的影响(例如，通过减少其症状的数量或严重度，或通过提高另一治疗效果，或通过产生另一有效作用)，或者减少受试者中疾病发生或加重的可能性就已经足够。本发明的一个实施方案涉及包含以足以诱导反应具体病症严重性的指示剂高于基线水平的持续改善的量和时间给予患者抗原结合蛋白例如人类抗体的方法。
如相关领域所理解，将包含本发明抗原结合蛋白的药用组合物以对适应症恰当的方式给予病人。在一个实施方案中，药物组合物包含本发明的人类抗体。药物组合物可采用任意适当技术包括但不限于肠道外、局部或吸入给药。如果是注射，可通过例如关节内、静脉内、肌肉内、损伤区内、腹膜内或皮下途径，以快速注射或连续输注给予药用组合物。可考虑例如在疾病或损伤部位局部给药，如透皮给药和埋植剂持续释放给药。吸入给药包括例如鼻腔或口腔吸入、采用喷雾剂、以气雾剂形式吸入抗原结合蛋白等等。其它选择包括口腔制剂包括片剂、糖浆剂或锭剂。
以包含一个或更多其它组分例如生理学可接受载体、辅料或稀释剂的组合物形式给予本发明抗原结合蛋白是有利的。组合物可任选额外包含一个或更多如下所述的生理学活性剂。在多个具体实施方案中，组合物包含除一个或更多本发明抗原结合蛋白(例如人类抗体)之外的一个、两个、三个、四个、五个或六个生理学活性剂。
在一个实施方案中，药物组合物包含本发明人类抗体以及一个或更多选自以下的物质：pH适合于抗体的缓冲液、抗氧化剂例如抗坏血酸、低分子量多肽(例如含少于10个氨基酸的多肽)、蛋白质、氨基酸、糖例如糊精、络合物例如EDTA、谷胱甘肽、稳定剂和辅料。根据适当工业标准，也可加入防腐剂。可使用适当辅料溶液作为稀释剂将组合物配制成冻干粉末。适当组分在所用剂量和浓度下对受者无毒。可用于药物处方组分的进一步实例见Remington’s PharmaceuticalSciences，第16版.(1980)和20版.(2000)，Mack Publishing Company，Easton，PA.
提供医学从业者使用的试剂盒，其包括一种或更多本发明抗原结合蛋白以及治疗本文讨论任何病症的标签或其它说明。在一个实施方案中，试剂盒包括以上述组合物形式装在一个或多个管型瓶中的一种或多种人类抗体的无菌制剂。
给药剂量和频率可根据以下因素而改变：给药途径、所用具体抗体、所治疾病的性质和严重度、症状为急性还是慢性以及患者的体积和总体症状。可通过本领域熟知的方法确定适当剂量，例如在临床试验中包括剂量放大研究。
本发明抗原结合蛋白尤其是人类抗体可在例如一段时间内按规律间隔给药一次或多次。在具体实施方案中，在至少一个月或更长时间给药一次给予人类抗体，例如一个、两个或三个月或者甚至不确定。对于治疗慢性症状，长期治疗通常最有效。但是，对于治疗急性症状，短期给药例如从一周至六周就已足够。通常，给予人类抗体直至患者表现出所选体征或指示剂高于基线水平的医学相关改善度为止。
本文提供的治疗方案的一个实例包括以适当剂量一周一次皮下注射抗原结合蛋白例如人类抗体治疗血糖水平引起的症状。本文提供的这些症状的实例包括例如高血糖症、2型糖尿病、空腹糖耐量受损、葡萄糖耐量降低和血脂异常。可持续每周或每月给予抗原结合蛋白直到达到所需结果例如病人症状消退。可按需要重新治疗，或者，可选择地，给予维持剂量。
可在使用抗原结合蛋白例如人类抗体治疗之前、进行中和/或之后监测病人血糖浓度，以检测其浓度的任何变化。对于某些病症，血糖升高发病率可随例如疾病进程等因素而变化。可用已知技术测定葡萄糖水平。也可用已知技术例如ELISA在患者血液中测定葡萄糖水平。
本发明方法和组合物的具体实施方案涉及使用例如抗原结合蛋白例如人类抗体和一个或多个胰高血糖素拮抗剂、两个或更多本发明抗原结合蛋白，或者本发明抗原结合蛋白和一个或更多其它胰高血糖素拮抗剂。在进一步的实施方案中，单独或与其它用于治疗使患者痛苦的症状的药剂组合给予抗原结合蛋白。这些药剂的实例包括蛋白质以及非蛋白质药物。当联合给予多种药物时，如本领域所熟知其剂量应相应调整。“联合给药”和组合疗法不限于同时给药，也包括在涉及给予患者至少一种其它治疗剂的疗程中至少给予一次抗原和蛋白的治疗方案。
另一方面，本发明提供制备治疗2型糖尿病、高血糖症、代谢综合症、血脂异常和相关病症药剂的方法，其包含本发明抗原结合蛋白例如人类抗体与药学可接受辅料中的混合物，用于治疗2型糖尿病和相关病症。药剂制备方法如上所述。
组合疗法
另一方面，本发明提供使用本发明治疗性抗原结合蛋白，例如本文所述完全人类治疗性抗体与一种或多种其它治疗一起治疗糖尿病患者的方法。在一个实施方案中，该组合疗法可达到协同效应。抗原结合蛋白可与一个或更多下述当前可用的2型糖尿病治疗组合。其中包括双胍(美福明)以及磺脲类(例如格列本脲、格列吡嗪)。用于维持血糖平衡的其它治疗包括PPARγ拮抗剂(吡格列酮、罗格列酮)；α葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖、伏格列波糖)。其它治疗包括可注射治疗例如
Figure A20078004297301031
(胰高血糖素样肽)和
Figure A20078004297301032
(普兰林肽)。
已描述本发明，以下实施例用以说明目的，不具有限制性。
实施例
实施例1：抗原制备
将编码全长477个氨基酸的胰高血糖素受体(SEQ ID NO：2)的人类GCGR cDNA亚克隆到pDC312表达载体中，并转染AM1D细胞。在筛选和单细胞克隆后，选择单克隆(克隆1004)用于进一步基于受体的细胞表面表达的特性研究。饱和结合分析测定的受体表达水平(Bmax)为每mg膜蛋白质含11.4pmol胰高血糖素受体。
此外，在框架中讲编码N端GCGR(SEQ ID NO：2的1-142氨基酸)的cDNA序列与人IgG1Fc的cDNA融合，并亚克隆至pDsRa21载体(如U.S.2005/0118643所述)。在转染至AM1D细胞后可筛选细胞稳定库。用重组蛋白质A快流速柱(GE Healthcare)接着用Source 30Q阴离子交换柱(GE Healthcare)从浓缩条件培养基中纯化GCGR N端Fc。
实施例2：鼠抗人杂交瘤生成
将上述克隆1004的粗细胞膜组分用作常规和RIMMS(多位点注射快速免疫)免疫C57BL/6或DBF1小鼠的抗原(Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine)。在多轮免疫之后，通过电融合将***(RIMMS免疫)或脾(常规免疫)释放的淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞、Sp2/0-Ag14(ATCC)融合。将融合细胞按2x104个细胞/孔的密度接种于预铺100μl添加10％FBS、5％三甲氧唑辛克隆因子(BioVerisTM)、1×青霉素-链霉素-谷酰胺(Gibco)以及1×OPI(草酰乙酸盐、丙酮酸盐及胰岛素，Sigma)的BD培养基的96孔板。培养24小时后，每孔加入100μl 2×HAT(0.1mM次黄嘌呤、0.16mM脱氧胸腺嘧啶苷、4mM氨基蝶呤，Sigma)。分别在融合后的第7天和第10天更换培养基，然后在第2次更换培养基后的第2天收集条件培养基用于下述初步筛选。
对杂交瘤上清进行基于细胞的ELISA(酶联免疫吸附测定法)或使用1004细胞的FMAT(微体积荧光数字图像测定技术)，与亲代AM1D细胞平行。基于可与1004而非AM1D特异性结合来筛选包含GCGR特异抗体的杂交瘤克隆。
从下述扩增的杂交瘤培养基中部分纯化单克隆抗体，并用结合的(ELISA或FMAT)和功能的基于细胞的测定法测定其对胰高血糖素诱导cAMP生成的中和作用，如下文所述。扩增阳性克隆、克隆单细胞并用多个测定法进一步确认。
实施例3：完全人类抗体生成
根据所述方案，例如U.S.05/0118643和WO 05/694879、WO98/24838、WO 00/76310和美国专利7064244(均以参考形式并于本文)，将来源于人GCGR高表达细胞系1004的粗细胞膜制备品用作免疫IgG2和IgG4
Figure A20078004297301041
(Abgenix，now Amgen，Inc.)的抗原。初次免疫后，给予后继轮次的加强免疫直至达到适当的抗体滴度。鉴别显示适当滴度的动物，然后从引流***获得淋巴细胞，必要时将各组混合。在一些实例中，通过用适当的介质(例如，DMEM，Invitrogen，Carlsbad，CA)研磨淋巴组织以解离淋巴细胞将细胞从组织中释放。筛选B细胞并与适当融合配体融合，例如非分泌骨髓瘤P3X63Ag8.653细胞(American Type Culture Collection CRL 1580，Kerney等，J.Immunol.123，1548-1550(1979))，如上述参考文献所述。其它适当的融合配体包括Sp2/0-Ag14(ATCC)细胞。将融合细胞沉淀并重悬于筛选介质中(通常为包含含偶氮丝氨酸、hypozanthine和其它补充物质的DMEM)，温育20-30分钟，然后重悬于筛选介质中病接种平皿前培养。然后将细胞分布于孔中以最大化克隆形成能力，并用标准技术培养。培养后，用富含胰高血糖素受体细胞克隆1004和亲代细胞系AM1D用FMAT对杂交瘤上清对进行筛选。接着用使用FITC标记(异硫氰酸荧光素偶联)的人IgG抗体的FACS分析确认GCGR特异性结合子。按U.S 2005/0118643及其它上述引用参考文献所述方案扩增包含受体特异单克隆抗体的杂交瘤克隆。如下文所述检测上清对胰高血糖素诱导的cAMP生成的抑制。将包含拮抗抗体的杂交瘤克隆单细胞克隆并扩增用于进一步检测。然后如下所述纯化抗体，然后测定来自单克隆的纯化抗体的中和活性。
用Mab Select(GE Healthcare)树脂将抗体从杂交瘤条件培养基中纯化出来。向7至10ml的条件培养基(CM)中加入100μl在PBS中平衡的Mab Select树脂的1∶2匀浆。将试管置振动器于4-8℃过夜。1000×g离心试管5分钟，倾去未结合部分。用5ml PBS洗涤树脂，然后离心并如上所述倾去未结合部分。将转移树脂至SPIN-X，0.45μm，2ml试管中。用0.5ml PBS再洗涤树脂两次，然后离心。通过室温下温育并偶尔搅拌10分钟用0.2ml 0.1M醋酸洗脱单克隆抗体。离心试管，向洗脱液中加入30μl 1M pH8.0Tris缓冲液。纯化抗保存于4-8℃。
实施例4：抗体的体外表征
抗体/受体结合测定法：基于总细胞的ELISA
将GCGR过表达CHO细胞(克隆1004)和亲代细胞(AM1D)接种于微量培养板至90％汇合。用BSA封闭细胞，与杂交瘤上清4℃温育90分钟。强洗涤后，将细胞与检测抗体羊抗鼠IgG Fc-HRP(Pierce)温育，洗涤三次。加入50μl/孔TMB底物(KPL)，室温温育5-10分钟。加入50μl 0.5N H2SO4终止反应，用SpectraMax(Molecular Devices)于450nm处读取数值。以GCGR膜血清免疫小鼠为阳性对照，以空白培养基为背景对照。
抗体/受体结合测定法：FMAT
将GCGR过表达CHO细胞(克隆1004)以亚汇合密度(50-60％)接种于底部洁净、黑壁的96孔微量培养板(Applied Biosystems)中，然后在室温与杂交瘤上清温育60分钟。与FMAT蓝色标记第二抗体(羊抗人IgG，Applied Biosystems)温育后，用8200细胞检测***(AppliedBiosystems)记录细胞影像和细胞结合荧光量。
基于细胞的功能测定法
在采用稳定功能细胞系基于细胞的功能测定法中测定抗胰高血糖素受体抗体的中和活性。用包含来自人、小鼠、大鼠、食蟹猴或大鼠的GCGR cDNAs(cDNAs分别编码SEQ ID NO：2，4，6，8)的表达构建体(pcDNA3.1，Invitrogen)分别转染CHO K1细胞以建立稳定细胞系。从转染群中单细胞克隆表达来自上述种属GCGR的最终功能细胞系，并检测胰高血糖素刺激cAMP生成。基于各单品系的EC50，选择最终测定法细胞系并保存以备将来使用。
在竞争结合测定法中用以下方案测定Kb，或基于拮抗剂存在下剂量响应曲线漂移的Schild分析法计算抗体结合的解离常数。Schild分析法的使用如Lazaeno等，Br.J.Pharmacol.109(4)：1110-9(1993)所描述，此处以参考形式并于本文。该测定法从用于小分子改编到用于本文抗体。杂交瘤上清和纯化抗体均使用以下方案检测。
Cisbio的HTRF(均相时间分辨荧光分析技术)-cAMP动态试剂盒用于功能测定。用功能测定法首先筛选在结合测定法中可与人GCGR特异性结合的克隆的杂交瘤上清。然后从杂交瘤条件培养基中纯化抗体，并重新检测Kb和IC50值。使用该方法可鉴别可抑制胰高血糖素激活时cAMP生成、为胰高血糖素拮抗剂的抗体。
将所选稳定功能细胞系接种于96-半孔板。将GCGR抗体加入孔中，37℃温育20分钟，然后加胰高血糖素(Calbiochem)，并在37℃再温育15分钟。在裂解液中加入cAMP共轭物之后，将抗cAMP穴状化合物(抗共轭结合至穴状化合物的cAMP的抗体)加入孔中，将板于室温下温育1小时，然后用RubyStar(BMG Labtech的荧光微量培养板读板仪)读取数值。
用功能性人GCGR细胞系初步检测2μM浓度的纯化抗体。用50pM胰高血糖素刺激细胞，筛选显示强抑制活性的抗体测定IC50(定义为抑制高于基线最大效应一半所需的抗体浓度)。在1μM浓度检测抗体，然后作连续2倍系列稀释。绘制剂量响应曲线图，并用GraphPad Prism软件测定IC50。筛选具有较低IC50的抗人GCGR抗体，然后用适当细胞系进一步检测交叉种属受体活性。
功能测定法中人类抗体的IC50
对各所选人源抗体作Schild分析以检测跨不同种属的人抗GCGR抗体的相对效价。简而言之，在连续稀释的胰高血糖素(100nM至10fM)存在下检测不同浓度的抗体。用GraphPad Prism软件绘制不同抗体浓度下的胰高血糖素剂量响应曲线。计算抗体的pA2，即产生胰高血糖素剂量响应曲线2倍右移所需抗体浓度的负对数。当Schild斜率等于1时，pA2等于pKb，即抗体结合的解离常数。然后，由pKb的反log值衍生出Kb，可直接用于比较跨种属单个抗体的相对效价。
检测其它抗体对人GCGR的活性。
  抗体   IC50(nM)
  A-1   15.0
  A-2   10.1
  A-5   13.3
  A-6   32.2
  A-7   8.8
  A-8   10.4
  A-10   无活性
  A-11   16.7
  A-12   21.3
  A-13   72.6
  A-14   457.5
  A-15   11.3
  A-16   无活性
  A-17   无活性
  A-18   203.7
  A-19   无活性
  A-20   无活性
  A-21   47.2
  A-22   7.2
  A-23   无活性
Schild分析法测定的Kb值
Figure A20078004297301081
实施例5：抗体的重组表达和纯化
研发表达抗体的稳定细胞系
基于Abgenix提供各抗体的DNA序列设计PCR引物以获得完整轻链开放阅读框、重链开放式阅读框的信号肽和可变域。将完整轻链、重链信号肽和可变域以及人IgG2恒定区分与表达载体pDC323和pDC324相连。
作为PCR引物设定的实例，5’A-9轻链引物为4337-12(5’-AAGCTC GAG GTC GAC TAG ACC ACC ATG GAC ATG AGG GTC CCCGCT CAG CTC CTG-3’)(SEQ ID NO：313)，其包含SalI限制性酶切位点、框内终止密码子、Kozak序列和氨基酸MDMRVPAQLL(SEQ ID NO：314)的密码，3’引物3250-80(5’-AAC CGT TTA AAC GCG GCC GCTCAA CAC TCT CCC CTG TTG AA-3’)(SEQ ID NO：315)，其包含NotI限制性酶切位点、终止密码子和氨基酸FNRGEC(SEQ ID NO：316)的密码。5’A-9重链引物为3444-34(5’-AAG CTC GAG GTC GAC TAGACC ACC ATG GAG TTT GGG CTG AGC TGG GTT TTC-3’)(SEQ IDNO：317)，其包含SalI限制性酶切位点、框内终止密码子、Kozak序列和氨基酸MEFGLSWVF(SEQ ID NO：318)的密码，A-9重链可变区/IgG2(+)链接点引物4341-29(5’-GAC CAC GGT CAC CGT CTC CTCAGC CTC CAC CAA GGG CCC ATC GGT CTT-3’)(SEQ ID NO：319)，编码氨基酸GTTVTVSSASTKGPSVF(SEQ ID NO：321)的互补(-)链引物4341-30(5’-AAG ACC GAT GGG CCC TTG GTG GAG GCT GAGGAG ACG GTG ACC GTG GTC-3’)(SEQ ID NO：320)，3’引物3250-79(5’-AAC CGT TTA AAC GCG GCC GCT CAT TTA CCC GGA GACAGG GA-3’)(SEQ ID NO：322)，其包含NotI限制性酶切位点、终止密码子和氨基酸SLSPGK(SEQ ID NO：323)的密码。
用于转染抗GCGR表达质粒的CHO宿主细胞位通过适应无血清培养基(Rasmussen等，Cytotechnology 28：31-42，1998)来源于DXB-11细胞(Urlaub等，PNAS US 77：4126-4220，(1980))的CHO细胞系。
使用标准电穿孔方法用表达质粒pDC323-抗GCGRκ和pDC324-[抗GCGR-IgG2]转染宿主细胞产生抗GCGR细胞系。在用表达质粒转染宿主细胞系之后，在含有4％经透析的胎牛血清(ds或dfFBS)的选择性培养基(不含GHT)中培养细胞2-3周以筛选质粒和回收细胞。然后从培养基中移去血清，在-GHT选择性培养基中培养细胞直至其活力＞85％。随后在含有150nM MTX的培养基中培养转染细胞群。
细胞系克隆
根据以下方法建立所筛选克隆的细胞库。克隆步骤保证产生克隆种群和细胞库，使商业生产具有重现性。将抗体表达细胞扩增群(pool)有限稀释地接种于96孔板，并在小规模研究中评价候选克隆的生长和生产力特性。
实施例6：ob/ob小鼠的体内活性
向12周雄性ob/ob小鼠(Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine)IP注射缓冲液或者1或3mg/kg(n＝8-10/组)的抗体3或4。在单次注射抗体后的0、24、48、72、96、120、144、192、240小时测定血糖。以3mg/kg抗体剂量注射抗体3时血糖降低8天，如图1所示。
相似地，向12周雄性ob/ob小鼠(Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine)IP注射缓冲液或者1或3mg/kg(n＝8-10/组)的抗体3或9。在单次注射抗体后的0、24、72、120、192、240小时测定血糖。以3mg/kg抗体剂量注射抗体3和9时血糖降低8天，如图2所示。
实施例7：正常雄性食蟹猴的体内效力
在云南灵长类动物中心(中国云南)在雄性食蟹猴中评价抗体A-9单次皮下(SC)剂量的效力。通过检测给予口服剂量葡萄糖后的血液葡萄糖清除率对猴子进行葡萄糖耐量试验(GTT)。GTT数据表示为AUC(曲线下面积)，如图3所示，代表通过测定口服后0、30、90分钟的血糖量得到的葡萄糖清除率。如图3所示，在给予抗体前24天以交错方式给予前剂量GTT1，在单次剂量前17天以交错方式给予前剂量GTT2。向30只食蟹猴单次皮下(SC)注射总共3或30mg/kg抗体A-9或对照给药抗体。注射后3天给予猴子GTT3，注射后8天给予GTT4，注射后17天给予GTT5。如图3所示，结果为单次SC注射3或30mg/kg抗体9可提高葡萄糖耐量试验期间的葡萄糖清除率。
实施例8：竞争结合测定法
将本发明的若干抗体混合，用竞争结合测定法检测哪些抗体与标记参比抗GCGR抗体交叉竞争结合。用Alexa荧光染料(分子探针/Invitrogen，Carlsbad，CA)标记A-3抗体作为示踪物，根据操作说明制备。检测一定剂量范围内的各个抗体与固定浓度1nM标记A-3抗体竞争结合表达于CHO细胞(如上所述)上的GCGR受体的能力。用实施例4描述的FMAT测定荧光密度，并计算Alexa A-3结合受体的抑制程度。基于以上分析可分出三组抗体。即与Alexa-A-3竞争时的可克服、部分可克服或非可克服抗体。可克服抗体能与A-3竞争结合，而非可克服抗体不能交叉竞争并且似乎在人GCGR上具有不同的结合位点。部分可克服抗体与A-3结合位点有一些重叠。如图4-6所示。经检测并发现能与Alexa-A-3竞争结合(可克服)的抗体为A-11、A-2、A-7、A-12、A-17、A-6、A-8、A-15和A-5。经检测并发现仅能与Alexa-A-3部分竞争结合(部分可克服)的抗体为A-16、A-14、A-20和A-23。经检测并发现不能与Alexa-A-3竞争结合的抗体为A-19和A-10。需要注意的是所有或大部分可克服抗体在基于细胞测定法(IC50)中显示出抑制活性，而部分可克服抗体和非可克服抗体用此测定法未显示活性。
实施例9：嵌合受体的构建
人GCGR与人GLP-1受体最为同源，且均属于受体N端部分有三对半胱氨酸的GPCR B家族。为了测定所测人类抗体结合至人GCGR上的区域或位点，并测定之间形成二硫键的三对半胱氨酸所维持构象的重要性，生成人GCGR和人GLP-1R(GLP-1R，登录号NP_002053)之间的多种嵌合受体构建物并在细胞中表达。如图7所示。来自人GCGR的嵌合体序列显示于图7。举例而言，显示图上部的嵌合体4中，氨基酸1-142来自人GCGR，其余部分来自GLP-1受体。嵌合体4包含完整的三对半胱氨酸。在嵌合体4中引入成对半胱氨酸的点突变(Cys1-3、Cys 2-5或Cys 4-6)使随后的三个嵌合体：嵌合体-41CA，3CA；42CA，5CA以及44CA，6CA均含一个断裂的半胱氨酸对。嵌合体-7的氨基酸1-79来自人GCGR；嵌合体-8的氨基酸80-477来自人GCGR；嵌合体-10的氨基酸80-142来自人GCGR；嵌合体-15的氨基酸80-119来自人GCGR；嵌合体-19的氨基酸1-119和143-477来自人GCGR。通过荧光蛋白的框内C端融合监测细胞表面受体表达。使用Alexa标记的参比抗体A-3通过FMAT直接检测抗体与特定嵌合受体的结合。如图7所示，此处测定的所有抗体的结合均需要人GCGR的N端(氨基酸1-142)。抗体A-18、A-21和A-10的表现相似因为它们表现出仅与含三个完整半胱氨酸对的嵌合体-4结合。这表明这些抗体的构象表位。对于抗体A-3，来自人GCGR 80-119的氨基酸序列是抗体结合所必需且足够的。此外，研究表明A-3结合不需要人GCGR的氨基酸120-142。而且，对于抗体A-3，构象由第二和第三对(Cys 2-5、Cys 4-6)维持，而不是第一对半胱氨酸。因此，抗体A-3和所有与A-3交叉反应的抗体与人GCGR结合的受体区域在人GCGR氨基酸Ser80-Ser119之内。
本文引用的各参考文献就其所述和所有目的完整并于本文作为参考。
本发明不限于本文描述的预期作为本发明单个方面的单独例证的特定实施方案、本发明的功能等同方法和组分的范围之内。确实，对于本领域技术人员而言可根据上文的描述和附图做出除本文显示和描述之外的许多本发明的修改。这些修改均涵盖于附加权利要求的范围内。
序列表
<110>AMGEN INC.
     YAN，HAI
     HU，SHAW-FEN SYLVIA
     BOONE，THOMAS C.
     LINDBERG，RICHARD A.
<120>与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法
<130>A-1133-WO-PCT
<140>待委托
<141>2007-09-19
<150>60/846,202
<151>2006-09-20
<150>60/968,977
<151>2007-08-30
<160>324
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1519
<212>DNA
<213>人
<400>1
gtgcagcccc tgccagatgt gggaggcagc tagctgccca gaggcatgcc cccctgccag     60
ccacagcgac ccctgctgct gttgctgctg ctgctggcct gccagccaca ggtcccctcc    120
gctcaggtga tggacttcct gtttgagaag tggaagctct acggtgacca gtgtcaccac    180
aacctgagcc tgctgccccc tcccacggag ctggtgtgca acagaacctt cgacaagtat    240
tcctgctggc cggacacccc cgccaatacc acggccaaca tctcctgccc ctggtacctg    300
ccttggcacc acaaagtgca acaccgcttc gtgttcaaga gatgcgggcc cgacggtcag    360
tgggtgcgtg gaccccgggg gcagccttgg cgtgatgcct cccagtgcca gatggatggc    420
gaggagattg aggtccagaa ggaggtggcc aagatgtaca gcagcttcca ggtgatgtac     480
acagtgggct acagcctgtc cctgggggcc ctgctcctcg ccttggccat cctggggggc     540
ctcagcaagc tgcactgcac ccgcaatgcc atccacgcga atctgtttgc gtccttcgtg     600
ctgaaagcca gctccgtgct ggtcattgat gggctgctca ggacccgcta cagccagaaa     660
attggcgacg acctcagtgt cagcacctgg ctcagtgatg gagcggtggc tggctgccgt     720
gtggccgcgg tgttcatgca atatggcatc gtggccaact actgctggct gctggtggag     780
ggcctgtacc tgcacaacct gctgggcctg gccaccctcc ccgagaggag cttcttcagc     840
ctctacctgg gcatcggctg gggtgccccc atgctgttcg tcgtcccctg ggcagtggtc     900
aagtgtctgt tcgagaacgt ccagtgctgg accagcaatg acaacatggg cttctggtgg     960
atcctgcggt tccccgtctt cctggccatc ctgatcaact tcttcatctt cgtccgcatc    1020
gttcagctgc tcgtggccaa gctgcgggca cggcagatgc accacacaga ctacaagttc    1080
cggctggcca agtccacgct gaccctcatc cctctgctgg gcgtccacga agtggtcttc    1140
gccttcgtga cggacgagca cgcccagggc accctgcgct ccgccaagct cttcttcgac    1200
ctcttcctca gctccttcca gggcctgctg gtggctgtcc tctactgctt cctcaacaag    1260
gaggtgcagt cggagctgcg gcggcgttgg caccgctggc gcctgggcaa agtgctatgg    1320
gaggagcgga acaccagcaa ccacagggcc tcatcttcgc ccggccacgg ccctcccagc    1380
aaggagctgc agtttgggag gggtggtggc agccaggatt catctgcgga gacccccttg    1440
gctggtggcc tccctagatt ggctgagagc cccttctgaa ccctgctggg accccagcta    1500
gggctggact ctggcaccc                                                 1519
<210>2
<211>477
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Pro Pro Cys Gln Pro Gln Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Ala Cys Gln Pro Gln Val Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu
            20                  25                  30
Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Gly Asp Gln Cys His His Asn Leu Ser
        35                  40                  45
Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp Lys
    50                  55                  60
Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser
65                  70                  75                  80
Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val
                85                  90                  95
Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly
            100                 105                 110
Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys Gln Met Asp Gly Glu Glu Ile
        115                 120                 125
Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Phe Gln Val Met
    130                 135                 140
Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu
145                 150                 155                 160
Ala Ile Leu Gly Gly Leu Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile
                165                 170                 175
His Ala Asn Leu Phe Ala Ser Phe Val Leu Lys Ala Ser Ser Val Leu
            180                 185                 190
Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly Asp
        195                 200                 205
Asp Leu Ser Val Ser Thr Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys
    210                 215                 220
Arg Val Ala Ala Val Phe Met Gln Tyr Gly Ile Val Ala Asn Tyr Cys
225                 230                 235                 240
Trp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala
                245                 250                 255
Thr Leu Pro Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly Trp
            260                 265                 270
Gly Ala Pro Met Leu Phe Val Val Pro Trp Ala Val Val Lys Cys Leu
        275                 280                 285
Phe Glu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp
    290                 295                 300
Trp Ile Leu Arg Phe Pro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe
305                 310                 315                 320
Ile Phe Val Arg Ile Val Gln Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala Arg
                325                 330                 335
Gln Met His His Thr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu
            340                 345                 350
Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe Val
        355                 360                 365
Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Ala Lys Leu Phe Phe
    370                 375                 380
Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu Tyr
385                 390                 395                 400
Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu Arg Arg Arg Trp His
                405                 410                 415
Arg Trp Arg Leu Gly Lys Val Leu Trp Glu Glu Arg Asn Thr Ser Asn
            420                 425                 430
His Arg Ala Ser Ser Ser Pro Gly His Gly Pro Pro Ser Lys Glu Leu
        435                 440                 445
Gln Phe Gly Arg Gly Gly Gly Ser Gln Asp Ser Ser Ala Glu Thr Pro
    450                 455                 460
Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala Glu Ser Pro Phe
465                 470                 475
<210>3
<211>1880
<212>DNA
<213>小鼠
<400>3
cgcgaggagc gcagccctag ccccggcgac tgagcacacc tgaggagagg tgcacacact     60
ctgaggacct aggtgtgcaa cctctgccag atgtggggcg tggctaccca gaggcatgcc    120
cctcacccag ctccactgtc cccacctgct gctgctgctg ttggtgctgt catgtctgcc    180
agaggcaccc tctgcccagg taatggactt tttgtttgag aagtggaagc tctatagtga    240
ccaatgccac cacaacctaa gcctgctgcc cccacctact gagctggtct gtaacagaac    300
cttcgacaag tactcctgct ggcctgacac ccctcccaac accactgcca acatttcctg    360
cccctggtac ctaccttggt accacaaagt gcagcaccgc ctagtgttca agaggtgtgg    420
gcccgatggg cagtgggttc gagggccacg ggggcagccg tggcgcaacg cctcccaatg    480
tcagttggat gatgaagaga tcgaggtcca gaagggggtg gccaagatgt atagcagcca    540
gcaggtgatg tacaccgtgg gctacagtct gtccctgggg gccttgctcc ttgcgctggt    600
catcctgctg ggcctcagga agctgcactg cacccgaaac tacatccatg ggaacctgtt    660
tgcgtccttt gtgctcaagg ctggctctgt gttggtcatc gattggctgc tgaagacacg    720
gtacagccag aagattggcg atgacctcag tgtgagcgtc tggctcagtg acggggcgat    780
ggccggctgc agagtggcca cagtgatcat gcagtacggc atcatagcca actattgctg    840
gttgctggta gagggcgtgt acctgtacag cctgctgagc cttgccacct tctctgagag    900
gagcttcttt tccctctacc tgggcattgg ctggggtgcg cccctgctgt ttgtcatccc    960
ctgggtggtg gtcaagtgtc tgtttgagaa tgttcagtgc tggaccagca atgacaacat   1020
gggattctgg tggatcctgc gtattcctgt cttcctggcc ttactgatca attttttcat   1080
ctttgtccac atcattcacc ttcttgtggc caagctgcgt gcccatcaga tgcactatgc    1140
tgactataag ttccggctgg ccaggtccac gctgaccctc atccctctgc tgggggtcca    1200
cgaggtggtc tttgcctttg tgactgacga gcatgcccaa ggcaccctgc gctccaccaa    1260
gctctttttt gacctgttcc tcagctcctt ccagggtctg ctggtggctg ttctctactg    1320
tttcctcaac aaggaggtgc aggcagagct gatgcggcgt tggaggcaat ggcaagaagg    1380
caaagctctt caggaggaaa ggttggccag cagccatggc agccacatgg ccccagcagg    1440
gccttgtcat ggtgatccct gtgagaaact tcagcttatg agtgcaggca gcagcagtgg    1500
gactggctgt gtgccctcta tggagacctc gctggccagt agtctcccaa ggttggctga    1560
cagccccacc tgaatctcca ctggagccta gccaggctgc gttcagaaag ggcctcagag    1620
gacaacccag agccagatgc ccggccaagg ctgaagagac aaagcagcaa gacagcagct    1680
tgtactgtgc acactcccct aacctgtcct agcctggcac aggccacagt gacagagtag    1740
gggttggata tgatggagaa gccatgttat ctatgaactc tgagtgttcc catgtgtgtt    1800
gacatggtcc ctgtacccag atatgtcctt cagtaaaaag ctcgagtggg agctgctgca    1860
caaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                                1880
<210>4
<211>485
<212>PRT
<213>小鼠
<400>4
Met Pro Leu Thr Gln Leu His Cys Pro His Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Val Leu Ser Cys Leu Pro Glu Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe
            20                  25                  30
Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Ser Asp Gln Cys His His Asn Leu
        35                  40                  45
Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp
    50                  55                  60
Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Pro Asn Thr Thr Ala Asn Ile
65                  70                  75                  80
Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Tyr His Lys Val Gln His Arg Leu
                85                  90                  95
Val Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg
            100                 105                 110
Gly Gln Pro Trp Arg Asn Ala Ser Gln Cys Gln Leu Asp Asp Glu Glu
        115                 120                 125
Ile Glu Val Gln Lys Gly Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Gln Gln Val
    130                 135                 140
Met Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala
145                 150                 155                 160
Leu Val Ile Leu Leu Gly Leu Arg Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr
                165                 170                 175
Ile His Gly Asn Leu Phe Ala Ser Phe Val Leu Lys Ala Gly Ser Val
            180                 185                 190
Leu Val Ile Asp Trp Leu Leu Lys Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly
        195                 200                 205
Asp Asp Leu Ser Val Ser Val Trp Leu Ser Asp Gly Ala Met Ala Gly
    210                 215                 220
Cys Arg Val Ala Thr Val Ile Met Gln Tyr Gly Ile Ile Ala Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Cys Trp Leu Leu Val Glu Gly Val Tyr Leu Tyr Ser Leu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Ala Thr Phe Ser Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly
            260                 265                 270
Trp Gly Ala Pro Leu Leu Phe Val Ile Pro Trp Val Val Val Lys Cys
        275                 280                 285
Leu Phe Glu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe
    290                 295                 300
Trp Trp Ile Leu Arg Ile Pro Val Phe Leu Ala Leu Leu Ile Asn Phe
305                 310                 315                 320
Phe Ile Phe Val His Ile Ile His Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala
                325                 330                 335
His Gln Met His Tyr Ala Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Arg Ser Thr
            340                 345                 350
Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe
        355                 360                 365
Val Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Thr Lys Leu Phe
    370                 375                 380
Phe Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu
385                 390                 395                 400
Tyr Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ala Glu Leu Met Arg Arg Trp
                405                 410                 415
Arg Gln Trp Gln Glu Gly Lys Ala Leu Gln Glu Glu Arg Leu Ala Ser
            420                 425                 430
Ser His Gly Ser His Met Ala Pro Ala Gly Pro Cys His Gly Asp Pro
        435                 440                 445
Cys Glu Lys Leu Gln Leu Met Ser Ala Gly Ser Ser Ser Gly Thr Gly
    450                 455                 460
Cys Val Pro Ser Met Glu Thr Ser Leu Ala Ser Ser Leu Pro Arg Leu
465                 470                 475                 480
Ala Asp Ser Pro Thr
                485
<210>5
<211>1875
<212>DNA
<213>大鼠
<400>5
gaattcgcgg ccgccgccgg gccccagatc ccagtgcgcg aggagcccag tcctagaccc     60
agcaacctga ggagaggtgc acacaccccc aaggacccag gcacccaacc tctgccagat    120
gtgggggggt ggctacccag aggcatgctc ctcacccagc tccactgtcc ctacctgctg    180
ctgctgctgg tggtgctgtc atgtctgcca aaggcaccct ctgcccaggt aatggacttt    240
ttgtttgaga agtggaagct ctatagtgac cagtgccacc acaacctaag cctgctgccc    300
ccacctactg agctggtctg caacagaact ttcgacaagt actcctgctg gcctgacacc    360
cctcccaaca ccactgccaa catttcctgc ccctggtacc taccttggta ccacaaagtg    420
cagcaccgcc tagtgttcaa gaggtgtggg cctgatgggc agtgggttcg agggccacgg    480
gggcagtcat ggcgcgacgc ctcccaatgt cagatggatg atgacgagat cgaggtccag    540
aagggggtag ccaagatgta tagcagctac caggtgatgt acactgtggg ctacagtctg    600
tccctggggg ccttgctcct ggcgctggtc atcctgctgg gcctcaggaa gctgcactgc    660
acccggaact acatccacgg gaacctgttc gcgtccttcg tgctcaaggc tggctctgtg    720
ctggtcattg attggctgct caagacacgc tatagccaga agattggaga tgacctcagt    780
gtgagcgtct ggctcagtga tggggcggtg gctggctgca gagtggccac agtgatcatg    840
cagtacggca tcatagccaa ctactgctgg ttgctggtgg agggtgtgta cctgtacagc    900
ctgctgagca tcaccacctt ctcggagaag agcttcttct ccctctatct gtgcatcggc    960
tggggatctc ccctgctgtt tgtcatcccc tgggtggtgg tcaagtgtct gtttgagaat   1020
gtccagtgct ggaccagcaa tgacaatatg ggattctggt ggatcctgcg tatccctgta   1080
ctcctggcca tactgatcaa ttttttcatc tttgtccgca tcattcatct tcttgtggcc   1140
aagctgcgtg cccatcagat gcactatgct gattacaagt tccggctagc caggtccacg   1200
ctgaccctca ttcctctgct gggagtccac gaagtggtct ttgcctttgt gactgatgag   1260
catgcccagg gcaccctgcg ctccaccaag ctcttttttg acctgttctt cagctccttt  1320
cagggtctgc tggtggctgt tctctactgt ttcctcaaca aggaggtgca ggcagagcta  1380
ctgcggcgtt ggaggcgatg gcaagaaggc aaagctcttc aggaggaaag gatggccagc  1440
agccatggca gccacatggc cccagcaggg acttgtcatg gtgatccctg tgagaaactt  1500
cagcttatga gtgcaggcag cagcagtggg actggctgtg agccctctgc gaagacctca  1560
ttggccagta gtctcccaag gctggctgac agccccacct gaatctccac tggactccag  1620
ccaagttgga ttcagaaagg gcctcacaag acaacccaga aacagatgcc tggccaaggc  1680
tgaagaggca aagcagcaag acagcagctt gtactatcca cactccccta acctgtcctg  1740
gccgggtaca ggccacattg atggagtagg ggctggatat gatggagtag ccatgctatg  1800
aactatgggt gttcccatga gtgttgccat gttccatgca cacagatatg accttcagta  1860
aagagctccc gtagg                                                   1875
<210>6
<211>485
<212>PRT
<213>大鼠
<400>6
Met Leu Leu Thr Gln Leu His Cys Pro Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Val
1               5                   10                  15
Val Leu Ser Cys Leu Pro Lys Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe
            20                  25                  30
Leu Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Ser Asp Gln Cys His His Asn Leu
        35                  40                  45
Ser Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp
    50                  55                  60
Lys Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Pro Asn Thr Thr Ala Asn Ile
65                  70                  75                  80
Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Tyr His Lys Val Gln His Arg Leu
                85                  90                  95
Val Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg
            100                 105                 110
Gly Gln Ser Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys Gln Met Asp Asp Asp Glu
        115                 120                 125
Ile Glu Val Gln Lys Gly Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Tyr Gln Val
    130                 135                 140
Met Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala
145                 150                 155                 160
Leu Val Ile Leu Leu Gly Leu Arg Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr
                165                 170                 175
Ile His Gly Asn Leu Phe Ala Ser Phe Val Leu Lys Ala Gly Ser Val
            180                 185                 190
Leu Val Ile Asp Trp Leu Leu Lys Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly
        195                 200                 205
Asp Asp Leu Ser Val Ser Val Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly
    210                 215                 220
Cys Arg Val Ala Thr Val Ile Met Gln Tyr Gly Ile Ile Ala Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Cys Trp Leu Leu Val Glu Gly Val Tyr Leu Tyr Ser Leu Leu Ser Ile
                245                 250                 255
Thr Thr Phe Ser Glu Lys Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Cys Ile Gly
            260                 265                 270
Trp Gly Ser Pro Leu Leu Phe Val Ile Pro Trp Val Val Val Lys Cys
        275                 280                 285
Leu Phe Glu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe
    290                 295                 300
Trp Trp Ile Leu Arg Ile Pro Val Leu Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe
305                 310                 315                 320
Phe Ile Phe Val Arg Ile Ile His Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala
                325                 330                 335
His Gln Met His Tyr Ala Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Arg Ser Thr
            340                 345                 350
Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe
        355                 360                 365
Val Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Thr Lys Leu Phe
    370                 375                 380
Phe Asp Leu Phe Phe Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu
385                 390                 395                 400
Tyr Cys Phc Leu Asn Lys Glu Val Gln Ala Glu Leu Leu Arg Arg Trp
                405                 410                 415
Arg Arg Trp Gln Glu Gly Lys Ala Leu Gln Glu Glu Arg Met Ala Ser
            420                 425                 430
Ser His Gly Ser His Met Ala Pro Ala Gly Thr Cys His Gly Asp Pro
        435                 440                 445
Cys Glu Lys Leu Gln Leu Met Ser Ala Gly Ser Ser Ser Gly Thr Gly
    450                 455                 460
Cys Glu Pro Ser Ala Lys Thr Ser Leu Ala Ser Ser Leu Pro Arg Leu
465                 470                 475                 480
Ala Asp Ser Pro Thr
                485
<210>7
<211>1434
<212>DNA
<213>食蟹猴
<400>7
atgcccccct gtcagccacg tcgacccctg ctactgttgc tgctgctgct ggcctgccag     60
ccacaggccc cctccgctca ggtgatggac ttcctgtttg agaagtggaa actctacggt    120
gaccagtgtc accacaacct gagcctgctg ccccccccca cggagctggt ctgtaacaga    180
accttcgaca agtattcctg ctggccagac acccccgcca ataccacagc caacatctcc    240
tgcccctggt acctgccttg gcaccacaaa gtgcaacacc gcttcgtgtt caagagatgc    300
gggcccgatg gtcagtgggt gcgtggaccc cgggggcagc cttggcgtga cgcctctcag    360
tgccagatgg acggcgagga gcttgaggtc cagaaggagg tggctaagat gtacagcagc    420
ttccaggtga tgtacacggt gggctacagc ctgtccctgg gggccctgct cctcgccttg    480
gccatcctgg ggggcatcag caagctgcac tgcacccgca acgccatcca cgcgaacctg    540
tttgtgtcct tcgtgctgaa ggccagctcc gtgctggtca tcgatgggct gctcaggacc    600
cgctacagcc agaagattgg cgacgacctc agtgtcagca tctggctcag tgatggagcg    660
gtggccggct gccgtgtggc cgcggtgttc atgcaatatg gcgtcgtggc caactactgc    720
tggctgctgg tggagggcct gtacctgcac aacctgctgg gcctggccac cctccctgag    780
aggagcttct tcagcctcta cctgggcatc ggctggggtg cccccatgct gttcatcatc    840
ccctgggtgg tggtcaggtg tctgttcgag aacatccagt gctggaccag caatgacaac    900
atgggcttct ggtggatcct gcggttcccc gtcttcctgg ccatcctgat caacttcttc    960
atcttcatcc gcattgttca cctgcttgtg gccaagctgc gggcgcggga gatgcaccac   1020
acagactaca agttccgact ggccaagtcc acactgaccc tcatccccct gctgggtgtc   1080
cacgaagtga tcttcgcctt cgtgacggac gagcacgccc agggcaccct gcgcttcgcc   1140
aagctcttct tcgacctctt cctcagctcc ttccagggcc tgctggtggc tgtcctctac   1200
tgcttcctca acaaggaggt gcagtcggaa cttcggcggc attggcaccg ctggcgcctg   1260
ggcaaagtgc tgcaggagga gcggggcacc agcaaccaca agaccccatc tgcgcctggc   1320
caaggccttc ctggcaagaa gctgcagtct gggaggggtg gtggcagcca ggactcatct   1380
gcggagatcc ccttggctgg tggcctccct aggttggctg agagcccctt ctga         1434
<210>8
<211>477
<212>PRT
<213>食蟹猴
<400>8
Met Pro Pro Cys Gln Pro Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Ala Cys Gln Pro Gln Ala Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu
            20                  25                  30
Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Gly Asp Gln Cys His His Asn Leu Ser
        35                  40                  45
Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp Lys
    50                  55                  60
Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser
65                  70                  75                  80
Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val
                85                  90                  95
Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly
            100                 105                 110
Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys Gln Met Asp Gly Glu Glu Leu
        115                 120                 125
Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Phe Gln Val Met
    130                 135                 140
Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu
145                 150                 155                 160
Ala Ile Leu Gly Gly Ile Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile
                165                 170                 175
His Ala Asn Leu Phe Val Ser Phe Val Leu Lys Ala Ser Ser Val Leu
            180                 185                 190
Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly Asp
        195                 200                 205
Asp Leu Ser Val Ser Ile Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys
    210                 215                 220
Arg Val Ala Ala Val Phe Met Gln Tyr Gly Val Val Ala Asn Tyr Cys
225                 230                 235                 240
Trp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala
                245                 250                 255
Thr Leu Pro Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly Trp
            260                 265                 270
Gly Ala Pro Met Leu Phe Ile Ile Pro Trp Val Val Val Arg Cys Leu
        275                 280                 285
Phe Glu Asn Ile Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp
    290                 295                 300
Trp Ile Leu Arg Phe Pro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe
305                 310                 315                 320
Ile Phe Ile Arg Ile Val His Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala Arg
                325                 330                 335
Glu Met His His Thr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu
            340                 345                 350
Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Ile Phe Ala Phe Val
        355                 360                 365
Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Phe Ala Lys Leu Phe Phe
    370                 375                 380
Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu Tyr
385                 390                 395                 400
Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu Arg Arg His Trp His
                405                 410                 415
Arg Trp Arg Leu Gly Lys Val Leu Gln Glu Glu Arg Gly Thr Ser Asn
            420                 425                 430
His Lys Thr Pro Ser Ala Pro Gly Gln Gly Leu Pro Gly Lys Lys Leu
        435                 440                 445
Gln Ser Gly Arg Gly Gly Gly Ser Gln Asp Ser Ser Ala Glu Ile Pro
    450                 455                 460
Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala Glu Ser Pro Phe
465                 470                 475
<210>9
<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>9
aggtctagtc agagcctctt ggatagagat gatggagaca cctatttgga c    51
<210>10
<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>10
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Arg Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu
1               5                   10                  15
Asp
<210>11
<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>11
aggtctagtc agagcctctt ggatagtgct gatggagaca cctatttgga c    51
<210>12
<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>12
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Ala Asp Gly Asp Thr Tyr Leu
1               5                   10                  15
Asp
<210>13
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>13
cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc       33
<210>14
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>14
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1               5                   10
<210>15
<211>36
<212>DNA
<213>人
<400>15
agggccagtc agagtgttag cagcaactac ttagcc    36
<210>16
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>16
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>17
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>17
cgggcaagtc aggacattag aaatgatttt ggc                         33
<210>18
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>18
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp Phe Gly
1               5                   10
<210>19
<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>19
gggtctactc agagcctctt ggatagtgat gatggagaca cctatttgga c    51
<210>20
<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>20
Arg Ser Thr Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu
1               5                   10                  15
Asp
<210>21
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>21
caggcgagtc aggacattag taagtattta aat                       33
<210>22
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>22
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>23
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>23
tctggagata aattggggga taaatatgtt tgc    33
<210>24
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>24
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val Cys
1               5                   10
<210>25
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>25
tctggagata aattggggga taaatatgct tgc    33
<210>26
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>26
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Cys
1               5                   10
<210>27
<211>39
<212>DNA
<213>人
<400>27
acccgcagca gtggcagcat tgtcagcaac tttgtgcaa    39
<210>28
<211>13
<212>PRT
<213>人
<400>28
Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Ser Asn Phe Val Gln
1               5                   10
<210>29
<211>39
<212>DNA
<213>人
<400>29
actggaatca cctccaacat cggaagcaat actgtacac    39
<210>30
<211>13
<212>PRT
<213>人
<400>30
Thr Gly Ile Thr Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val His
1               5                   10
<210>31
<211>39
<212>DNA
<213>人
<400>31
tctggaagca ggtccaacat cggaagtaat tatgtatac    39
<210>32
<211>13
<212>PRT
<213>人
<400>32
Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr
1               5                   10
<210>33
<211>42
<212>DNA
<213>人
<400>33
actgggagca gctccaacat cggggcaggt tatgctgtac ac          42
<210>34
<211>14
<212>PRT
<213>人
<400>34
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Ala Val His
1               5                   10
<210>35
<211>48
<212>DNA
<213>人
<400>35
aagtctagtc agagcctcct gcatagtgat ggaaagaact atttgttt    48
<210>36
<211>16
<212>PRT
<213>人
<400>36
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Phe
1               5                   10                  15
<210>37
<211>48
<212>DNA
<213>人
<400>37
aggtctagtc agagcctcct gcatagtaat ggatacaact atttggat    48
<210>38
<211>16
<212>PRT
<213>人
<400>38
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1               5                   10                  15
<210>39
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>39
cgggcaagtc agggcattag aaatgattta ggc    33
<210>40
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>40
cgggcgagtc agggtattag cagctggtta gcc    33
<210>41
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>41
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>42
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>42
acgctttcct atcgggcctc t                 21
<210>43
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>43
Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser
1               5
<210>44
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>44
gctgcatcca gtttgcaaag t    21
<210>45
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>45
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>46
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>46
gctgcctcca gtttgcaaag t    21
<210>47
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>47
ggtgcatcca gcagggccac t    21
<210>48
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>48
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210>49
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>49
gctgcatcca gtttggaaag t    21
<210>50
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>50
Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>51
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>51
gatgcatcca atttggaaac a    21
<210>52
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>52
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1               5
<210>53
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>53
caaacttcca agcggccctc a    21
<210>54
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>54
Gln Thr Ser Lys Arg Pro Ser
1               5
<210>55
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>55
caatctacca agcggccctc a    21
<210>56
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>56
Gln Ser Thr Lys Arg Pro Ser
1               5
<210>57
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>57
gaggataacc aaagaccctc t    21
<210>58
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>58
Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1               5
<210>59
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>59
agtaataatc agcggccctc a    21
<210>60
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>60
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1               5
<210>61
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>61
aggaataatc agcggccctc a    21
<210>62
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>62
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1               5
<210>63
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>63
gataacaaca atcggccctc a    21
<210>64
<211>6
<212>PRT
<213>人
<400>64
Asp Asn Asn Asn Arg Pro
1               5
<210>65
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>65
gaagtttcct accggttctc t    21
<210>66
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>66
Glu Val Ser Tyr Arg Phe Ser
1               5
<210>67
<211>21
<212>DNA
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<400>67
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<212>PRT
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<211>21
<212>DNA
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<211>7
<212>PRT
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<212>DNA
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<212>PRT
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Ser Tyr Ala Met Asn
1               5
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<212>DNA
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<212>DNA
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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tttatatggt atgatggaag tgaaaaatat tatgtagact ccgtgaaggg c    51
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<211>17
<212>PRT
<213>人
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Phe Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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<212>PRT
<213>人
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Val Ile Ser Asp Asp Gly Ser His Lys Tyr Ser Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>131
gaaatatgga atgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg c     51
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<212>PRT
<213>人
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Glu Ile Trp Asn Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
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gtgatatcac atgatggaag tgataaatac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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ggtatatggt atgatggaag gaataaatac tatgtagact ccgtgaaggg c     51
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>54
<212>DNA
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<212>PRT
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Arg Ser
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>141
tttatatcag atgatggaag taataaatat tatggagact ccgtgaaggg c    51
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>142
gttatatcat atgatggaag taataaatac tatggagact ccgtgaaggg c    51
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<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>143
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>144
gttatatggt atgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
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<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>145
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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cttatatcat ttgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
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<212>PRT
<213>人
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Leu Ile Ser Phe Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>148
tggatcatcc ctgacagtgg tggcacaaag tatgcacaga agtttcaggg c    51
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<212>PRT
<213>人
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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tggatcggcg tttacaatgg tcacacaaaa tatgcacaga agttccaggg c    51
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<211>17
<212>PRT
<213>人
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Trp Ile Gly Val Tyr Asn Gly His Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
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<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>152
gaagtttcct accggttctc t                                     21
<210>153
<211>17
<212>PRT
<213>人
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Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
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attatatggt ctgatggaat taacaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
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<212>PRT
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Ile Ile Trp Ser Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
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aacattaata gtaggagtag tctcatatac tacacagact ctgtgaaggg c    51
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<212>PRT
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Asn Ile Asn Ser Arg Ser Ser Leu Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
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tacattggta gtagtagtag tgccatatac tacggagact ctgtgaaggg c    51
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<212>PRT
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Tyr Ile Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
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tctatatggt atgatggaag taataaatat tatgtagact ccgtgaaggg c    51
<210>161
<211>17
<212>PRT
<213>人
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Ser Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>162
tacattggta gtagtagtag tgccatatac tacgcagact ctgtgaaggg c    51
<210>163
<211>17
<212>PRT
<213>人
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Tyr Ile Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211>21
<212>DNA
<213>人
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cttggtggtg gttttgacta c                                     21
<210>165
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>165
Leu Gly Gly Gly Phe Asp Tyr
1               5
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<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>166
atgggaggcg gctttgacta c                                            21
<210>167
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>167
Met Gly Gly Gly Phe Asp Tyr
1               5
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<212>DNA
<213>人
<400>168
gaaaaagatc attacgacat tttgactggt tataactact actacggtct ggacgtc    57
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<212>PRT
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Leu Asp Val
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<212>DNA
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<212>PRT
<213>人
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Glu Glu Thr Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr His His Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
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<213>人
<400>172
gagcctcagt attacgatat tttgactggt tatgataact actacggtat ggacgtc    57
<210>173
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>173
Glu Pro Gln Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asp Asn Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210>174
<211>57
<212>DNA
<213>人
<400>174
gaaaaaccgt attacgatat tttgactggt tatttctact actatggtat ggacgtc    57
<210>175
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>175
Glu Lys Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Phe Tyr Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210>176
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>176
ttagcagtgg cctttgacta c                     21
<210>177
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>177
Leu Ala Val Ala Phe Asp Tyr
1               5
<210>178
<211>36
<212>DNA
<213>人
<400>178
gaagatggca gtggctggta cggtgctttt gacatc    36
<210>179
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>179
Glu Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Ile
1               5                   10
<210>180
<211>48
<212>DNA
<213>人
<400>180
gatcaatacg atattttgac tggttattct tctgatgctt ttgatatc                 48
<210>181
<211>16
<212>PRT
<213>人
<400>181
Asp Gln Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ser Asp Ala Phe Asp Ile
1               5                   10                  15
<210>182
<211>60
<212>DNA
<213>人
<400>182
gcctattacg atattttgac tgattacccc cagtatgact actactacgg tatggacgtc    60
<210>183
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>183
Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Pro Gln Tyr Asp Tyr Tyr Tyr
1               5                   10                  15
Gly Met Asp Val
            20
<210>184
<211>51
<212>DNA
<213>人
<400>184
gatgggtatt acgatatttt gactggttat gaggatgatg cttttgatat c             51
<210>185
<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>185
Asp Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Glu Asp Asp Ala Phe Asp
1               5                   10                  15
Ile
<210>186
<211>60
<212>DNA
<213>人
<400>186
gaagggtttc attacgatat tttgactggt tcctacttct actactacgg tatggacgtc    60
<210>187
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>187
Glu Gly Phe His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Ser Tyr Phe Tyr Tyr Tyr
1               5                   10                  15
Gly Met Asp Val
            20
<210>188
<211>30
<212>DNA
<213>人
<400>188
agggtagcag tggctgggta ctttgactac                                    30
<210>189
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>189
Arg Val Ala Val Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>190
<211>27
<212>DNA
<213>人
<400>190
atgcaaaata tacagcctcc tctcacc    27
<210>191
<211>18
<212>PRT
<213>人
<400>191
Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Tyr Glu Tyr Tyr Tyr His Tyr Gly Met
1               5                   10                  15
Asp Val
<210>192
<211>57
<212>DNA
<213>人
<400>192
gagagaggcc tctacgatat tttgactggt tattataact actacggtat tgacgtc    57
<210>193
<211>19
<212>PRT
<213>人
<400>193
Glu Arg Gly Leu Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Ile Asp Val
<210>194
<211>39
<212>DNA
<213>人
<400>194
gatcagtata actggaacta ctactacggt atggacgtc    39
<210>195
<211>13
<212>PRT
<213>人
<400>195
Asp Gln Tyr Asn Trp Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1               5                   10
<210>196
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>196
tatagaagtg gctggtcccc cctctttgac ttc          33
<210>197
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>197
Tyr Arg Ser Gly Trp Ser Pro Leu Phe Asp Phe
1               5                   10
<210>198
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>198
tatagcagtg gctggtcccc cctctttgac tac         33
<210>199
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>199
Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Pro Leu Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>200
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>Ser或Thr
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>Arg或Ser
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>Asp或Ala
<400>200
Arg Ser Xaa Gln Ser Leu Leu Asp Xaa Xaa Asp Gly Thr Tyr Thr Leu
1               5                   10                  15
Asp
<210>201
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(5)..(5)
<223>Gly或Asp
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>Leu或Phe
<400>201
Arg Ala Ser Gln Xaa Ile Arg Asn Asp Xaa Gly
1               5                   10
<210>202
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>Val或Ala
<400>202
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Xaa Cys
1               5                   10
<210>203
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ser或Thr
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>Gly或Asp
<400>203
Xaa Tyr Xaa Met His
1               5
<210>204
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(6)..(6)
<223>Glu或Gln
<400>204
Ala Ala Ser Ser Leu Xaa Ser
1               5
<210>205
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)..(2)
<223>Ser或Thr
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>Thr或Ser
<400>205
Gln Xaa Xaa Lys Arg Pro Ser
1               5
<210>206
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ser，Phe，Val或Gln
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>Tyr或Asn
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>Asn或Gln
<220>
<221>MOD_RES
<222>(12)..(12)
<223>Val或Ala
<400>206
Xaa Ile Trp Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Xaa Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>207
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Val或Phe
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>His，Asp或Tyr
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>Asp，Asn或His
<220>
<221>MOD_RES
<222>(11)..(11)
<223>Tyr或Ser
<220>
<221>MOD_RES
<222>(12)..(12)
<223>Ala或Gly
<400>207
Xaa Ile Ser Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Xaa Xaa Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>208
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>His或Gln
<220>
<221>MOD_RES
<222>(6)..(6)
<223>Asn，Asp或Tyr
<400>208
Leu Gln Xaa Asn Ser Xaa Pro Leu Thr
1               5
<210>209
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(6)..(6)
<223>Asn或Ser
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>Ile或Val
<400>209
Gln Ala Trp Asp Ser Xaa Thr Val Xaa
1               5
<210>210
<211>19
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)..(2)
<223>Lys，Glu或Pro
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>Asp，Thr，Gln或Pro
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>His或Tyr
<220>
<221>MOD_RES
<222>(12)..(12)
<223>Asn，His，Asp或Phe
<220>
<221>MOD_RES
<222>(13)..(13)
<223>Tyr，His或Asn
<220>
<221>MOD_RES
<222>(17)..(17)
<223>Leu或Met
<400>210
Glu Xaa Xaa Xaa Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Xaa Xaa Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Xaa Asp Val
<210>211
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的一致序列
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Leu或Met
<400>211
Xaa Gly Gly Gly Phe Asp Tyr
1               5
<210>212
<211>339
<212>DNA
<213>人
<400>212
gatattgtgc tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc     60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcttg gatagagatg atggagacac ctatttggac    120
tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatacgct ttcctatcgg    180
gcctctggag tcccagacag gttcagtggc agtgggtcag gcactgattt ctcactgaaa    240
atcagcaggg tggaggctga ggatgttgga gtttattact gcatgcaacg tatagagttt    300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           339
<210>213
<211>113
<212>PRT
<213>人
<400>213
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Arg
            20                  25                  30
Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                85                  90                  95
Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>214
<211>323
<212>DNA
<213>人
<400>214
agactccact ctccctgccc gtcacccctg gagagccggc ctccatctcc tgcaggtcta     60
gtcagagcct cttggatagt gctgatggag acacctattt ggactggtac ctgcagaagc    120
cagggcagtc tccacagctc ctgatctata cgctttccta tcgggcctct ggagtcccag    180
acaggttcag tggcagtggg tcagacactg atttctcact gaaaatcagc agggtggagg    240
ctgaggatgt tggagtttat tactgcatgc aacgtataga gtttccattc actttcggcc    300
ctgggaccaa agtggatatc aaa                                            323
<210>215
<211>113
<212>PRT
<213>人
<400>215
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Ala Asp Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Asp Phe Ser Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                85                  90                  95
Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>216
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>216
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag tgtgcagcct    240
gaagattttg taacttatta ctgtctacag cataatagta accctctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
<210>217
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>217
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>218
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>218
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag tctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagta accctctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
<210>219
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>219
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>220
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>220
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ttgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gctctatgct gcctccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtgggtc tgggtcagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtg acccgctcac cttcggccaa    300
gggacacgac tggagattaa a                                              321
<210>221
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asp Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>222
<211>324
<212>DNA
<213>人
<400>222
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ttccagggga aagagccacc     60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaactact tagcctggta ccagcagaaa    120
tctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca    180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag    240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcaa caatatggta actcaccatt cactttcggc    300
cctgggacca atgtggatat caaa                                           324
<210>223
<211>108
<212>PRT
<213>人
<400>223
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Phe Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro
                85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Asn Val Asp Ile Lys
            100                 105
<210>224
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>224
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
gtcacttgcc gggcaagtca ggacattaga aatgattttg gctggtatca gcaaaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag caaaatagtt acccgctcac tttcggggga    300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                              321
<210>225
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>225
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Phe Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gln Asn Ser Tyr Pro Leu
                 85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>226
<211>339
<212>DNA
<213>人
<400>226
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc     60
atctcctgca ggtctactca gagcctcttg gatagtgatg atggagacac ctatttggac    120
tggtacctgc agaagccggg gcagtctcca cagctcctga tctatacgct ttcctatcgg    180
gcctctggag tcccagacag gttcagtggc agtgggtcag gcactgattt cacactgaaa    240
atcagcaggg tggaggctga ggatgttgga gtttattact gcatgcaacg tatagagttt    300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           339
<210>227
<211>113
<212>PRT
<213>人
<400>227
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Thr Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                85                  90                  95
Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>228
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>228
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tggaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag tgtgcagcct    240
gaagattttg taacttatta ctgtctacag cataatagta accctctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
<210>229
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>229
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>230
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>230
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagt aagtatttaa attggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagctcct catctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca    180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct    240
gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tatggtaatc tcccgatcac cttcggccaa    300
gggacacgac tggagagtaa a                                              321
<210>231
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>231
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Ile
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ser Lys
            100                 105
<210>232
<211>318
<212>DNA
<213>人
<400>232
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc     60
acctgctctg gagataaatt gggggataaa tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc    120
cagtcccctg tgctggtcat ctatcaaact tccaagcggc cctcagggat ccctgagcgg    180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg    240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcaaca ctgtgatttt cggcggaggg    300
accaagctga ccgtccta                                                  318
<210>233
<211>106
<212>PRT
<213>人
<400>233
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val
            20                  25                  30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
        35                  40                  45
Gln Thr Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Asn Thr Val Ile
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210>234
<211>318
<212>DNA
<213>人
<400>234
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc     60
acctgctctg gagataaatt gggggataaa tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc    120
cagtcccctg tgctggtcat ctatcaaact tccaagcggc cctcagggat ccctgagcgg    180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg    240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgtggtttt cggcggaggg    300
accaagctga ccgtccta                                                  318
<210>235
<211>106
<212>PRT
<213>人
<400>235
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val
            20                  25                  30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
        35                  40                  45
Gln Thr Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210>236
<211>318
<212>DNA
<213>人
<400>236
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc     60
acctgctctg gagataaatt gggggataaa tatgcttgct ggtatcagca gaagccaggc    120
cagtcccctg tactggtcat ctatcaatct accaagcggc cctcagggat ccctgagcgt    180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg    240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgtggtatt cggcggaggg    300
accaagctga ccgtccta                                                  318
<210>237
<211>106
<212>PRT
<213>人
<400>237
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
            20                  25                  30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
        35                  40                  45
Gln Ser Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210>238
<211>330
<212>DNA
<213>人
<400>238
aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc     60
tcctgcaccc gcagcagtgg cagcattgtc agcaactttg tgcaatggta ccagcagcgc    120
ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtccct    180
gatcggttct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga    240
ctgaagactg aggacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgataccag caatcaggtg    300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtcctg                                     330
<210>239
<211>110
<212>PRT
<213>人
<400>239
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Ser Asn
            20                  25                  30
Phe Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val
        35                  40                  45
Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65                  70                  75                  80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr
                85                  90                  95
Ser Asn Gln Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
<210>240
<211>330
<212>DNA
<213>人
<400>240
cagtctgtcc tgactcagcc acccccagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc    60
tcgtgtactg gaatcacctc caacatcgga agcaatactg tacactggta ccagcagttc    120
ccaggaacgg cccccaaaot cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct    180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag    240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg    300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta                                     330
<210>241
<211>110
<212>PRT
<213>人
<400>241
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Pro Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ile Thr Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val His Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
<210>242
<211>330
<212>DNA
<213>人
<400>242
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc    60
tcttgttctg gaagcaggtc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccaacagctc    120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct    180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg    240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag taggccggta    300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta                                     330
<210>243
<211>110
<212>PRT
<213>人
<400>243
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Ser Arg Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
<210>244
<211>330
<212>DNA
<213>人
<400>244
cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc     60
tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg ctgtacactg gtaccagcag    120
cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatgataaca acaatcggcc ctcaggggtc    180
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc    240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtgctata    300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta                                     330
<210>245
<211>110
<212>PRT
<213>人
<400>245
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
            20                  25                  30
Tyr Ala Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Ser Ala Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
<210>246
<211>336
<212>DNA
<213>人
<400>246
aatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc     60
atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaacta tttgttttgg    120
tacctacaga agccaggcca gtctccacag ctcctgatct atgaagtttc ctaccggttc    180
tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttctc attgaaaatc    240
agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaaatat acagcctcct    300
ctcaccttcg gccaagggac acgactggag attaaa                              336
<210>247
<211>112
<212>PRT
<213>人
<400>247
Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Tyr Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Asn
                85                  90                  95
Ile Gln Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>248
<211>336
<212>DNA
<213>人
<400>248
ggtattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc     60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg    120
tacttgcaga agccagggca gtctccgcag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc    180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc    240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tggaagctct tcaaactatg    300
tgcagttttg gccaggggac caagctggag atcaag                              336
<210>249
<211>112
<212>PRT
<213>人
<400>249
Gly Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Glu Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Met Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>250
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>250
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatct    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcaa cctgcagcct    240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctcgcag ttttggccag    300
gggaccaagc tggagatcaa a                                              321
<210>251
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>251
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Arg
                85                  90                  95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>252
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>252
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc     60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
cggttcagcg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
<210>253
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>253
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu  Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>254
<211>339
<212>DNA
<213>人
<400>254
gatattgtgc tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc     60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcttg gatagagatg atggagacac ctatttggac    120
tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatacgct ttcctatcgg    180
gcctctggag tcccagacag gttcagtggc agtgggtcag gcactgattt ctcactgaaa    240
atcagcaggg tggaggctga ggatgttgga gtttattact gcatgcaacg tatagagttt    300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa                           339
<210>255
<211>113
<212>PRT
<213>人
<400>255
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Arg
            20                  25                  30
Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                85                  90                  95
Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>256
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>256
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcgt ctgtagggga cagagtcacc     60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatact gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct    240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag tctaacagtt tcccgctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
<210>257
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>257
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>258
<211>348
<212>DNA
<213>人
<400>258
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc  60
tcctgtgcag cgtctggaat caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcatct atatggtatg atggaagtaa taaatattat 180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc ttcagagaca attccaagaa aacgctgtat 240
ctgcaaatga acaggctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacttggt 300
ggtggttttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca              348
<210>259
<211>116
<212>PRT
<213>人
<400>259
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ser Lys Lys Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Leu Gly Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>260
<211>348
<212>DNA
<213>人
<400>260
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggaat caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccagggt    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atatggtatg atggaagtga aaaatattat    180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaatggga    300
ggcggctttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca                 348
<210>261
<211>116
<212>PRT
<213>人
<400>261
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Phe Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Met Gly Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>262
<211>384
<212>DNA
<213>人
<400>262
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atgtggtatg atggaagtaa taaagactat    180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga accgcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagaaaaa    300
gatcattacg acattttgac tggttataac tactactacg gtctggacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca                                           384
<210>263
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>263
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>264
<211>467
<212>DNA
<213>人
<400>264
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atgtggtatg atggaagtaa taaagactat    180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga accgcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagaaaaa    300
gatcattacg acattttgac tggttataac tactactacg gtctggacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggcg    420
ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca gcggccctgg gctgcct                  467
<210>265
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>265
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>266
<211>384
<212>DNA
<213>人
<400>266
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggga tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg gtctggagtg ggtggcagtt atatcagatg atggaagtca taaatactct    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag aactgaggac tcggctgtgt attactgtgc gagagaggag    300
acgtattacg atattttgac tggctatcat cactactacg gtatggacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca    384
<210>267
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>267
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Asp Asp Gly Ser His Lys Tyr Ser Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Glu Thr Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr His His Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>268
<211>384
<212>DNA
<213>人
<400>268
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagaa atatggaatg atggaagtaa taaatactat    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atcccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagagcct    300
cagtattacg atattttgac tggttatgat aactactacg gtatggacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca                                           384
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<212>PRT
<213>人
<400>269
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Glu Ile Trp Asn Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Pro Gln Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asp Asn Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>270
<211>384
<212>DNA
<213>人
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tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgaca tgcactgggt ccgccaggct    120
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gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga gcagtttgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagaaaaa    300
ccgtattacg atattttgac tggttatttc tactactatg gtatggacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca                                           384
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<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>271
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Ser His Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Phe Tyr Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>272
<211>348
<212>DNA
<213>人
<400>272
caggtgcagt tggcggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtacag cgtctggaat caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaggt atatggtatg atggaaggaa taaatactat    180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa aacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaggttagca    300
gtggcctttg actactgggg ccagggaact ttggtcaccg tctcctca                 348
<210>273
<211>116
<212>PRT
<213>人
<400>273
Gln Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Gly Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Lys Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Leu Ala Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
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<211>384
<212>DNA
<213>人
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<210>275
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>275
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>276
<211>372
<212>DNA
<213>人
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cagttctccc tgcagttgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ttactgtaca    300
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accgtctctt ca                                                        372
<210>277
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<212>PRT
<213>人
<400>277
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
    50                  55                  60
Val Ser Val Arg Ser Arg Thr Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65                  70                  75                  80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
                85                  90                  95
Tyr Tyr Cys Thr Arg Glu Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Ala Phe Asp
            100                 105                 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>278
<211>374
<212>DNA
<213>人
<400>278
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cctctgggag caccttcaga agctatgaca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atatcagatg atggaagtaa taaatactat    180
ggagactccg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcaa    300
tacgatattt tgactggtta ttcttctgat gcttttgata tctggggcca agggacaatg    360
gtcaccgtct cttc                                                      374
<210>279
<211>125
<212>PRT
<213>人
<400>279
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Phe Ile Ser Asp Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ser Asp Ala Phe
            100                 105                 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
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<211>375
<212>DNA
<213>人
<400>280
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cctctgggag caccttcaga agctatgaca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atatcagatg atggaagtaa taaatattat    180
ggagactccg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
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tacgatattt tgactggtta ttcttctgat gcttttgata tctggggcca agggacaatg    360
gtcaccgtct cttca                                                     375
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<211>125
<212>PRT
<213>人
<400>281
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Phe Ile Ser Asp Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ser Asp Ala Phe
            100                 105                 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>282
<211>375
<212>DNA
<213>人
<400>282
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cctctggaag caccttcaga agctatgaca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat    180
ggagactccg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcaa    300
tacgatattt tgactggtta ttcttctgat gcttttgata tctggggcca agggacaatg    360
gtcaccgtct cttca                                                     375
<210>283
<211>125
<212>PRT
<213>人
<400>283
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ser Asp Ala Phe
            100                 105                 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>284
<211>387
<212>DNA
<213>人
<400>284
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcctat    300
tacgatattt tgactgatta cccccagtat gactactact acggtatgga cgtctggggc    360
caagggacca cggtcaccgt ctcctca                                        387
<210>285
<211>129
<212>PRT
<213>人
<400>285
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Asp Tyr Pro Gln Tyr Asp Tyr
            100                 105                 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
        115                 120                 125
Ser
<210>286
<211>378
<212>DNA
<213>人
<400>286
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ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatggg    300
tattacgata ttttgactgg ttatgaggat gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca    360
atggtcaccg tctcttca                                                  378
<210>287
<211>126
<212>PRT
<213>人
<400>287
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Leu Ile Ser Phe Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Glu Asp Asp Ala
            100                 105                 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>288
<211>387
<212>DNA
<213>人
<400>288
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc     60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactatt tgcactgggt gcgacaggcc    120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcatccctg acagtggtgg cacaaagtat    180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac    240
ttggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaaggg    300
tttcattacg atattttgac tggttcctac ttctactact acggtatgga cgtctggggc    360
caagggacca cggtcaccgt ctcctca                                        387
<210>289
<211>129
<212>PRT
<213>人
<400>289
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ile Pro Asp Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Gly Phe His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Ser Tyr Phe Tyr
            100                 105                 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
        115                 120                 125
Ser
<210>290
<211>357
<212>DNA
<213>人
<400>290
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc     60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagttgggc gcgacaggcc    120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcggcgttt acaatggtca cacaaaatat    180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac    240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccatat tttactgtgc gagaagggta    300
gcagtggctg ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca       357
<210>291
<211>119
<212>PRT
<213>人
<400>291
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Gly Val Tyr Asn Gly His Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Ile Phe Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Arg Val Ala Val Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>292
<211>381
<212>DNA
<213>人
<400>292
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agatatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtca taaatactat    180
gaagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attctaagaa cacgctgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agccgacgac acgggtgtgt attactgtgc gagagtcggg    300
tatggcagtg gctggtacga gtactattac cactacggta tggacgtctg gggccaaggg    360
accacggtca ccgtctcctc a                                              381
<210>293
<211>127
<212>PRT
<213>人
<400>293
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Tyr Glu Tyr Tyr Tyr His Tyr
            100                 105                 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>294
<211>384
<212>DNA
<213>人
<400>294
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtgacaatt atatggtctg atggaattaa caaatactat    180
gcagactccg tgaagggccg attcaccata tccagagaca attccaagaa cacgctgaat    240
ctgcaaatga acagtttgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagaga    300
ggcctctacg atattttgac tggttattat aactactacg gtattgacgt ctggggccaa    360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca                                           384
<210>295
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>295
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Thr Ile Ile Trp Ser Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Arg Gly Leu Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Tyr
            100                 105                 110
Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210>296
<211>366
<212>DNA
<213>人
<400>296
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt ggctatacct tgaactgggt ccgccaggct    120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcaaac attaatagta ggagtagtct catatactac    180
acagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt atttctgtgc gagagatcag    300
tataactgga actactacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc    360
tcctca                                                               366
<210>297
<211>122
<212>PRT
<213>人
<400>297
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Thr Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Asn Ile Asn Ser Arg Ser Ser Leu Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Tyr Asn Trp Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>298
<211>360
<212>DNA
<213>人
<400>298
gaggtgcggc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc    60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct    120
ccagggaagg ggctggagtg gatttcatac attggtagta gtagtagtgc catatactac    180
ggagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagatataga    300
agtggctggt cccccctctt tgacttctgg ggccagggaa gcctggtcac cgtctcctca    360
<210>299
<211>120
<212>PRT
<213>人
<400>299
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Arg Ser Gly Trp Ser Pro Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>300
<211>348
<212>DNA
<213>人
<400>300
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc     60
tcctgtgcag cgtctggaat caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct    120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcatct atatggtatg atggaagtaa taaatattat    180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc ttcagagaca attccaagaa aacgctgtat    240
ctgcaaatga acaggctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacttggt    300
ggtggttttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca                 348
<210>301
<211>116
<212>PRT
<213>人
<400>301
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ser Lys Lys Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Leu Gly Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>302
<211>360
<212>DNA
<213>人
<400>302
gaggtgcggc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc     60
tcctgtacag cctctggatt ccccttcaat agatatgcca tgaactgggt ccgccaggct    120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attggtagta gtagtagtgc catatactac    180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat    240
ctgcaaatga acagcctgag agatgaagac acggctgtgt attactgtgc gagatatagc    300
agtggctggt cccccctctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca    360
<210>303
<211>120
<212>PRT
<213>人
<400>303
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Pro Phe Asn Arg Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Pro Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>304
<211>321
<212>DNA
<213>人
<400>304
cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct     60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag    120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac    180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag    240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag    300
agcttcaaca ggggagagtg t                                              321
<210>305
<211>107
<212>PRT
<213>人
<400>305
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
        35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
    50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
                85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105
<210>306
<211>318
<212>DNA
<213>人
<400>306
ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa     60
gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg    120
gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa    180
caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag    240
tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg    300
gcccctacag aatgttca                                                  318
<210>307
<211>106
<212>PRT
<213>人
<400>307
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1               5                   10                  15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
            20                  25                  30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
        35                  40                  45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
    50                  55                  60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65                  70                  75                  80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
                85                  90                  95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
            100                 105
<210>308
<211>978
<212>DNA
<213>人
<400>308
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag     60
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg    120
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca    180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc    240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc    300
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc    360
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc    420
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc    480
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt    540
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc    600
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg    660
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac    720
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg    780
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac    840
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac    900
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc    960
tccctgtctc cgggtaaa    978
<210>309
<211>326
<212>PRT
<213>人
<400>309
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            100                 105                 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        115                 120                 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    130                 135                 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
                165                 170                 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
            180                 185                 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
        195                 200                 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    210                 215                 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
                245                 250                 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            260                 265                 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        275                 280                 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    290                 295                 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325
<210>310
<211>236
<212>PRT
<213>人
<400>310
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1               5                   10                  15
Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
        35                  40                  45
Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val
65                  70                  75                  80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
            100                 105                 110
His Asn Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
        115                 120                 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
    130                 135                 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145                 150                 155                 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
            180                 185                 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
        195                 200                 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
    210                 215                 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>311
<211>473
<212>PRT
<213>人
<400>311
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
            20                  25                  30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Val Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val
65                  70                  75                  80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
                85                  90                  95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr
        115                 120                 125
Asn Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
    130                 135                 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145                 150                 155                 160
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
                165                 170                 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
            180                 185                 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
        195                 200                 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly
    210                 215                 220
Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225                 230                 235                 240
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
                245                 250                 255
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
            260                 265                 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
        275                 280                 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
    290                 295                 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305                 310                 315                 320
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
                325                 330                 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
            340                 345                 350
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
        355                 360                 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
    370                 375                 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385                 390                 395                 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                405                 410                 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
            420                 425                 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
        435                 440                 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
    450                 455                 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210>312
<211>236
<212>PRT
<213>人
<400>312
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1               5                   10                  15
Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
        35                  40                  45
Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val
65                  70                  75                  80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
            100                 105                 110
His Asn Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
        115                 120                 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
    130                 135                 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145                 150                 155                 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
            180                 185                 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
        195                 200                 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
    210                 215                 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>313
<211>54
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>313
aagctcgagg tcgactagac caccatggac atgagggtcc ccgctcagct cctg    54
<210>314
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的肽
<400>314
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu
1               5                   10
<210>315
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>315
aaccgtttaa acgcggccgc tcaacactct cccctgttga a                  41
<210>316
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的肽
<400>316
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
1               5
<210>317
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>317
aagctcgagg tcgactagac caccatggag tttgggctga gctgggtttt c    51
<210>318
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的肽
<400>318
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe
1               5
<210>319
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>319
gaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtctt       48
<210>320
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>320
aagaccgatg ggcccttggt ggaggctgag gagacggtga ccgtggtc    48
<210>321
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的肽
<400>321
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
1               5                   10                  15
Phe
<210>322
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的引物
<400>322
aaccgtttaa acgcggccgc tcatttaccc ggagacaggg a           41
<210>323
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：合成的肽
<400>323
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
1               5
<210>324
<211>15
<212>DNA
<213>人
<400>324
ggctatacct tgaac    15

Claims (35)

1.包含选自以下的氨基酸序列的分离的抗原结合蛋白：
a.包含选自以下序列的轻链CDR3：
i.与选自L1-L23的轻链CDR3序列，SEQ ID NOs：72；74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100的CDR3序列相差总共不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；
ii.L Q X21 N S X22 P L T(SEQ ID NO：208)；
iii.Q A W D S X23 T V X24(SEQ ID NO：209)；
b.包含选自以下序列的重链CDR3序列：
i.与选自H1-H23的重链CDR3序列，SEQ ID NOs：165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199的CDR3序列相差总共不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列；
ii.E X25 X26 X27 Y D I L T G Y X28 X29 Y Y G X30 D V(SEQID NO：210)
iii.X31 G G G F D Y(SEQ ID NO：211)；或
c.(a)的轻链CDR3序列和(b)的重链CDR3序列；
其中，
X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，
X22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，
X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，
X24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，
X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，
X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基，
X27为组氨酸残基或酪氨酸残基，
X28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基，
X29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，
X30为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，
X31为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
2.权利要求1的分离的抗原结合蛋白，其包含选自以下的氨基酸序列：
a.选自以下的轻链CDR1序列：
i.与L1-L23的CDR1序列，SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1；
ii.R S X1 Q S L L D X2 X3 D G T Y T L D(SEQ ID NO：200)
iii.R A S Q X4 I R N D X5 G(SEQ ID NO：201)；及
iv.S G D K L G D K Y X6 C(SEQ ID NO：202)；其中
X1为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，
X3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，
X4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，
X5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基，
X6为缬氨酸残基或丙氨酸残基，
b.选自以下的轻链CDR2序列：
i.与L1-L23的CDR2序列，SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2；
ii.A A S S L X9 S(SEQ ID NO：204)；及
iii.Q X10 X11 K R P S(SEQ ID NO：205)；其中
X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，
X10为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X11为苏氨酸残基或丝氨酸残基，
c.选自以下的重链CDR1序列：
i.与H1-H23的CDR1序列，SEQ ID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1；
ii.X7 Y X8 M H(SEQ ID NO：203)，其中
X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，
X8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基；及
d.选自以下的重链CDR2：
i.与H1-H23的CDR2序列，SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链序列；
ii.X12 I W X13 D G S X14 K Y Y X15 D S V K G(SEQ ID NO：206)；
iii.X16 I S X17 D G S X18 K Y X19 X20 D S V K G(SEQ ID NO：207)；
其中
X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，
X13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，
X14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，
X15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，
X16为缬氨酸残基或苯丙氨酸残基，
X17为组氨酸残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，
X18为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基，
X19为酪氨酸残基或丝氨酸残基，
X20为丙氨酸残基或甘氨酸残基，
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
3.权利要求1的分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一：
a.包含以下的轻链可变结构域：
i.选自SEQ ID NOs：10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的轻链CDR1序列；
ii.选自SEQ ID NOs：43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的轻链CDR2序列；
iii.选自SEQ ID NOs：72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的轻链CDR3序列；以及
b.包含以下的重链可变结构域：
i.选自SEQ ID NOs：102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122的重链CDR1序列；
ii.选自SEQ ID NOs：124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重链CDR2序列；以及
iii.选自SEQ ID NOs：165、167、169、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重链CDR3序列；或
c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
4.分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一：
a.选自以下的轻链可变结构域序列：
i.具有与选自L1-L23的轻链可变结构域序列，SEQ ID NOs：213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257至少80％相同的序列的氨基酸；
ii具有与编码L1-L23的轻链可变结构域序列，SEQ ID NOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256至少80％相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；
iii.由在中等严格条件下与L1-L23轻链可变结构域序列，SEQID NOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；
b.选自以下的重链可变结构域序列：
i.与H1-H23的重链可变结构域序列，SEQ ID NOs：259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303至少80％相同的氨基酸序列；
ii与编码H1-H23的重链可变结构域序列，SEQ ID NOs：258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302的多聚核苷酸序列至少80％相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；
iii.由在中等严格条件下与H1-H23重链可变结构域序列，SEQ ID NOs：258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；或
c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
5.权利要求4的分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一：
a.选自L1-L23：SEQ ID NOs：213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257的轻链可变结构域序列；
b.选自H1-H23：SEQ ID NOs：259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303的重链可变结构域序列；或
c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
6.权利要求5的抗原结合蛋白，其中所述轻链可变结构域与重链可变结构域选自组合L1H1、L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23。
其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。
7.权利要求6的抗原结合蛋白，其进一步包含：
a.SEQ ID NO：305的轻链恒定序列；
b.SEQ ID NO：307的轻链恒定序列；
c.SEQ ID NO：309的重链恒定序列；
d.SEQ ID NO：305的轻链恒定序列和SEQ ID NO：309的重链恒定序列，或
e.SEQ ID NO：307的轻链恒定序列和SEQ ID NO：309的重链恒定序列。
8.权利要求1或4的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白选自人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原结合抗体片段、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、Fab片段、F(fa’)x片段、结构域抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和在铰链区至少具有一个突变的IgG4抗体。
9.权利要求8的抗原结合蛋白，其中所述结合蛋白为人类抗体。
10.权利要求1或4的抗原结合蛋白，当其与人胰高血糖素受体结合时：
a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；
b.以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；或
c.在人胰高血糖素受体上与所述参比抗体交叉竞争结合，
其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L11H11、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的轻链和重链可变结构域序列的组合。
11.分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时：
a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；
b.以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；或
c.在人胰高血糖素受体上与所述参比抗体交叉竞争结合，
其中所述参比抗体选自A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-11、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22。
12.权利要求11的分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时：
a.与人胰高血糖素受体的氨基酸Ser80至Ser119特异性结合；
b.以90nM或更低的IC50值降低胰高血糖素信号传导；
c.在动物模型中降低血糖；
d.(a)和(b)二者，或
e.(a)、(b)和(c)。
13.权利要求12的抗体，其中所述动物为ob/ob小鼠模型。
14.一种药用组合物，其包含与药用可接受载体混合的权利要求1或4的抗原结合蛋白。
15.一种药用组合物，其包含与药用可接受载体混合的权利要求11或12的人类抗体。
16.一种分离的核酸，其包含编码权利要求1或5的抗原结合剂的轻链可变结构域、重链可变结构域或二者的多聚核苷酸序列。
17.权利要求16的分离的核酸，其中序列选自L1-L23，SEQ IDNOs：212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256；H1-H23，SEQ ID NOs：258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302，或二者。
18.一种重组表达载体，其包含权利要求16的核酸。
19.一种宿主细胞，其包含权利要求18的载体。
20.一种杂交瘤，其能够生产权利要求9的抗体。
21.生产与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白的方法，其包括在允许表达所述抗原结合蛋白的条件下培养权利要求19的宿主细胞。
22.降低需要治疗的受试者的血糖的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。
23.提高需要治疗的受试者的葡萄糖耐受的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。
24.在需要治疗的受试者中预防或治疗2型糖尿病或相关病症的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。
25.权利要求24的方法，其中所述受试者为人受试者。
26.权利要求24的方法，其中所述相关病症为高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。
27.在需要治疗的受试者中降低血糖的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。
28.在需要治疗的受试者中提高葡萄糖耐受的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。
29.在需要治疗的受试者中预防或治疗2型糖尿病或相关病症的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。
30.权利要求29的方法，其中所述受试者是人受试者。
31.权利要求29的方法，其中所述相关病症为高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。
32.一种用于治疗2型糖尿病的试剂盒，其包含权利要求14的组合物。
33.一种用于治疗2型糖尿病的试剂盒，其包含权利要求15的组合物。
34.权利要求14或15的药用组合物在制备用于治疗可从降低血糖受益的病症的药物中的用途。
35.权利要求32的用途，其中所述病症选自2型糖尿病、高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。
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