CN101522907A - 制备崁非醇-3-o-芸香糖苷的方法和含崁非醇-3-o-芸香糖苷的皮肤外用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于制备崁非醇－3－O－芸香糖苷的方法以及含有所述莰非醇－3－O－芸香糖苷作为活性成分的皮肤外用组合物。特别地，本发明涉及一种通过利用能够从植物提取物中的崁非醇－3－O－芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖的酶或微生物而进行水解来分离崁非醇－3－O－芸香糖苷的方法以及含有防止皮肤产生皱纹的莰非醇－3－O－芸香糖苷的皮肤外用组合物。

Description

制备崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法和含崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物
技术领域
本发明涉及一种用于制备具有以下化学式1的崁非醇-3-O-芸香糖苷(kaempferol-3-O-rutinoside)的方法以及含有崁非醇-3-O-芸香糖苷作为活性成分的皮肤外用组合物。更具体地，本发明涉及一种通过利用能够从植物提取物中的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物(kaempferol-3-O-rutinoside glycosides)中选择性地除去糖的酶或微生物而进行水解来分离出崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法，以及含有防止皮肤产生皱纹的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。
化学式1
Figure A200780038247D00051
背景技术
具有上述化学式1的崁非醇-3-O-芸香糖苷是黄酮醇的一种典型成分，它是一种类黄酮并广泛地分布在植物的花和叶中(Redox Report(氧化还原作用报导)，4，13-16，1999)。特别地，崁非醇-3-O-芸香糖苷是一种具有优异的生理活性(例如：抗氧化)(Redox Report，Vol.4，No.3，1999)并可以改进血液循环(Biol.Pharm.Bull.(生物药学通讯)25(4)，505-508，2002)的物质。因此，已经对崁非醇-3-O-芸香糖苷的各种功效进行了研究，并已经将崁非醇-3-O-芸香糖苷应用到各种领域中。然而，由于目前所用的崁非醇-3-O-芸香糖苷大多仅以数ppm到数十ppm的含量包含于植物提取物中，因此难以展现崁非醇-3-O-芸香糖苷的实际功效。此外，由于难以找到含有大量崁非醇-3-O-芸香糖苷的植物，并且用来制备大量的崁非醇-3-O-芸香糖苷的分离和提纯也没有经济效益，因此崁非醇-3-O-芸香糖苷的大量生产的研究很少。
同时，表皮(external skin)包括真皮组织的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)组分以及胶原蛋白，基于所述ECM的总量，所述胶原蛋白占约70-80％。皮肤皱纹的形成是由于年龄增长或紫外(UV)光而导致的胶原蛋白的产生量的减少或胶原蛋白的破坏。特别地，诸如胶原酶的基质金属蛋白酶(matrix metallo protease)的表达导致了正常产生的胶原蛋白的降解，从而产生了皱纹。
已经开发和利用了各种物质来抑制胶原蛋白的减少，这种胶原蛋白的减少是皱纹产生的源头。例如视黄醇、视黄酸等的类维生素A物质(retinoidmaterials)表现出优异的抗皱效果(Dermatology therapy(皮肤病学治疗)，1998，16，357-364)，并已经采用含有麦芽汁等的组合物来对胶原酶进行控制(日本专利No.5,105,693)。然而，即使在仅使用少量的类维生素A物质时，类维生素A物质也会刺激皮肤。而且，从天然产品中获得的物质以单纯的提取物的形式使用，并没有表现出各个成分的效果。因此，难以持续地保持并控制所述提取物的活性。
发明内容
本发明的发明人发现，不用于特定目的绿茶种子含有大量的配糖物，例如：山茶糖苷A(camelliaside A)和山茶糖苷B(camelliaside B)。由于该发现，本发明的发明人开发了一种用于大量生产具有优异的生理活性的崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法，并且还证实了所述崁非醇-3-O-芸香糖苷具有优异的抗皱效果。
因此，本发明的目的是提供一种用于大量生产高纯度的将被用作化妆品和食品成分的崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法，并且本发明还提供一种含有抗皱效果优异的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。
为了实现该目的，本发明提供了一种制备具有以下化学式1的崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法，该方法包括通过利用能够从植物提取物中的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖的酶或微生物而进行水解来分离出崁非醇-3-O-芸香糖苷。
化学式1
Figure A200780038247D00071
本发明还提供了一种含有用来抗皱的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。
以下，将对本发明进行详细地描述。
用来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法包括：
(1)使用水和有机溶剂中的一种来获取含有崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的植物提取物；以及
(2)利用酶和微生物中的一种从处于所述提取物内的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖以分离出崁非醇-3-O-芸香糖苷。
为了利用水或有机溶剂从步骤(1)中的植物(特别是绿茶(茶树(Camelliasinensis)))中获取含有崁非醇-3-O-芸香糖苷或者崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的植物提取物，将水或有机溶剂倒入绿茶叶或绿茶种子中约1-6次，优选约3次。随后通过在室温下对混合物进行1-5轮的搅拌以除去脂肪来对绿茶叶或绿茶种子进行提取。将水或有机溶剂倒入已除去了脂肪的绿茶叶或绿茶种子中约1-8次，优选约4次。将混合物在回流下提取1-5次，并在10-20℃下进行1-3天的沉降。然后通过过滤和离心将残渣和滤液分离，通过在减压下浓缩所分离的滤液以得到提取物，并且将该提取物悬浮在水中，用有机溶剂除去所述提取物的色素。接着，用有机溶剂对水层进行1-5次萃取。通过在减压下对得到的有机溶剂层进行浓缩来获得提取物，并且随后将所述提取物溶解在少量的有机溶剂中。通过向混合物加入大量的有机溶剂而产生沉淀，并将所述沉淀干燥以获得含有本发明的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的提取物。
所述提取物含有崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物，特别是含有山茶糖苷A或山茶糖苷B。
所述有机溶剂可以为选自由乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯和三氯甲烷所组成的组中的至少一种溶剂，以及这些有机溶剂与水的混合物，优选地，可以使用80％的乙醇。
所述利用酶或微生物从位于所述提取物中的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖而分离出崁非醇-3-O-芸香糖苷的步骤(2)中，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷是利用酶或微生物由位于步骤(1)所制备的提取物中的均为崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的山茶糖苷A或山茶糖苷B而制备的。
从微生物等中获得降解糖键的酶。该酶可以为市场上商购的酶，也可以为根据需要而制备得到的酶。特别地，所述酶具有从所述崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖以分离出崁非醇-3-O-芸香糖苷的活性。
由山茶糖苷A来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷的反应在以下反应式1中示出。
反应式1
Figure A200780038247D00091
在以上反应中，通过从山茶糖苷A中选择性地除去吡喃半乳糖基的糖而得到崁非醇-3-O-芸香糖苷。用于从山茶糖苷A中除去所述糖的酶可以为选自由葡糖苷酶、纤维素酶、半乳糖苷酶和淀粉葡糖苷酶所组成的组中的至少一种酶。
由山茶糖苷B来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷的反应在以下反应式2中示出。
反应式2
Figure A200780038247D00092
在以上的反应中，通过从山茶糖苷B中选择性地除去吡喃木糖基的糖而得到崁非醇-3-O-芸香糖苷。用来从山茶糖苷B中除去所述糖的酶可以为选自由木糖苷酶、木聚糖酶和柚皮苷酶所组成的组中的至少一种酶。
用于反应式1和反应式2中的微生物可以为选自由曲霉属(aspergillussp.)、芽孢杆菌属(bacillus sp.)、青霉属(penicillium sp.)、根霉属(rhizopussp.)、根毛霉属(rhizomucor sp.)、篮状菌属(talaromyces sp.)、双歧杆菌属(bifidobacterium sp.)、被孢霉属(mortierella sp)、隐球菌属(cryptococcus sp.)以及微杆菌属(microbacterium sp.)所组成的组中至少一种微生物。
当酶或微生物进行反应时，pH值的范围优选为4.0-5.5。如果所述pH值低于4.0，则反应速率低，并且如果所述pH值超过5.5，则产量低。此外，当所述酶或微生物进行反应时，温度范围优选为30-50℃。如果所述温度低于30℃，则反应速率低，并且如果所述温度高于50℃，则酶的反应选择性降低。
作为底物的绿茶种子提取物的浓度范围优选为5-20％。如果所述浓度高于20％，则相对于所使用的量，酶或微生物的经济效率降低，并且如果所述浓度低于5％，则所述酶或微生物的反应速率低。
当所述酶或微生物进行反应时，反应的时间优选为48-76小时。
通过薄层色谱法(thin layer chromatography)来检查底物的消除速率。当底物被完全消除时，将混合物在热水(80-100℃)中加热5-15分钟以终止反应。将获得的反应溶液在减压下浓缩以除去溶剂，随后向残渣中加入醇并对混合物进行1-5轮搅拌。通过过滤除去沉淀的盐，并将滤液在减压下进行浓缩以获得粗产品。用硅胶柱色谱法(三氯甲烷：甲醇＝8：1-4：1)对得到的粗产品进行提纯，从而提供了纯净的崁非醇-3-O-芸香糖苷。
本发明提供了含有用来抗皱的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。
含有崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物通过将促进前胶原的产生和抑制胶原酶的表达活性相结合的协同作用而具有优异的抗皱效果，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷是根据上述方法从植物(特别是绿茶)中获得的。
基于所述组合物的总重量，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷的含量为0.0001-10重量％。如果所述崁非醇-3-O-芸香糖苷的含量低于0.0001重量％，则所述组合物不能获得该组分的抗皱效果，并且如果所述崁非醇-3-O-芸香糖苷的含量高于10重量％，则与所述崁非醇-3-O-芸香糖苷的使用量相比，抗皱效果并没有显著的增加。
根据本发明的崁非醇-3-O-芸香糖苷可以被配制成皮肤外用组合物，但不特别地限定于此类制剂。所述制剂可以包括：化妆品组合物，例如柔肤剂(skinsoftener)、营养水(nutrition water)、营养霜(nutrition cream)、按摩霜(massagecream)、精华素(essence)、眼霜(eye cream)、眼部精华素(eye essence)、清洁霜(cleansing cream)、清洁泡沫(cleansing foam)、清洁水(cleansingwater)、美容涂敷剂(pack)、粉剂(powder)、美体洗剂(body lotion)、美体霜(body cream)、美体油(body oil)、美体精华素(body essence)、化妆品底霜(makeup base)、粉底(foundation)、染发剂(hair-dyeing agent)、洗发香波(shampoo)、护发素(rinse)和沐浴露(body washing agent)等；以及药物组合物，例如药膏(ointment)、凝胶(gel)、霜剂(cream)、贴布(patch)和喷剂等。在各种制剂的组合物中，可以适当地加入用于制备这些制剂所需要的各种材料和添加剂。本领域技术人员可以轻松地选择所述成分的类型和含量。
根据本发明，从植物(特别是绿茶)中提取山茶糖苷A或山茶糖苷B，然后利用酶或微生物从山茶糖苷A或山茶糖苷B中选择性地除去所述糖以大量生产崁非醇-3-O-芸香糖苷，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷是主要的生理活性成分之一。所述崁非醇-3-O-芸香糖苷表现出对前胶原产生的促进作用以及对胶原酶的表达活性的抑制作用，通过将上述活性相结合的协同作用，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷具有优异的抗皱效果。本发明提供了一种含有用于抗皱的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。
具体实施方式
下面，用制备实施例、实施例以及实验实施例来更详细地描述本发明。然而，本发明不限于此。
制备实施例1：绿茶种子提取物的制备
将6L的己烷加入到2kg的绿茶种子中，并将混合物在室温下进行3轮搅拌以从被提取的绿茶种子中除去脂肪。将4L的80％的甲醇倒入1kg的除去了脂肪的种子中，在回流下对混合物进行3次提取并使得到的溶液在15℃下沉降1天。用滤布和离心进行过滤，将残渣和滤液分离。在减压下浓缩所分离的滤液，并且将该滤液悬浮在水中，随后分5次加入总量为1L的***，并进行萃取以除去色素。分三次加入总量为500ml的1-丁醇并除去水层。得到的余下的1-丁醇层在减压下进行浓缩以获得1-丁醇提取物。将所获得的提取物溶解在少量的甲醇中，并随后加入到大量的乙酸乙酯中，从而获得沉淀。将生成的沉淀干燥，从而获得250g的绿茶种子提取物。
实施例1：对选择性地水解山茶糖苷A的酶的筛选
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的醋酸缓冲溶液中(pH4.5)。向混合物中加入1.5g的酶，并且得到的混合物在37℃的水浴中反应24-48小时。利用具有C18反相柱(流动相为乙腈：水＝40：60)的高效液相色谱法(HPLC)在270nm的紫外(UV)波长下分析山茶糖苷A的转化率。实验中所用的酶以及转化率的结果示于下表1中。
表1
Figure A200780038247D00131
表1中的在48小时之后具有约50％的转化率的酶被认为是很有可能具有反应选择性的酶。因此，β-葡糖苷酶、淀粉葡糖苷酶、纤维素酶-A以及β-半乳糖苷酶包含于在所述糖的选择性消除反应中具有高度选择性的候选组中。
实施例2：对选择性地水解山茶糖苷B的酶的筛选
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的醋酸缓冲溶液中(pH4.5)。向混合物中加入1.5g的酶，并使得到的混合物在37℃的水浴中反应24-48小时。利用具有C18反相柱(流动相为乙腈：水＝40：60)的HPLC在270nm的UV波长下分析山茶糖苷B的转化率。
实验中所用的酶以及转化率的结果示于下表2中。
表2
Figure A200780038247D00141
表2中的在48小时之后具有约50％的转化率的酶被认为是很有可能具有反应选择性的酶。因此，β-木糖苷酶、木聚糖酶以及柚皮苷酶包含于在所述糖的选择性消除反应中具有高度选择性的候选组中。
实验实施例1：崁非醇-3-O-芸香糖苷的转化率根据温度的变化
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的醋酸缓冲溶液中(pH4.5)。向混合物中加入1.5g的来自于所述候选组的β-半乳糖苷酶，并确定处于各个温度下的水浴中的崁非醇-3-O-芸香糖苷的转化率。转化率的结果示于下表3中。
表3
 
反应温度(℃) 转化率(％)
25 79
30 92
35 98
40 97
45 94
50 91
确定崁非醇-3-O-芸香糖苷在30-50℃下具有很高的转化率。此外，在35℃下的转化率高于在30℃和40℃下的转化率，这表示在35℃之前，酶的活性随着温度的升高而增高。然而，在45℃以上转化率显著地降低，这是由于酶的不稳定性随着温度的升高而增高所导致的。
实验实施例2：崁非醇-3-O-芸香糖苷的转化率根据时间的变化
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的醋酸缓冲溶液中(pH4.5)。向混合物中加入1.5g的来自于所述候选组的β-半乳糖苷酶，并确定处于37℃的水浴中的崁非醇-3-O-芸香糖苷在各个反应时间下的转化率。转化率的结果示于下表4中。
表4
 
反应时间(小时) 转化率(％)
12 33
24 68
48 91
72 98
96 98
120 98
如表4中所示，在72小时后的转化率达到了98％，并且超过72小时后的转化率都很接近。
实验实施例3：崁非醇-3-O-芸香糖苷的转化率根据反应的pH值的变化
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的具有各种pH值的醋酸缓冲溶液中。向混合物中加入1.5g的来自于所述候选组的β-半乳糖苷酶，并确定处于37℃的水浴中的崁非醇-3-O-芸香糖苷在缓冲溶液的各种pH值下的转化率。转化率的结果示于下表5中。
表5
 
反应的pH值 转化率(％)
4.0 93
4.5 98
5.0 95
5.5 90
6.0 84
6.5 77
7.0 75
7.5 78
8.0 80
8.5 82
9.0 83
如表5中所示，pH值为4.0-5.5时，转化率高于或等于90％，并且最高转化率为98％，对应的pH值为4.5。
实验实施例4：崁非醇-3-O-芸香糖苷的转化率根据底物浓度的改变
将由制备实施例1获得的绿茶种子提取物的浓度在5-50％的范围内进行调整。向混合物中加入1.5g的来自于所述候选组的β-半乳糖苷酶，并确定处于37℃的水浴中崁非醇-3-O-芸香糖苷的在各种底物浓度下的转化率。转化率的结果示于下表6中。
表6
 
底物浓度(％) 转化率(％)
5.0 97
10.0 98
15.0 95
20.0 91
25.0 87
30.0 83
35.0 76
40.0 71
45.0 63
50.0 55
如表6所示，底物浓度为5-20％时，转化率高于90％，并且最高转化率为98％，对应的底物浓度为10％。
实验实施例5：崁非醇-3-O-芸香糖苷的鉴定
实施例1和实施例2以及实验实施例1-4中制备的产物表现出以下的特征，并因而被鉴定为崁非醇-3-O-芸香糖苷(Varian Gemini 2000 300MHz，Varian公司)
<崁非醇-3-O-芸香糖苷的物理化学特性>
性质：淡黄绿色微晶体
正离子快原子轰击质谱(Positive FAB-MS)：595[M+H]+
1H-NMR：6.31(1H，d，2，H6)、6.63(1H，d，2，H8)、7.03(2H，d，8，H3’，5’)、8.21(2H，d，8，H2’，6’)、12.04(1H，s，5-OH)、1.10(3H，d，4，Me-rha)、4.61(1H，brs，H1-rha)、5.20(1H，d，8，H1-glc)
13C-NMR：156.6、133.5、177.5、161.3、98.9、164.2、93.8、156.9、104.2、121.1、130.9、115.2、159.9、115.2、130.9、101.6、74.4、76.7、70.9、76.0、67.1、100.8、70.5、70.2、72.1、68.3、17.7
实施例3：通过山茶糖苷A的酶反应来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷
将10g的由制备实施例1获得的绿茶种子提取物溶解在100ml的0.1M的醋酸缓冲溶液中(pH 4.5)。向混合物中加入1.5g的酶，并使得到的混合物在37℃的水浴中反应48-75小时。相应的酶为β-葡糖苷酶(实施例3-1)、纤维素酶-A(实施例3-2)和β-半乳糖苷酶(实施例3-3)，并且利用各个酶来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷。然后，用薄层色谱法来检查底物的消除速率。当底物被完全消除时，将混合物在热水(80-100℃)中加热5-15分钟以终止反应。将反应溶液在减压下浓缩以除去溶剂，并将残渣加入到乙醇中，进行1-5轮搅拌。通过过滤除去产生的沉淀，并随后将滤液在减压下浓缩以获得粗产品。所获得的粗产品用硅胶柱色谱法(三氯甲烷：甲醇＝8：1-4：1)进行提纯，从而获得纯净的崁非醇-3-O-芸香糖苷。
实施例4：通过山茶糖苷B的酶反应来制备崁非醇-3-O-芸香糖苷
按照与实施例3相同的方法由山茶糖苷B制备崁非醇-3-O-芸香糖苷，并且所使用的酶为β-木糖苷酶(实施例4-1)、木聚糖酶(实施例4-2)以及柚皮苷酶(实施例4-3)。
实验实施例6：对胶原酶表达的抑制效果的测定
对由实施例3和实施例4获得的崁非醇-3-O-芸香糖苷所能达到的抑制胶原酶表达的效果进行测定，并与生育酚和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)所能达到的抑制胶原酶表达的效果进行比较。生育酚和EGCG是使皮肤的表皮细胞再生并防止皮肤老化的抗氧化物质。
将人的成纤维细胞以5000细胞/孔的量植入含有具有2.5％的胎牛血清的杜尔贝科改良的伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Media，DMEM)的96孔的微量滴定板中，并进行培养直到人的成纤维细胞生长了90％，然后在无血清的DMEM培养基中再培养24小时。将实施例3和实施例4的崁非醇-3-O-芸香糖苷、生育酚和EGCG以1×10-4M的浓度溶解在所述无血清的DMEM培养基中并处理24小时，收集所述细胞培养基。
用测量胶原酶的仪器(Amershampharmacia公司)来测定所收集的细胞培养基的胶原酶产生的程度。将所收集的细胞培养基加入到均匀涂敷有第一胶原酶抗体的96孔板上，并在恒温器中进行3小时的抗原-抗体反应。
3小时后，将键合有发色团的第二胶原酶抗体加入到96孔板中，进行15分钟的反应。15分钟之后，在室温下植入显色物质并持续15分钟以诱导显色，然后加入1M的硫酸以终止反应(显色)。反应溶液的颜色为黄色，并且所述黄色的色调的明暗程度可以根据反应进行的程度而不同。
通过对405nm处的吸光度进行测量来测定具有黄色的色调的96孔板的吸光度，并且通过以下等式1计算合成的程度。在该计算中，未用所述材料进行处理的细胞培养基的吸光度作为对照组。也就是说，未处理组的胶原酶表达的程度为100，并且与该对照组的吸光度进行比较得到用所述材料处理过的组的胶原酶表达的程度。结果示于表7中。
等式1
Figure A200780038247D00201
表7
Figure A200780038247D00202
胶原酶表达的程度越低，胶原酶表达的抑制效果就越高并且皮肤中越少发生胶原蛋白的降解。因此，能减少产生的皱纹的量。从表7的结果中可以确定，胶原酶表达的程度根据实施例3和实施例4中所用的酶而不同，但是本发明的崁非醇-3-O-芸香糖苷抑制了胶原酶在体外的表达。而且，崁非醇-3-O-芸香糖苷所达到的胶原酶表达的抑制效果高于已知的抗氧化物质生育酚所达到的抑制效果。
实验实施例7：对促进前胶原产生的效果的测定
对由实施例3和实施例4得到的崁非醇-3-O-芸香糖苷所达到的促进前胶原产生的效果进行测定，并与由维生素C所达到的效果进行比较。所述前胶原为诱导胶原蛋白产生的物质，而且是产生胶原蛋白和防止老化所需要的。已知维生素C是用于胶原蛋白合成的必要组分。
将人的成纤维细胞以5000细胞/孔的量植入到含有具有2.5％的胎牛血清的杜尔贝科改良的伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Media，DMEM)的96孔的微量滴定板中，并进行培养直到人的成纤维细胞生长了90％，然后在无血清的DMEM培养基中再培养24小时。将实施例3和实施例4的崁非醇-3-O-芸香糖苷和维生素C以1×10-4M的浓度溶解在所述无血清的DMEM培养基中并处理24小时，收集所述细胞培养基。24小时后，使用前胶原1型C肽酶免疫测定试剂盒(C-peptide EIAkit)(MK101，Takara，日本)测定漂浮在所述培养基中的前胶原的量。
在未处理的组中，前胶原产生的程度为100。与对照组的前胶原产生的程度进行比较后获得用所述材料处理过的组的前胶原产生的程度。结果示于表8中。
表8
Figure A200780038247D00211
前胶原产生的程度越高，胶原蛋白产生的程度就越高。因此，能防止皱纹的产生。从表8中的结果可以确定前胶原的产生的程度根据实施例3和实施例4中所用的酶而不同，但是本发明的崁非醇-3-O-芸香糖苷促进了前胶原在体外的产生。而且，由崁非醇-3-O-芸香糖苷所达到的前胶原的产生的程度明显高于由已知的为合成胶原蛋白的必要组分的维生素C所达到的程度。
工业实用性
本发明提供了一种利用酶或微生物从植物提取物中的崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去糖来大量生产崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法。本发明一种还提供了含有用于抗皱的崁非醇-3-O-芸香糖苷的皮肤外用组合物。

Claims (16)

1、一种用于制备由以下化学式1表示的崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法，该方法包括通过利用酶和微生物中的一种进行水解而将崁非醇-3-O-芸香糖苷从崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中分离出来，所述酶和微生物能选择性地除去糖，
化学式1
Figure A200780038247C00021
2、根据权利要求1所述的方法，其中，用于制备崁非醇-3-O-芸香糖苷的方法包括：
(1)利用水和有机溶剂中的一种来获取含有崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的植物提取物；以及
(2)利用所述酶和微生物中的一种对所述提取物进行水解以从所述崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物中选择性地除去所述糖，从而分离出所述崁非醇-3-O-芸香糖苷。
3、根据权利要求1所述的方法，其中，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物为山茶糖苷A或山茶糖苷B。
4、根据权利要求3所述的方法，其中，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷是通过选择性地将吡喃半乳糖基的所述糖中的一个从所述山茶糖苷A中除去而获得的，以及通过选择性地将吡喃木糖基的所述糖中的一个从所述山茶糖苷B中除去而获得的。
5、根据权利要求4所述的方法，其中，将所述糖从山茶糖苷A中除去的酶为选自由葡糖苷酶、纤维素酶、半乳糖苷酶和淀粉葡糖苷酶所组成的组中的至少一种酶，以及将所述糖从山茶糖苷B中除去的酶为选自由木糖苷酶、木聚糖酶和柚皮苷酶所组成的组中的至少一种酶。
6、根据权利要求2所述的方法，其中，所述微生物为选自由曲霉属(aspergillus sp.)、芽孢杆菌属(bacillus sp.)、青霉属(penicillium sp.)、根霉属(rhizopus sp.)、根毛霉属(rhizomucor sp.)、篮状菌属(talaromyces sp.)、双歧杆菌属(bifidobacterium sp.)、被孢霉属(mortierella sp)、隐球菌属(cryptococcus sp.)以及微杆菌属(microbacterium sp.)所组成的组中的至少一种微生物。
7、根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，所述酶和所述微生物的反应pH值为4.0-5.5。
8、根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，所述酶和所述微生物的反应温度为30-50℃。
9、根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，所述酶和所述微生物的反应时间为48-76小时。
10、根据权利要求2所述的方法，其中，所述含有崁非醇-3-O-芸香糖苷配糖物的植物提取物为绿茶的提取物。
11、一种皮肤外用组合物，该组合物含有由以下化学式1表示的用于抗皱的崁非醇-3-O-芸香糖苷，
化学式1
Figure A200780038247C00041
12、根据权利要求11所述的组合物，其中，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷具有将促进前胶原产生和抑制胶原酶表达的活性相结合的协同作用。
13、根据权利要求11所述的组合物，其中，基于该组合物的总重量，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷的含量为0.0001-10重量％。
14、根据权利要求11所述的组合物，其中，所述组合物为被配制为由柔肤剂、营养水、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、眼部精华素、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、美容涂敷剂、粉剂、美体洗剂、美体霜、美体油、美体精华素、化妆品底霜、粉底、染发剂、洗发香波、护发素和沐浴露所组成的组中的一种化妆品组合物。
15、根据权利要求11所述的组合物，其中，所述组合物为被配制为由药膏、凝胶、霜剂、贴布和喷剂所组成的组中的一种药用组合物。
16、根据权利要求11所述的组合物，其中，所述崁非醇-3-O-芸香糖苷分离自绿茶。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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