CN101505788B

CN101505788B - 周围神经病变的预防和/或治疗药

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Publication number: CN101505788B
Application number: CN2007800311244A
Authority: CN
Inventors: 须川诚
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2006-08-22
Filing date: 2007-08-22
Publication date: 2013-06-26
Anticipated expiration: 2027-08-22
Also published as: CA2661054A1; EP2057997A1; US20100234278A1; WO2008023725A1; CN101505788A; EP2057997A4; JPWO2008023725A1

Abstract

通过将含有红细胞生成素作为有效成分的用于预防和/或治疗由染色体的微管抑制作用引起的周围神经病变的药物组合物给予服用了微管抑制剂的抗癌剂的患者，可减轻该患者的周围神经病变，可增加以往不可能的上述抗癌剂的给药剂量、给药周期、给药次数。因此，该药物组合物不仅可以改善该患者的生活质量(QOL)，而且可以延长该患者的生命。

Description

周围神经病变的预防和/或治疗药

技术领域

本发明涉及含有红细胞生成素作为有效成分的新的药物组合物，用于预防和/或治疗由微管抑制作用(微管抑制作用)引起的周围神经病变。

背景技术

顺铂(Cisplatin)及其衍生物、紫杉(Taxan)类抗癌剂虽然具有良好的治疗效果，在临床上被广泛应用，但同时引起严重的副作用——贫血和周围神经病变(neuropathy)。人们已清楚了解到周围神经病变表现出疼痛症状、是神经的轴突变性和髓鞘受损的疾病，除了由于给予抗癌剂造成周围神经病变之外，周围神经病变还会作为HIV感染或糖尿病的并发症发作。

另一方面，被认为是造血***的细胞因子的红细胞生成素(EPO)近年来已逐渐明了它也是在中枢神经***中产生的(Masuda等人，1994)、参与神经***的发生(Liu等人，1994；Juul等人，1998；1999；Chin等人，2000)、对脑缺血(Sakanaka等人，1998；Briness等人，2000)和脊髓损伤(Gorio等人，2002)、脑炎症(Agnello等人，2002)等疾病表现出广泛的神经保护作用。

另外，据报告，在大鼠(Campana & Myers，2001)和人组织(Hassan等人，2004)的末稍神经***中也存在EPO和EPO的受体，表明EPO在末稍神经***中承担着生理上的作用。

作为EPO在末稍神经***中表现出生理功能的旁证，Campana等人的研究小组报告了如果给予大鼠的坐骨神经以慢性压迫的损伤或压损，在病变部位附近的神经胶质细胞(施万(schwann)细胞)中EPO的表达会上升(Li等人，2005)。坐骨神经如果受伤，在病变部位的远侧就会引起沃勒变性(轴突变性)，病变部位的近侧则成为神经突起发芽时的位置(Ide，1996；Cheng & Zochodne，2002)。作为施万细胞在周围神经病变中的作用，已知在病变部位及其远侧，施万细胞通过再分化和增殖，进一步引起细胞移动，起着作为对新形成的神经突起的发芽和再生轴突的立足点所必需的作用(Hall & Gregson，1974；Ide，1996；Li等人，2005)。施万细胞是在末稍神经中形成髓鞘(myelin)的神经胶质细胞，相当于中枢神经***中的少突胶质细胞(oligodendrocyte)。本发明人等报告了EPO是参与少突胶质细胞的成熟和髓鞘化的分子，有可能促进中枢神经***的脱髓鞘病中的再髓鞘化(Sugawa等人，2002；国际专利：国际公开号WO02/02135A1)。根据这些报告可以认为，EPO不仅对中枢神经***的神经细胞有作用、而且对施万细胞也有作用，还有可能参与周围神经病变时的神经保护以及神经再生和修复。

有关外原性给予时的EPO对神经病变的作用，据报告EPO具有防止因HIV感染而最常出现的麻烦的神经症状——与HIV相关的感觉神经病(HIV-SN)的模型由于添加与HIV相关的囊膜糖蛋白gp120而引起的DRG(脊髓背根神经节)的细胞脱落的作用(Keswanai等人，2004)，以及具有改善因给予链脲霉素(streptozotocin)而导致的糖尿病模型大鼠中神经传导速度的降低和改善痛觉的作用(Bianchi等人，2004)。

据报道，临床上给予顺铂的癌患者的神经症状的评价为在给予EPO组得到显著性改善(Mangiameli等人，2002)。

然而，因顺铂导致的周围神经病变是由于产生自由基而引起的，对于与上述不同的发生机理导致的周围神经病变，EPO是否具有预防或治疗效果还完全不清楚。特别是对于将通过抑制主要参与细胞***的染色体的微管作用而使癌细胞死亡的微管抑制剂作为抗癌剂给予时引起的周围神经病变，EPO是否有效果还没有任何报告。

非专利文献1：Agnello D，Bigini P，Villa P，Mennini T，CeramiA，Brines ML，Ghezzi P.Erythropoietin exerts ananti-inflammatory effect on the CNS in a model of experimentalautoimmune encephalomyelitis，.Brain Res.2002 Oct11；952(1)：128-34。

非专利文献2：Bianchi R，Buyukakilli B，Brines M，Savino C，Cavaletti G，Oggioni N，Lauria G，Borgna M，Lombardi R，CimenB，Comelekoglu U，Kanik A，Tataroglu C，Cerami A，Ghezzi P.Erythropoietin both protects from and reverses experimentaldiabetic neuropathy，Proc Natl Acad Sci USA.2004 Jan20；101(3)823-8。

非专利文献3：Brines ML，Ghezzi P，Keenan S，Agnello D，deLanerolle NC，Cerami C，Itri LM，Cerami A.Erythropoietincrosses the blood-brain barrier to protect against experimentalbrain injury，.Proc Natl Acad Sci USA.2000 Sep 12；97(19)：10526-31。

非专利文献4：Campana WM，Myers RR.Erythropoietin anderythropoietin receptors in the peripheral nervous system：changes after nerve injury，FASEB J.2001 Aug：15(10)：1804-6。

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非专利文献6：Cheng C，Zochodne DW，In vivo proliferation，migration and phenotypic changes of Schwann cells in thepresence of myelinated fibers.Neuroscience.2002；115(1)：321-9。

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非专利文献9：Hassan K，Simri W，Rubenchik I，Manelis J，Gross B，Shasha SM，Kristal B.Effect of erythropoietin therapyon polyneuropathy in predialytic patients.JN ephrol.2003Jan-Feb；16(1)：121-5。

非专利文献10：Hassan K，Gross B，Simri W，Rubinchik I，CohenH，Jacobi J，Shasha SM，Kristal B.The presence oferythropoietin receptors in the human peripheral nervoussystem.Clin Nephrol.2004 Feb；61(2)：127-9。

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非专利文献16：Liu ZY，Chin K，Noguchi CT.A minimalcytoplasmic subdomain of the erythropoietin receptor mediateserythroid and megakaryocytic cell development.Blood.1999 Nov15；94(10)：3381-7。

非专利文献17：Mangiameli A，Spina S，Iannetti E，CatalanoD，Spadaro D，Trovato GM.Erythropoietin and cisplatin-inducedneuropathies in cancer patients.Clin Ter.2002 May-Jun；153(3)：177-80.Italian。

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非专利文献19：Sakanaka M，Wen TC，Matsuda S，Masuda S，Morishita E，Nagao M，Sasaki R.In vivo evidence thaterythropoietin protects neurons from is chemic damage.Proc NatlAcad Sci USA.1998 Apr 14；95(8)：4635-40。

非专利文献20：Sugawa M.Sakurai Y，Ishikawa-Ieda Y，SuzukiH，Asou H.Effects of erythropoietin on glial cell development；oligodendrocyte maturation and astrocyte proliferation.Neurosci Res.2002 Dec；44(4)：391-403。

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的在于提供用于预防和/或治疗周围神经病变的药物组合物，特别是提供用于预防和/或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变的药物组合物。

解决课题的手段

本发明人发现红细胞生成素对于将泰索帝等微管抑制剂作为抗癌剂给予时产生的周围神经病变具有显著的治疗效果，从而完成了本发明。

即，本发明提供以下发明。

(1)药物组合物，含有红细胞生成素作为有效成分，用于预防和/或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变。

(2)如(1)所述的药物组合物，其中，上述由微管抑制作用引起的周围神经病变是由于给予了选自长春花生物碱类或紫杉类的至少1种而引起的周围神经病变。

(3)如(2)所述的药物组合物，其中，上述紫杉类(紫杉烷类)是紫杉醇(Paclitaxel)或泰索帝(Taxotere)。

(4)含有红细胞生成素的药物组合物在癌症治疗中的应用，其特征在于，将该药物组合物与具有微管抑制作用的抗癌剂组合。

(5)用于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变的方法，包括将含有预防或治疗有效量的红细胞生成素的药物组合物给予需要该预防或治疗的患者。

(6)癌症的治疗方法，包括将含有对于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变为有效量的红细胞生成素的药物组合物与具有微管抑制作用的抗癌剂组合，给予患者。

(7)红细胞生成素在制造用于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变的药物组合物中的应用。

(8)组合制剂，包括药物组合物和具有微管抑制作用的抗癌剂，所述药物组合物含有对于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变为有效量的红细胞生成素。

发明效果

如后述实施例所示，在由泰索帝引起的周围神经病变(neuropathy)模型小鼠中，在神经症状的评价和坐骨神经的病理组织学评价的任一评价中都可观察到EPO可减轻周围神经病变。

因此，本发明的预防和/或治疗药对周围神经病变的治疗是有用的，特别是可用于减轻给予了微管抑制剂的抗癌剂的患者的周围神经病变副作用。由此在减轻患者痛苦的同时(提高生活质量(QOL))，可以增加以往不可能的抗癌剂的给药量、给药期间、给药次数，而且可以延长生命。

附图说明

图1是表示由于给予泰索帝导致的神经症状变化的图。

图2是表示因给予泰索帝90mg/kg ip导致的神经症状变化及给予EPO后对其的影响的图。

图3-1是表示在未给予泰索帝组(0 iv)中，经甲苯胺蓝染色显现的坐骨神经病理组织的轴突变性变化及给予EPO后对其的影响的照片。

图3-2是表示在给予泰索帝组(90mg/kg ip)中，经甲苯胺蓝染色显现的坐骨神经病理组织的轴突变性变化及给予EPO后对其的影响的照片。

具体实施方式

红细胞生成素

对于本发明所用的红细胞生成素而言，任何EPO均可使用，但优选高度纯化的EPO，更具体讲，优选哺乳动物EPO、特别是基本上与人EPO具有同样生物学活性的EPO。

本发明中使用的红细胞生成素可用任何方法制造，可以使用例如由来自人的提取物纯化得到的天然人EPO(特公平1-38800号公报等)，或通过基因工程的方法由大肠杆菌、酵母菌、中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)、C127细胞、COS细胞、骨髓瘤细胞、BHK细胞、昆虫细胞等产生，再经各种方法提取、分离纯化的人EPO等。本发明中可使用的红细胞生成素优选通过基因工程方法制造的EPO，优选使用哺乳动物细胞(特别是CHO细胞)制造的EPO(例如特公平1-44317号公报、KennethJacobs等人，Nature，313 806-810(1985)等)。

通过基因重组法得到的EPO的氨基酸序列可以与天然的EPO相同，或者是该氨基酸序列中缺失、置换、附加1个或多个氨基酸后的产物，只要其具有与天然EPO同样的生物学活性。氨基酸的缺失、置换、附加等可以通过本领域技术人员公知的方法进行。例如，若是本领域技术人员，可运用定点诱变法(Gotoh，T.等人(1995)Gene 152，271-275；Zoller，M.J.and Smith，M.(1983)Methods Enzymol.100，468-500；Kramer，W.等人(1984)Nucleic Acids Res.12，9441-9456；Kramer，W.and Fritz，H.J.(1987)Methods Enzymol.154，350-367；Kunkel，T.A，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci，USA.82，488-492；Kunkel(1988)Methods Enzymol.85，2763-2766)等，通过在EPO的氨基酸中导入适当变异，可以制备功能上与EPO同等的多肽。而氨基酸的变异也可以在自然界中产生。一般来说，被置换的氨基酸残基中，理想的是置换成可保持氨基酸侧链性质的其它氨基酸。作为氨基酸侧链的性质，例如可举出疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、含有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)、含有带羟基的侧链的氨基酸(S、T、Y)、含有带硫原子的侧链的氨基酸(C、M)、含有羧酸以及带酰胺的侧链的氨基酸(D、N、E、Q)、含有带碱的侧链的氨基酸(R、K、H)、含有带芳香族的侧链的氨基酸(H、F、Y、W)(括号内任一个字母均表示氨基酸的单字母标记)。已知通过对一氨基酸序列缺失、附加1个或多个氨基酸残基和/或用其它氨基酸置换而具有被修饰的氨基酸序列的多肽可以维持其生物学活性(Mark，D.F.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1984)81，5662-5666；Zoller，M.J.& Smith，M.Nucleic AcidsResearch(1982)10，6487-6500；Wang，A.等人，Science 224，1431-1433；Dalbadie-McFarland，G.等人，Proc，Natl.Acad.Sci.USA(1982)79，6409-6413)。

另外，作为本发明的红细胞生成素，也可以使用EPO和其它蛋白质的融合蛋白质。为了制作融合多肽，例如可以按照将编码EPO的DNA与编码其它蛋白质的DNA的读框做成一致那样连接后，导入表达载体，通过宿主使融合蛋白表达。在本发明中可与EPO融合的其它蛋白质没有特别限定。

另外，作为本发明的红细胞生成素也可以使用进行了化学修饰的EPO。作为化学修饰的EPO的例子，可举出经聚乙二醇等化学修饰的EPO(WO90/12874等)、对不带糖链的EPO通过聚乙二醇等化学修饰后的产物、以及结合了维生素B12等、无机或有机化合物等化合物的EPO等。

此外，作为本发明的红细胞生成素，也可以使用EPO衍生物。所谓EPO衍生物是指对EPO分子中的氨基酸进行修饰的EPO或对EPO分子中的糖链进行修饰的EPO。

EPO分子中糖链的修饰包括附加、置换、缺失糖链等。作为本发明中优选的糖链修饰如EPO分子中唾液酸的缺失。

通常，通过重组动物细胞产生的EPO、来自尿的EPO都是以含有不同糖链结构的多种EPO的EPO组合物的形式得到的。附加到EPO组合物中的EPO分子的唾液酸的数目可以因各个EPO分子的不同而不同，通常在1个EPO分子中可附加11个～15个唾液酸。通过除去这些唾液酸可以制作脱唾液酸化的EPO(脱唾液酸EPO)。脱唾液酸化时被除去的唾液酸的数目没有特别限定，可以将全部唾液酸都除去，也可以除去1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个唾液酸。对于本发明所优选的脱唾液酸EPO，附加到EPO分子中的唾液酸数为10个以下，更优选5个以下，特别优选2个以下。予以说明，对于本发明中可使用的唾液酸的数目，使用EPO组合物中含有的EPO分子的平均数。平均每分子的唾液酸数可通过本领域技术人员公知的方法进行测定(EP0428267公报等)。

除去唾液酸的EPO(脱唾液酸EPO)可通过本领域技术人员公知的方法进行制作，例如可通过唾液酸酶等酶对EPO进行处理等来制作。唾液酸酶可以使用市售的产品。(特表2005-507426号、Nobuo Imai等人，Eur.J.Biochem，194，457-462(1990)等)

另外，本发明的红细胞生成素可以是糖链改变体EPO，其中可举出在EPO的N末端附着唾液酸的糖链改变体EPO——NESP(NovelErythropoietin Stimulating Protein：WO85/02610，WO91/05867，WO95/05465等记载)等糖链被改变的EPO类似物。

EPO分子中氨基酸的修饰可举出氨基甲酰化、生物素化、脒化、乙酰化、胍化等，本发明中优选的氨基酸修饰是氨基甲酰化。

被修饰的氨基酸残基没有特别限定，可举出赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、色氨酸等，在本发明中，被修饰的氨基酸优选是赖氨酸。

因此，作为本发明中氨基酸被修饰的EPO的特别优选形式，可举出赖氨酸被氨基甲酰化的EPO(Marcel L等人，Derivatives oferythropoietin that are tissue protective but noterythropoietic.Science，2004；305：239、Fiordaliso E等人，Anonerythropoietic derivative of erythropoietin protects themyocardium from ischemia-reperfusion injury.PNAS，2005；102：2046等)。EPO的氨基甲酰化包括通过与异氰酸盐离子等反应而进行的氨基甲酰化、通过与烷基-异氰酸酯等反应而进行的烷基-氨基甲酰化、通过与芳基-异氰酸酯等反应而进行的芳基-氨基甲酰化等。

预防和/或治疗用制剂

在本发明的目标预防和/或治疗药中，根据需要，可适当添加混悬剂、助溶剂、稳定剂、等渗剂、保存剂、防吸附剂、表面活性剂、稀释剂、赋形剂、pH调整剂、镇痛剂、缓冲剂、含硫还原剂、抗氧化剂等。

作为混悬剂的例子，可举出甲基纤维素、聚山梨酯80、羟乙基纤维素、***胶、黄蓍胶粉末、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯等。

作为助溶剂，可举出聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚山梨酯80、烟酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。

作为稳定剂，可举出葡聚糖40、甲基纤维素、明胶、亚硫酸钠、偏亚硫酸钠等。

作为稳定剂，也可以添加某种氨基酸(例如，特开平10-182481号公报等)。作为稳定剂添加的氨基酸包括游离的氨基酸、其钠盐、钾盐、盐酸盐等盐等。氨基酸可以添加1种或2种以上组合。作为稳定剂添加的氨基酸没有特别限定，作为优选氨基酸，可举出亮氨酸、色氨酸、丝氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸。

作为等渗剂，可举出D-甘露醇、山梨醇等。

作为保存剂，可举出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。

作为防吸附剂，可举出人血清白蛋白、卵磷脂、葡聚糖、环氧乙烷-丙氧乙烷共聚物、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚乙二醇等。

作为表面活性剂，举出以下一些典型的例子。非离子表面活性剂、例如山梨糖醇酐单辛酸酯、山梨糖醇酐单月桂酸酯、山梨糖醇酐单棕榈酸酯等山梨糖醇酐脂肪酸酯；甘油单辛酸酯、甘油单肉豆蔻酸酯、甘油单硬脂酸酯等甘油脂肪酸酯；十甘油单硬脂酸酯、十甘油二硬脂酸酯、十甘油单亚油酸酯等多甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三硬脂酸酯等聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨糖醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇四油酸酯等聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油单硬脂酸酯等聚氧乙烯甘油脂肪酸酯；聚乙二醇二硬脂酸酯等聚乙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯月桂基醚等聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六烷基醚等聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚；聚氧乙烯壬基苯基醚等聚氧乙烯烷基苯基醚；聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油(聚氧乙烯氢化蓖麻油)等聚氧乙烯硬化蓖麻油；聚氧乙烯山梨醇醚蜂蜡等聚氧乙烯蜂蜡衍生物；聚氧乙烯羊毛脂等聚氧乙烯羊毛脂衍生物；聚氧乙烯硬脂酰胺等聚氧乙烯脂肪酰胺等具有HLB6～18的衍生物；阴离子表面活性剂、例如十六烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、油基硫酸钠等含有碳数10～18的烷基的烷基硫酸盐；聚氧乙烯十二烷基硫酸钠等环氧乙烷的平均加成摩尔数为2～4、烷基的碳数为10～18的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐；十二烷基磺基琥珀酸钠等烷基的碳数为8～18的烷基磺基琥珀酸盐；天然的表面活性剂，例如卵磷脂、甘油磷脂、鞘髓磷脂等神经鞘氨醇磷脂；碳数12～18的脂肪酸的蔗糖脂肪酸酯等。在本发明的制剂中可以添加这些表面活性剂中的1种或2种以上的组合。优选的表面活性剂是聚山梨酯20、40、60或80等聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，特别优选聚山梨酯20和聚山梨酯80。另外优选以聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物(Pluronic F-68(注册商标)等)为代表的聚氧乙烯聚丙二醇。

作为含硫还原剂，可举出N-乙酰半胱氨酸、N-乙酰同型半胱氨酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨糖醇、硫基乙酸及其盐、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、碳数1～7的硫代链烷酸等含有巯基的化合物等。

作为抗氧化剂，可举出异抗坏血酸、二丁羟基甲苯、丁羟基茴香醚、α-生育酚、醋酸生育酚、L-抗坏血酸及其盐、L-抗坏血酸棕榈酸酯、L-抗坏血酸硬脂酸酯、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、没食子酸三戊酯、没食子酸丙酯或乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、焦磷酸钠、偏磷酸钠等螯合剂。

另外，也可以含有氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠等无机盐；柠檬酸钠、柠檬酸钾、醋酸钠等有机盐等通常添加的成分。

本发明的目标预防和/或治疗药中的红细胞生成素的有效量由医生在考虑作为对象的疾病及其症状等、患者的年龄、体重、给药途径等之后确定。通常，按照成人每人EPO的给予量为0.1μg～5000μg、优选5～1000μg来给予。

本发明的预防和/或治疗药通常以非口服途径给予，可举出注射剂(皮下注射、静脉注射、肌肉注射等)、经皮、经粘膜、经鼻、经肺等途径给予，也可以口服。

疾病

本发明的预防和/或治疗药可用于周围神经病变的治疗。

周围神经病变是指除了脑和脊髓之外的神经***的病变。具体来说是指包围神经轴突的髓鞘(myelin)被破坏、进而伴随着轴突变性的末稍神经疾病。其病变不仅是在神经细胞，而且在形成髓鞘的施万细胞中也会出现。会出现感觉障碍、麻木、感觉迟钝、疼、灼热感、痛、异常感觉、感觉缺失、运动障碍、无力、麻痹(完全运动丧失)等症状。

本发明的预防和/或治疗药特别是对于治疗当将微管抑制剂作为抗癌剂给予时出现的周围神经病变是有用的。作为细胞内结构的微管是多个微管蛋白结合(聚合)而形成的，微管蛋白的2聚体和微管通过聚合、解聚而处于“动态平衡”状态。微管抑制剂是通过打乱该平衡状态而发挥抗癌作用的制剂。作为微管抑制剂，已知有：1)长春花生物碱类(通过与微管蛋白结合，引起微管蛋白之间结合，由此具有抑制微管形成的作用)的长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)等，和，2)紫杉类(与长春花生物碱相反，通过促进微管蛋白的聚合，稳定微管，结果，影响细胞***期(M期)的纺锤体(由微管构成)的形成及其功能，通过使细胞停止***而引起细胞病变。由此发挥抗癌作用。)的紫杉醇(paclitaxel)(taxol，泰素)、泰索帝(taxotere)、多西他赛(docetaxel)等。

特别是通过与像紫杉醇和泰索帝那样的抗癌作用强、通过强烈抑制微管的作用而容易出现手足麻木等神经病变的抗癌剂并用时，本发明的预防·治疗药可获得优越的效果。

本发明还提供含有红细胞生成素的药物组合物在癌症治疗中的应用，其特征在于，将该药物组合物与具有微管抑制作用的抗癌剂组合。作为具有微管抑制作用的抗癌剂，优选上述的长春花生物碱类和紫杉类，更优选紫杉类。特别优选紫杉醇和泰索帝。将本发明的含有红细胞生成素的药物组合物与上述抗癌剂组合的时期，由医生考虑红细胞生成素的效果、作为对象的疾病及其症状等、患者的年龄、体重、给药途径等之后确定，在给予上述抗癌剂之前、给予的同时、或给予后的任一时期进行组合均可。特别优选在给予上述抗癌剂之前或给予的同时进行组合。

本发明还提供用于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变的方法，包括将含有预防或治疗有效量的红细胞生成素的药物组合物给予需要该预防或治疗的患者。

本发明还提供癌症的治疗方法，包括将含有对于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变为有效量的红细胞生成素的药物组合物与具有微管抑制作用的抗癌剂组合，给予患者。

本发明还提供红细胞生成素在制造用于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变的药物组合物中的应用。

本发明还提供组合制剂，其包括药物组合物和具有微管抑制作用的抗癌剂，所述药物组合物含有对于预防或治疗由微管抑制作用引起的周围神经病变为有效量的红细胞生成素。

在本发明中，将含有红细胞生成素的药物组合物与具有微管抑制作用的抗癌剂“组合”给予的方式，包括在抗癌剂给予之前、与抗癌剂给予的同时、在抗癌剂给予后进行“组合”的所有情况。

实施例

通过实施例对本发明进行更详细说明，但本发明并不限定于这些实施例。各种各样的变更、修饰对于本领域技术人员来说都是可以的，这些变更、修饰也都包括在本发明中。

实施例1：EPO在由泰索帝引起的周围神经病变(neuropathy)模型中的作用

<实验材料和方法>

(1)由给予泰索帝引起的周围神经病变模型的制作

(1-1)动物

购入5周龄的ICR小鼠(雄性)，进行1周的处理(饲养)后，用于实验。

(1-2)试剂的制备和给予

作为抗癌剂使用泰索帝(泰索帝注射液、Aventis Pharma公司制、1V 80mg 2mL)。

使用附带的溶剂和生理盐水，按照小鼠体重每10g的给予量为0.15ml左右，配制泰索帝(45mg/kg iv，90mg/kg ip)。作为对照的溶剂(0mg/kg)，使用土温-80和生理盐水进行同样配制，以iv方式给予。

另外，作为人重组EPO，将Epogin(商品名、中外制药制)用溶剂(含有135nmol/L NaCl、0.125％组氨酸-HCl、含0.005％土温80的10mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)的溶液)进行调制，按照720U/只动物/周给予。给予方案按照每周一次分别给予泰索帝0、45mg/kg iv(尾部静注)、90mg/kg ip，共给予3周(第0、7、14天，共计3次)。而溶剂和EPO(720U/只动物)在给予泰索帝3小时前分别以sc(背颈部)方式给予。

给予组分为以下6组(括号内的数字为动物只数)。

1.泰索帝(Tax)0 iv+赋形剂(5)

2.泰索帝(Tax)0 iv+EPO(5)

3.泰索帝(Tax)45 iv+赋形剂(8)

4，泰索帝(Tax)90 ip+赋形剂(8)

5.泰索帝(Tax)90 ip+EPO(8)

(2)神经症状的评价

通过连续给予泰索帝，当把尾巴悬吊时则诱发典型的后腿的交差反应，随着症状发展，前肢也可看到同样的反应，导致步行障碍。以该症状为指标，将完全看不到症状的情况评价为0，将虽然没有表现出明显的弯曲反应，但出现运动异常的情况评价为0.5，将任何后肢表现出弯曲反应的情况评价为1，将后肢维持2秒以上的弯曲状态或伸展状态的情况评价为2、将出现步行障碍的情况评价为3。该评分通过盲法对症状进行评价来进行。

(3)坐骨神经的病理组织学的评价

在将肌肉组织剥离，露出坐骨神经的状态下，加戊二醛固定液(在使用前保存在冰中)使得坐骨神经完全浸没，放置10分钟后，分离坐骨神经，在戊二醛醇固定液中用振荡器(shaker)缓慢搅拌1小时。然后按照常规方法，将该坐骨神包埋在电子显微镜用树脂中，通过甲苯胺蓝(toluidine blue)染色制作染色切片，将轴突变性的程度按照无变性(-)、轻度(+)、中度(++)3个等级进行评价。

<结果>

(1)神经症状的变化

给予泰索帝时，对于给予45mg/kg iv、90mg/kg ip的情况，均在给予第8天前后出现神经症状，之后，经时观察到症状的进一步恶化，关于症状的程度，在给予的第7-10天，与45mg/kg ip相比，90mg/kg ip给予组更早出现恶化倾向，但之后两者的症状变化几乎相同，两者之间无明显差异(图1)。另一方面，在未给予泰索帝组(naive)，则完全未出现神经症状(图1)。基于以上结果，可以采用症状较早出现的泰索帝90mg/kg ip给予来进行药效的研究。

在由给予泰索帝90mg/kg ip而引起的病变中，通过给予EPO，10天后观察到神经症状的显著性减轻(图2)。

(2)组织学研究

表1和图3-1、图3-2给出了通过甲苯胺蓝染色进行组织学研究的结果。

[表1]在给予泰索帝(Tax)的坐骨神经标本中的轴突变性变化和EPO的效果

在未给予泰索帝组(0 iv)，没有观察到任何坐骨神经轴突的变性，但在给予泰索帝组轴突径缩小、变形，明显观察到轴突变性。变性程度在90mg/kg ip给予组为±3、轻度(+)1、中度(++)3(图3-2、表1)。另一方面，在EPO给予组，给予90mg/kg ip的变性程度在±～轻度(+)的范围，评价为±的个数比赋形剂(vehicle)组的要多，确认病变有减轻的倾向(图3-2，表1)。

由这些结果可知，在由给予在癌症治疗中广泛使用的抗癌剂泰索帝造成的周围神经病变模型中，通过给予EPO，具有抑制神经症状的恶化和坐骨神经的轴突变性的倾向(图1、图2、图3-1、图3-2、表1)。

产业实用性

通过将含有红细胞生成素作为有效成分的药物组合物给予给药有微管抑制剂的抗癌剂的患者，使该患者的周围神经病变减轻，可以增加以往不可能的上述抗癌剂的给药剂量、给药周期、给药次数。因此，该药物组合物不仅可以改善该患者的生活质量(QOL)，而且可以延长该患者的生命。

Claims

1.红细胞生成素在制备用于预防或治疗由紫杉类引起的周围神经病变的药物中的应用。

2.权利要求1所述的应用，其中，所述紫杉类是紫杉醇或泰索帝。

3.权利要求1或2的应用，其中，将红细胞生成素与紫杉类抗癌剂组合使用。

4.权利要求3的应用，其中，所述紫杉类是泰索帝。