CN101439172A - 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，本发明的药物组合物原料组成为：甘草浸膏、白及、郁金、海螵蛸、黄芩、茯苓、厚朴、天仙子。本发明对制备工艺参数进行了***控制；本发明通过对处方中药味的鉴别、含量测定，限量检查，有效的对产品进行了质量控制，并且使用该方法控制的产品在药理效果上表现的更为稳定、安全。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。
背景技术
胃及十二指肠溃疡是一种常见病。流行病学调查表明，人口中约有10％在其一生中患过本病。该病可发生于任何年龄，以45—55岁最多见。各种与发病有关的因素如胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌感染、遗传、体质、环境、饮食、生活习惯、神经精神因素等，通过不同途径或机制，导致上述侵袭作用增强和或防护机制减弱，均可促发溃疡发生。由于胃溃疡属慢性病，且易复发，要使其完全愈合，必须坚持长期服药。而长期服用相关化学药物如法莫替丁、雷尼替丁、甲氧米胍等会导致众多不良反应，相关中药大多存在质量控制不科学，疗效不稳定的情况。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物；
本发明目的还在于提供一种治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物的制备方法；
本发明目的还在于提供一种治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 150-200重量份 白及 60-90重量份 郁金 60-90重量份
海螵蛸 60-90重量份 黄芩 120-180重量份 茯苓 30-45重量份
厚朴 40-60重量份 天仙子 0.5-1.5重量份
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 200重量份 白及 60重量份 郁金 90重量份
海螵蛸 60重量份 黄芩 180重量份 茯苓 30重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 150重量份 白及 90重量份 郁金 60重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 45重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 延胡索(醋炙)75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 薏苡仁(麸炒)45重量份
泽泻 50重量份 天仙子1.5重量份
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
脾胃同居中焦，互为表里，既密不可分，又功能各异。胃主受纳和腐热水谷，脾主运化而输布营养精微；脾主升清，胃主降浊，一纳一化，一升一降，共同完成水谷的消化、吸收、输布及生化气血之功能。胃病多实，常有寒客热积，饮食停滞之患；脾病多虚，易现气虚、阳虚之疾。胃为阳土，喜润恶燥，因此胃病多热，多燥；脾为阴土，喜燥恶湿，故脾病多寒，多湿。因此，脾胃病症多由脾湿胃热，热伤血络所致，本发明处方中黄芩清热燥湿，泻火解毒；白及、海螵蛸收敛止血，消肿生肌，郁金、天仙子活血止痛，行气解郁；茯苓渗湿健脾补中，宁心安神，厚朴燥湿行气；甘草补脾益气，清热解毒，调和诸药不但有燥湿化热，健胃理气之功，还有解郁安神之效。
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物制备方法为：
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加8～12倍量水，加热至60-80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至2～4，至不再产生沉淀为止，静置8-12小时，滤集沉淀，用400-800重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为150-250微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，加入辅料，制成本领域各种常规制剂，如：颗粒剂、胶囊剂、片剂、软胶囊、合剂，即得。
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物制备方法为：
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加10倍量水，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成颗粒，干燥，整粒、即得。
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物的质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定和/或限量检查中的一种或几种：
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材15-40g，加正丁醇10-40ml，加热回流0.5-2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5-2g，加正丁醇10-30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(55-75:25-45:5-15)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约3-10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本发明制剂相当于生药材25-45g，加甲醇60-100ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1-5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材0.5-2g，加甲醇10-30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一以0.5％-1.5％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(6-9:2-6:0.5-2)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5-3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液1-5ul与黄芩苷对照品溶液1-5ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明制剂相当于生药材15-35g，加石油醚(60～90℃)5-20ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薏苡仁对照药材0.5-3g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-15μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本品制剂相当于生药材20-30g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.5-1ml作为供试品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含0.5-3mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(2-6：0.5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干5-15min；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(40-60：60-40：0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.01-0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明制剂适量，混匀，研细，取相当于生药材0.1-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇10-50ml，精密称重，超声处理10-50分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药60-90克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置1-3小时，加***200-600ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液0.5-2ml，搅匀，放置2小时，加***5-20ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VIB)，吸取上述样品溶液2-6μl，对照品溶液1-3μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(10-20：1-3：0.5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
本发明所述的治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合的质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定和/或限量检查中的一种或几种：
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明制剂相当于生药材25g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明制剂适量，混匀，研细，取相当于生药材0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药70克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置2小时，加***400ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VI B)，吸取上述样品溶液5μ1，对照品溶液2μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(17：2：1)为展开剂，展开，展距16厘米，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。
具体实施方式
下述实验例和实施例进一步说明但不下限于本发明
实验例1.甘草酸提取分离工艺的筛选
以甘草酸的含量为考察指标，采用正交试验对酸沉淀时的PH值、静置时间和洗涤用水量参数进行考察。具体方法如下：
称取甘草浸膏900g，等分成9份。按照正交表L9(34)安排，进行正交试验，对9个样品分别进行酸沉、静置、洗涤，对9个提取物中甘草酸的含量进行测定，结果分别见表1、表2、表3。
表1.水煎工艺因素水平表
表2.水煎工艺筛选正交试验数据表
表3.方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
由表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为C>A>B；直观分析以A2B1C2为最佳工艺；由表3方差分析结果表明：C因素的影响具有显著性意义，A、B因素的影响无显著性意义。即：加10倍量水，调PH值至3，静置10小时提取纯化甘草酸。
实验例2.本发明中药组和物鉴别方法的筛选
甘草
方法一：取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺甘草的阴性样品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点显色清晰，阴性无干扰。
方法二：取本品制剂相当于生药材30g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加在中性氧化铝柱(60～100目，2g，内径1cm)上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺甘草的阴性样品溶液。另取甘草对照药材1g，同法处理至“取正丁醇液蒸干”，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(7：3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点但斑点分离不好。
方法三：取本品制剂相当于生药材30g，加水15ml使溶解，加盐酸1.5ml，水浴上加热30分钟，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺甘草的阴性样品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)—苯-乙酸乙酯—冰醋酸(10：20：7：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
方法四：取本品制剂相当于生药材30g，加***60ml，超声处理10分钟，滤过，弃去***液，药渣挥去溶剂，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加盐酸2ml与三氯甲烷20ml，加热回流1小时，放冷，分取三氯甲烷液，水层再用三氯甲烷30ml振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺甘草的阴性样品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(15：4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
综上所述，优选方法一作为本药物组合物中甘草的质量控制方法。
泽泻
方法一：取本品制剂相当于生药材20g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺泽泻的阴性样品溶液。另取泽泻1.5g，加水100ml煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约15ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—乙酸乙酯—甲酸(6：3.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
方法二：取本品制剂相当于生药材20g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺泽泻的阴性样品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点分离不好。
方法三：取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺泽泻的阴性样品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点显色清晰，阴性无干扰。
综上所述，优选方法三作为本药物组合物中泽泻的质量控制方法。
延胡索
方法一：取本发明制剂相当于生药材35g，加乙醇—氨试液(1:1)10ml，研匀，加苯60ml，加热回流2小时，滤过，滤液用20％盐酸溶液振摇提取3次(20ml、15ml、15ml)，合并酸液，加氨试液使成碱性，用三氯甲烷振摇提取3次(25ml、20ml、20ml)，合并三氯甲烷液，水洗后，用无水硫酸钠脱水，浓缩至1ml，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺延胡索的阴性样品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—乙醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液及亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕色斑点，但斑点颜色较浅。
方法二：取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用***挣摇提取3次，每次10ml，合并***液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺延胡索的阴性样品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但斑点颜色较浅。
方法三：取本发明制剂相当于生药材35g，加浓氨试液4ml与氯仿40ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺延胡索的阴性样品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各20μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺(10：6：1：0.1)为展开剂，置展开缸中预饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点，但斑点分离不好。
方法四：取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺延胡索的阴性样品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点显色清晰，阴性无干扰。
综上所述，优选方法四作为本药物组合物中延胡索的质量控制方法。
黄芩
方法一：取本发明制剂相当于生药材35g，加乙酸乙酯—甲醇(3：1)的混合溶液60ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液各2μl以及上述三种对照品溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(10:3:1:2)为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同的暗绿色斑点，但样品半点分离不好。
方法二：取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，供试品溶液、阴性样品溶液与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且斑点显色清晰，阴性无干扰。
方法三：取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇75ml，滴加盐酸3～6滴，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约2ml，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。另取黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱色法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5：3：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
方法四：取本发明制剂相当于生药材35g，加***50ml，回流1小时，滤过，药渣用***20ml洗涤，药渣备用，合并滤液，低温挥去***，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加水适量，通过D101大孔吸附树脂柱(内径约1.5cm，柱高20cm，依次用丙酮、乙醇、水各50ml预洗)上，用水80ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇—冰醋酸—水(7:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但样品斑点分离不好。
方法五：取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用盐酸调节pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B页)试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丙酮—醋酸—水(10:4:5:3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但相应斑点颜色较浅。
综上所述，优选方法二作为本药物组合物中黄芩的质量控制方法。
薏苡仁
取本品粉末1g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺薏苡仁的阴性样品溶液。另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上。分别适用下列展开剂与显色方法，方法及结果见下表：
表4 薏苡仁鉴别方法的筛选
| 方法一 | 方法二 | 方法三 | |
| 展开剂 | 以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1) | 石油醚—***—乙醇(100：10：1) | 醋酸乙酯-甲酸-水(11：4：3) |
| 显色方法 | 取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视 | 取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，110℃烘15分钟 | 取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，110℃烘15分钟 |
| 结果 | 显相同颜色的斑点，且斑点显色清晰，阴性无干扰 | 显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅 | 显相同颜色的斑点，但样品斑点分离不好 |
综上所述，优选方法一作为本药物组合物中薏苡仁的质量控制方法。
实验例3.限量检查方法的确定
天仙子具有解痉止痛，安神定喘的作用，用于治疗胃痉挛疼痛，喘咳，癫狂。但其含有莨菪碱、东莨菪碱等阿托品类生物碱，此类生物碱皆为M-胆碱受体阻滞剂，对周围神经的作用表现为抑制交感神经机能，对中枢神经***则表现为兴奋作用，严重者转入中枢抑制致嗜睡、昏迷。如果剂量过大，常会引起中毒死亡，故有必要对其进行限量检查。实验过程如下：
2005版中国药典一部中天仙子的日服用极量为0.6g，本实验控制本发明中药组合物两天服用总量中所含阿托品类生物碱的量不超过其各自每日口服的极量，可作为质量控制的依据。
(1)检测限的考察
取天仙子对照药材0.6g，，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，取上述第一种溶液1μl、2μl、3μl、4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(17：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰，结果在该层析条件下，天仙子对照药材在0.12mg时即有可辨色斑。因此确定检测限为0.12mg。
(2)专属性考察
照实施例2处方比例按对照药材相同的制法制备缺天仙子的阴性药液，按天仙子对照药材限量检查方法试验，阴性无干扰。
(3)重现性的考察
取实施例2样品5份，按照上述限量检查方法进行试验，均能得到相同的试验结果，表明该限量检测方法重现性好。
根据以上试验将天仙子天仙子限量检查方法总结如下：
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药70克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置2小时，加***400ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VIB)，吸取上述样品溶液5μ1，对照品溶液2μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(17：2：1)为展开剂，展开(展距16厘米)，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
实验例4.含量测定方法的筛选
采用高效液相色普法测定本发明药物中黄芩苷的含量，以完善本发明的质量检测方法，部分试验结果见下：
1、供试品溶液的制备
取本按实施例2方法制备的本发明药物组合物制剂相当于原料药0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理，放至室温，用甲醇补足减失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
比较了不同超声时间，供试品溶液中黄芩苷的含量，结果如下表：
表5 超声时间的选择
| 超声时间 | 10分钟 | 20分钟 | 30分钟 | 40分钟 |
| 黄芩苷含量(mg/g) | 12.4534 | 18.6236 | 23.1146 | 23.1251 |
从上表可以看出，超声提取30分钟已经可以将本发明药物中的黄芩苷提取完全，所以供试品溶液的制备选择超声提取30分钟即可。
2.流动相的选择
取供试品溶夜，分别以甲醇-水-磷酸溶液不同配比的流动相，比较供试品溶液色谱图中各峰的分离效果，结果见下表：
表6.流动相的选择
| 流动相配比 | 甲醇-水(52：48：) | 甲醇-水-磷酸(52：48：0.2) | 甲醇-水-磷酸(47：53：0.2) | 甲醇-水-磷酸(57：43：0.2) | 甲醇-水-磷酸(42：58：0.2) |
| 色谱峰分离效果 | 分离效果差，有干扰 | 分离效果好，无干扰 | 分离效果差， | 分离效果差，有干扰 | 分离效果差，有干扰 |
从上表可以看出，甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)时供试品色谱图中各峰的分离效果好，主峰没有出现干扰。
3.含量检测的方法学考察
对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下：
检测仪器：岛津公司SPD-10Avp型高效液相色谱仪
色谱柱：迪玛公司(Zorbax C18 4.6×250mm，5μm)
流动相：甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)
检测波长：280nm 流速：1.000ml/min 柱温：室温
对照品：黄芩苷购于中国药品生物制品检定所批号：715-200211
测定方法：按实施例2方法制备样品，按供试品溶液的制备方法制备样品液；用微孔滤膜(0.45μm)过滤。分别精密吸取阴性对照液，对照品液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(1)稳定性试验对照品溶液(33μg/ml)，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：
表7.稳定性试验
(2)线性关系考察取对照品溶液(33μg/ml)摇匀，分别精密吸取2、5、10、15、18μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，表明黄芩苷在0.0956μg-1.0516μg间呈线性关系，其回归方程为：
Area＝2942391.045*Amt-44394.34494(r＝0.9999)
表8 线性关系考察
(3)精密度试验 精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：
表9 精密度试验
(4)重现性试验 按实施例2方法制备5份样品进行测定，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：
表10 重现性试验
(5)回收率试验 精密称取已知含量的按实施例2方法制备的样品0.2g，置25ml量瓶中，加10ml黄芩苷对照品溶液(0.36mg/ml)，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：
表11 回收率试验
(6)空白试验
按实施例2方法及供试品溶液的制备方法制备阴性样品和阴性样品液，按照供试品溶液制备方法检测，结果阴性样品溶液在与黄芩苷对照品相同保留时间处没有色谱峰，所以阴性无干扰。
由以上方法学考查结果可以看出，本发明药物所采用的含量测定方法其线性关系、稳定性、精密度、重现性等均良好，可以作为有效控制本发明药物质量的方法之一。
实验例5.药效学实验
1 材料
1.1 药品：
本发明中药组合物I，根据实施例3方法制成；
本发明中药组合物II，根据实施例2方法制成；
阳性药物：快胃片，国药准字Z37021100，青岛国风药业股份有限公司生产；
解郁安神颗粒，国药准字Z20033214，河南辅仁药业有限公司生产。
1.2 动物健康Wistar大白鼠，雌雄兼用，体重(220±20)g。由中国中医研究院实验动物中心提供。
2.方法与结果
2.1 对水浸应激型大鼠胃溃疡的抑制作用
取大白鼠40只，随机分为四组，本发明中药组合物I、II组，阳性对照组、空白对照组。连续灌胃四日，每日一次，空白对照组灌胃等体积的生理盐水。末次给药30分钟后，将大鼠固定于特制的鼠笼中，直立浸于23±0.5C°的温水槽内，水面以齐剑突为宜。水浸应激7小时后，用颈椎脱臼法将大鼠处死，打开腹腔，把胃取出，用生理盐水洗净，沿胃大弯剪开，检查溃疡病变。以溃疡长度总和的毫米数作为溃疡指数。
溃疡指数的测量方法：溃疡呈条索状者，测其长度，以mm为单位，若宽度>1mm，计长加倍；出血程点状者(长、宽均<1mm)计0.5mm；出血程斑状者(长、宽均>2mm)则以面积计数；以上所有结果相加得溃疡指数。
抑制百分率＝((S1组溃疡长度总和—S2或S3或S4组溃疡长度总和)÷对照组溃疡长度总和)*100％
表12.对水浸应激型大鼠胃溃疡的抑制作用
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 溃疡指数(X±SD)mm | 溃疡抑制率(％) |
| 空白对照组S1 | —— | 10 | 87±15.35 | —— |
| 阳性对照组S2 | 0.09 | 10 | 11.6±6.48** | 70.11 |
| 本发明中药组合物I S3 | 3 | 10 | 10.6±5.27** | 73.21 |
| 本发明中药组合物II S4 | 3 | 10 | 7.5±3.28**※# | 88.95 |
统计学处理以组间t检验比较差异的显著性，与空白对照组比较，**P<0.01，与本发明中药组合物I比较※P<0.05。与阳性对照组比较#P<0.05
2.2 对大鼠胃液分泌的影响
Wistar大鼠40只(雄性200-220克)，随机分组，每组5只，禁食不禁水46小时，各组动物给药(灌胃)，共3天。末次给药后均禁食24小时，不禁水。乙醇麻醉下，沿大鼠腹中线剪(或切)一小口，轻轻找出胃，将幽门结扎，再由十二指肠给药一次，缝合腹壁切口。2小时后拆线，打开腹腔，结扎喷门，摘出胃，沿胃大弯剪开胃腔，倾出胃内容物，收集于刻度离心管中，记录胃液量，以精密pH试纸(pH0.5-5.0)测胃内容物的pH值，再以1500转/分钟，离心10分钟。
胃液总酸度及总酸排出量测定：上清胃液1.0ml，加酚红指示标1滴，用0.01mol/L NaOH液滴定，直至胃液先呈黄色后转为红色2秒内不消失为终点，记录NaOH液的消耗量。实验结果见表13。
表13 对大鼠胃液分泌的影响(n＝10)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 胃液量(ml) | 总酸度(mmol/L) | 总酸排出量(mmol/L.H) |
| 空白对照组S1 | —— | 10 | 4.9±1.8 | 7.24±2.77 | 19.1±12.44 |
| 阳性对照组S2 | 0.09 | 10 | 2.82±0.3** | 3.14±1.54 | 5.21±1.93** |
| 本发明中药组合物I S3 | 3 | 10 | 2.63±0.4** | 2.13±1.46 | 3.27±1.63** |
| 本发明中药组合物II S4 | 3 | 10 | 1.52±0.5** | 1.17±1.54 | 2.18±1.64**※# |
统计学处理以组间t检验比较差异的显著性，与空白对照组比较，**P<0.01，与本发明中药组合物I比较※P<0.05。与阳性对照组的比较#P<0.05
2.3 对无水乙醇致大鼠胃粘膜损伤的修复作用
Wistar大鼠30只(雄性200-220克)，随机分组，每组10只，禁食不禁水48小时，各组给无水乙醇1.0ml/只。1小时后各组给水1.0ml/只，给药组分别给药1.0ml/只，一日两次，各组动物均正常饲养，分别于给药2天、4天后处死其中一半动物，取出胃，以10ml水充盈，1％甲醛溶液中固定，剖开胃，观察药物对损伤胃粘膜的修复作用。
结果如下：
(1)给无水乙醇后，动物活动明显减少，状态不好。
(2)第二天早上，可见对照组动物饮水量及尿量明显多于给药组。
(3)造型2天后，能见到各组动物粘膜溃疡有所减轻(指条索状溃疡痕迹明显减轻，颜色变浅，有愈合迹象)。但也仍有溃疡较重者，条索状溃疡呈边缘外翻，不清晰。
(4)造型4天后，各组动物的胃粘膜溃疡均有明显修复，个别动物已已愈合完全，粘膜表面平整、光滑；未愈合者其仍可见条索状溃疡的痕迹，但条纹色浅，沟纹细，无边缘外翻，呈将愈合状。可见给药组比对照组愈合好。见表14。
表14 对无水乙醇致大鼠胃粘膜损伤的修复作用
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 2天溃疡数(X±SD) | 4天溃疡数(X±SD) |
| 空白对照组S1 | —— | 10 | 41.6±34.0 | 41.6±14.1 |
| 阳性对照组S2 | 0.09 | 10 | 61.0±31.6 | 32.8±18.5 |
| 本发明中药组合物I S3 | 3 | 10 | 58.0±26.2 | 26.5±19.7** |
| 本发明中药组合物II S4 | 3 | 10 | 62.35±26.95 | 19.83±12.7**※# |
统计学处理以组间t检验比较差异的显著性，与空白对照组比较，**P<0.01，与本发明中药组合物I比较※P<0.05。与阳性对照组的比较#P<0.05
以上试验结果表明：本发明中药组合物I、本发明中药组合物II及对照药快胃片均具有抑制胃溃疡的发生，减少胃酸分泌，修复胃粘膜损伤的作用，且本发明中药组合物II优于本发明中药组合物I。
2.4.解郁安神作用
2.4.1 对小鼠自发活动次数及睡眠时间的影响
取昆明种小鼠40只，体重18-22g，雌雄兼用，随机分为4组，每组10只。生理盐水对照组(对照组)：予生理盐水0.2ml/10g灌胃，每日1次，共3天。阳性组：解郁安神颗粒，取制备好的解郁安神颗粒样品液0.2ml/10g灌胃(相当于人用量的9倍)，每日1次，共3天。本发明药物组每日1次，共3天，各组最末次灌胃后1h，将小鼠放入自发活动仪中适应3分钟后，开始测定自发活动次数及睡眠超过2小时的睡眠时间。结果见下表：
表15.对小鼠自发活动次数及睡眠时间的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 自发活动次数 | 睡眠时间(mmin) |
| 对照组 | - | 10 | 168.7±64.1 | 41.2±14.3 |
| 阳性组 | 1.5 | 10 | 103.2±57.4* | 77.8±25.0* |
| 本发明中药组合物I | 3 | 10 | 169.7±63.1 | 45.6±16.4 |
| 本发明中药组合物II | 3 | 10 | 108.4±42.2* | 78.8±24.6* |
注：与对照组比较，*P<0.01
2.4.2 对脾虚小鼠炭末推进功能的影响
对脾虚小鼠小肠推进功能的影响取昆明种小鼠，体重18～22g，雄性，随机分为5组，即正常对照组、模型组、阳性药解郁安神颗粒组，本发明药物组，每组10只，ig 100％大黄水煎液1ml/只(正常对照组ig同体积的蒸馏水)，连续8d，出现溏便，纳呆，消瘦，少动，毛发枯涩，畏寒等“脾虚”症状。造模第5d开始每天下午ig给药(0.2ml/10g，正常对照组ig同体积的蒸馏水)，第8d将动物称体重后禁食24h，未次给药1h后ig5％的炭末(用10％***胶配制)，20min后处死动物，立即剖腹腔取出胃肠，平铺一玻璃板上，测量炭末头端在肠管内的移动距离和小肠全长(自幽门至回盲部)，计算推进百分率。
表16.对脾虚小鼠炭末推进功能的影响(x±s；n＝10)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 体重增长(g) | 推进百分率(％) |
| 正常对照组 | -- | 10 | 7.01±1.10 | 6.72±12.01 |
| 模型组 | -- | 10 | 4.11±1.35## | 64.30±11.42# |
| 解郁安神颗粒 | 1.5 | 10 | 5.87±1.55 | 37.82±7.02** |
| 本发明中药组合物I | 3 | 10 | 4.66±1.58 | 58.38±6.89 |
| 本发明中药组合物II | 3 | 10 | 5.90±1.72 | 42.61±4.76** |
注：与正常组相比#P<005，##P<001；与模型组比较，*P<005，**P<001。
实验2.4.1和2.4.2表明本发明中药组合物II具有解郁安神的作用。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
实施例1.
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成本领域各种常规制剂，如：颗粒剂、胶囊剂、片剂、软胶囊、滴丸，即得。
实施例2.颗粒剂
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成颗粒，干燥，制成500g，即得。
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明制剂相当于生药材25g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药70克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置2小时，加***400ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VIB)，吸取上述样品溶液5μ1，对照品溶液2μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(17：2：1)为展开剂，展开，展距16厘米，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
实施例3.颗粒剂
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 延胡索(醋炙)75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 薏苡仁(麸炒)45重量份
泽泻 50重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成颗粒，干燥，制成500g，即得。
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52:48:0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
【功能主治】健胃，消炎，止痛。用于胃溃疡，十二指肠溃疡，急慢性胃炎。
【用法用量】开水冲服，一次10g，一日3次。
实施例4.胶囊剂
甘草浸膏 200重量份 白及 60重量份 郁金 90重量份
海螵蛸 60重量份 黄芩 180重量份 茯苓 30重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，制成1200粒，即得。
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明制剂相当于生药材25g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5.片剂
甘草浸膏 150重量份 白及 90重量份 郁金 60重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 45重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，加入0.5％的硬脂酸镁混合均匀，压片，包薄膜衣，制成1300片，即得。
【鉴别】
取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药70克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置2小时，加***400ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(《中国药典2005年版附录VI B)，吸取上述样品溶液5μ1，对照品溶液2μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(17：2：1)为展开剂，展开，展距16厘米，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
实施例6.软胶囊
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，与适量植物油搅匀，制成软胶囊1500粒，即得。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
实施例7.滴丸
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加水10倍，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入80℃的聚乙二醇，聚乙二醇与药粉的重量比7：3，搅拌均匀后，密闭并保温在80℃，滴入5℃～15℃的液体石蜡中，滴速为20滴每分钟，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，包赭石衣，得滴丸3000丸，即得。
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明制剂相当于生药材25g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液。按照供试品制剂及溶液的制备方法制备缺泽泻的阴性样品溶液。另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52：48：0.2)为流动相；检测波长为280nm。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg。
Claims (9)
1.一种治疗治疗胃及十二指肠溃疡的中药组合物的中药组合物，其特征是该组合物是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 150-200重量份 白及 60-90重量份 郁金 60-90重量份
海螵蛸 60-90重量份 黄芩 120-180重量份 茯苓 30-45重量份
厚朴 40-60重量份 天仙子 0.5-1.5重量份
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征是该组合物可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 200重量份 白及 60重量份 郁金 90重量份
海螵蛸 60重量份 黄芩 180重量份 茯苓 30重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征是该组合物可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 150重量份 白及 90重量份 郁金 60重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 45重量份
厚朴 40重量份 天仙子 1.5重量份
4.如权利要求1所述的中药组合物，其特征是该组合物可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 延胡索(醋炙) 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 薏苡仁(麸炒) 45重量份
泽泻 50重量份 天仙子 1.5重量份
5.如权利要求1所述的中药组合物，其特征是该组合物可以是由如下重量比的原料药制成的：
甘草浸膏 180重量份 白及 75重量份 郁金 75重量份
海螵蛸 90重量份 黄芩 120重量份 茯苓 30重量份
厚朴 50重量份 天仙子 1.5重量份
6.如权利要求1-5任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征是该制备方法为：
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加8～12倍量水，加热至60-80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至2～4，至不再产生沉淀为止，静置8-12小时，滤集沉淀，用400-800重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为150-250微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，加入辅料，制成本领域各种常规制剂，如：颗粒剂、胶囊剂、片剂、软胶囊、合剂，即得。
7.如权利要求6所述的中药组合物颗粒剂的制备方法，其特征是该制备方法为：
以上八味，取甘草浸膏100重量份，加10倍量水，加热至80℃使溶解，冷却至室温，边搅拌边滴加盐酸(盐酸:水＝1:5)，调pH值至3，至不再产生沉淀为止，静置10小时，滤集沉淀，用600重量份水充分洗涤至中性，即得甘草酸提取物，剩余的甘草浸膏与白及等七味粉碎成细粉，过筛，筛孔内经为180±7.6微米，混匀，加入甘草酸提取物，混匀，制成颗粒，干燥，整粒、即得。
8.如权利要求6所述的中药组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定和/或限量检查中的一种或几种：
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材15-40g，加正丁醇10-40ml，加热回流0.5-2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5-2g，加正丁醇10-30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(55-75:25-45:5-15)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约3-10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本发明制剂相当于生药材25-45g，加甲醇60-100ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.5-2g，加甲醇10-30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一以0.5％-1.5％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(6-9:2-6:0.5-2)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5-3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液1-5ul与黄芩苷对照品溶液1-5ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明制剂相当于生药材15-35g，加石油醚(60～90℃)5-20ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液；另取薏苡仁对照药材0.5-3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-15μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本品制剂相当于生药材20-30g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.5-1ml作为供试品溶液；另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含0.5-3mg的对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(2-6∶0.5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干5-15min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(40-60：60-40：0.2)为流动相；检测波长为280nm；
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.01-0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂适量，混匀，研细，取相当于生药材0.1-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇10-50ml，精密称重，超声处理10-50分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药60-90克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置1-3小时，加***200-600ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇1-3ml溶解，作为供试品溶液；另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液0.5-2ml，搅匀，放置2小时，加***5-20ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VIB)，吸取上述样品溶液2-6μl，对照品溶液1-3μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(10-20：1-3：0.5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
9.如权利要求8所述的中药组合的质量控制方法，该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定和/或限量检查中的一种或几种：
【鉴别】
(1)取本发明制剂相当于生药材25g，加正丁醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加正丁醇20ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水(65:35:10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本发明制剂相当于生药材35g，加甲醇80ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以1％NaOH制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿—甲醇(7.5:4:1)为展开剂，展开缸充分饱和后进行展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，将板置空气中挥尽碘蒸气，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别B项下的供试品溶液2ul与黄芩苷对照品溶液2ul点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，凉干，喷以2％的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明制剂相当于生药材25g，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液；另取薏苡仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层上板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯—醋酸(10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本品制剂相当于生药材35g，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml作为供试品溶液；另取23-乙酰泽泻醇B适量，加甲醇制成1ml含1mg的对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，105℃烘干10min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
【含量测定】
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(52：48∶0.2)为流动相；检测波长为280nm；
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂适量，混匀，研细，取相当于生药材0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放至室温，用甲醇补失重量，过滤，取续滤液1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
与1.14g原药材相当的本品制剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于10mg；
【限量检查】
取本品适量，研细，取制剂相当于原料药70克，精密称定，加氨试液80ml，搅匀，放置2小时，加***400ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取天仙子对照药材0.6g，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加***10ml，振摇2小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验(《中国药典》2005年版附录VIB)，吸取上述样品溶液5μ1，对照品溶液2μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇—氨水(17：2：1)为展开剂，展开，展距16厘米，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上出现的斑点应浅于对照药材斑点。
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| GR01 | Patent grant |