CN101435819A - 免疫层析试验用具 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种免疫层析试验用具、用该免疫层析试验用具检测待测物的方法以及该免疫层析试验用具的制作方法。该免疫层析试验用具包含层析膜，层析膜有判断区，该区域固定有可与待测物结合的结合物，可与人抗鼠抗体反应的物质附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中。

Description

免疫层析试验用具
技术领域：
本发明涉及一种免疫层析试验用具、用免疫层析试验用具检测待测物的方法及免疫层析试验用具的制作方法。
背景技术：
免疫层析试验用具作为用能与试样中待测物特异性结合的物质检测待测物的实验器具已为人所知。将疑为含待测物的试样添加到此实验器具的一部分(加样区)，则试样由于毛细管现象在加样区内移动，达到固定有可与待测物结合的标记物的标记物固定垫。如果有待测物，则待测物与标记物结合，形成待测物—标记物复合物。试样再因毛细管现象散开，此复合物在免疫层析膜移动，到达固定有可与待测物结合的结合物的判断区，于是，该复合物结合到该结合物。如此，在判断区形成标记物—待测物—结合物夹心式复合物。
当标记物含有色载体粒子(染色的乳胶粒子和胶体金属粒子等)时，标记物会被判断区捕捉，则判断区显色。通过观察此判断区的显色，即可进行试样中待测物的检测。
在使用这种免疫层析试验用具的实验中，试样中所含影响免疫层析反应的物质可能造成假阳性反应。比如，有时采自人的生物试样中会含有人抗鼠抗体(HAMA)，此时，HAMA在免疫层析试验用具中会与作为结合物使用的来源于鼠的抗体起反应。因此，即使不含待测物的试样中也可能出现疑似存在待测物的假阳性结果。
美国专利申请第2007/0059682号记述有一种免疫层析试验用具，其中层析膜有固定了捕捉HAMA的物质的HAMA捕捉器。此免疫层析试验用具通过用HAMA捕捉器捕捉存在于试样中的HAMA提高结果的准确性。
然而，专利文献1记述的免疫层析试验用具有时不能彻底捕捉HAMA。其结果，受未捕捉的HAMA的影响，可能给出错误的判断结果。
发明内容：
本发明的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节发明内容的陈述所限。
本发明的目的是提供一种免疫层析试验用具，它可以降低可能存在于试样中的人抗鼠抗体(HAMA)对免疫层析反应产生的影响，从而得出比以往的免疫层析试验用具更准确的判断结果。
本发明的另一目的是提供一种用上述免疫层析试验用具检测待测物的检测方法以及一种上述免疫层析试验用具的制作方法。
即本发明提供：
一种检测试样中待测物的免疫层析试验用具，包括：
层析膜，有固定了可以与待测物结合的结合物的判断区；
试样展开垫，有加样区配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的位置，用于添加试样；及
标记物附着垫，配置于比加样区靠近试样展开方向下游、比层析膜靠近试样展开方向上游的位置，用于附着可与待测物结合的标记物。
在此，可与人抗鼠抗体反应的物质附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中。
所述免疫层析试验用具，其中可与人抗鼠抗体反应的物质附着在标记物附着垫。
其中可与人抗鼠抗体反应的物质附着在试样展开垫。
其中标记物附着垫配置在与试样展开垫和层析膜有接触的位置。
其中标记物附着垫配置在与层析膜有一定间隔的位置。
其中试样展开垫配置在与层析膜有接触的位置。
其中试样展开垫配置在与层析膜有一定间隔的位置。
所述免疫层析试验用具，还包括：配置在比层析膜靠试样展开方向下游位置的吸收垫。
其中吸收垫配置在与层析膜有接触的位置。
其中可与人抗鼠抗体反应的物质为可与人抗鼠抗体反应的抗体或可与人抗鼠抗体反应的抗体片段。
其中可与人抗鼠抗体反应的抗体是选自保藏于日本国家技术评估研究所专利微生物寄存中心(NPMD)的保藏日为2007年9月25日的保藏号为NITE BP—420和保藏号NITE BP—421之中的至少一种杂交瘤产生的单克隆抗体。
所述免疫层析试验用具，其中标记物附着垫还附着质控用标记物，层析膜还有固定可与质控用标记物结合的物质的质控区。
所述免疫层析试验用具，还包括：第二试样展开垫，其配置在比加样区靠近试样展开方向下游且比层析膜靠近试样展开方向上游的位置。
其中可与人抗鼠抗体反应的物质附着在第二试样展开垫。
其中可与人抗鼠抗体反应的物质附着在垫中，以便与试样一起展开。
本发明还提供一种用免疫层析试验用具检测试样中待测物的方法，该免疫层析试验用具所含层析膜有一判断区，其中固定有可与待测物结合的结合物。该方法包括以下步骤：
向免疫层析试验用具添加试样；
使可与人抗鼠抗体反应的物质和可与待测物结合的标记物与试样在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中接触；以及
让可与固定在判断区的待测物结合的结合物与试样接触；
检测出通过待测物结合到判断区的标记物质。
本发明再提供一种免疫层析试验用具的制作方法，其中该免疫层析试验用具所含层析膜有一用于检测试样中所含待测物的判断区，该判断区中固定有可与待测物结合的结合物。该制造方法包括让可与人抗鼠抗体反应的物质附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中。
使用本发明的免疫层析试验用具，即使试样中含有人抗鼠抗体(HAMA)，也可以彻底降低HAMA对免疫层析反应的影响。因此，可以准确地检测出试样中的待测物。比如当检查病毒和细菌等病原体感染时，可以降低产生假阳性结果的可能性。因此可以得出更正确的检查结果。
附图说明：
图1为本发明的免疫层析试验用具形态的例示图。
图2为比较例的层析膜平面图。
具体实施方式：
本发明的免疫层析试验用具用于检测试样中由抗原或抗体组成的待测物。
上述试样含从人体采集的生物样本和对该生物样本进行前期处理所得的产物。作为采自人体的生物样本有：血液、血清、粪便、尿液、唾液、鼻腔抽取液、拭液、汗液、泪液等。作为上述前期处理比如有将生物样本溶解到适当的前期处理试剂中，用过滤器过滤溶解所得溶液等。
待测物只要是能够获得待测物相应抗体的物质即可，无特别限定。比如可以是细菌、原生生物和真菌等细胞、病毒、蛋白质、多糖类等。具体而言，作为待测物有流感病毒(如A型、B型等)、副流感病毒、RS病毒、轮状病毒、杯状病毒(calicivirus)、冠状病毒、腺病毒、肠道病毒、疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、重症急性呼吸器症候群病原病毒(冠状病毒)等病毒；支原体肺炎、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、三日疟原虫等细胞；其他消化器官疾病、中枢神经疾病、出血热等各种疾病的病原体、这些病原体的代谢物；癌胚抗原和CyFRA等肿瘤标记物、激素等。这些待测物在生物样本中也可以含一种以上。
本发明的免疫层析试验用具尤其适用于检测从流感病毒、冠状病毒、轮状病毒和腺病毒中选择的一种以上的病毒。
本发明的免疫层析试验用具将可与人抗鼠抗体(HAMA)反应的物质(HAMA反应物)附着在比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中。HAMA反应物只要是配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫，既可以仅附着在一个垫中，也可以附着在二个以上垫中。HAMA反应物最好不固定在垫中。即HAMA反应物最好能够与试样一起展开。
HAMA是一种人类所具有的能够特异性认识鼠的免疫球蛋白(鼠抗体)的抗体。在多数情况下，被暴露于鼠抗体的人和接受使用鼠单克隆抗体的药物治疗的人具有HAMA。在本说明书中，对HAMA无特别限定，只要是能与鼠抗体反应的人所具有的抗体即可。比如，也可以是兔抗体和狗抗体等能与其他哺乳动物抗体交叉反应的来源于人的抗体。
上述HAMA反应物只要能与HAMA反应无特别限定。比如可以是与HAMA反应的鼠抗体及其片段(如Fc片段、F(ab’)2片段、Fab片段、Fab’片段等)。更具体地说，作为HAMA反应物有由保藏号NITE BP—420(微生物识别码HB2—2350)的杂交瘤或保藏号NITE BP—421(微生物识别码HB3—354)的杂交瘤(均于2007年9月25日由国家技术评估研究所专利微生物寄存中心保藏)产生的来源于鼠的单克隆抗体或“单克隆用非特异去除剂”(BioLink公司生产)。
HAMA反应物可以一种单独使用，也可以二种以上混合使用。特别是混合了上述由保藏号NITE BP—420的杂交瘤和保藏号NITE BP—421的杂交瘤产生的来源于鼠的单克隆抗体的HAMA反应物最好。
本发明的免疫层析试验用具，上述HAMA反应物附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游位置的垫中。
作为配置于比上述层析膜靠近试样展开方向上游的垫，可举出试样展开垫和标记物附着垫。也可以是与试样展开垫和标记物附着垫不同的第二试样展开垫。
如本发明这样让HAMA反应物附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游位置的垫中，可以比将HAMA反应物固定在层析膜上更多地附着HAMA反应物。还可以比将HAMA反应物固定在层析膜上延长试样中所含HAMA与HAMA反应物的反应时间。因此，可以减少HAMA对免疫层析反应的影响。
在本说明书中，所谓“试样展开方向上游”和“试样展开方向下游”指在免疫层析试验用具的纵长方向的相对方向，添加试样的一头为上游，试样展开下去(流下去)的一头为下游。
在本说明书中，所谓比如“在比层析膜靠近试样展开方向上游位置放在衬底上的试样展开垫”指包括层析膜的试样展开方向上游开头部分在内，试样展开方向上游的某一处至少有试样展开垫的一部分。
本发明的免疫层析试验用具的试样展开垫有添加试样的加样区，在比层析膜靠近试样展开方向上游位置放在衬底上。试样展开垫可以使用人造纤维、玻璃纤维、纤维素纤维等材质的东西。加样区为添加试样的部分，最好位于试样展开垫的试样展开方向上游位置。
本发明的免疫层析试验用具的标记物附着垫附着可与待测物结合的标记物。标记物附着垫在比加样区靠近试样展开方向下游且比层析膜靠近试样展开方向上游位置放在衬底上。标记物附着垫可以使用玻璃纤维、纤维素纤维、塑料(如聚酯、聚丙烯、聚乙烯等)纤维等材质的东西。标记物附着垫最好与试样展开垫接触配置。
可与待测物结合的标记物最好为被标记的可与待测物结合的抗体或抗原。作为标记此抗原或抗体的标记成份如有：琼脂、琼脂糖、交联琼脂糖、交联海藻酸、交联瓜尔胶、硝酸纤维素和羧基纤维素等纤维素酯类、凝胶、交联凝胶、乳胶、橡胶、聚酯、聚乙烯、聚丙烯、苯乙烯-丁二烯共聚物、聚氯乙烯树脂、聚醋酸乙烯酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、苯乙烯-甲基丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸环氧丙酯、丙烯醛-乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物等天然或合成树脂及其衍生物、用色素粒、荧光分子或磁粒子等标记的玻璃(比如活性化玻璃)、硅胶、高岭土、云母、硅铝、氧化铝、硫酸钡等无机材料组成的粒子所得粒子；红细胞；及金等金属胶体。其中尤以含色素分子、荧光分子或磁性粒子的乳胶粒子和金胶体为佳。
可与待测物结合的标记物也可根据待测物种类为二种以上。
标记物附着垫最好还附着有用于确认试样是否适当展开的质控用标记物。质控用标记物最好对试样中的成份实际上不起反应。该质控用标记物可以与下述能与质控用标记物结合的物质组合使用。即，质控用标记物和能结合到质控用标记物的物质是二个能特异性结合的物质的组合。其中，以任何一者为质控用标记物使用均可。作为这种能特异性结合的二个物质的组合可以列举出半抗原和能与之结合的蛋白质，如链霉亲和素或亲和素与生物素、2，4—二硝基酚或异羟洋地黄毒苷与蛋白质(如清蛋白、酪蛋白、纤维蛋白原等)等。
作为质控用标记物的标记可以使用与上述标记物同样的标记。质控用标记物可以与标记物同一标记成份标记，也可以不同标记成份标记。
本发明的免疫层析试验用具的衬底只要可以作为普通免疫层析试验用具的衬底使用即可，无特别限定。比如可以使用塑料、纸张、玻璃等。衬底为了配置层析膜、试样展开垫和标记物附着垫等，最好表面具有粘性。
本发明的免疫层析试验用具的层析膜具有固定了可与待测物结合的结合物的判断区。作为层析膜的材质可以使用靠静电作用和疏水相互作用等物理作用能与蛋白质结合且通过毛细管现象能使试样展开的材质。比如，硝化纤维、尼龙(如也可以羧基和烷基作为置换基的导入了氨基的修饰尼龙)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纤维素等。
固定在层析膜判断区的结合物只要是能与待测物结合的物质即可。尤以能与待测物特异性结合的抗体或抗原为宜。结合物最好能在与上述标记物与待测物结合的位点不同的位点与待测物结合。
层析膜根据待测物的种类可以仅有一个判断区，也可以有二个以上。当有二个以上时，各判断区固定不同种类的能与待测物结合的结合物。
层析膜最好有固定有可与质控用标记物结合的物质的质控区，用于确认试样是否适当展开。
判断区和质控区可以是线形、圆形和方形等。
本发明的免疫层析试验用具除上述层析膜、试样展开垫和标记物附着垫外，还可以有吸收垫。吸收垫可以用纤维素、玻璃纤维等材质的东西。吸收垫最好配置在比层析膜靠近试样展开方向下游的位置，并与层析膜接触。在这种位置上配置吸收垫可以加快试样的展开速度。
本发明的免疫层析试验用具可以使用已为人知的免疫层析试验用具的制作方法，只要使HAMA反应物附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中即可。
比如，在以往的制作方法中，附着标记物的标记物附着垫用含标记物的缓冲液制作。具体而言，通过将标记物附着垫浸泡在该缓冲液、或在标记附着垫中添加缓冲液使标记物附着垫含有该缓冲液。然后干燥含有该缓冲液的标记物附着垫，即可制作出附着有标记物的标记物附着垫。此时，再在上述缓冲液中添加HAMA反应物，即可使标记物附着垫除标记物之外又附着HAMA反应物。在上述缓冲液中添加质控用标记物，即可使标记物附着垫还附着质控用标记物。
用含有HAMA反应物的缓冲液还可以制作附着有HAMA反应物的试样展开垫。即，通过将试样展开垫浸泡在该缓冲液、或在试样展开垫中添加该缓冲液后干燥，制作附着有HAMA反应物的试样展开垫。附着有HAMA反应物的第二试样展开垫也同样可以用含有HAMA反应物的缓冲液制作。
可以将如上制作的标记物附着垫、试样展开垫或第二试样展开垫与用众所周知的方法制作的其他组成部分、如衬底、层析膜、标记物附着垫或试样展开垫、任意的第二试样展开垫和任意吸收垫组装在一起，进行裁剪，制作本发明的免疫层析试验用具。
本发明的免疫层析试验用具的形式如图1(a)～(d)所例示。(a)、(b)和(c)所示免疫层析试验用具有试样展开垫1、标记物附着垫2、层析膜3、吸收垫4和衬底5。(d)所示免疫层析试验用具有试样展开垫1、标记物附着垫2、层析膜3、吸收垫4、衬底5和第二试样展开垫6。加样区10位于试样展开垫1的试样展开方向上游。
本发明的免疫层析试验用具的理想状态为，标记物附着垫2与试样展开垫1和层析膜3接触配置。作为这种状态的例示如(a)和(c)。
本发明的免疫层析试验用具的另一理想状态为，标记物附着垫2与层析膜3隔一定间隔配置。作为这种状态的例示如(b)和(d)。上述间隔可根据免疫层析试验用具的大小和所检测的待测物种类等适当选择。
本发明的免疫层析试验用具的其他理想状态为，试样展开垫1与层析膜3接触配置。作为这种状态的例示如(b)和(c)。
本发明的免疫层析试验用具最好在比加样区10靠近试样展开方向下游、且比层析膜3靠近试样展开方向上游的位置还有放在衬底上的第二试样展开垫6。该第二试样展开垫6可以配置于比标记物附着垫2靠近试样展开方向上游的位置，也可以配置于下游位置。第二试样展开垫6还可以有二个以上。
当本发明的免疫层析试验用具有第二试样展开垫6时，选自试样展开垫1、第二试样展开垫6和标记物附着垫2中的至少一个附着HAMA反应物即可。第二试样展开垫6可以使用与上述试样展开垫1同样材质的东西。
举例
实施例1
在市场销售的检测流感病毒用免疫层析试验用具(pochtem流感A/B，希森美康(Sysmex)株式会社)的标记附着垫中作为HAMA反应物附着以保藏号NITE BP—420和保藏号NITE BP—421保藏在国家技术评估研究所专利微生物寄存中心的杂交瘤产生的来源于鼠的单克隆抗体，制备本发明的免疫层析试验用具。
即，如下制备pochtem流感A型/B型的标记物附着垫。
将1050μg引发抗A型流感单克隆抗体***反应的蓝色聚苯乙烯乳胶粒子(粒径0.3μm)悬浮于3950μL分散用缓冲液(含有BSA和蔗糖的磷酸缓冲液(pH7.0))中，制备抗A型流感单克隆抗体***反应粒子。
将1050μg引发抗B型流感单克隆抗体***反应的蓝色聚苯乙烯乳胶粒子(粒径0.3μm)悬浮于3950μL分散用缓冲液(含有BSA和蔗糖的磷酸缓冲液(pH7.0))中，制备抗B型流感单克隆抗体***反应粒子。
将1150μg引发链霉亲和素***反应的红色聚苯乙烯乳胶粒子(粒径0.19μm)悬浮于3850μL分散用缓冲液(含有BSA和蔗糖的磷酸缓冲液(pH7.0))中，制备链霉亲和素***反应乳胶粒子。
将上述二种杂交瘤产生的来源于鼠的单克隆抗体溶解于1mLHAMA反应物缓冲液(磷酸缓冲液(pH7.0))中，使其分别达到1.75mg/mL，制备HAMA反应物溶液。
混合如上调制的抗A型流感单克隆抗体***反应粒子3600μL、抗B型流感单克隆抗体***反应粒子3600μL、链霉亲和素***反应乳胶粒子200μL和HAMA反应物溶液800μL，获得含有HAMA反应物的混合乳胶粒子8200μL。
将所得含有HAMA反应物的混合乳胶粒子832μL放入玻璃纤维制薄垫(300mm×5mm×0.28mm)上，在真空干燥机上烘干，制备标记物附着垫。
将如此制备的标记物附着垫与pochtem流感A/B的衬底、层析膜和试样展开垫组装在一起裁剪，获得本发明的免疫层析试验用具。
此免疫层析试验用具附着有平均一个测试条10μg的HAMA反应物。
pochtem流感A/B是具有图1(a)所示结构的试验用具，针对A型流感的鼠单克隆抗体和针对B型流感的鼠单克隆抗体及生物素BSA作为能与待测物结合的结合物和能与质控用标记物结合的物质分别固定在层析膜载体上的判断区和质控区。
比较例1
使用pochtem流感A/B作为比较例1。
比较例2
作为比较例2，使用的是将与实施例1中所用相同的HAMA反应物固定在pochtem流感A/B的层析膜第一判断区7A(参照图2)的用具。
下面用图2说明比较例2的层析膜的制备方法。
图2为层析膜的平面图。如图2所示，由硝化纤维膜构成的层析膜7有第一判断区7A、第二判断区7B和质控区7C。
比较例2的层析膜用抗体涂覆机将以下溶液涂覆在第一判断区7A、第二判断区7B和质控区7C。
第一判断区7A：
上述HAMA反应物所含两种来源于鼠的单克隆抗体在磷酸缓冲液(pH7.0)分别稀释为1.75mg/ml浓度的溶液。
第二判断区7B：
用磷酸缓冲液(pH7.0)稀释到浓度1.5mg/ml的抗B型流感单克隆抗体溶液。
质控区7C：
用磷酸缓冲液(pH7.0)稀释到浓度2.0mg/ml的生物素BSA溶液。
在实施例1和比较例1的层析膜中，均在第一判断区7A涂覆了用磷酸缓冲液(pH7.0)稀释到浓度2.0mg/ml的抗A型流感单克隆抗体溶液。
将分别涂覆了各溶液的层析膜在50℃干燥30分钟。
将干燥后的层析膜7浸泡于封闭液(含有BSA的磷酸缓冲液(pH7.0))中，进行封闭。封闭后，用清洗液(含有SDS的磷酸缓冲液(pH7.0))冲洗，40℃干燥120分钟，制备比较例2的层析膜。
将所得比较例2的层析膜与pochtem流感A/B的衬底、标记物附着垫和试样展开垫组装在一起裁剪，获得比较例2的免疫层析试验用具。
所得比较例2的免疫层析试验用具有平均每测试条4.1μg的HAMA反应物固定在层析膜载体上。得知，若要固定多于此量的HAMA反应物，则层析膜载体表面会有HAMA反应物析出。因此，层析膜载体上可固定的HAMA反应物量，从试验用具的质量考虑，比固定在实施例1的免疫层析试验用具上的HAMA反应物数量要少得多。
实验例1
将抗鼠IgG(MBL303G抗鼠IgG(山羊)、标签号No.130)用以下所示稀释用缓冲液稀释到表1所示浓度。以此为试样，在实施例1、比较例1和2的免疫层析试验用具的加样区添加试样200μL。15分钟后，目测判断区的显色强度。
先制作目测判断样本，比如BioDot公司的TSR3000薄膜分析仪(membrane strip reader)测定的判断区的检测线强度在0.015以上0.03以下设为1+，0.03以上且小于0.08设为2+，0.08以上设为3+，此目测判断即通过将试验用具上出现的检测线强度与该目测判断样本比较而进行。判断显色比1+目测判断样本弱的检测线为+w。
作为阴性质控品(NC)使用了不含抗鼠IgG的稀释用缓冲液。
稀释用缓冲液成份如下：
<稀释用缓冲液>
磷酸钠·2H2O           78g
氯化钠                 45g
叠氮化钠               2.5g
牛血清白蛋白           50g
4N氢氧化钠             87.5mL
超纯水                 5L
*用1N氢氧化钠和1N盐酸调整为pH7.0。
结果如表1所示。在此，“A”栏表示固定有抗A型流感单克隆抗体的第一判断区的判断结果。而“B”栏表示固定有抗B型流感单克隆抗体的第二判断区的判断结果。“—”表示目测无法确认判断区颜色。
比较例2如上所述在第一判断区固定了HAMA反应物。因此，比较例2仅在第二判断区判断结果的“B”栏有记载。
表中虽然没有表示，但在所有实验中均确认了质控区的颜色。即，确认试样已适当展开。
[表1]
Figure A200810148851D00201
从表1的结果得知，pochtem流感A/B(比较例1)的判断区(第一和第二判断区)尽管试样中未含有流感病毒，但由于抗鼠IgG的存在，显示出假阳性结果。
即使使用在层析膜上固定了HAMA反应物的比较例2的免疫层析试验用具也未能避免这一假阳性结果。
与此相反，用本发明的实施例1的免疫层析试验用具，当抗鼠IgG浓度为168μg/mL时，虽然可见极少的假阳性结果，但比起比较例1和2的试验用具来，可以提供更准确的结果。
实施例2
将与实施例1所用相同HAMA反应物附着在取代实施例1的pochtem流感A/B的pochtemS流感(希森美康株式会社)的标记物附着垫中，制备本发明的免疫层析试验用具。
pochtemS流感与pochtem流感A/B同样，在层析膜上的各判断区和质控区固定有作为能与待测物结合的结合物对A型流感病毒的鼠单克隆抗体和对B型流感病毒的鼠单克隆抗体以及作为能与质控用标记物结合的物质生物素BSA，具有图1(b)所示结构。
比较例3
比较例3使用了pochtemS流感。
实验例2
用实施例1和2及比较例1和3的免疫层析试验用具对采自患者的试样进行实验。
试样按照pochtem流感A/B或pochtemS流感的附属说明书，通过用附属的标本抽取试剂对从患者采集的生物样本(鼻腔抽取液、鼻腔拭液或咽喉拭液)进行处理而制备。
将所得试样约200μL添加到实施例1和2及比较例1和3的免疫层析试验用具加样区，与实验例1同样，进行判断区的检测线强度判断。检测线强度+w以上者判断为流感病毒阳性。
作为质控实验，对同样生物试样用RT—PCR(反转录聚合酶连锁反应)检测流感病毒抗原。
免疫层析试验用具或RT—PCR判断为阳性的试样数如表2的“A”(A型流感病毒为阳性)、“B”(B型流感病毒为阳性)或“A/B”(A型和B型流感病毒均为阳性)栏所示。表2的“—”栏表示判断为阴性的试样数。
[表2]
(A)比较例1的免疫层析实验用具
Figure A200810148851D00231
(B)实施例1的免疫层析实验用具
Figure A200810148851D00232
(C)比较例3的免疫层析实验用具
Figure A200810148851D00233
(D)实施例2的免疫层析实验用具
Figure A200810148851D00234
从表2的结果得知，有的试样(表2(A)(C)画网格的栏)用RT—PCR法判断为没有流感病毒，但用传统的免疫层析试验用具时判断为阳性，但用本发明的免疫层析试验用具即使这种试样也与RT—PCR的结果一致，能判断为阴性。即，使用本发明的免疫层析试验用具降低了假阳性的发生率。
实施例3
作为HAMA反应物，使用市场销售的非特异吸收抗体(Biolink公司，单克隆用非特异去除剂，标签号061002)取代实施例2用的HAMA反应物，制备本发明的免疫层析试验用具。
平均每测试条附着的HAMA反应物数量为7.2μg。
实验例3
用实施例3和比较例3的免疫层析试验用具，以HAMA血清(含人抗鼠抗体的血清)为试样进行检测线强度判断。
HAMA血清使用以下几种：
HAMA血清1：BioReclamation(国际生物公司制)BRH22942
HAMA血清2：BioReclamation(国际生物公司制)BRH40929
HAMA血清3：BioReclamation(国际生物公司制)BRH40930
HAMA血清4：BioReclamation(国际生物公司制)BRH40932
将上述HAMA血清150μL与附属于pochtemS流感的标本抽取试剂800μL混合，制备试样。将200μL试样添加到各免疫层析试验用具的加样区，10分钟后与实验例1同样进行检测线强度判断。
作为阴性质控品(NC)使用了200μL标本抽取试剂。
结果如表3所示。其中“—”表示目测未能确认判断区显色。另，表中虽无表示，但在整个实验中，确认质控区显色。即确认试样适当展开。
[表3]
Figure A200810148851D00251
从表3的结果得知，使用市场销售的非特异性吸收抗体作为HAMA反应物的本发明免疫层析试验用具比以往的免疫层析试验用具能够降低假阳性的发生率。
前述的详细说明及附图是通过文字解释和图示来进行的，其目的不在于限定权利要求的保护范围。本说明书中的具体实施方式的各个变种对于普通技术人员来说显而易见，并处于权利要求及其等同技术的保护范围内。

Claims (17)

1.一种用于检测试样中所含待测物的免疫层析试验用具，包括：
层析膜，具有固定了可以与待测物结合的结合物的判断区；
试样展开垫，具有加样区配置在比层析膜靠近试样展开方向上游位置，用于添加试样；及
标记物附着垫，配置于比加样区靠近试样展开方向下游且比层析膜靠近试样展开方向上游的位置，用于附着可与待测物结合的标记物；
其中，可与人抗鼠抗体反应的物质附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中。
2.权利要求1所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的物质附着在标记物附着垫。
3.权利要求1所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的物质附着在试样展开垫。
4.权利要求1～3中任一所述免疫层析试验用具，其特征在于：标记物附着垫配置在与试样展开垫和层析膜有接触的位置。
5.权利要求1～3中任一所述免疫层析试验用具，其特征在于：标记物附着垫与层析膜有一定间隔。
6.权利要求1～3中任一所述免疫层析试验用具，其特征在于：试样展开垫与层析膜接触配置。
7.权利要求1～3中任一所述免疫层析试验用具，其特征在于：试样展开垫与层析膜有一定间隔。
8.权利要求1所述免疫层析试验用具，还包括：配置在比层析膜靠近试样展开方向下游位置的吸收垫。
9.权利要求8所述免疫层析试验用具，其特征在于：吸收垫与层析膜有接触。
10.权利要求1所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的物质为可与人抗鼠抗体反应的抗体或可与人抗鼠抗体反应的抗体片段。
11.权利要求10所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的抗体是选自保藏于日本国家技术评估研究所专利微生物寄存中心，保藏日期为2007年9月25日，国际保藏号为NITE BP—420和国际保藏号为NITE BP—421之中的至少一种杂交瘤产生的单克隆抗体。
12.权利要求1～3中任一所述免疫层析试验用具，其特征在于：标记物附着垫还附着质控用标记物；
层析膜还有固定可与质控用标记物结合的物质的质控区。
13.权利要求1所述免疫层析试验用具，还包括：第二试样展开垫，其配置在比加样区靠近试样展开方向下游且比层析膜靠近试样展开方向上游的位置。
14.权利要求13所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的物质附着在第二试样展开垫。
15.权利要求1所述免疫层析试验用具，其特征在于：可与人抗鼠抗体反应的物质附着在垫中，以便与试样一起展开。
16.一种用免疫层析试验用具检测试样中所含待测物的方法，该免疫层析试验用具所含层析膜有一判断区，其中固定有可与待测物结合的结合物。该方法包括以下步骤：
向免疫层析试验用具添加试样；
使可与人抗鼠抗体反应的物质和可与待测物结合的标记物与试样在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中接触；以及
让可与固定在判断区的待测物结合的结合物与试样接触；
检测出通过待测物结合到判断区的标记物质。
17.一种用于检测试样中待测物的免疫层析试验用具的制造方法，所述免疫层析试验用具所含层析膜有一个用于检测试样中所含待测物的判断区，所述判断区中固定有可与待测物结合的结合物，其特征在于：包括让可与人抗鼠抗体反应的物质附着在配置于比层析膜靠近试样展开方向上游的垫中的步骤。
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