CN101421383B

CN101421383B - 表面活性漂白和动态pH

Info

Publication number: CN101421383B
Application number: CN2007800123584A
Authority: CN
Inventors: E·M·孔卡; D·A·伊斯泰尔; H·吴; A·J·波罗斯
Original assignee: Procter and Gamble Ltd; Genencor International Inc
Priority date: 2006-03-02
Filing date: 2007-02-16
Publication date: 2011-12-14
Anticipated expiration: 2027-02-16
Also published as: CA2643265A1; US20080029130A1; EP1991651B2; EP1991651A1; CN101421383A; BRPI0708504A8; WO2007106293A1; CA2643265C; RU2431655C2; RU2008139090A; JP5486810B2; JP2009528427A; MX2008011092A; US20110021404A1; BRPI0708504A2; EP1991651B1

Abstract

本发明的名称是表面活性漂白和动态pH。本发明提供用于动态pH控制的方法和组合物，尤其在洗涤剂应用中。在特别优选的实施方式中，洗涤剂组合物在从包括布在内的织物表面去除污垢中有用。在一些特别优选的实施方式中，本发明提供酶组合，以提供动态pH控制。

Description

表面活性漂白和动态pH

技术领域

本发明提供用于动态pH控制的方法和组合物，尤其在洗涤剂应用中。在特别优选的实施方式中，洗涤剂组合物在从包括布在内的织物表面去除污垢中有用。在一些特别优选的实施方式中，本发明提供酶组合，用于提供动态pH控制。

背景技术

洗涤剂和其它清洁组合物典型地包括活性成分的复杂组合。例如，大多数清洁产品包括表面活性剂体系、用于清洁的酶、漂白剂、助洗剂、抑泡剂(sudssuppressors)、污垢悬浮剂(soil-suspending agents)、去污剂(soil-release agents)、光学增白剂、柔软剂、分散剂、染料迁移抑制化合物、研磨剂、杀菌剂和香料。尽管目前的洗涤剂是复杂的，但还有许多难以完全去除的污渍。并且，由于清洁不完全，经常有残留物积累，导致脱色(例如，变黄)和美感降低。由于越来越多地使用低清洗温度(例如冷水)和较短的洗涤周期，这些问题被复杂化。而且，许多污渍是由纤维质材料的复杂混合物组成的，主要包括碳水化合物和碳水化合物衍生物、纤维和细胞壁组分(例如，植物材料、木材、基于泥/粘土的污渍和水果)。这些污渍对清洁组合物的配制和应用造成了严峻的挑战。

此外，有色的衣服往往会磨损和表现出外观上的损失。这种颜色损失的一部分是由于洗衣过程中的磨损，特别是在自动洗涤和烘干机中。而且，织物的拉伸强度损失似乎是由于使用、磨损和/或洗涤和干燥而产生的机械以及化学作用所致的不可避免的结果。因此，需要经济并有效地清洗有色衣服以便使这些外观损失最小化的方法。

总之，尽管清洁组合物的能力有所改进，在本领域中仍然存在着对去除污渍、维持织物颜色和外观并防止染料迁移的洗涤剂的需求。此外，存在着为织物提供和/或恢复拉伸强度，以及提供防皱、防起球和/或防缩性质，以及提供静电控制、织物柔软性，维持期望的颜色外观和织物的抗磨损性质和益处的洗涤剂和/或织物护理组合物的需求。特别地，存在着对含有能够去除污渍的有色成分的组合物的需求，所述污渍的有色成分通常仍附着在洗过的织物上。此外，存在着对适合于纺织品漂白的改进方法和组合物的需求。

发明内容

本发明提供用于动态pH控制的方法和组合物，尤其在洗涤剂应用中。在特别优选的实施方式中，洗涤剂组合物在从包括布在内的织物表面去除污垢中有用。通过洗涤进行动态pH控制允许性能成分在合适的pH范围内充分利用它们的潜力以给出优良的清洁益处。此外，洗涤溶液pH的变化(从弱碱性pH变为酸性pH)也使表面上的污垢变性，并且去除某些在较高pH下没有去除的污垢。

本发明进一步提供包括足量的至少一种酶和所述酶的至少一种底物的组合物，其足以使洗液的pH降至至少约pH7或以下。在一些特别优选的实施方式中，使用本文所述的方法(如实施例3)以便评估pH下降。在一些优选的实施方式中，pH下降至约pH6或以下。在一些可选的实施方式中，酶选自水解酶和氧化酶。在一些优选的实施方式中，水解酶选自过水解酶(perhydrolase)、羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸一酯水解酶、磷酸二酯水解酶、硫醚水解酶、α-氨基-酰基-肽水解酶、肽基-氨基酸水解酶、酰基-氨基酸水解酶、二肽水解酶、肽基-肽水解酶、胃蛋白酶、胃蛋白酶B、凝乳酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶A、糜蛋白酶B、弹性蛋白酶、肠激酶、组织蛋白酶C、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶解凝乳酶、肾素、枯草杆菌蛋白酶、曲霉菌肽酶(aspergillopeptidase)A、胶原酶、羧菌肽酶B、激肽释放酶、胃亚蛋白酶(gastrisin)、组织蛋白酶D、菠萝蛋白酶、角蛋白酶、糜蛋白酶C、胃蛋白酶C、曲霉菌肽酶B、尿激酶、羧基肽酶A和B、氨基肽酶、脂肪酶、果胶酯酶和叶绿素酶。在一些特别优选的实施方式中，水解酶包括至少一种具有过水解酶活性的酶(如本文所述的过水解酶)。在还有另外的实施方式中，氧化酶选自：醛糖氧化酶、半乳糖氧化酶、纤维二糖氧化酶、吡喃糖氧化酶，山梨糖底物包括酯部分。在一些优选的实施方式中，包括酯部分的底物选自乙酸乙酯、甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯、neodol(结构为RCH(CH₃)CH₂OH的脂肪醇)酯、乙氧基neodol乙酸酯、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。在还有进一步的实施方式中，包括酯部分的底物具有式R¹O_x[(R²)_m(R³)_n]_p，其中R¹是H或包括伯胺、仲胺、叔胺或季胺部分的部分，所述包括胺部分的R¹部分选自取代或未取代的烷基、杂烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基；或者其中R¹包括从1至50,000个碳原子、从1至10,000个碳原子、或者甚至从2至100个碳原子；每个R²是烷氧基部分，在本发明的一方面每个R²独立地是乙氧基、丙氧基或丁氧基部分；R³是酯形成部分，其具有式：R⁴CO-，其中R⁴可以是H、取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基，在本发明的一方面，R⁴可以是包括1至22个碳原子的取代或未取代的烷基、链烯基或炔基部分，包括4至22个碳原子的取代或未取代的芳基、烷芳基、烷基杂芳基或杂芳基部分，或者R⁴可以是取代或未取代的C₁-C₂₂烷基部分或者R⁴可以是取代或未取代的C₁-C₁₂烷基部分；当R¹是H时，x是1；当R¹不是H时，x是等于或小于R¹中碳数目的整数，p是等于或小于x的整数，m是从0至12或者甚至1至12的整数，并且n至少是1。在还有另外的实施方式中，基于总的组合物重量，本文所述的组合物包括约0.1至约99.9的包含酯部分的底物。在一些优选的实施方式中，基于总的组合物重量，组合物包括约0.1至约50的包含酯部分的底物。在还有进一步优选的实施方式中，组合物进一步包括至少一种过氧化氢源和/或过氧化氢。在一些优选的实施方式中，组合物进一步包括至少一种辅助成分。在一些特别优选的实施方式中，所述至少一种辅助成分选自表面活性剂、助洗剂、螯合剂、染料迁移抑制剂、沉积助剂、分散剂、附加酶和酶稳定剂、催化物、漂白激活剂、漂白促进剂、预形成的过酸、聚合分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂(structure elasticizing agents)、织物柔软剂、载体、水溶助长剂、操作助剂和/或颜料。

本发明还提供清洁表面和/或织物的至少一部分的方法，其包括：任选的洗涤和/或漂洗表面和/或织物的步骤；使所述表面和/或织物与本文所述的至少一种组合物和/或包括本文所述的至少一种组合物的洗液接触；和任选地洗涤和/或漂洗所述表面和/或织物。在一些优选的实施方式中，洗液的pH基本上呈线性下降。在还有进一步的实施方式中，表面和/或织物被暴露于pH小于约6.5的洗液至少约2分钟的时期。

本发明进一步提供清洁表面和/或织物的至少一部分的方法，其包括：任选的洗涤和/或漂洗表面和/或织物的步骤；使所述表面和/或织物与本文所述的至少一种组合物和/或包括本文所述的至少一种组合物的洗液接触；和任选地洗涤和/或漂洗所述表面和/或织物，其中所述接触发生在一个洗涤周期期间。在一些优选的实施方式中，洗液的pH基本上呈线性下降。在一些特别优选的实施方式中，洗液的pH在最后的25％至50％洗涤周期内降至6.5或以下。在另外的实施方式中，表面和/或织物被暴露于pH小于约6.5的洗液至少约2分钟的时期。

附图说明

图1A-C提供了显示用过乙酸pH对清洁性能影响的图。图A提供T恤衫的结果，而图B提供枕头套的结果，并且图C提供茶锈的结果。

图2提供显示脏的增载物(dingy ballast)的滴定曲线的图。

图3A-C提供显示涉及产生动态pH性能益处的底物和酶参数的图。图A提供处理的pH曲线的图，而图B提供T恤衫、枕头套、包含疏水性污垢的数据和这些数据的平均值，并且图C提供酒、茶、包含亲水性污垢的数据和这些数据的平均值。

图4A-C提供显示测定底物作用和清洁性能所进行的实验结果的图。图A提供显示处理的pH曲线的图，而图B提供T恤衫、枕头套、包含疏水性污垢的数据和这些数据的平均值，并且图C提供酒、茶、包含亲水性污垢的数据和这些数据的平均值。

图54A-C提供显示动态pH洗涤剂和商业洗涤剂清洁性能比较的图。图A提供显示处理的pH曲线的图，而图B提供T恤衫、枕头套、包含疏水性污垢的数据和这些数据的平均值，并且图C提供酒、茶、包含亲水性污垢的数据和这些数据的平均值。

发明内容

本发明提供用于动态pH控制的方法和组合物，尤其在洗涤剂应用中。在特别优选的实施方式中，洗涤剂组合物可应用在从包括布在内的织物表面去除污垢。在一些特别优选的实施方式中，本发明提供酶组合，用于在整个洗涤周期中提供动态pH控制。

如无其它的说明，本发明的实践涉及在分子生物学、微生物学、蛋白质纯化、蛋白质工程、蛋白质和DNA测序以及重组DNA领域中普遍应用的传统技术，这些技术在本领域的技术范围内。这些技术对本领域的技术人员是已知的，并且在许多教科书和参考资料中有所描述(参见，例如Sambrook et al.，Molecular Cloning： A Laboratory Manual，第二版(Cold Spring Harbor)，[1989])；和Ausubel et al.，Current Protocols in Molecular Biology[1987])。此处提及的所有专利、专利申请、论文以及出版物，包括在上文和下文提出的，都在此被明确地引入作为参考。

而且，此处提供的标题不是对本发明的各个方面或实施方式的限制，可以参考说明书作为整体，对其进行理解。因此，下面即将定义的术语通过参考作为整体的说明书得以更完整的限定。然而，为了帮助理解本发明，下面对许多术语进行定义。

定义

本文中如无其它限定，在此使用的所有技术术语和科学术语具有与被本发明所涉及领域的普通技术人员普遍理解的相同的意义。例如，Singleton和Sainsbury，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology，2d Ed.，John Wiley and Sons，NY(1994)；和Hale and Marham，The Harper Collins Dictionary of Biology，HarperPerennial，NY(1991)为本领域技术人员提供了本发明中使用的许多术语的一般性释义。虽然与此处描述相似或等价的任何方法和物质在本发明的实践中是有用的，此处描述了优选的方法和物质。因此，下面即将限定的术语可通过参照说明书作为整体而得到更加充分地描述。同样，如此处所用，如果在上下文中没有其它明确的说明，单数的词语＂一(a)＂、＂一(an)＂和＂该、所述(the)＂包括复数的指示。如无其它的说明，分别地，核酸以5′至3′方向从左至右书写；氨基酸序列以氨基至羧基方向从左至右书写。应该理解，本发明不限于所描述的特定方法、方案和试剂，因为本领域技术人员可以根据它们的应用背景对它们进行变化。

在整个本说明书中，给出的每一最大值数字限定意图包含每一较小的数字限定，如同这些较小的数字限定明确地写在本文中。在整个本说明书中，给出的每一最小值数字限定将包含每一较大的数字限定，如同这些较大的数字限定明确地写在本文中。在整个本说明书中，给出的每一数字范围将含有落入此较宽数字范围内的每一较窄数字范围，如同这些较窄数字范围明确地写在本文中。

如此处所用，术语“动态pH”是指在清洁期间清洁***pH的变化，这是由于至少一种酶对清洁***中所存在的至少一种底物的作用。在特别优选的实施方式中，动态pH条件产生清洁益处，如洗涤剂的洗涤性能提高。

如此处所用，术语“漂白(bleaching)”是指，在合适的pH和温度条件下，处理物质(例如，织物、衣物等)或表面足够长时间，以使物质增亮(即变白)/或使物质清洁。适于漂白的化学品的例子包括但不限于ClO₂、H₂O₂、过酸类、NO₂等。

如此处所用，术语“消毒(disinfecting)”是指，从表面去除污染物，以及抑制或杀死物品表面的微生物。不意图将本发明限制为任何具体表面、物品或欲被去除的污染物(一种或多种)或微生物。

如此处所用，术语“过水解酶(perhydrolase)”是指，能够催化导致形成足够高含量过酸的反应的酶，所述过酸适于如清洁、漂白和消毒用途。在特别优选的实施方式中，本发明的过水解酶产生非常高的过水解与水解的比值。这些独特的酶的高过水解与水解比值使这些酶适于用在非常宽的各种用途中。在另外的优选实施方式中，本发明的过水解酶被表征为具有独特的三级结构和一级序列。在特别优选的实施方式中，本发明的过水解酶包括独特的一级和三级结构。在一些特别优选的实施方式中，本发明的过水解酶包括独特的四级结构。在一些优选实施方式中，本发明的过水解酶是耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)过水解酶，而在可选的实施方式中，过水解酶是此过水解酶的变体，在更进一步的实施方式中，过水解酶是此过水解酶的同源物。在进一步优选的实施方式中，对单体水解酶进行工程改造，产生过水解酶活性好于单体的多聚体酶。然而，不意图将本发明限于此特定的耻垢分枝杆菌过水解酶、此过水解酶的特定变体，也不限于此过水解酶的特定同源物，其被提供在US04/40438中，在此处被引入其全部作为参考。

如此处所用，“个人护理产品(personal care product)”指用于毛发、皮肤、头皮和牙齿的清洁、漂白和/或消毒的产品，包括但不限于洗发剂、润肤液、沐浴凝胶、局部保湿剂(topical moisturizers)、牙膏和/或其它局部洗涤剂。在一些特别优选的实施方式中，这些产品用于人，而在其它实施方式中，这些产品在非人的动物中有用(例如，在兽医用途中)。

如此处所用，“清洁组合物(cleaning composition)”和“清洁制剂(cleaningformulation)”是指，可以用于从欲清洁的物品中去除不需要的化合物的组合物，所述物品如织物、器皿、隐形眼镜、其它固体基质、毛发(洗发剂)、皮肤(肥皂和霜)、牙齿(漱口水、牙膏)等。该术语包括为所需的特定类型的清洁组合物以及产品形式(例如，液体、凝胶、颗粒或喷雾组合物)而选定的任何物质/化合物，只要该组合物与用于组合物中的过水解酶和其它酶(一种或多种)相容即可。考虑到欲清洁的表面、物品或织物，和针对使用期间的清洁条件所需的组合物形式之后，容易对清洗组合物物质作出具体的选择。

所述术语进一步指，适于对任何物体和/或表面进行清洁、漂白、消毒和/或灭菌的任何组合物。这些术语意图包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂(laundry detergents)和精细织物洗涤剂；硬表面清洁制剂如用于玻璃、木材、陶瓷和金属台面和窗的清洁制剂；地毯洗涤剂；烤箱洗涤剂；织物增新剂(fresheners)；织物柔软剂；和纺织品及衣物预除污剂(pre-spotters)和盘碟洗涤剂)。

事实上，如无其它说明，如此处所用，术语“清洁组合物”包括颗粒或粉末形式的通用或重役型(heavy-duty)清洗剂，特别是清洁洗涤剂；液体、凝胶或膏体形式的通用清洗剂，特别是所谓的重役液体(HDL)型；液体精细织物洗涤剂；手工洗碟剂或轻役型(light duty)洗碟剂，特别是那些高起泡型的；机器洗碟剂，包括各种片状、颗粒、液体和漂洗助剂型，用于家用和公共机构用；液体清洁和消毒剂，包括抗菌洗手型、清洁条状物(cleaning bars)、漱口水、牙齿清洗剂、汽车或地毯清洗剂、浴室清洗剂；洗发香波(hair shampoos)和洗发水(hair-rinses)；沐浴凝胶和泡沫浴以及金属洗涤剂；以及洗涤助剂如漂白添加剂和“污渍粘除(stain-stick)”或预处理型。

如此处所用，术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于指混合物，其意图用在清洗介质中，用于清洁弄脏的对象。在一些优选的实施方式中，该术语涉及洗涤织物和/或衣物(例如，“衣物洗涤剂”)。在可选的实施方式中，该术语指其它洗涤剂，如那些用于清洗盘碟、餐具等的洗涤剂(例如，“盘碟洗涤剂”)。不意图将本发明限制在任何具体的洗涤剂制剂或组合物。事实上，意图在于，除了过水解酶之外，该术语还包括含有表面活性剂、转移酶、水解酶、氧化还原酶、助洗剂、漂白剂、漂白激活剂、上蓝剂(bluing agents)和荧光染料、抗结块剂、掩蔽剂、酶激活剂、抗氧化剂和增溶剂的洗涤剂。

如此处所用，洗涤剂“增加的性能”定义为，对漂白敏感性污渍(例如，草、茶、酒、血、脏物等)的清洁增强，如在标准的洗涤周期后通过常规的评价方法确定的。在特别的实施方式中，本发明的酶在氧化并去除有色污渍和污垢方面性能增加。在进一步的实施方式中，本发明的酶在去除污渍和/或使污渍脱色方面性能增加。在还有另外的实施方式中，本发明的酶在去除脂类污渍和污垢方面性能增加。在更进一步的实施方式中，本发明在去除盘碟和其它物品的污垢和污渍方面性能增加。

如此处所用，术语“硬表面清洁组合物”是指，用于清洁硬表面如地板、墙壁、瓷砖、浴室和厨房设备和类似物的洗涤剂组合物。这些组合物可以任何形式提供，包括但不限于固体、液体、乳剂等。

如此处所用，“盘碟洗涤组合物(dishwashing composition)”是指用于清洁盘碟的所有形式的组合物，包括但不限于颗粒和液体形式。

如此处所用，“织物清洁组合物(fabric cleaning composition)”是指用于清洁织物的所有形式的洗涤剂组合物，包括但不限于颗粒、液体和条状形式。

如此处所用，“纺织品(textile)”是指编织织物，以及适于转变为纱线或用作纱线的人造短纤维和长丝，编织物，针织物和非织造织物。该术语包括由天然纤维以及合成(例如，人造)纤维制成的纱线。

如此处所用，“纺织材料(textile materials)”是对纤维、纱线中间物、纱线、织物和由织物制成的产品(例如，衣服和其它物品)的总称。

如此处所用，“织物(fabric)”包括任何纺织材料。因此，意图在于，该术语包括衣服以及织物、纱线、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料和任何其它纺织材料。

如此处所用，术语“相容的”意味着，清洁组合物物质不使过水解酶的酶活性降低到过水解酶在正常的应用条件下不能如所需的有效的程度。具体的清洁组合物物质在下文中详细列出。

如此处所用，“有效量的酶”是指，在特定用途中达到需要的酶活性所需的酶量。这种有效量容易被本领域的普通技术人员确定，并且基于许多因素，如应用的具体酶变体、清洁用途、清洁组合物的具体组成以及是否需要液体或干的(例如，颗粒、条状)组合物，和类似因素。

如此处所用，“非织物清洁组合物”包括硬表面清洁组合物、洗碟组合物和个人护理清洁组合物(例如，口腔清洁组合物、牙齿清洁组合物、个人清洁组合物等)。

如此处所用，“口腔清洁组合物”是指牙粉、牙膏、牙胶、牙粉、漱口水、口腔喷剂、口腔凝胶(mouth gels)、口香糖、止咳糖、香粉、片剂、生物凝胶(biogels)、预防性膏剂(prophylaxis pastes)、牙齿处理溶液(dental treatment solutions)和类似物。适合与本发明的过水解酶一起使用的口腔护理组合物是本领域熟知的(参见，例如，美国专利5,601,750、6,379,653和5,989,526，所有专利在此被引用作为参考)。

如此处所用，“氧化化学品(oxidizing chemical)”是指，具有漂白任何材料的能力的化学品。氧化化学品以适于漂白的量、pH和温度存在。该术语包括但不限于过氧化氢和过酸类。

如此处所用，“酰基”是作为去除了-OH基团后的羧酸残余物的有机酸基团的通称(例如，乙酰氯，CH₃CO-Cl，是由乙酸CH₃COO-H形成的酰氯)。各个酰基基团的命名是用“酰(yl)”替代酸的“酸(ic)”而形成的。

如此处所用，术语“酰化”是指，将酰基(RCO-)基团取代进入分子的化学转化，通常是针对-OH基中的活性氢进行。

如此处所用，术语“转移酶”是指，催化官能化合物向一系列底物转移的酶。

如此处所用，“离去基团”是指，在被另一亲核体取代时，从酰基供体切除的亲核体。

如此处所用，术语“酶促转化”是指，通过使底物或中间产物和酶接触，底物修饰为中间产物，或中间产物修饰为终产物。在一些实施方式中，接触是通过直接将底物或中间产物暴露于合适的酶实现的。在其它实施方式中，接触包括将底物或中间产物暴露于生物体，所述生物体表达和/或分泌该酶，和/或分别将期望的底物和/或中间产物代谢成期望的中间产物和/或终产物。

如此处所用，短语“洗涤剂稳定性”是指洗涤剂组合物的稳定性。在一些实施方式中，稳定性是在应用该洗涤剂期间被评价的，而在其它实施方式中，该术语是指洗涤剂组合物在储存期间的稳定性。

如此处所用，短语“对蛋白水解的稳定性”是指蛋白质(例如，酶)抵抗蛋白水解的能力。不意图于将该术语限制为，应用任何特定蛋白酶来评价蛋白质的该稳定性。

如此处所用，“氧化稳定性”是指蛋白质在氧化条件下起作用的能力。特别地，该术语是指蛋白质在各种浓度H₂O₂和/或过酸存在情况下起作用的能力。各种氧化条件下的稳定性可以通过本领域技术人员已知的标准程序和/或此处描述的方法来测定。氧化稳定性的实质上改变通过酶活性半衰期增加或降低至少约5％或更多来证实(在大多数实施方式中，增加是优选的)，这是与氧化化合物不存在的情况下的酶活性相比较而言的。

如此处所用，“pH稳定性”是指蛋白质在特定pH下起作用的能力。一般来说，大多数酶具有其起作用的有限pH范围。除了在中间范围pH(即，pH7左右)起作用的酶之外，还有能够在非常高或非常低的pH下起作用的酶。在各种pH下的稳定性可以通过本领域技术人员已知的标准程序和/或此处描述的方法来测定。pH稳定性的实质上改变通过酶活性半衰期增加或降低至少约5％或更多来证实(在大多数实施方式中，增加是优选的)，这是与酶在最适pH下的酶活性相比较而言的。然而，不意图于将本发明限制为任何pH稳定性水平或pH范围。

如此处所用，“热稳定性”是指蛋白质在特定温度下起作用的能力。一般来说，大多数酶具有其起作用的有限温度范围。除了在中间范围温度(即，室温)起作用的酶之外，还有能够在非常高或非常低的温度下起作用的酶。热稳定性可以通过已知程序和/或此处描述的方法来测定。热稳定性的实质上改变通过突变体的催化活性的半衰期增加或降低至少约5％或更多来证实(在大多数实施方式中，增加是优选的)，所述突变体暴露于不同于(即，高于或低于)酶活性最适温度的温度。然而，不意图于将本发明限制为任何温度稳定性水平或温度范围。

如此处所用，“化学稳定性”是指蛋白质(例如酶)对可负面影响其活性的化学品的稳定性。在一些实施方式中，这样的化学品包括但不限于过氧化氢、过酸类、阴离子洗涤剂、阳离子洗涤剂、非离子洗涤剂、螯合剂等。然而，不意图于将本发明限制为任何特定的化学品稳定性水平或化学品稳定性范围。

如此处所用，短语“底物特异性的改变”是指酶的底物特异性的变化。在一些实施方式中，底物特异性的变化被定义为，酶相比酶变体或其它酶组合物观察到的K_cat/K_m比值的差异。酶的底物特异性根据被测试的底物而变化。酶的底物特异性是通过比较它对不同底物显示出的催化效率而测定的。这些测定在评价突变酶的效率中特别有用，因为常常期望产生对感兴趣的特定底物显示更高比值的变体酶。例如，与目前用于清洁、漂白和消毒用途的酶相比，本发明的过水解酶在从酯底物产生过酸方面更加有效。本发明的另一例子是相比野生型酶具有更低的过酸降解活性的过水解酶。本发明的另一例子是，对比乙酸更加疏水的酰基基团具有更高活性的过水解酶。然而，不意图于将本发明限制为任何特定的底物组分或任何具体的底物特异性。

如此处所用，短语“独立地选自……”意味着，选自所引用的马库什组的部分或要素可以是相同的，可以是不同的或是要素的任意混合物，如下面的例子所示：

涉及化学组分时，如此处所用的术语“取代的(substituted)”指，应用该术语的有机组分或基团：

(a)通过消除至少一个元素或基团而变成不饱和的；或

(b)化合物或基团中的至少一个氢被含有一个或多个(i)碳、(ii)氧、(iii)硫、(iv)氮或(v)卤素原子的部分替代；或

(c)既有(a)又有(b)。

仅含有碳和氢原子的如刚刚在上面(b)中描述地可以替代氢的部分，是烃部分，包括但不限于烷基、链烯基、炔基、链二烯基、环烷基、苯基、烷基苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、类固醇基团，和这些基团的相互组合以及这些基团与多价烃基例如烯属烃(alkylene)、亚烷基(alkylidene)和alkylidyne基的组合。如刚刚在上面(b)描述的可以替代氢的含氧原子的部分包括但不限于，羟基、酰基或酮、醚、环氧、羧基和含酯基团。如刚刚在上面(b)描述的可以替代氢的含硫原子的部分包括但不限于，含硫的酸和酸酯基团、硫醚基团、巯基和硫代酮基。如刚刚在上面(b)描述的可以替代氢的含氮原子的部分包括但不限于，氨基、硝基、偶氮基、铵基、酰胺基、叠氮基、异氰酸盐(酯)基、氰基和腈基。如刚刚在上面(b)描述的可以替代氢的含卤原子的部分包括氯、溴、氟、碘基团，以及之前描述的任何部分，其中氢或侧链烷基被卤素基团取代而形成稳定的取代部分。

应该理解，(b)(i)至(b)(v)的上述任意部分可以彼此进行取代，或者是以单价取代进行或者是在多价取代中通过失去氢，形成可以替代在该有机化合物或基团中的氢的另一个单价部分。

如此处所用，术语“纯化的”和“分离的”是指从样品中去除污染物。例如，感兴趣的酶是通过去除溶液或制备物中不是感兴趣酶的污染蛋白质和其它化合物来纯化的。在一些实施方式中，重组的感兴趣酶是在细菌或真菌宿主细胞中表达的，并且这些重组的感兴趣酶是通过去除其它宿主细胞组分来纯化的；样品中重组的感兴趣酶多肽的百分比因而增加。

如此处所用，“感兴趣的蛋白质”是指被分析、鉴定和/或修饰的蛋白质(例如，酶或“感兴趣的酶”)。天然发生的蛋白质以及重组蛋白质在本发明中有用。

如此处所用，“蛋白质”是指由氨基酸组成的并且被本领域技术人员认为是蛋白质的任意组分。术语“蛋白质”、“肽”和“多肽”在此可以交换使用。其中肽是蛋白质的一部分，本领域技术人员知晓该术语在文中的应用。

如此处所用，功能上和/或结构上相似的蛋白质被认为是“相关蛋白质”。在一些实施方式中，这些蛋白质来源于不同的属和/或种，包括生物体类别之间的差异(例如，细菌蛋白和真菌蛋白)。在一些实施方式中，这些蛋白质来源于不同的属和/或种，包括生物体类别之间的差异(例如，细菌酶和真菌酶)。在另外的实施方式中，相关蛋白质是由相同的种提供的。事实上，不意图将本发明限制为来自任何特定来源的相关蛋白质。此外，术语“相关蛋白质”包括三级结构同源物和一级序列同源物(例如，本发明的酶)。在进一步实施方式中，该术语包括能够免疫学上交叉反应的蛋白质。在一些最特别优选的实施方式中，本发明的相关蛋白质有非常高的过水解与水解比值。

清洁和洗涤剂制剂

本发明的洗涤剂组合物以任何合适的形式提供，包括，例如，作为液体稀释剂、颗粒形式、乳剂形式、凝胶形式和膏状物形式。应用固体洗涤剂组合物时，洗涤剂优选地配制为颗粒。优选地，将颗粒配制成另外含有保护剂(参见，例如，在1991年1月17日提交的美国申请序列号07/642,669，在此被引入作为参考)。同样地，在一些实施方式中，将颗粒配制成含有降低颗粒在洗涤介质中的溶解速度的物质(参见，例如，美国专利号5,254,283，在此被引入其全部作为参考)。此外，本发明的过水解酶可以在底物和酶存在于相同颗粒的制剂中使用。因此，在一些实施方式中，通过提供局部浓度高的酶和底物，酶的效力得以增加(参见，例如，美国专利申请公开US2003/0191033，在此被引入作为参考)。

在本发明中有用的许多酶和酶变体在配制各种洗涤剂组合物中是有用的。许多已知的化合物是在这些组合物中有用的合适的表面活性剂。这些包括非离子、阴离子、阳离子、阴离子或两性离子洗涤剂(参见，例如，美国专利号4,404,128和4,261,868)。合适的洗涤剂制剂是美国专利号5,204,015中描述的制剂(前面已被引入作为参考)。本领域技术人员对用于清洁组合物的不同配方是熟悉的。

如上指出，在一些优选实施方式中，本发明的洗涤剂组合物应用表面活性试剂(即表面活性剂)，包括阴离子、非离子和两性表面活性剂，它们在洗涤剂组合物中的应用是众所周知的。适于用在本发明中的一些表面活性剂描述于英国专利申请号2094826A中，其在此被引入作为参考。在一些实施方式中，表面活性剂混合物用在本发明中。

用于本发明洗涤剂组合物的合适的阴离子表面活性剂包括直链或分支烷基苯磺酸酯；具有直链或分支的烷基或链烯基基团的烷基或链烯基醚硫酸酯；烷基或链烯基硫酸酯；烯烃磺酸酯；烷烃磺酸酯和类似物质。用于阴离子表面活性剂的合适的抗衡离子包括碱金属离子如钠和钾；碱土金属离子如钙和镁；铵离子；和具有1至3个碳原子数是2或3的烷醇基团的烷醇胺。

在本发明中有用的两性表面活性剂包含季铵磺酸盐、甜菜碱型两性表面活性剂和类似物质。这种两性表面活性剂在同一分子内既有正电荷基团又有负电荷基团。

在本发明中有用的非离子表面活性剂通常包括聚氧化亚烷基醚，以及高级脂肪酸烷醇酰胺或其烯化氧加合物、脂肪酸甘油一酯和类似物质。

在一些优选实施方式中，本发明洗涤剂组合物中包含的表面活性剂或表面活性剂混合物以总洗涤剂组合物的约1至约95的重量百分比的量提供，并且优选地是总洗涤剂组合物的约5至约45重量百分比。在各种实施方式中，本发明组合物中含有许多其它组分。这些组分中的许多描述于下。不意图将本发明限制为这些特定例子。事实上，预期其它化合物可以用于本发明中。下面的描述仅说明了一些任选的组分。

蛋白质，特别是本发明的过水解酶和/或其它酶，通常以按重量计约0.001至约5％(优选0.1％至0.5％)的水平被配入已知的粉末和液体洗涤剂中，所述洗涤剂的pH在3和12.0之间。在一些实施方式中，这些洗涤剂清洁组合物进一步包含其它酶(如蛋白酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、过氧化物酶、氧化还原酶、纤维素酶、脂酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶和/或内切糖苷酶)以及助洗剂和稳定剂。事实上，预期任何具有水解活性的酶将单独使用或与其它酶组合使用在本发明中。

除了典型的清洁组合物，容易理解，本发明的过水解酶变体也在应用天然或野生型酶的任何用途中有用。因此，这样的变体可以用在，例如条状和液体肥皂应用、餐盘护理制剂、表面清洁应用、隐形眼镜清洁液或产品、废物处理、纺织品应用、消毒剂、皮肤护理、口腔护理、毛发护理等中。事实上，不意图将本发明的任何过水解酶变体限于任何特定用途。例如，在洗涤剂组合物中，本发明的变体过水解酶除了具有降低的致敏性，还可以具有增强的性能(和野生型或未修饰的过水解酶相比)。

向传统的清洁组合物中加入蛋白质并不产生任何特殊的使用限制。换言之，适于该涤剂剂的任何温度和pH也适用于本发明的组合物，只要pH在酶具有活性的范围内和温度低于所述蛋白质的变性温度。此外，本发明的蛋白质在没有洗涤剂的清洁、漂白和消毒组合物中有用，同样或是单独使用或是和过氧化氢源、酯底物(例如，或是被加入到被应用的体系中的，或是在被应用的体系中固有的，如含有酯的污渍等)、其它酶、表面活性剂、助洗剂、稳定剂等联合使用。事实上，不意图将本发明限制为任何特定的制剂或应用。

具体实施方式

本发明提供用于动态pH控制的方法和组合物，尤其在洗涤剂应用中。在特别优选的实施方式中，洗涤剂组合物可用于在从包括布在内的织物中表面去除污垢。在一些特别优选的实施方式中，本发明提供酶组合，用于提供动态pH控制。事实上，预期任何具有水解活性或过水解活性的酶将单独使用和/或与其它酶组合使用在本发明中。

在自动洗涤机中洗涤织物是众所周知的。标准的自动洗涤机操作包括至少一个洗涤周期，至少一个旋转周期——其去除洗涤周期中的大部分洗涤液体，最后的漂洗周期和最后的旋转周期。

洗涤剂(如表面活性剂和洗涤助洗剂)通常在洗涤和/或漂洗周期期间加入到洗涤机圆筒中，以有助于从织物中去除污垢和污渍。然而，为了防止洗液中存在成分的干扰，其它物质如织物护理作用剂(如柔软剂、手感修饰剂、抗皱剂等)有时在漂洗周期而不是洗涤周期期间加入到洗涤负荷(wash load)中。这些物质(如香料、增白剂、织物护理作用剂和/或去污剂)中有一些沉积在织物上，以提供最大益处。在一些情况下，使这些物质在织物上的潜在沉积最大化是期望的。

在洗涤周期开始期间含水洗液的pH通常高，典型地7以上，并且最常见的至少9。事实上，它通常在10.5至12.5的范围内，并且有时甚至更高。然而，在本发明的一些实施方式中，期望的最终pH小于或等于6。由于在洗涤和/或漂洗周期中通常包括的添加剂性质不同并且去除了大部分洗液，漂洗周期的pH通常低于洗涤周期，但是它通常不低于7。尽管已经使用pH7以下的漂洗周期，但这不是通常实施的。自动洗涤机具有特殊的要求，因为在洗涤周期中通常包括复杂洗涤剂组分并且在单次洗涤负荷中包括各种织物类型也是常见的。

衣物洗涤组合物需要在技术上和经济上是吸引人的，以及是消费者可接受的。特别地，去除油污和/或可漂白的污渍对衣物洗涤剂的配方设计师来说是一个持续的挑战。尽管这是需要改进的方面，衣物洗涤组合物中能有效改进性能的这些类型的成分倾向于是一些最昂贵的成分(如漂白剂)。本发明以成本上有效的方式提供改进衣物洗涤剂性能的组合物和方法。

此外，本发明提供适于有效清洁脏的物品的组合物和方法。伴随自动洗涤机处理出现的问题涉及在许多次洗涤期间残余物在织物上的逐渐沉积。此外，在穿着期间有大量身体污垢和环境污垢沉积在织物上，这进一步增加了残余污垢。这些残余物经常导致暗色织物发浑和/或赋予白色和/或其它亮色织物“脏的”外观。这种残余物的沉积还使得从织物表面去除污渍更加困难。本发明可用于处理脏的衣物并且比目前的组合物能更有效地对它们进行清洁。

因为衣物洗涤剂中具有不同活性的最佳pH值变化很大，pH依赖的清洁弄脏的织物的性能也是如此，所以需要能在各种pH条件下有效地工作以清洁弄脏的织物的组合物。在本发明的一些实施方式中使用的本发明的过水解酶可用于从酯底物中产生过酸漂白剂和降低pH的酸。在一些实施方式中，这些酯底物存在于污垢中，而在其它的实施方式中，它们被加入到组合物和/或洗涤负荷中。在特别优选的实施方式中，为了提供定向漂白，表面活性酯吸附到织物和污渍表面。因此，这些酶诸如本发明提供的那些酶——其对污渍和/或织物表面具有极大的亲合力，促进表面局部漂白和/或酸形成。具有中等碱度的配方允许pKa在8.2左右的特定成分(如，过酸类)和表面活性剂的活性和溶解性较大。酯经水解酶切割产生酸，其降低了pH，溶解了脂肪族残余物并且提高了在酸性pH下具有最佳活性的洗衣成分的性能。

在一些特别优选的实施方式中，过水解酶、表面活性剂酯、甘油三乙酸酯、过氧化物和最小量的表面活性剂基质(base)可用在清洁脏污的物品中。在一些实施方式中，污垢主要包括身体污垢。在一些实施方式中，脏污的织物被滴定以便提供合适的缓冲***，以提供碱性pH但是具有足够的容量以允许由于酶促酸生产而导致的pH下降。如本文所指出，性能试验是在北美中等洗涤条件下在小型洗涤机中进行的。本发明提供的酶促漂白和动态pH配方与商品液体洗涤剂相比对包含身体污垢的物品表现更好。在一些更优选的实施方式中，酶的加入被延迟5分钟(即，水解酶是在12分钟洗涤周期的5分钟之后加入的)，而底物和过水解酶是在洗涤周期开始时加入到洗涤负荷中的。

在一些实施方式中，本发明在从酯底物和过氧化氢酶促产生过酸方面有用处。在一些优选实施方式中，底物选自下列一种或多种：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。重要的是，本发明提供了在宽范围的pH和温度范围内有效清洁、漂白和消毒的方法。在一些实施方式中，在这种产生方法中应用的pH范围是4-12。在可选的实施方式中，应用的温度范围在5℃至90℃之间。本发明提供了优于目前应用的***的优势(参见，例如，EP申请87-304933.9)，优势在于，漂白在过酸氧化的最适pH下进行成为可能，以及提供了在中性pH、酸性pHs和低温下进行的漂白。尽管本发明对于衣物和织物护理在此进行了最充分的描述，但不意图于将本发明限制于这些用途。事实上，本发明在多种情况下有用，特别是在这样的情况下——其中通过过酸和/或过氧化氢的漂白在动态pH条件下是期望的，包括但不限于洗衣、织物处理、个人护理用途、消毒和清洁硬表面。

在历史上，过硼酸钠，和更近来的过碳酸钠，已经被用作漂白化合物，特别是在衣物洗涤剂中。该化合物在水溶液中迅速分解，产生过氧化氢(H₂O₂)，过氧化氢是活性漂白物质。由于过硼酸钠在高于80℃的温度更具活性，在40-60℃的温度范围内(即，在二十世纪五十年代通常最优选的洗涤温度)活性较低，所以漂白激活剂被掺入到含有过硼酸钠的衣物洗涤剂。事实上，大多数衣物洗涤剂含有漂白激活剂。这些激活剂是带有O-或N-结合的乙酰基团的化合物，能够和强亲核性氢过氧化阴离子反应，生成过氧乙酸。由于反应物是氢过氧化阴离子，碱性pHs对于这些激活剂向过酸的有效转化是必需的。过氧乙酸在弱碱性介质中分解，形成纯态氧(参见Hofmann et al.，J.Prakt.Chem.，334：293-297[1992])。

在高温(例如，>40℃)和高pH(>10)条件下，过氧化氢是特别有效的漂白剂，高温和高pH在一些环境中是清洗织物典型使用的条件。然而，如上所述，冷水清洗正在被更普遍地应用，导致H₂O₂漂白效率比使用热水时低。为了克服这种低温弊端，洗涤剂制剂通常包含漂白增强剂如TAED(N，N，N’N’-四乙酰基乙二胺)、NOBS(壬酰氧基苯磺酸)等。这些增强剂与H₂O₂结合，形成过酸物质，其比单独的H₂O₂更有效。尽管其有助于洗涤剂的漂白能力，TAED反应仅是大约50％有效的，原因是TAED的四个乙酰基中的仅仅两个转化为过酸。此外，TAED通过过氧化氢向过乙酸的转化仅在碱性pHs和高温下有效。因此，对于在所有漂白应用的用途而言，TAED反应不是最优的(例如，那些涉及中性或酸性pHs和冷水的应用)。本发明提供了克服TAED用途的弊端的方法。例如，本发明在冷水应用中以及那些涉及中性或酸性pH水平的应用中有用。而且，本发明提供了从过氧化氢产生过酸的手段，其具有高的过水解与水解比值。

而且，本发明的过水解酶和/或水解酶对多种酰基供体底物有活性，并且在低底物浓度下有活性，并且由于高的过酸：酸比值，提供了有效的过水解的手段。事实上，已经认识到，较高的过水解与水解比值是漂白应用所优选的(参见，例如，美国专利号5,352,594、5,108,457、5,030,240、3974,082和5,296,616，所有专利在此被引入作为参考)。在一些优选的实施方式中，本发明的过水解酶提供了大于1的过水解与水解比值。在一些特别优选的实施方式中，过水解酶提供了大于1的过水解与水解比值并且在漂白中有用。

此外，已经显示，它在通常使用的洗涤剂制剂中有活性(例如，Ariel Futur，WOB等)。因此，本发明提供了在多种清洁环境下的许多优点。

如上所述，通过酶促过水解产生过酸的关键成分是酶、酯底物和过氧化氢。过氧化氢可以直接分批加入，或持续地“原位”产生。目前的洗衣粉采用分批加入的H₂O₂，其形式是自动分解成H₂O₂的过碳酸盐或过硼酸盐。本发明的过水解酶在相同的洗衣粉分批方法中可用作H₂O₂来源。然而，这些酶也可以与任何其它合适的H₂O₂来源一起作用，包括通过化学、电化学和/或酶学方法产生的H₂O₂。化学来源的例子是上述过碳酸盐和过硼酸盐，而电化学来源的例子是供给氧气和氢气的燃料电池，并且酶的例子包含从葡萄糖与葡萄糖氧化酶的反应中产生H₂O₂。下式提供了本发明中有用的偶联***的例子。

该***产生导致该***的pH降低的酸(一种或多种)。不意图将本发明限制为任何具体的酶，因为和合适底物生成H₂O₂和酸的任何酶都在本发明的方法中有用。例如，来自乳酸菌(Lactobacillus)种的乳酸氧化酶在本发明中有用，已知所述乳酸氧化酶由乳酸和氧生成H₂O₂。事实上，本发明的方法的一个优点是，酸的产生(例如，在上面的例子中的葡萄糖酸)将碱性溶液的pH降低到过酸最有效漂白的pH范围(即，在pKa值或低于pKa值)。其它能够产生过氧化氢的酶(例如，糖氧化酶、醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等)也可以与酯底物以及本发明的过水解酶组合使用，产生过酸。从底物产生酸而不产生过氧化氢的酶也用在本发明中。这些酶的例子包括但不限于酯酶、脂酶、磷脂酶、角质酶、蛋白酶。在一些优选实施方式中，酯底物选自下列酸中的一种或多种：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。因此，如本文所述，对于洗涤剂制剂和用途以及各种其它用途，本发明提供了优于目前应用的方法和组合物的明确的优势。

过水解酶活性

从微生物中得到的酶的应用是长期存在的。事实上，本领域中有许多已知的生物催化剂。例如，美国专利号5,240,835(在此被引入作为参考)描述了从C.oxydans得到的转酰酶活性及其生产。此外，美国专利号3,823,070(在此被引入作为参考)描述了由正链烷烃产生某些脂肪酸的棒状杆菌(Corynebacterium)。美国专利号4,594,324(在此被引入作为参考)描述了氧化烯烃的荚膜甲基球菌(Methylcoccus capsulatus)。其它的生物催化剂在本领域中已知(参见，例如，美国专利号4,008,125和4,415,657；两者均在此被引入作为参考)。EP 0 280 232描述了将C.oxydans酶用在二醇与乙酸的酯之间的反应中，来产生单乙酸酯。其它参考文件描述了用C.oxydans酶从前手性二醇制备手性羟基羧酸。有关C.oxydans转酰酶活性以及C.oxydans培养、该酶的制备和纯化的其它细节提供于美国专利号5,240,835中。因此，此酶的酯交换能力——主要使用乙酸酯——是已知的。然而，此酶能够进行过水解反应的确定是非常出乎意料的。更令人惊讶的是，这些酶在过水解反应中显示出非常高的效率。例如，在甘油三丁酸酯和水存在的情况下，该酶发生作用产生丁酸，而在甘油三丁酸酯、水和过氧化氢存在的情况下，该酶发生作用主要产生过丁酸和非常少的丁酸。这种高的过水解与水解比值是本发明的过水解酶类型的酶表现出的独特性质，并且是以前描述的脂酶、角质酶及酯酶未表现出的独特特性。

本发明的过水解酶在宽的pH和温度范围内有活性，并且接受宽范围的底物用于酰基转移。受体包含水(水解)、过氧化氢(过水解)和醇(典型的酰基转移)。对于过水解测定，酶在选择的缓冲液中，在指定的温度下，和底物酯，在过氧化氢存在的情况下进行温育。用于测定过水解的典型底物包含酯如乙酸乙酯、甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯、乙氧基化neodol乙酸酯和其它底物。此外，该野生型酶水解短链酸的硝基苯基酯。后者是测定酶浓度的方便底物。通过本文描述的分析方法，可以测定过酸和乙酸。也描述了硝基苯基酯水解。

虽然在本发明开发过程中使用的主要例子是耻垢分枝杆菌过水解酶，但在过氧化氢存在的情况下将酯主要转化成过酸的从任何来源获得的任何过水解酶都可用在本发明中。在一些特别优选的实施方式中，过水解酶被公开在US04/040438(WO05/056782)中，其被全部引入作为参考。

在本发明的一些优选实施方式中，包含脂肪族和/或芳族羧酸和醇的酯与本发明的过水解酶和/或水解酶一起使用。在一些优选的实施方式中，底物酯选自一种或多种下列酸的酯：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。在其它实施方式中，甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯、neodol酯和/或乙氧基化neodol酯作为酰基供体用于过酸/酸形成。

在本发明的一些优选实施方式中，包含脂肪族和/或芳族羧酸和醇的酯与本发明的过水解酶和/或水解酶一起用在本发明的洗涤剂制剂中。在一些优选的实施方式中，底物选自一种或多种下列酸的酯：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。因此，在一些优选的实施方式中，提供了包括至少一种过水解酶和/或水解酶、至少一种过氧化氢来源和至少一种酸酯的洗涤剂。

水解酶活性

除了此处描述的过水解酶之外，多种水解酶可用于本发明中，包括但不限于作用于酯键的羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸单酯水解酶和磷酸二酯水解酶；作用于醚键的硫醚水解酶；和作用于肽键的α-氨基-酰基-肽水解酶、肽基-氨基酸水解酶、酰基-氨基酸水解酶、二肽水解酶和肽基-肽水解酶。这样的水解酶(一种或多种)单独使用或者与过水解酶组合使用。在它们之中，优选的是羧酸酯水解酶和肽基-肽水解酶。合适的水解酶包括：(1)属于肽基-肽水解酶类的蛋白酶(例如，胃蛋白酶、胃蛋白酶B、凝乳酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶A、胰凝乳蛋白酶B、弹性蛋白酶、肠激酶、组织蛋白酶C、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶酶、肾素、枯草杆菌蛋白酶、曲霉菌肽酶A、胶原酶、梭状芽孢杆菌肽酶B、激肽释放酶、胃亚蛋白酶(gastrisin)、组织蛋白酶D、菠萝蛋白酶(bromelin)、角蛋白酶、胰凝乳蛋白酶C、胃蛋白酶C、曲霉菌肽酶B、尿激酶、羧肽酶A和B和氨基肽酶)；(2)羧酸酯水解酶，包含羧基酯酶、脂酶、果胶酯酶和叶绿素酶；和(3)具有高过水解对水解比值的酶。在它们之中特别有效的是脂酶，以及显示出高的过水解对水解比值的酯酶，以及应用本发明的过水解酶的一级、二级、三级和/或四级结构特征进行蛋白质工程改造的酯酶、角质酶和脂酶。

根据应用目的，按照需要的量将水解酶掺入洗涤剂组合物中。优选地应当以0.00001至5重量百分比的量、更优选地以0.02至3重量百分比的量掺入。此酶应该以颗粒形式应用，所述颗粒由单独的粗提酶制成，或者由粗提酶与洗涤剂组合物中的其它酶和/或组分相结合而制成。粗提酶的颗粒以这样的量应用，以至于颗粒中纯化的酶的重量百分比是0.001至50。颗粒的应用量是0.002至20的重量百分比，并且优选地是0.1至10的重量百分比。在一些实施方式中，颗粒被配制以便含有酶保护剂和溶解延迟物质(即，调节颗粒在使用期间溶解的物质)。

在应用中，本发明的过水解酶在洗液中占约0.01ppm至100ppm之间。在一些优选的实施方式中，过水解酶以约0.1ppm至10ppm的浓度存在。

氧化酶活性

本发明的洗涤剂组合物包括糖氧化酶，即这样的酶，其催化糖底物如糖单体、二聚体、三聚体和寡聚体的氧化并且还原分子氧，以产生过氧化氢。

合适的糖氧化酶包括选自醛糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.9)、半乳糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.9)、纤维二糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.25)、吡喃糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.10)、山梨糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.11)和/或己糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.5)、葡萄糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.4)的糖氧化酶及其混合物。实际上，预期符合下列公式的任何合适的氧化酶在本发明中都有用：

酶+底物→酸+H₂O₂。

掌握归类为EC1.1.3._、EC1.2.3._、EC1.4.3._和EC1.5.3._的酶的专业技术人员将会理解，按照国际生物化学与分子生物学联盟(the International Union ofBiochemistry and Molecular Biology(IUBMB))命名委员会的建议，相似分类的酶在本发明中是有用的。

在一些实施方式中，优选的糖氧化酶包括醛糖氧化酶和/或半乳糖氧化酶，最优选的是醛糖氧化酶，这是由于其最宽的底物特异性。醛糖氧化酶对所有的单糖、二糖、三糖和寡糖如D-***糖、L-***糖、D-纤维二糖、2-脱氧-D-半乳糖、2-脱氧-D-核糖、D-果糖、L-岩藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘油-D-古洛-庚糖、D-乳糖、D-来苏糖、L-来苏糖、D-麦芽糖、D-甘露糖、松三糖、L-蜜二糖、帕拉金糖、D-蜜三糖、L-鼠李糖、D-核糖、L-山梨糖、水苏糖、蔗糖、D-海藻糖、D-木糖和L-木糖具有活性。

在一些特别优选的实施方式，优选的糖氧化酶是在WO99/31990中所述的醛糖氧化酶，其是由雪霉镰孢菌(Microdochium nivale)CBS100236所产生的多肽或者具有此处SEQ ID NO:2描述的氨基酸序列或其类似物。此外，这样的氧化酶在本发明中有用：其具有明显更宽的底物特异性并且因此能更有效地去除糖以及具有更广谱的糖。例如：半乳糖氧化酶作用于D-半乳糖、乳糖、蜜二糖、蜜三糖和水苏糖；纤维二糖氧化酶作用于纤维二糖，并且还作用于纤维糊精、乳糖和D-甘露糖；吡喃糖氧化酶作用于D-葡萄糖，并且还作用于D-木糖、L-山梨糖和D-葡萄糖-1.5-乳糖；山梨糖氧化酶作用于L-山梨糖，并且还作用于D-葡萄糖、D-半乳糖和D-木糖；己糖氧化酶作用于D-葡萄糖，并且还作用于D-半乳糖、D-甘露糖、麦芽糖(malton)、乳糖和纤维二糖。

合适的己糖氧化酶包括在WO96/39851中描述的那些(参见，如实施例1-6)。合适的吡喃糖氧化酶包括在WO97/22257中描述的那些(参见，如第1页28行至第2页19行；第4页13行至第5页14行；和第10页35行至第11页24行)。

在一些优选的实施方式中，本发明的清洁组合物包括按总的组合物的重量计约0.0001至约10％，优选地从约0.001％至约0.2％，更优选地从约0.005％至约0.1％的纯糖氧化酶。

在本发明中有用的其它酶包括半乳糖氧化酶(Novozymes A/S)、纤维二糖氧化酶(Fermco Laboratories，Inc.)、半乳糖氧化酶(Sigma)、吡喃糖氧化酶(Takara Shuzo Co.)、山梨糖氧化酶(ICN Pharmaceuticals，Inc.)和葡萄糖氧化酶(Genencor International，Inc.)。

在进一步的实施方式中，为了进一步提高酶促漂白性能，包括化合物如糖、葡萄糖和/或半乳糖的底物被加入到该组合物中。

其它清洁制剂成分

其它组分在本发明的清洁制剂中有用。虽然本发明的清洁制剂不意图于被这样限制，但在下面更详细地描述了多种组分。实际上，虽然这样的组分对于本发明的目的而言不是必需的，但下文描述的辅助剂的非限制性列举适用于目前的清洁组合物，并且可以被适宜地掺入本发明的一些实施方式中，例如，为了协助或增强清洁性能，用于处理待清洁底物，或修饰清洁组合物的美感如应用香料、着色剂、染料等的情况。应该理解，这样的辅助剂是除本发明的酶、过氧化氢和/或过氧化氢源和包含酯部分的材料之外的。这些添加组分的精确性质和它们的掺入水平将取决于组合物的物理形式和应用其进行的清洁操作的性质。合适的辅助剂材料包括但不限于表面活性剂、助洗剂、螯合剂、染料迁移抑制剂、沉淀助剂、分散剂、另外的酶和酶稳定剂、催化材料、漂白激活剂、漂白促进剂、预形成的过酸、聚合分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物柔软剂、载体、水溶助长剂、操作助剂和/或颜料。除了下文的公开内容，这样的其它辅助剂的合适例子和使用水平在美国专利号5,576,282、6,306,812和6,326,348中见到，所述专利在此被引入作为参考。前述辅助成分可以构成本发明清洁组合物的余量。

表面活性剂——在一些实施方式中，本发明所提供的清洁组合物可以包括至少一种表面活性剂和/或表面活性剂体系，其中该表面活性剂优选地选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂(ampholytic surfactants)、两性离子表面活性剂(zwitterionic surfactants)、半极性非离子表面活性剂(semi-polar nonionic surfactants)及其混合物。

表面活性剂的存在水平典型地是按照主题清洁组合物的重量计约0.1％至约60％，约1％至约50％，或甚至约5％至约40％。

阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐——在本发明的一些实施方式中，此类阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐是有用的，其包括饱和的或脂肪酸盐，烷基或链烯基醚羧酸盐，a-硫代脂肪酸盐或酯，氨基酸型表面活性剂，磷酸酯表面活性剂，季铵盐，包括具有3至4个烷基取代基和多达1个苯基取代的烷基取代基的那些。合适的阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐包括英国专利申请号2094826A中公开的那些，其公开内容在此被引入作为参考。在一些实施方式中，组合物包括从约1至约20重量百分比的此类阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐。

助洗剂——在本发明的一些实施方式中，组合物包括约0至约10重量百分比的一种或多种助洗剂组分，所述组分选自下列化合物的碱金属盐和链烷醇胺盐：磷酸盐、膦酸盐、膦酰基羧酸盐、氨基酸的盐、氨基聚乙酸盐高分子电解质、非解离聚合物、二羧酸的盐和铝硅酸盐。合适的二价螯合剂的例子在英国专利申请号2094826A中公开的那些，其公开内容在此被引入作为参考。

在其它实施方式中，本发明的组合物含有约0％至约10％重量百分比的下列化合物的一种或多种碱金属盐作为碱金属或无机电解质：硅酸盐、碳酸盐和硫酸盐以及有机碱如三乙醇胺、二乙醇胺、单乙醇胺和三异丙醇胺。在一些实施方式中，本发明的清洁组合物包括一种或多种洗涤剂助洗剂和/或助洗剂***。当使用助洗剂时，主题清洁组合物典型地包括相对低水平的助洗剂(如按主题清洁组合物的重量计从约0％至约10％的助洗剂)。

[104[在多种实施方式中，助洗剂包括但不限于，多磷酸的碱金属盐、铵盐和烷醇铵盐，碱金属硅酸盐，碱土金属碳酸盐和碱金属碳酸盐，铝硅酸盐助洗剂聚羧酸盐化合物，羟基聚羧酸盐醚合物，马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚、1，3，5-三羟基苯-2，4，6-三磺酸和羧甲基氧代琥珀酸的共聚物，聚乙酸如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸的各种碱金属盐、铵盐和取代的铵盐，以及聚羧酸盐如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧联二琥珀酸、聚马来酸、苯1，3，5-三羧酸、羧甲基氧代琥珀酸及它们的可溶性盐。

鳌合剂——在一些实施方式中，本发明提供的的清洁组合物含有至少一种螯合剂。合适的螯合剂包括铜、铁和/或锰螯合剂及它们的混合物。

在包括至少一种螯合剂的一些优选实施方式中，清洁组合物包括按照主题清洁组合物的重量计从约0.1％至约15％，或从约0.5％至约5％的所述至少一种螯合剂。

沉淀助剂——在一些进一步的实施方式中，本发明提供的清洁组合物含有沉淀助剂。合适的沉淀助剂包括聚乙二醇、聚丙二醇、聚羧酸酯、污垢释放聚合物如聚对苯二甲酸、粘土如高岭石、蒙脱石、绿坡缕石(atapulgite)、伊利石、膨润土、多水高岭土和其混合物。

抗再沉积剂(Anti-Redeposition Agents)——在本发明还有另外的实施方式中，组合物含有约0.1至约5重量百分比的一种或多种下列化合物作为抗再沉积剂：聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素。在一些优选实施方式中，羧甲基纤维素和/或聚乙二醇的组合和本发明的组合物共同应用，作为有用的污垢去除组合物。

染料转移抑制剂——在还有进一步的实施方式中，本发明的清洁组合物包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。

当存在于主题清洁组合物中时，染料转移抑制剂的存在水平典型地按照主题清洁组合物的重量计约0.0001％至约10％、约0.01％至约5％、或约0.1％至约3％。

分散剂——在其它实施方式中，本发明的清洁组合物含有分散剂。合适的水溶性有机物质包含均聚酸或共聚酸或它们的盐，其中聚羧酸包括至少两个通过不多于两个碳原子彼此隔离的羧基。

酶——在还有进一步的实施方式中，本发明所提供的清洁组合物进一步包括一种或多种洗涤酶(detergent enzymes)，所述酶提供清洁性能和/或织物护理益处。合适的酶的例子包括但不限于，半纤维素酶、过氧化酶、蛋白酶、金属蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、malanases、甘露聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、和淀粉酶、或它们的混合物。在一些实施方式中，组合是传统应用的酶(如蛋白酶、脂酶、角质酶和/或纤维素酶与淀粉酶)的混合物。

酶稳定剂——可以用多种技术稳定洗涤剂中使用的酶。在本发明的一些实施方式中，通过成品组合物中存在的水溶性钙离子和/或镁离子来源，此处应用的酶可以被稳定化，所述水溶性钙离子和/或镁离子来源将这样的离子提供给酶。

催化金属配合物(Catalytic Metal Complexes)——在讲一步的实施方式中，本发明的清洁组合物包括至少一种催化金属配合物。在一些实施方式中，含金属漂白催化剂包括含有下列的催化剂体系：具有确定的漂白催化活性的过渡金属阳离子，如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子；几乎没有或没有漂白催化活性的辅助金属阳离子，如锌或铝阳离子；和对催化和辅助金属阳离子具有确定的稳定常数的螯合剂(sequestrate)，尤其是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基磷酸)和它们的水溶性盐，其在本发明中有用(参见，如美国专利号U.S.4,430,243，其在此被引入其全部作为参考)。

在一些实施方式中，借助锰化合物催化此处的组合物。此类化合物及其应用水平是本领域熟知的(参见，例如，U.S.5,576,282中公开的基于锰的催化剂，其在此被引入其全部作为参考)。

钴漂白催化剂也在本发明中有用。这些组合物在本领域是已知的(参见，例如U.S.5,597,936和U.S.5,595,967)。此类钴催化剂容易经已知方法制备出来(参见，例如U.S.5,597,936和U.S.5,595,967)。

在一些实施方式中，本发明的组合物包括至少一种大多环刚性配体(macropolycyclic rigid ligand，“MRL”)的过渡金属配合物。作为实例，而不是作为限制，此处的组合物和清洁过程可以被调整，以在含水清洗介质中提供至少亿分之一数量级的活性MRL物质，并且通常优选地在清洗液体中提供约0.005ppm至约25ppm，更优选地约0.05ppm至约10ppm，并且最优选地约0.1ppm至约5ppm的MRL。

在一些实施方式中，目前过渡金属漂白催化剂中的优选过渡金属包括锰、铁和铬。在一些进一步的实施方式中，此处所用的优选MRL是一种特定类型的桥联的超刚性配体(ultra-rigid ligand)，如5，12-二乙基-1，5，8，12-四氮杂二环[6.6.2]十六烷。

合适的过渡金属MRLs容易通过已知方法配制(参见，例如WO00/332601和U.S.6,225,464，两篇专利都在此被引入其全部作为参考)。

漂白剂——在一些实施方式中，本发明提供本发明的过水解酶和其它漂白剂的联合应用，以进一步改进洗涤效果，其它漂白剂如过碳酸钠、过硼酸钠、硫酸钠/过氧化氢加合物和氯化钠/过氧化氢加合物和/或光敏漂白染料例如磺化酞菁的锌盐或铝盐。在其它实施方式中，本发明的过水解酶和漂白增强剂(例如TAED和/或NOBS)联合应用。

上蓝剂和荧光染料——在本发明的一些实施方式中，上蓝剂和荧光染料掺入组合物中。合适的上蓝剂和荧光染料的例子在英国专利申请号2094826A中公开，其公开内容在此并入作为参考。

抗结块剂——在组合物为粉末或固体的本发明一些实施方式中，在组合物中掺入抗结块剂。合适的抗结块剂的例子包括对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、乙酸盐、磺基琥珀酸盐、云母、细磨硅石、粘土、硅酸钙(例如，Micro-Cell[JohnsManville Co.])、碳酸钙和氧化镁。

抗氧化剂——在一些其它实施方式中，至少一种抗氧化剂被包括在本发明的组合物中。在一些特别优选的实施方式中，抗氧化剂包括，例如，叔丁基羟基甲苯、4，4′-亚丁基双(6-叔丁基-3-甲基苯酚)、2，2′-亚丁基双(6-叔丁基-3-甲基苯酚)、单苯乙烯基化甲酚、二苯乙烯基化甲酚、单苯乙烯酚、二苯乙烯酚和1，1-双(4-羟基-苯基)环己烷。

增溶剂——在一些实施方式中，本发明的组合物也包含增溶剂，包括但不限于低级醇(例如，乙醇、苯磺酸盐和低级烷基苯磺酸盐如对甲苯磺酸盐)、二元醇如丙二醇、乙酰基苯-磺酸盐、乙酰胺、吡啶二羧酸酰胺、苯甲酸盐和脲。

在一些实施方式中，本发明的洗涤剂组合物在从酸性至碱性pH的宽pH范围中应用。在一些优选的实施方式中，本发明的洗涤剂组合物在pH高于4至不高于约11的微酸性、中性或碱性洗涤剂洗涤介质中应用。

除了上述成分，香料、缓冲剂、防腐剂、染料和类似物质也用在本发明中。这些组分以本领域已知的浓度和形式提供。

在一些实施方式中，本发明的粉状洗涤剂基质(bases)通过任何已知的制备方法制备(如喷雾干燥法和造粒法)。在一些优选的实施方式中，使用通过喷雾干燥法和/或喷雾干燥造粒法得到的洗涤剂基质。通过喷雾干燥法得到的洗涤剂基质不受制备条件的限制。在一些优选的实施方式中，喷雾干燥法产生空心颗粒，它是通过将耐热成分如表面活性剂和助洗剂的含水浆液喷射进高温区得到的。在一些实施方式中，喷雾干燥后，加入香料、酶、漂白剂、无机碱性助洗剂。在一些利用通过如喷雾干燥造粒这样的方法获得的高密度颗粒洗涤剂基质的实施方式中，各种成分也是在制备该基质后加入的。

在一些利用液体洗涤剂基质的实施方式中，基质是均一的溶液，而在其它的实施方式中，它是不均一的分散体。

在一些实施方式中，在工业和家用用途中，本发明的洗涤剂组合物可以在这些环境中常规的应用温度、反应时间和液体比例下与织物(例如弄脏的织物)温育。温育条件(即，用本发明的洗涤剂组合物有效地处理物品的条件)可由本领域技术人员容易地确定。因此，用本发明洗涤剂进行有效处理的合适条件与使用包含野生型过水解酶的类似洗涤剂组合物时的条件是一致的。

如上所指出，在一些实施方式中，本发明所提供的洗涤剂被配制为处于合适溶液、中性pH中的预洗剂(pre-wash)，在这种情况下，存在足以提供期望的改进如软化、去起球、防起球、表面纤维去除和/或清洁的活性。当洗涤剂组合物是预浸(例如，预洗或预处理)组合物时，或是液体、喷雾、凝胶或是膏状组合物，过水解酶基于该预浸或预处理组合物总重量计通常以约0.00001％至约5％重量百分比被应用。在这样的组合物的一些实施方式中，至少一种表面活性剂被任选地利用。当使用时，这种表面活性剂的浓度基于该预浸泡组合物总重量计通常是约0.0005至约1重量百分比。该组合物的其余部分包括用于预浸剂的常规组分(例如，稀释剂、缓冲剂、其它酶(蛋白酶)等)，所述常规组分的浓度是其常规浓度。

清洁组合物

本发明的清洁组合物在各种应用中有用，包括洗涤用途、硬表面清洁、餐盘自动洗涤用途以及化妆用途如牙、牙齿、毛发和/或皮肤的清洁。然而，由于在低温溶液中有效性增加的独特优势以及优越的颜色保持特性，本发明的酶理想地适用于洗衣用途如漂白织物。而且，本发明的酶在颗粒和液体组合物中有用。

本发明的酶也用于清洁添加剂产品中。包含本发明酶的清洁添加剂产品理想地适于包括在需要额外的漂白效力的清洗过程中。这样的情况包括但不限于低温溶液清洁用途。在一些实施方式中，作为最简单的形式，该添加剂产品是本发明的一种或多种酶。在一些实施方式中，这样的添加剂被包装成这样的剂型，其适用于加入到应用了过氧源并且需要增加的漂白效力的清洁过程中。在一些实施方式中，这样的单剂型是丸剂，而在其它实施方式中，它是片剂、胶囊或其它单剂型量单位例如预先量取的粉末或液体。在一些优选的实施方式中，至少一种填料或载体物质被包含在其中，以增加此类组合物的体积。合适的填料或载体物质包括但不限于，各种硫酸盐、碳酸盐和硅酸盐以及滑石、粘土和类似物。在一些实施方式中，液体组合物的填料或载体物质包括水或低分子量伯醇和仲醇，包括多元醇和二醇。这样的醇的例子包括但不限于，甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇。在一些实施方式中，组合物含有约5％至约90％的此类物质。在一些实施方式中，酸性填料用来降低pH。在一些可选实施方式中，清洁添加剂包含如下定义的至少一种活化的过氧源或辅助成分。

本发明的清洁组合物和清洁添加剂需要有效量的本发明提供的酶。在一些特别优选的实施方式中，所需水平的酶通过加入一种或多种耻垢分枝杆菌过水解酶、变体、同源物和/或具有本发明酶活性的其它酶或酶片段而获得。典型地，本发明的清洁组合物包括至少0.0001重量百分比、从约0.0001至约1、从约0.001至约0.5、或者甚至从约0.01至约0.1重量百分比的本发明的至少一种酶。

在一些实施方式中，本发明的清洁组合物包括选自过氧源、过氧化氢和其混合物的物质，所述过氧源选自：

(i)约0.01至约50、约0.1至约20、或者甚至约1至10重量百分比的过酸盐、有机过氧酸、脲过氧化氢及其混合物；

(ii)约0.01至约50、约0.1至约20、或者约1至约10重量百分比的糖和约0.0001至约1、约0.001至约0.5、约0.01至约0.1重量百分比的糖氧化酶；和

(iii)其混合物。

合适的过酸盐包含选自过硼酸碱金属盐、过碳酸碱金属盐、过磷酸碱金属盐、过硫酸碱金属盐及其混合物的那些过酸盐。

在一些优选的实施方式中，糖类(一种或多种)选自单糖、二糖、三糖、寡糖及其混合物。合适的糖包含选自D-***糖、L-***糖、D-纤维二糖、2-脱氧-D-半乳糖、2-脱氧-D-核糖、D-果糖、L-岩藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘油-D-古洛-庚糖、D-乳糖、D-来苏糖、L-来苏糖、D-麦芽糖、D-甘露糖、松三糖、L-蜜二糖、帕拉金糖、D-蜜三糖、L-鼠李糖、D-核糖、L-山梨糖、水苏糖、蔗糖、D-海藻糖、D-木糖、L-木糖及其混合物的糖。

合适的糖氧化酶包括选自醛糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.9)、半乳糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.9)、纤维二糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.25)、吡喃糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.10)、山梨糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.11)和/或己糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.5)、葡萄糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.4)及其混合物的糖氧化酶。

在一些优选实施方式中，本发明的清洁组合物也含有约0.01至约99.9、约0.01至约50、约0.1至20、或者甚至约1至约15重量百分比的含酯部分的分子。合适的含酯部分的分子可以具有下式：

R¹O_x[(R²)_m(R³)_n]_p

其中R¹是选自H或取代或未取代的烷基、杂烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基的部分；在本发明的一个方面，R¹可以包括1至50,000个碳原子、1至10,000个碳原子、或者甚至2至100个碳原子；

每个R²是烷氧基化物部分，在本发明的一个方面，每个R²独立地是乙氧基化物、丙氧基化物或丁氧基化物部分；

R³是酯形成部分，一些实施方式下具有式：

R⁴CO-，其中R⁴是H、取代的或未取代的烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基，在本发明的一个方面，R⁴是包括1至22个碳原子的取代的或未取代的烷基、链烯基、炔基部分，包括4至22个碳原子的芳基、烷芳基、烷基杂芳基或杂芳基部分，或R⁴是取代的或未取代的C₁-C₂₂烷基部分，或R⁴是取代的或未取代的C₁-C₁₂烷基部分；当R¹是H时，x是1；当R¹不是H时，x是等于或小于R¹中碳数目的整数；

p是等于或小于x的整数；

m是从0至50的整数、从0至18的整数或从0至12的整数，

和n至少是1。

在本发明的一个方面，含酯部分的分子是烷基乙氧基化物或丙氧基化物，其具有式R¹O_x[(R²)_m(R³)_n]_p，其中：

R¹是C₂-C₃₂取代的或未取代的烷基或杂烷基部分；

每个R²独立地是乙氧基化物或丙氧基化物部分；

R³是酯形成部分，具有下式：

R⁴CO-，其中R⁴是H、取代的或未取代的烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基，在本发明的一个方面，R⁴是包括1至22个碳原子的取代的或未取代的烷基、链烯基或炔基部分，包括4至22个碳原子的取代的或未取代的芳基、烷芳基、烷基杂芳基或杂芳基部分，或R⁴是取代的或未取代的C₁-C₂₂烷基部分，或R⁴是取代的或未取代的C₁-C₁₂烷基部分；

x是等于或小于R¹中碳数目的整数；

p是等于或小于x的整数；

m是从1至12的整数，和

n至少是1。

在本发明的一个方面，含酯部分的分子具有式：

R¹O_x[(R²)_m(R³)_n]_p

其中R¹是H或含伯胺、仲胺、叔胺或季胺部分的部分，所述含胺部分的R¹部分选自取代的或未取代的烷基、杂烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基；在申请人的发明的一个方面，R¹包括1至50,000个碳原子、1至10,000个碳原子、或者甚至2至100个碳原子；

R³是酯形成部分，具有式：

R⁴CO-，其中R⁴可以是H、取代的或未取代的烷基、链烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基杂芳基和杂芳基，在本发明的一个方面，R⁴可以是包括1至22个碳原子的取代的或未取代的烷基、链烯基或炔基部分，包括4至22个碳原子的取代的或未取代的芳基、烷芳基、烷基杂芳基或杂芳基部分，或R⁴可以是取代的或未取代的C₁-C₂₂烷基部分，或R⁴可以是取代的或未取代的C₁-C₁₂烷基部分；

当R¹是H时，x是1；当R¹不是H时，x是等于或小于R¹中碳数目的整数；

p是等于或小于x的整数；

m是从0至12或甚至从1至12的整数，和

n至少是1。

在本发明的任意上述方面的一些实施方式中，含酯部分的分子的重均分子量小于约600,000道尔顿(Daltons)、小于约300,000道尔顿、小于约100,000道尔顿或甚至小于约60,000道尔顿。

合适的含酯部分的分子包括含有酯部分的多糖。

此处提供的清洁组合物典型地被这样配制，即，在含水的清洁操作中的应用期间，洗涤水的pH从约5.0至约11.5，或甚至从约7.5至约10.5。液体产品制剂典型地被配制为，pH从约3.0至约9.0。颗粒洗涤产品典型地被配制为，pH从约9至约11。将pH控制在推荐的使用水平的技术包含使用缓冲剂、碱、酸等，并且这对本领域的技术人员是熟知的。

在一些实施方式中，当本发明的酶用在颗粒组合物或液体中时，囊化颗粒形式的酶是有利的，以便在贮存期间保护酶免遭颗粒或液体组合物中其它组分的破坏。此外，囊化作用提供了在清洗过程中控制酶的可及性的手段。在一些实施方式中，囊化作用增强酶的性能。就此而言，酶用本领域已知的任何囊化材料进行囊化。

囊化材料典型地封装至少一部分的酶。典型地，囊化材料是水溶性和/或可在水中分散的。在一些实施方式中，囊化材料的玻璃化转变温度(Tg)是0℃或更高(关于玻璃化转变温度的更详细描述，参见，WO97/11151，特别是从第6页第25行至第7页第2行)。

在一些实施方式中，囊化材料选自糖类、天然树胶、合成树胶、几丁质、壳聚糖、纤维素、纤维素衍生物、硅酸盐、磷酸盐、硼酸盐、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蜡及其组合。当囊化材料是糖类时，它典型地选自单糖、寡糖、多糖及其组合。在一些优选的实施方式中，囊化材料是淀粉。(关于一些合适的淀粉的描述，参见EP 0 922 499；US4,977,252；US5,354,559和US5,935,826)。

在一些可选实施方式中，囊化材料是微球体，其由塑料制成，所述塑料包括但不限于热塑性塑料、丙烯腈、甲基丙烯腈、聚丙烯腈、聚甲基丙烯腈及其混合物。合适的可商业上得到的微球体包括

(Expancel、Stockviksverken、Sweden)、PM6545、PM6550、PM7220、PM7228、

、

、

和

(PQ Corp.、ValleyForge、PA)。

制备和使用本发明清洁组合物的方法

本发明的清洁组合物被配制成任何合适的形式，并且可以通过由配制者选择的任何方法制备出来(对于非限制性例子，参见美国专利5,879,584；5,691,297；5,574,005；5,569,645；5,565,422；5,516,448；5,489,392；和5,486,303；所有专利在此被引入作为参考)。

使用方法

此处公开的清洁组合物用于清洁织物和/或表面。典型地，使要清洁的部位的至少一部分与本发明清洁组合物的实施方式相接触，所述组合物是未掺水形式或是在洗液中稀释，随后，任选地清洗和/或漂洗所述部位。对于本发明的目的，清洗包括但不限于擦洗和机械搅拌。织物可以包括能够在普通消费者使用条件下被洗涤的任何合适的织物。本发明的清洁组合物典型地以在溶液中约500ppm至约15,000ppm的浓度应用。当清洗溶剂是水时，水温范围典型地是约5℃至约90℃。在清洁织物的实施方式中，水与织物的质量比典型地从约1:1至约30:1。

实验

提供下列实施例，目的是证明和进一步阐述本发明的某些优选实施方式和方面，而非解释为对其范围的限制。

在下面的实验公开内容中，应用下列缩写：℃(摄氏度)；rpm(每分钟的转数)；H₂O(水)；HCl(盐酸)；aa(氨基酸)；bp(碱基对)；kb(千碱基对)；kD(千道尔顿)；gm(克)；μg和ug(微克)；mg(毫克)；ng(纳克)；μl和ul(微升)；ml(毫升)；mm(毫米)；nm(纳米)；μm和um(微米)；M(摩尔)；mM(毫摩)；μM和uM(微摩)；U(单位)；V(伏特)；MW(分子量)；sec(秒)；min(s)(分钟/数分钟)；hr(s)(小时/数小时)；MgCl₂(氯化镁)；NaCl(氯化钠)；OD₂₈₀(280nm处的光密度)；OD₆₀₀(600nm处的光密度)；PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)；GC(气相色谱)；EtOH(乙醇)；PBS(磷酸盐缓冲液[150mM NaCl，10mM磷酸钠缓冲液，pH7.2])；SDS(十二烷基硫酸钠)；Tris(三(羟甲基)氨基甲烷)；TAED(N，N，N’N’-四乙酰乙二胺)；w/v(重量体积比)；v/v(体积比体积)；Per(过水解酶)；per(过水解酶基因)；Ms(耻垢分枝杆菌)；MS(质谱)；BRAIN(BRAIN生物技术研究和信息网络(Biotechnology Research and Information Network)，AG，Zwingenberg，Germany)；TIGR(基因组研究院(The Institute for Genomic Research)，Rockville，MD)；AATCC(美国纺织化学师与印染师协会(American Association of Textile and ColoringChemists))；WFK(wfk Testgewebe GmbH，Bruggen-Bracht，Germany)；Amersham(Amersham Life Science，Inc.Arlington Heights，IL)；ICN(ICN Pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA)；Pierce(Pierce Biotechnology，Rockford，IL)；Amicon(Amicon，Inc.，Beverly，MA)；ATCC(美国典型微生物菌种保藏中心(American Type CultureCollection)，Manassas，VA)；Amersham(Amersham Biosciences，Inc.，Piscataway，NJ)；Becton Dickinson(Becton Dickinson Labware，Lincoln Park，NJ)；BioRad(BioRad，Richmond，CA)；Clontech(CLONTECH Laboratories，Palo Alto，CA)；Difco(Difco Laboratories，Detroit，MI)；GIBCO BRL或Gibco BRL(LifeTechnologies，Inc.，Gaithersburg，MD)；Novagen(Novagen，Inc.，Madison，WI)；Qiagen(Qiagen，Inc.，Valencia，CA)；Invitrogen(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)；Genaissance(Genaissance Pharmaceuticals，Inc.，New Haven，CT)；DNA2.0(DNA2.0，Menlo Park，CA)；MIDI(MIDI Labs，Newark，DE)InvivoGen(InvivoGen，SanDiego，CA)；Sigma(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)；Sorvall(SorvallInstruments，DuPont Co.的子公司，Biotechnology Systems，Wilmington，DE)；Stratagene(Stratagene Cloning Systems，La Jolla，CA)；Roche(Hoffmann La Roche，Inc.，Nutley，NJ)；Agilent(Agilent Technologies，Palo Alto，CA)；Minolta(KonicaMinolta，Ramsey，NJ)；Zeiss(Carl Zeiss，Inc.，Thornwood，NY)；Genencor(GenencorInternational，Inc.，Palo Alto，CA)；Expancel(Expancel，Stockviksverken，Sweden)；PQCorp.(PQ Corp.，Valley Forge，PA)；BASF(BASF Aktiengesellschaft，Florham Park，NJ)；Monsanto(Monsanto，Co.，St.Louis，MO)；Novozymes(Novozymes A/S，Bagsvaerd，Denmark)；Wintershall(Winterschall AG.，Kassel，Germany)；Gist-Brocades(Gist-Brocades，NV，Ma Delfit，The Netherlands)；Enichem(EniChemAmericas，Inc.，Houston，TX)；Huntsman(Huntsman Corp.，Salt Lake City，UT)；Fluka(Fluka Chemie AG，Buchs，Switzerland)和Dow Corning(Dow Corning，Corp.，Midland，MI)。

可应用于洗涤剂制剂的其它缩写被提供在下表中：

LAS ：线性C_11-13烷基苯磺酸钠

TAS ：牛油烷基硫酸钠

CxyAS ：C_1x-C_1y烷基硫酸钠

CxyEz ：用平均z摩尔环氧乙烷缩合的C_1x-C_1y以线形为主的伯醇

CxyAEzS ：用平均z摩尔环氧乙烷缩合的C_1x-C_1y烷基硫酸钠(加入的分子的名称在实施例中)。

非离子物质：混合的乙氧基化/丙氧基化脂肪醇(如Plurafac LF404)，尤其是平均乙氧基化度3.8和平均丙氧基化度4.5的醇

QAS ：R₂.N+(CH₃)₂(C₂H₄OH)，其中R₂＝C₁₂-C₁₄

硅酸盐：无定形硅酸钠(SiO₂:Na₂O比值＝1.6-3.2:1)

间硅酸盐：偏硅酸钠(SiO₂:Na₂O比值＝1.0)

沸石A ：式子为Na₁₂(AlO₂SiO₂)₁₂.27H₂O的水合铝硅酸盐

SKS-6 ：式子为δ-Na₂Si₂O₅的结晶层状硅酸盐

硫酸盐：无水硫酸钠

STPP ：三聚磷酸钠

MA/AA ：4:1丙烯酸酯/马来酸酯的无规共聚物，平均分子量为约70,000-80,000

AA ：聚丙烯酸钠聚合物，平均分子量为4,500

聚羧酸酯：共聚物，其包括羧基化单体如丙烯酸酯、马来酸酯和甲基丙烯酸酯的混和物，MW范围在2,000-80,000(如Sokolan^TM，一种丙烯酸的共聚物，MW4,500；BASF)

BB1 ：3-(3，4-二氢异喹啉)丙烷磺酸酯

BB2 1-(3，4-二氢异喹啉)-癸烷-2-硫酸盐

PB1 ：过硼酸钠一水合物

PB4 ：名义式为NaBO₃.4H₂O的过硼酸钠四水合物

过碳酸钠：名义式为2Na₂CO₃.3H₂O₂的过碳酸钠

TAED ：四乙酰基乙二胺

NOBS ：钠盐形式的壬酰氧苯磺酸盐

DTPA ：二亚乙基三胺五乙酸

HEDP ：1，1-羟基乙烷二磷酸

DETPMP ：二乙三胺五(亚甲基)磷酸酯(如，Dequest2060^TM；Monsanto)

EDDS ：乙二胺-N，N′-二琥珀酸，其钠盐形式的(S，S)异构体

二胺：二甲基氨基丙胺；1，6-己二胺；1，3-丙二胺；2-甲基-1，5-戊二胺；1，3-戊二胺；1-甲基-二氨基丙烷

DETBCHD 5，12-二乙基-1，5，8，12-四氮二环[6，6，2]十六烷，二氯化物，Mn(II)盐

PAAC ：五胺乙酸钴(III)盐

石蜡：石蜡油(如，Winog70^TM；Wintershall)

石蜡磺酸酯：石蜡油或蜡，其中一些氢原子已经被磺酸基取代

醛糖氧化酶：氧化酶(如，醛糖氧化酶，Novozymes)

半乳糖氧化酶：半乳糖氧化酶(如，来自Sigma)

蛋白酶：蛋白水解酶(如，SAVINASE，

，

；Novozymes；和“蛋白酶A”，其被描述在US RE34,606中的图1A、1B和7，以及第11栏11-37行，“蛋白酶B”，其被描述在US5,955,340和US5,700,676，在图1A、1B和5，以及表1；和“蛋白酶C”，其被描述在US6,312,936和US6,482,628，在图1-3[SEQ ID 3]，以及第25栏，12行，“蛋白酶D”，其是在WO99/20723中所述的变体101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K(BPN’编号)，以及在US04/039006中所述的变体；Genencor)

淀粉酶：淀粉水解酶(如，

Ox Am；其被描述在Genencor的WO94/18314和WO96/05295中；和

、

、

和；Novozymes)

脂酶：脂肪分解酶(如，、

Ultra；Novozymes；和Lipomax^TM；Gist-Brocades)

纤维素酶：纤维素分解酶(如，

、

、

；Novozymes)

果胶裂解酶：

和

(Novozymes)。

PVP ：聚乙烯吡咯烷酮，平均分子量60,000

PVNO ：聚乙烯吡啶-N-氧化物，平均分子量50,000

PVPVI ：乙烯咪唑与乙烯吡咯烷酮的共聚物，平均分子量20,000

增白剂1 ：4，4′-双(2-磺基苯乙烯基)二苯二钠

硅树脂防沫剂：以硅氧烷-氧化烯共聚物作为分散剂的聚二甲基硅氧烷泡沫控制剂，其中泡沫控制剂与分散剂的比值为10:1至100:1

抑泡剂：12％硅氧烷/二氧化硅、18％十八烷醇、70％颗粒形式的淀粉

SRP1 ：阴离子封端的聚酯

PEGX ：聚乙二醇，分子量“X”

PVPK60

：乙烯吡咯烷酮均聚物(平均MW160,000)

Jeffamine

Figure 2007800123584100002G2007800123584D0030140734QIETU

ED-2001 ：封端的聚乙二醇(如，来自Huntsman)

Isachem

AS ：分支的醇烷基硫酸酯(如，来自Enichem)

MME PEG(2000) ：聚乙二醇单甲醚(MW2000)(如，来自Fluka).

DC3225C ：硅氧烷抑泡剂，硅油和二氧化硅的混和物(如，来自Dow Coming).

TEPAE ：四亚乙基五胺乙氧基化物

BTA ：苯并***

甜菜碱：(CH₃)₃N⁺CH₂COO^-

糖：工业级D-葡萄糖或食品级糖

CFA ：C₁₂-C₁₄烷基N-甲基葡糖酰胺

TPKFA ：C₁₂-C₁₄拔顶全切脂肪酸(topped whole cut fatty acids)

粘土：通式为Al₂O₃SiO₂·xH₂O的水合硅酸铝(如，高岭石、蒙脱石、绿坡缕石(atapulgite)、伊利石、膨润土、多水高岭土)。

MCAEM ：式子为R¹O_x[(R²)_m(R³)_n]_p的酯

pH配方：20℃下蒸馏水中1％溶液所测量的

过水解酶：US04/040438中所述的酶，包括野生型(WT)和变体(如，S54V)

ZPB ：六亚甲基二胺E24二甲基季，四硫酸盐

在下面一些实验中，分光光度计被用于测量反应完成后形成的产物的吸光度。反射计被用于测量样品的反射率。除非另外指明，蛋白质浓度是用BSA作为标准品通过Coomassie Plus(Pierce)估计的。

实施例1

酶分析

在本实施例中，描述了用于评价酶纯度和活性的方法，所述方法在随后的实施例中以及整个说明书中使用。

酶活性分析(pNB分析)

此活性是通过对硝基苯基丁酸酯的水解来测定的。反应混合物是通过将溶于二甲亚砜的10ul的100mM对硝基苯基丁酸酯加入到990ml pH8.0的100mMTris-HCl缓冲液而制备的，缓冲液中含有0.1％triton X-100。背景水解速度在加入酶之前在410nm处测定。反应通过将10ul酶加入到990ml反应物而被引发，室温下(～23℃)测定410nm处的吸光度变化。背景校正后的结果报告为δA₄₁₀/min/ml或δA₄₁₀/min/mg蛋白质。

本文提供的酶成分重量是基于总的活性蛋白质。所有的百分比和比值是按照重量计计算的，除非另外指明。所有的百分比和比值是基于总的组分计算的，除非另外指明。

实施例2

pH对过乙酸清洁性能的影响

在本实施例中，描述了测定pH对过乙酸清洁性能的影响所进行的实验。

A.小规模测试洗涤剂性能的方法

污渍：

用于测试的污渍是从商品供应者(即，Testfabrics)得到的。目标测试污渍是消费者脏的T恤、消费者脏的枕头套、精制茶渍(Testfabrics，茶低温滴在棉上，STC CFT BC-3)和精制酒渍(Testfabrics，用酒弄脏的棉，STC CFT CS-3)。消费者脏的物品被用作增载物以完成每2加仑0.6磅的洗涤负荷。消费者物品是从地方居民所捐献的脏的衣物收集且制备的。确定汇合的污渍区域并且从目标肮脏消费者测试污渍将之切成大约4英寸乘4英寸的样品。这些样品然后被切成两半并且做上标记用于比较两种洗涤处理。

小规模洗涤程序：

制备：

典型地，小规模洗涤实验比较三次处理重复中的五种不同的处理，其中每种处理每个目标污渍有两次重复。因此，每个精制污渍的两个被用在每种处理中。制备消费者测试污渍，使得每种处理含有与每个其它处理成对的一半样品。因此，五种处理测试含有10对消费者测试污渍，其中每种处理含有4个一半污渍，以提供成对比较。对于所有处理，这种成对安排的消费者测试污渍都是一式两份。对于每种处理，将污渍混和并称重，并且消费者脏的增载物加起来，得到总的洗涤负荷为0.6磅。将处理组合物进行称重，或按照组分形式分成几等分。3:1的钙镁比、每加仑(gpg)水硬度溶液10,000格令是这样制备的：通过将188.57g氯化钙二水合物和86.92g氯化镁六水合物溶解在纯水中至1L。

洗涤程序：

1.五个小规模顶部负载洗涤机桶填充以2加仑(7.75L)60℉的去离子水。

2.测试水硬度，并通过加入水硬度溶液将其调至6gpg。

3.向它们各自的桶中加入处理组分，并且开始以75rpm搅动。

4.测定pH，并根据需要用1NNaOH或HCl调节。

5.停止搅动，加入污渍和增载物，并且然后立刻重新开始搅动。

6.污渍和物品被洗涤12分钟。在整个洗涤中监控pH。

7.排水并且在中等洗涤机速度下旋转2分钟。

8.向桶中再次装入2加仑60℉的去离子水并且调节水硬度。

9.搅动两分钟。

10.排水并且再次在中等洗涤机速度下旋转2分钟。

11.从罐(pot)中移出污渍和增载物。

12.混和所有污渍并且在中等加热下以永久性压力循环在干燥机中干燥45分钟。

13.高加热下在干燥机中干燥增载物45分钟并且进行处理。

14.用中等加热熨平污渍并且安排分级。

污渍分级：

PSU分级***用于比较产品，如下面更细的描述。测试这些配方的性能(如，洗涤后污渍残余量)。在这些实验中，几种织物用该配方进行洗涤以进行比较。污渍用三个独立的分级机从视觉上进行分级，所述分级机用0-4Sheffe等级赋值以分区得分单位(panel score units，PSU)。

0.没有偏向

1.我认为该产品稍好(不确定)

2.我知道该产品稍好

3.该产品较好

4.该产品好很多

精制污渍(如茶和酒)在一轮循环测试(a round robin)中进行分级，其中对于所有处理来自同一循环重复的污渍进行相互比较。消费者测试污渍(如，脏的T恤和枕头套)进行成对分级，其中分成两半用于两种不同处理的弄脏的样品进行比较。然后对于每种处理，每种污渍类型的处理平均值通过汇编所有处理的所有样品的比较结果进行计算。

B.pH对过酸清洁性能的影响

小规模测试洗涤剂性能的方法被用于测试pH对过酸清洁消费者脏的T恤和枕头套以及精制茶渍的影响。进行两组八种处理三次重复实验以比较在过酸存在下和过酸不存在下的5至10的pH范围。使用低离子强度的缓冲液，避免鳌合金属离子的缓冲液。

组成(在2加仑洗涤中)：

300ppm C₁₂-C₁₃E6.5乙酸盐 2.25ml C₁₂-C₁₃E6.5乙酸盐

+/-0.5mM过乙酸 1ml3.78M过乙酸(+4M乙酸贮备液)1ml7.5M乙酸(对于不含过乙酸)

5mM缓冲液 38ml1M(醋酸盐pH5-6、重碳酸盐pH7.5-8.5、硼酸盐pH9.25-10.5)

6gpg水硬度最高达4.5ml的10,000gpg3:1Ca:Mg(水硬度贮备液)

调节pH的NaOH 7.75ml1N NaOH(以调节过酸加入)

性能：

图1显示过酸对清洁消费者脏的污垢和精制茶渍的影响。如该图所示，对所有污渍的整体清洁一般地随着pH下降而增加，存在过酸和不存在过酸下都是如此。观察到过酸对清洁最大的增加益处在pH8和9处，在这里存在过酸和不存在过酸的条件下清洁差别是最大的。该pH对应着过酸的pKa为8.2。低pH的清洁益处和pH8-9时过酸漂白效果最佳表明覆盖宽的pH范围的洗涤组合物提供改进的清洁性能。

实施例3

用于在洗涤中产生动态pH的参数的测定

在本实施例中，描述的是进行实验以测定涉及动态pH洗涤条件的参数。在洗涤中产生动态pH需要知道洗涤中的可滴定物质。尽管组分可被设计成提供动态pH，脏的布和中等城市水具有固有的缓冲能力，其更难于控制。虽然如此，进行实验以进行这些测定。

A.对脏的增载物进行滴定以得到动态pH

向2加仑小规模顶部负载桶中装入2加仑去离子水，并且用实施例2，A中的水硬度溶液将水硬度调节至6gpg。加入组分至100ppm的LAS、20ppm柠檬酸盐和200ppm的甘油三乙酸酯的洗涤浓度。在不同的时间加入可变量的PB1和1ppm的过水解酶，以在洗涤中获得不同的pH曲线。开始以75rpm搅动，然后加入0.6磅消费者脏的物品。继续搅动20分钟并且在整个过程中对pH进行监控。

图2显示与在不同时间加入不同量的过硼酸盐、各种过水解酶相关的各种pH曲线。这样获得期望的pH曲线：在加入具有高水解活性的低效过水解酶(WT)5分钟后延迟加入75ppm的PB1和1ppm的高效过水解酶(S54V)。pH曲线在起初的6分钟内从9略微下降至8，同时第一种酶正产生过酸。6分钟后，pH随着高水解活性酶的加入而显著下降。

B.产生动态pH性能益处的底物和酶参数

实施例2，部分A中所述的用于小规模测试洗涤剂性能的方法被用于测试产生动态pH的底物和酶参数对清洁性能的影响。评估对消费者脏的T恤和枕头套以及精制茶渍和酒渍的清洁效果。进行五种处理、三次重复实验，其中高效过水解酶(S54V)和低效高水解活性的过水解酶(WT)是在整个洗涤周期的不同时间加入的。比较这些处理并按照商业

重役液体配方(HDL)进行标准化。

组成(在2加仑洗涤中)：

1ppm过水解酶变体S54V　　 470ul 16100ppm过水解酶变体S54V(16.1mg/ml)

1ppm WT过水解酶 690ul 11000ppm WT过水解酶(11mg/ml)

300ppm C₁₂-C₁₅E7乙酸盐 2271mg C₁₂-C₁₅-E7乙酸盐

200ppm甘油三乙酸酯 1514mg甘油三乙酸酯(～1.3ml)

2.25mM过氧化氢 1.94ml 30％H₂O₂

75ppm PB1 568mg PB1(0.75mM～pH10)

20ppm柠檬酸盐 1.01ml 15％柠檬酸(0.1mM～pH2)

100ppm LAS 3.98ml 19％LAS pH8.5(NaOH中和的)

80ppm ZPB 606mg ZPB

6gpg硬度最高达4.5ml的10,000gpg3:1Ca:Mg

(水硬度贮备液)

基准：1540ppmHDL 11.66g

Figure 2007800123584100002G2007800123584D0034141734QIETU

HDL

性能：

图3显示不同条件所产生的pH曲线。需要加入具有高水解活性的过水解酶(WT)以产生足够的酸使pH降至6以下。延迟加入高效过水解酶(S54V)只是微微地减慢了pH下降，但是对清洁性能具有巨大的影响。发现允许高效过水解酶与底物反应5分钟，在最佳的活性条件下产生过乙酸，然后用高水解活性的酶降低pH能产生期望的pH曲线以及对脏物和酒渍最佳的清洁性能。

C.最优化酶参数以得到最佳性能

采用统计学实验设计对酶和底物参数进行最优化。实施例2，部分A中所述的用于小规模测试洗涤剂性能的方法被用于测试底物和酶参数对清洁性能的影响。评估对消费者脏的T恤和枕头套以及精制茶渍和酒渍的清洁效果。进行四组五种处理、三次重复实验，以比较不同量的高效过水解酶(S54V)与不同量的甘油三乙酸酯的延迟加入。比较这些处理，并按照商业

，HDL配方进行标准化。

甘油三乙酸酯

组成(在2加仑洗涤中)：

0.1-1ppm过水解酶S54V 0.1，0.33，0.55，0.78，1ml7570ppm过水解酶S54V

100-300ppm甘油三乙酸酯 757、1136、1514、1893、2271mg甘油三乙酸酯

300ppm C₁₂-C₁₃E9乙酸盐 271mg C₁₂-C₁₃-E9乙酸盐

2mM过氧化氢 2ml30％H₂O₂

100ppm PB1 757mg PB1(～pH10)

20ppm柠檬酸盐 152mg柠檬酸

100ppm LAS 3.98ml 19％LAS pH8.5(NaOH中和的)

80ppm ZPB 606mg ZPB

6gpg硬度最高达4.5ml的10,000gpg3:1 Ca:Mg

(水硬度贮备液)

基准：1540ppm

HDL 11.66g

HDL

性能：

测定了清洁脏的污垢、茶渍和酒渍对酶和甘油三乙酸酯浓度的依赖性。发现在洗涤周期内使用向组合物中延迟三分钟加入甘油三乙酸酯对清洁任何一种污渍没有显著影响。清洁脏的T恤、茶渍和酒渍很大程度上依赖于酶的浓度，这表明需要1ppm的高效过水解酶的最小量以将大部分底物转变成用于漂白的过乙酸和用于降低pH的酸。清洁T恤和茶渍不依赖于甘油三乙酸浓度表明在目前的洗涤体系中使用的是不高于100ppm的甘油三乙酸酯，而只是1ppm的酶。

在清洁酒渍中观察到的依赖性能被解释为动力学作用，其中甘油三乙酸酯的浓度越高，酶产生过乙酸或乙酸更快，并且在洗涤周期的早期酒渍更加敏感。

实施例3

底物的确定及其对清洁性能的影响

在本实施例中，描述的是进行实验以确定最佳的底物。动态pH洗涤剂配方中的过水解酶底物被用于在洗涤周期的过程中产生用于漂白和降低pH的过酸和酸。

甘油三乙酸酯是水溶性底物，其具有高摩尔的酸与重量比值，用于产生大量过乙酸和乙酸本体溶液。在其它实施方式中，表面活性剂酯在提供增强的清洁中有用，因为它们结合了表面活性剂性质与在清洁期间能通过过水解酶被转变成过乙酸的酯。测试四种表面活性剂酯对清洁脏的T恤和枕头套污垢以及精制茶渍和酒渍的作用。这四种表面活性剂酯包括变化的烷基链长度以及变化的环氧乙烷链长度和与最后的乙氧基化物的末端伯醇连接的乙酸酯。

C₁₂-C₁₃E9乙酸盐是由具有大约12至13个碳的分布中心的烷基链、大约9个乙二醇单元的乙氧基化分布中心和末端乙酸盐组成。C₁₂-C₁₅E7乙酸盐是由12至15碳烷基链与7个环氧乙烷单元和乙酸盐组成。C₉-C₁₁E2.5乙酸盐是由9至11个碳烷基链与2至3个环氧乙烷单元和乙酸盐组成。C₉-C₁₁E6乙酸盐是由9至11个碳烷基链与6个环氧乙烷单元和乙酸盐组成。

实施例2，部分A中所述的用于小规模测试洗涤剂性能的方法被用于采用五种处理、三次重复实验的设计测试这些底物对清洁性能的影响。比较这些处理，并按照商业

Figure 2007800123584100002G2007800123584D0034141757QIETU

，重役液体配方进行标准化。

组成(在2加仑洗涤中)：

1ppm过水解酶S54V 1ml 7570ppm过水解酶S54V

300ppm不同的表面活性剂酯 2271mg C₁₂-C₁₃-E9，C₁₂-C₁₅-E7，C₉-C₁₁-E2.5，

C9-C_11-E6.5乙酸盐

200ppm甘油三乙酸盐 1514mg甘油三乙酸盐(～1.3ml)

2.25mM过氧化氢 1.94ml 30％H₂O₂

75ppm PB1 568mg PB1(0.75mM～pH10)

20ppm柠檬酸盐 152mg柠檬酸(0.1mM～pH2)

100ppm LAS 3.98ml 19％LAS pH8.5(NaOH中和的)

80ppm ZPB 606mg ZPB

6gpg硬度最高达4.5ml的10,000gpg3:1 Ca:Mg

(水硬度贮备液)

基准：1540ppm

HDL 11.66gHDL

性能：

图4显示不同底物所产生的pH曲线。酶对底物的过水解或水解的差异，或者摩尔酸与重量比值的差异没有显著影响pH曲线。然而，C₁₂-C₁₅-E7乙酸盐确实对消费者脏的T恤和枕头套提供稍微增强的清洁效果。较短的底物，C₉-C₁₁-E2.5和C₉-C₁₁-E6酸盐，对亲水性的茶和酒污垢提供增强的清洁效果，这可能是由于它们较高的摩尔酸与重量比值的缘故。无论如何，与酶组合的所有底物在清洁茶渍和酒渍中表现良好。

实施例4

动态pH洗涤剂组合物与商业品牌的比较

在本实施例中，描述的是进行实验以比较动态pH洗涤剂组合物。实施例2，部分A中所述的用于小规模测试洗涤剂性能的方法被用于比较动态pH洗涤剂组合物与商业

品牌的清洁性能。评估对消费者脏的T恤和枕头套以及精制茶渍和酒渍的清洁。进行五种处理，三次重复实验，比较含有可选漂白剂的商业液体

、含有漂白剂颗粒的商业

、含有C₁₂-C₁₅-E7乙酸盐的动态pH组合物、含有C₉-C₁₁-E2.5乙酸盐的动态pH组合物、和作为基准的商业

HDL配方。向动态pH洗涤剂组合物中加入蛋白酶以补偿商业品牌对包含蛋白质的污垢如消费者脏的物品的任何优势。5分钟延迟后向动态pH处理洗涤周期中加入低效高水解活性过水解酶(WT)，以用目前的成分再现最佳的pH曲线。在这些实验中，还使用了丝氨酸蛋白酶ASP。

组成(在2加仑洗涤中)：

1ppm ASP变体R18 298ul 25400ppm ASP R18

1ppm过水解酶S54V 470ul 16100ppm过水解酶S54V

延迟5分钟后1ppm过水解酶WT 进入洗涤周期的5分钟时690ul 11000ppm

过水解酶WT

300ppm不同的酯底物 2271mgC₉-C₁₁-E2.5、C₁₂-C₁₅-E7乙酸酯

200ppm甘油三乙酸盐 1514mg甘油三乙酸盐(～1.3ml)

2.25mM过氧化氢 1.94ml 30％H₂O₂

75ppm PB1 568mg PB1(0.75mM～pH10)

20ppm柠檬酸盐 1.01ml 15％柠檬酸(0.1mM～pH2)

100ppm LAS 3.98ml 19％LAS pH8.5(NaOH中和的)

80ppm ZPB 606mg ZPB

6gpg硬度最高达4.5ml的10,000gpg3:1 Ca:Mg

(水硬度贮备液)

基准：1540ppm

HDL 11.66gHDL

1540ppm含有可选漂白剂的液体 11.66gLTBA

(LTBA)

970ppm含有漂白剂的颗粒

7.34g含有漂白剂的

性能：

图5显示由不同条件所产生的pH曲线。不管底物怎样，动态pH组合物在整个洗涤周期中产生从pH9至5.5的线性pH曲线。商业

制剂的pH曲线在加入测试污垢和脏的增载物后略为下降，这是由于它们固有的缓冲能力，但是pH在整个洗涤周期中保持恒定不变。液体

制剂保持洗涤pH为7.5，而含有漂白剂的颗粒

保持洗涤pH为10.25。动态pH洗涤剂组合物在清洁消费者脏的T恤和枕头套以及精制茶渍和酒渍上表现得比商业

液体制剂明显要好。最好的含有C₁₂-C₁₅-E7乙酸盐底物的动态pH组合物对消费者脏的物品以及茶渍和酒渍的表现与含有漂白剂的颗粒相同。

实施例5

洗涤剂组合物

在下面的实施例中，列举了各种洗涤剂组合物。在这些制剂中，酶水平按总的组合物重量计由纯酶来表示，并且如果没有另外指明，洗涤剂组分按总的组合物重量计来表示。

制备了本发明的下列液体洗衣洗涤剂组合物。

组合物(I)-(V)的pH值是约9至约10并且通过加入氢氧化钠调节至此pH。

另外，制备了本发明的下列手工洗碟液体洗涤剂组合物。

组合物(I)-(VI)的pH值是约8至约9并且通过加入氢氧化钠调节至此pH。

还制备了本发明的下列自动洗碟液体洗涤剂组合物。

I II III IV V

STPP 16 16 18 16 16

硫酸钾 - 10 8 - 10

1，2丙二醇 6.0 0.5 2.0 6.0 0.5

硼酸 4.0 3.0 3.0 4.0 3.0

CaCl₂二水合物 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04

MCAEM

(甘油三乙酸酯) 5.0 3.0 12.0 8.0 1.0

蛋白酶B 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03

淀粉酶 0.02 - 0.02 0.02 -

醛糖氧化酶 - 0.15 0.02 - 0.01

半乳糖氧化酶 - - 0.01 - 0.01

PAAC 0.01 - - 0.01 -

DETBCHD - 0.01 - - 0.01

过水解酶 0.1 0.03 0.05 0.03 0.06

MCAEM

(C₁₄-C₁₅E₁₂乙酸盐) 1.0 0.5 1.0 1.0 0.5

平衡至100％香料/染料和/或水

组合物(I)-(VI)的pH值是约9至约10并且通过加入氢氧化钠调节至此pH。

还制备了本发明的下列洗衣组合物。在一些优选的实施方式中，这些组合物可以是颗粒或片剂形式。

I II III IV V

基本产品(Base Product)

C₁₄-C₁₅AS或TAS 8.0 5.0 3.0 3.0 3.0

LAS 8.0 - 8.0 - 5.0

C₁₂-C₁₅AE₃S 0.5 2.0 1.0 - -

MCAEM

(甘油三乙酸酯) 12.0 15.0 10.0 18.0 12.0

QAS - - - 1.0 1.0

沸石A 5.0 8.0 6.0 - 5.0

SKS-6(干燥加入) - - 4.0 - -

MA/AA 2.0 2.0 2.0 - -

AA - - - - 4.0

　　　　　　　　　　　 I II III IV V

柠檬酸三钠2H₂O - 2.0 - - -

柠檬酸(无水) 2.0 - 1.5 2.0 -

DTPA 0.2 0.2 - - -

EDDS - - 0.5 0.1 -

HEDP - - 0.2 0.1 -

PB1 3.0 4.8 - - 4.0

过碳酸盐 - - 3.8 5.2 -

NOBS 1.9 - - - -

NACA OBS - - 2.0 - -

TAED 0.5 2.0 2.0 5.0 1.00

BB1 0.06 - 0.34 - 0.14

BB2 - 0.14 - 0.20 -

硫酸盐 20.0 25.0 10.0 25.0 18.0

硅酸盐 - 1.0 - - 3.0

蛋白酶B 0.033 0.033 - - -

蛋白酶C - - 0.033 0.046 0.033

脂酶 - 0.008 - - -

淀粉酶 0.001 - - - 0.001

纤维素酶 - 0.0014 - - -

果胶裂解酶 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

醛糖氧化酶 0.03 - 0.05 - -

PAAC - 0.01 - - 0.05

过水解酶 0.03 0.05 1.0 0.06 0.1

MCAEM^**

2.05.0 12.0 3.5 6.8

平衡至100％水分/硫酸钠和/或微量组分(Minors)^*

●香料/染料，增白剂/SRP1/羧甲基纤维素钠/光漂白剂/MgSO₄/PVPVI/抑泡剂/高分子PEG/粘土。

^**MCAEM选自C₉-C₁₁E_2.5乙酸盐、[C₁₂H₂₅N(CH₃)(CH₂CH₂OAc)₂]⁺Cl^-、(CH₃)₂NCH₂CH₂OCH₂CH₂OAc或它们的混合物。

还制备了本发明的下列液体洗衣洗涤剂制品。

I I II III IV V

LAS 11.5 8.5 9.0 - 4.0 -

C₁₂-C₁₅AE_2.85S - - 3.0 18.0 - 12.0

C₁₄-C₁₅E_2.5S 8.5 11.5 3.0 - 12.0 -

MCAEM

3.2 3.2 3.0 2.0 2.0 1.0

(甘油三乙酸酯）

CFAA - - - 5.0 - 3.0

TPKFA 2.0 2.0 - 2.0 0.5 2.0

柠檬酸(无水) 3.2 3.2 0.5 1.2 2.0 1.2

甲酸钙 0.1 0.1 0.06 0.1 - -

I I II III IV V

甲酸钠 0.5 0.5 0.06 0.1 0.05 0.05

异丙基苯磺酸钠 4.0 4.0 1.0 3.0 1.2 -

硼酸盐 0.6 0.6 - 3.0 2.0 3.0

乙醇 2.0 2.0 1.0 4.0 4.0 3.0

1，2丙二醇 3.0 3.0 2.0 8.0 8.0 5.0

单乙醇胺 3.0 3.0 1.5 1.0 2.5 1.0

TEPAE 2.0 2.0 - 1.0 1.0 1.0

PB1 3.8 2.0 4.5 3.2 2.8 2.5

蛋白酶A 0.03 0.03 0.01 0.03 0.02 0.02

脂酶 - - - 0.002 - -

淀粉酶 - - - - 0.002 -

纤维素酶 - - - - - 0.0001

果胶裂解酶 0.005 0.005 - - -

醛糖氧化酶 0.05 - - 0.05 - 0.02

半乳糖氧化酶 - 0.04

过水解酶 0.03 0.05 0.01 0.03 0.08 0.02

MCAEM

(C₁₂-C₁₅E₆ 3.2 4.6 1.8 3.5 6.2 2.8

乙酸盐)

PAAC 0.03 0.03 0.02 - - -

DETBCHD - - - 0.02 0.01 -

SRP1 0.2 0.2 - 0.1 - -

DTPA - - - 0.3 - -

PVNO - - - 0.3 - 0.2

增白剂1 0.2 0.2 0.07 0.1 - -

硅氧烷防泡剂 0.04 0.04 0.02 0.1 0.1 0.1

平衡至100％香料/染料和/或水

组合物(I)-(V)的pH值为约9至约10并且通过加入氢氧化钠调节至此pH。

制备了本发明的下列浓缩的高密度洗碟洗涤剂：

I II III IV V VI

STPP - 35.0 45.0 - - 20.0

柠檬酸三钠2H₂O 17.0 - - 30.0 35.0 -

硅酸盐 5.0 5.0 3.0 - 5.0 1.0

间硅酸盐 2.5 4.5 4.5 - - -

PB1 - - 4.5 - - -

PB4 - - - 5.0 - -

过碳酸盐 5.0 4.5 - - 3.8 4.8

BB1 - 0.1 0.1 - 0.5 -

BB2 0.2 0.05 - 0.1 - 0.6

MCAEM

3.5 14.5 5.5 3.0 2.9 25.9

(甘油三乙酸酯)

　　　　　　 I II III IV V VI

HEDP 1.0 - - - - -

DETPMP 0.6 - - - - -

PAAC 0.03 0.05 0.02 - - -

石蜡 0.5 0.4 0.4 0.6 - -

蛋白酶B 0.072 0.053 0.053 0.026 0.059 0.01

淀粉酶 0.012 - 0.012 - 0.021 0.006

脂酶 - 0.001 - 0.005 - -

果胶裂解酶 0.001 0.001 0.001 - - -

醛糖氧化酶 0.05 0.05 0.03 0.01 0.02 0.01

过水解酶 0.072 0.053 0.053 0.026 0.059 0.01

MCAEM

(C₁₂-C₁₃E_6.5 3.5 2.8 1.6 7.5 4.2 0.8

乙酸盐)

BTA 0.3 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3

聚羧酸盐 6.0 - - - 4.0 0.9

香料 0.2 0.1 0.1 0.2 0.2 0.2

平衡至100％水分/硫酸钠和/或微量组分(Minors)^*

^*增白剂/染料/SRPI/羧甲基纤维素钠/光漂白剂/MgSO₄/PVPVI/抑泡剂/高分子PEG/粘土。

组合物(I)-(VI)的pH值为约9.0至约10.0。

制备了本发明的下列片状洗涤剂组合物，通过使用标准的12头旋转压力机(12head rotary press)，在13KN/cm²的压力下，压缩颗粒洗碟洗涤剂组合物来实施。

I II III IV V VI VII VIII

STPP - 38.8 24.7 28.2 - 22.4 26.1 16.0

柠檬酸三钠2H₂O 20.0 - - - 35.9 - - -

碳酸钠 5.0 1.0 3.0 2.4 1.0 5.0 2.0 3.0

硅酸盐 5.0 4.8 5.0 2.6 3.4 1.9 2.3 1.2

脂酶 0.001 - 0.01 - 0.02 - - -

蛋白酶B 0.042 0.072 0.042 0.031 - - - -

蛋白酶C - - - - 0.052 0.023 0.023 0.029

过水解酶 0.01 0.08 0.05 0.04 0.052 0.023 0.023 0.029

MCAEM

(C₉-C₁₁E_2.5 2.8 6.5 4.5 3.8 4.6 2.8 2.8 2.8

乙酸盐)

淀粉酶 0.012 0.012 0.012 - 0.015 - 0.017 0.002

果胶裂解酶 0.005 - - 0.002 - - - -

醛糖氧化酶 - 0.03 - 0.02 0.02 - 0.03 -

PB1 - - 3.8 - 7.8 - - 8.5

过碳酸盐 6.0 3.8 - 6.0 - 5.0 4.5 -

BB1 0.2 - 0.5 - 0.3 0.2 - -

RR2 - 0.2 - 0.5 - - 0.1 0.2

I II III IV V VI VII VIII

MCAEM

(甘油三乙酸酯) 3.5 4.0 4.0 5.2 3.0 4.2 4.0 6.5

PAAC 0.01 0.01 0.02 - - - - -

DETBCHD - - - 0.02 0.02 - - -

TAED - - - - - 2.1 - 1.6

HEDP 1.0 - - 0.9 - 0.4 0.2 -

DETPMP 0.7 - - - - - - -

石蜡 0.4 0.5 0.5 0.5 - - 0.5 -

BTA 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 -

聚羧酸盐 4.0 - - - 4.9 0.6 0.8 -

PEG400-30,000 - - - - - 2.0 - 2.0

甘油 - - - - - 0.4 - 0.5

香料 - - - 0.05 0.2 0.2 0.2 0.2

平衡至100％水分/硫酸钠和/或微量组分(Minors)^*

^*增白剂/染料/SRP1/羧甲基纤维素钠/光漂白剂/MgSO₄/PVPVI/抑泡剂/高分子PEG/粘土。

组合物(I)-7(VIII)的pH值为约9至约10。

组合物7(I)-7(VIII)的片剂重量为约20克至约30克。

制备了本发明的下列液体硬表面清洁洗涤剂组合物。

I II III IV V VI VII

MCAEM(甘油三乙酸酯) 7.0 5.9 8.5 12.5 15.5 6.4 12.5

LAS - - - 0.8 0.8 - 0.8

异丙基苯磺酸钠 1.5 2.6 - 1.5 1.5 1.5 1.5

IsachemAS 0.6 0.6 - - - 0.6 -

柠檬酸三钠2H2O 0.5 0.56 0.5 0.6 0.75 0.5 0.75

脂肪酸 0.6 0.13 0.6 0.1 0.4 0.6 0.4

2-丁基辛醇 0.3 0.3 - 0.3 0.3 0.3 0.3

PEG DME-2000

Figure 2007800123584100002G2007800123584D0044144449QIETU

0.4 - 0.3 0.35 0.5 - -

PVP 0.3 0.4 0.6 0.3 0.5 - -

MME PEG(2000)

- - - - - 0.5 0.5

Jeffamine

ED-2001 - 0.4 - - 0.5 - -

PAAC - - - 0.03 0.03 0.03 -

DETBCHD 0.03 0.05 0.05 - - - -

蛋白酶B 0.07 0.05 0.05 0.03 0.06 0.01 0.04

淀粉酶 0.12 0.01 0.01 - 0.02 - 0.01

脂酶 - 0.001 - 0.005 - 0.005 -

过水解酶 0.07 0.05 0.08 0.03 0.06 0.01 0.04

MCAEM(C12-C15E8 3.5 5.6 4.8 5.3 3.6 8.0 4.7

果胶裂解酶 0.001 - 0.001 - - - 0.002

PB1 2.5 4.6 1.8 3.8 3.2 1.8 2.8

醛糖氧化酶 0.05 - 0.03 - 0.02 0.02 0.05

I II III IV V VI VII

平衡至100％香料/染料和/或水

组合物(I)-(VII)的pH值约8.5至约9.5并且通过加入氢氧化钠调节至此pH。

本说明书中提及的所有专利和出版物表明了本发明所属技术领域的技术人员的水平。所有专利和出版物通过参考并入本文至这样的程度，似乎每个单独的出版物都明确地分别并入本文，作为参考。

尽管已经描述了本发明的优选实施方式，对本领域技术人员明显的是，可以对公开的实施方式作各种修改，而且此种修改被包括在本发明的范围内。

本领域技术人员容易认识到，本发明完全可以进行调整以实现目标并获得所提及的以及固有的结果和优势。本文中描述的组合物和方法，代表了优选的实施方式，是示范性的，而不意图成为对本发明范围的限制。对本领域技术人员明显的是，可以对本文中公开的发明进行各种置换和修改，而不脱离本发明的精神和范围。

本文中例证性地描述的发明可以在缺少本文中未具体公开的任一元素或许多元素、限定或许多限定的情况下适宜地实施。已被使用的术语和表述，是被用作描述性术语，而不是限定性的，并且本发明的意图不是在使用这些术语和表述时排除显示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是应认识到在要求保护的发明范围内各种修改是可能的。因此，应该理解，尽管本发明通过优选的实施方式和可选的特征被具体地公开，但本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，而这些修改和变化被认为包含在本发明的范围之内，如由所附权利要求限定的。

在本文中，本发明已以宽范的和一般性的方式被描述。落入该概括性公开内容中的每一较窄的种类和亚类也形成本发明的一部分。这包括发明的这样的概括性描述，其带有附加条件或从该类中除去任何主题的负限定，不论删除的物质是否在本文中被具体地叙述。

Claims

1.清洁表面和/或织物至少一部分的方法，其包括：

任选地洗涤和/或漂洗表面和/或织物；

使所述表面和/或织物与洗液接触，所述洗液包含过水解酶和用于该酶的底物，其中洗液的初始pH为碱性，且过水解酶及底物的量足以使洗液的pH降至6.5或更低；和

任选地洗涤和/或漂洗所述表面和/或织物，

其中所述接触发生在洗涤周期期间，且

其中降低洗液的pH改善洗液组分的性能。

2.权利要求1的方法，其中pH从碱性降至酸性改善在酸性pH具有最适活性的洗液组分的性能。

3.权利要求1的方法，其中相对于在碱性pH的污垢去除，pH从碱性降至酸性增加污垢的去除。

4.权利要求1所述的方法，其中所述洗液的pH基本上呈线性下降。

5.权利要求1所述的方法，其中所述洗液的pH在最后25％至50％的所述洗涤周期内降至6.5或以下。

6.权利要求1所述的方法，其中所述表面和/或织物被暴露于pH小于6.5的所述洗液至少2分钟的时期。