CN101245362A - 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 - Google Patents
发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101245362A CN101245362A CNA2008100244299A CN200810024429A CN101245362A CN 101245362 A CN101245362 A CN 101245362A CN A2008100244299 A CNA2008100244299 A CN A2008100244299A CN 200810024429 A CN200810024429 A CN 200810024429A CN 101245362 A CN101245362 A CN 101245362A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enramycin
- culture
- glucose
- days
- njwgy3665
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108700041171 enramycin Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N enramicina Chemical compound O.N1C(=O)NC(=O)C(C=2C=C(Cl)C(O)=C(Cl)C=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC2N=C(N)NC2)NC(=O)C(CCCNC(N)=O)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)N(CCCCN)C(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)/C=C/C=C/CCCCC(C)CC)C(C)OC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C)NC(=O)C1CC1CNC(N)=N1 NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N 0.000 title abstract description 29
- 229950003984 enramycin Drugs 0.000 title abstract description 29
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 title abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 241000276851 Streptomyces sp. NJWGY3665 Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 15
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 12
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 claims description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 claims description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 16
- 238000011090 industrial biotechnology method and process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 abstract 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 abstract 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 abstract 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 7
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 2
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- -1 grace mycin Chemical compound 0.000 description 2
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000006030 antibiotic growth promoter Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000000192 social effect Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及的是一种发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，属于农业生物技术、工业生物技术、发酵工程领域。其方法为：(1)斜面培养：将链霉菌Strrptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，培养温度28－37℃，培养时间2－6天；(2)种子培养：用无菌水将斜面上培养的孢子制成单孢子悬液，并接种到种子培养基中培养，温度为28～32℃，转速为200rpm，培养2－6天；(3)发酵培养：将种子液接种到发酵培养基中培养，温度控制在28－37℃，pH控制在6.0－9.0，转速180－220rpm，发酵5－9天，得到链霉菌，采用离心分离的方法将菌丝体用甲醇或乙醇进行提取分离，再采用树脂方法进行精制，获得多肽类抗生素安来霉素。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，属于农业生物技术、工业生物技术、发酵工程领域。
背景技术
抗生素添加于饲料中用以促进畜禽生长发育和提高饲料报导已有近60年的历史，许多国家都长期应用抗生素添加剂。然而，伴随着抗生素类促生长剂的广泛使用，一系列问题也逐渐显露，主要是药物残留和耐药性问题。长期、广泛、不加选择地使用抗生素饲料给细菌性疾病的控制和治疗带来了极大的麻烦和困难，同时也给人类的健康带来潜在的威胁。目前虽然关于是否应该在饲料中使用抗生素存在众多的争议，但实践证明，合理地使用抗生素添加剂能促进畜禽生长，提高饲料转化率。同时也有报告显示，禁止在饲料中添加抗生素或其他抗菌促生长剂的国家会造成畜牧业生产成本增加、盈利减少，同时也有可能引发诸如生态环境及国家之间的贸易战等问题。事实上，抗生素添加剂仍在大量使用，只有对它们进行全面的认识及合理的应用，才能充分发挥其有利作用，并避免对人类健康造成危害。当务之急便是针对微生物的耐药性，研究和开发广谱、高效、安全的新型饲料添加剂，这不仅能带来显著的经济效益，还具有极其重要的社会意义。
安来霉素(Enramycin)，是一种广谱、高效、安全的新型饲料添加剂。它又名恩来霉素、恩霉素、持久霉素，是由链霉菌发酵产生的一种多肽类抗生素。作为一种全新的饲料专用添加剂，具有以下特点：①饲料中添加微量的安来霉素就能促进对畜禽的增重。②具有对革兰氏阳性菌的强烈的抗微生物活性，特别能够大力抑制肠内的有害菌(梭菌)。③由于不吸收性，只在消化管内发挥其效果，不会残留于畜禽体内。④与临床上现有的抗生素或抗菌药之间不存在交叉耐药性。敏感菌几乎不对安来霉素产生耐药性，在实验条件下，耐药性的产生也非常缓慢，即使出现，耐药性也不稳定，而且极易丢失。因此长期续用时，其效果也不会受到任何影响。⑤在饲料中有良好的稳定性。此外，安来霉素对乙肝病毒(HBV)抗原和乙肝e抗原(HBeAg)也有较好的抑制效果。正因为有如此多的优点，安来霉素已经成为抗菌促生长饲料添加剂的一线产品。
专家预测，作为一种动物专用抗生素，安来霉素还会在相当长的时间内充当促生长剂的主角，因为它既可以满足人们对安全性的要求，又可显著降低动物产品成本。但目前安来霉素工艺过程复杂，发酵时间长，生产成本高，单位效价低。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足之处，筛选了一株安来霉素生产菌，并提供一种发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，根据菌株生长代谢过程中对氧需求量的不同，进行分阶段控制溶氧，这是一个有氧、微氧等多阶段集成发酵，并采用流加碳源的方法，实现了安来霉素生产菌链霉菌的高密度培养。本发明发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法工艺过程简单，生产成本低，单位体积发酵液中安来霉素效价高。
本发明发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法中采用链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，该菌在起始低葡萄糖浓度(1％)发酵、生产过程中通过流加葡萄糖等营养物质，并根据发酵不同阶段对溶氧的需求差异的情况下实现了高效率的发酵，单位体积发酵液中安来霉素效价达6100μg/mL。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌株是从南京工业大学江浦校区土壤中分离得到。目前该链霉菌菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，本保藏中心登记入册编号是CGMCCNO.2410，分类命名：链霉菌，菌种的拉丁学名是Streptomyces sp.，参据的微生物(株)：NJWGY3665，保藏日期是2008年3月21日。
发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法是采取以下方式实现：
发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法为：
1、斜面培养：将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，葡萄糖营养培养基的重量百分配比为葡萄糖0.5～1％、牛肉膏0.5～1％、蛋白胨0.5～1％、NaCl 0.3～0.5％或K2HPO4 0.1～0.2％、琼脂1.5～2％、水余量，pH 6.0-9.0，培养温度28-37℃，培养时间2天-6天；
2、种子培养：用无菌水将斜面上培养的孢子制成单孢子悬液，并接种到50ml种子培养基中培养，种子培养基的重量百分配比为葡萄糖1～3.0％、玉米浆1～3％、CaCO3 1～2％、酵母粉0.5％、NaCl 0.1～0.8％、水余量，pH为6.0-9.0，温度为28～32℃，转速为200rpm，培养2天-6天；
3、发酵培养：将种子液接种到发酵培养基中培养，发酵培养基的重量百分配比为葡萄糖2.0-5.0％、淀粉0.5-2.0％、玉米浆0.5-3.0％、酵母膏0.1～0.5％、黄豆饼粉0.5～2％、NaCl 0.5-1.0％、CaCO3 1～2％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水余量，温度控制在28-37℃，pH控制在6.0-9.0，转速180-220rpm，发酵5-9天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体用甲醇或乙醇进行提取分离，再采用离子交换树脂方法进行精制分离，获得多肽类抗生素安来霉素。
采用HPLC进行定量分析，可以得知样品中安来霉素的浓度。单位体积发酵液中安来霉素为3630μg/ml～6630μg/ml。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂平板上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
本发明发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法中采用链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，该菌在实现了高效率的转化，安来霉素产率为6630μg/mL。链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌株是经自主筛选分离到的一株产抗菌物质的菌株，其发酵产物安来霉素具有强烈的抗微生物活性，且敏感菌几乎不对安来霉素产生耐药性。本发明发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法工艺过程简单，生产成本低，单位效价高。
本发明发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法生产的多肽类抗生素安来霉素可以作为一种广谱、高效、安全的新型饲料添加剂。
具体实施方式
实施例1：
将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖0.5％，牛肉膏0.5％，蛋白胨0.5％，NaCl 0.5％，琼脂1.5％、水96.5％，pH6.0的葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，在28℃下培养2天。取斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18×180mm的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成孢子悬液，取0.5ml孢子悬液接种到含40ml葡萄糖1.0％，玉米浆3％，CaCO3 1％、酵母膏0.5％、NaCl 0.1％、水94.4％，pH7.0的液体种子培养基中培养3天，培养温度为28℃，转速为200rpm。再将5m1种子液接入到装液量为100ml发酵培养基的500ml摇瓶中，在28℃，180rpm，pH6.0的条件下摇床发酵培养5天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体用甲醇或乙醇进行提取分离，再采用离子交换树脂方法进行精制分离，获得多肽类抗生素安来霉素。
采用HPLC进行定量分析，可以得知样品中安来霉素的浓度。单位体积发酵液中安来霉素为3630μg/ml。
所述的发酵培养基的配比为葡萄糖4.0％，淀粉2.0％，玉米浆2.0％、酵母膏0.1％、黄豆饼粉2％、NaCl 0.5％、CaCO3 1.5％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水86.9％。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂平板上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
实施例2：
将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖0.5％，牛肉膏0.8％、蛋白胨0.8％、K2HPO4 0.1％、琼脂1.8％、水96％，pH7.0的葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，在37℃下培养3天。取斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18×180mm的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成孢子悬液，取0.5ml孢子悬液接种到孢子悬液接种到含40ml葡萄糖2.0％、玉米浆2.0％、CaCO3 1.5％、酵母粉0.5％、NaCl 0.5％、水93.5％，pH7.0的液体种子培养基中培养4天，培养温度为30℃，转速为200rpm。再将10ml种子液接入到装液量为100ml发酵培养基的500ml摇瓶中，在32℃，220rpm，pH7.0的条件下摇床发酵培养6天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体，用乙醇进行提取分离，再采用离子交换树脂方法进行精制分离，获得多肽类抗生素安来霉素。
采用HPLC进行定量分析，可以得知样品中安来霉素的浓度。单位体积发酵液中安来霉素为4630μg/ml。
所述的发酵培养基的配比为葡萄糖2.0％，淀粉1.5％，玉米浆0.5％、酵母膏0.3％、黄豆饼粉1.5％、NaCl 0.8％、CaCO3 1.5％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水90.9％。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂平板上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
实施例3：
采用肉汤培养基将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖1％，牛肉膏1％，蛋白胨1％，NaCl 0.5％，琼脂2％、水94.5％，pH9.0的葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，在32℃下培养5天。取斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18×180mm的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成孢子悬液，取1ml孢子悬液接种到含50ml葡萄糖3.0％，玉米浆1％，CaCO3 2％、酵母粉0.5％、NaCl 0.8％、水92.7％，pH 9.0的液体种子培养基中培养4天，培养温度为32℃，转速为200rpm。再将将50ml种子液接种到装液量为1.5L发酵培养基的2L发酵罐中，在37℃，空气以总流速为1.0L/min流入，并以400rpm搅拌混合，维持溶氧浓度(DO)为60-100％。用20％(w/v)NaOH将pH值维持在8.5-9.0，适量补糖，当细胞浓度光密度(O.D.)水平达到32时，转入微氧，维持溶氧浓度(DO)为5-10％，发酵培养9天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体，用乙醇进行提取分离，再采用树脂进行精制，获得多肽类抗生素安来霉素。
采用HPLC进行定量分析，可以得知样品中安来霉素的浓度。单位体积发酵液中安来霉素为5630μg/ml。
所述的发酵培养基的配比为葡萄糖5.0％，淀粉0.5％，玉米浆3.0％、酵母膏0.5％、黄豆饼粉0.5％、NaCl 1.5％、CaCO3 1.5％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水95％。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂茄子瓶上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
实施例4：
采用肉汤培养基将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖0.8％，牛肉膏1％、蛋白胨1％、K2HPO4 0.2％、琼脂2％、水95％，pH 8.0的葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，在37℃下培养6天。取斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18×180mm的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成孢子悬液，取0.5ml孢子悬液接种到孢子悬液接种到含50ml葡萄糖3.0％、玉米浆3.0％、CaCO3 2％、酵母粉0.5％、NaCl 0.8％、水90.7％，pH9.0的液体种子培养基中培养48h，培养温度为32℃，转速为200rpm。将50ml种子液接种到装液量为1.5L发酵培养基的2L发酵罐中，在33℃，空气以总流速为1.5L/min流入，并以350rpm搅拌混合，维持溶氧浓度(DO)为60-100％。20％(w/v)NaOH将pH值维持在8.0-8.5，流加葡萄糖等营养物，当细胞浓度光密度(O.D.)水平达到38时，转入微氧，维持溶氧浓度(DO)为5-10％，发酵培养9天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体，用乙醇进行提取分离，再采用树脂方法进行精制，获得多肽类抗生素安来霉素。
可以采用HPLC进行定量分析，可以得知样品中安来霉素的浓度。单位体积发酵液中安来霉素为6630μg/ml。
所述的发酵培养基的配比为葡萄糖5.0％，淀粉2％，玉米浆1.5％、酵母膏0.5％、黄豆饼粉2％、NaCl 0.8％、CaCO3 1.5％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水85.7％。
链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂茄子瓶上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
Claims (3)
1、一种发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，其特征在于方法为：
(1)斜面培养：将链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665菌种接到葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，葡萄糖营养培养基的重量百分配比为葡萄糖0.5～1％、牛肉膏0.5～1％、蛋白胨0.5～1％、NaCl 0.3～0.5％或K2HPO4 0.1～0.2％、琼脂1.5～2％、水余量，pH 6.0-9.0，培养温度28-37℃，培养时间2天-6天；
(2)种子培养：用无菌水将斜面上培养的孢子制成单孢子悬液，并接种到40ml种子培养基中培养，种子培养基的重量百分配比为葡萄糖1～3.0％、玉米浆1～3％、CaCO3 1～2％、酵母粉0.5％、NaCl 0.1～0.8％、水余量，pH为6.0-9.0，温度为28～32℃，转速为200rpm，培养时间2天-6天；
(3)发酵培养：将种子液接种到发酵培养基中培养，发酵培养基的重量百分配比为葡萄糖2.0-5.0％、淀粉0.5-2.0％、玉米浆0.5-3.0％、酵母膏0.1～0.5％、黄豆饼粉0.5～2％、NaCl 0.5-1.5％、CaCO3 1.5％、NH4Cl 0.5％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸铵0.3％、水余量，温度控制在28-37℃，pH控制在6.0-9.0，转速180-220rpm，发酵5-9天，得到链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665，采用离心分离的方法将菌丝体用甲醇或乙醇进行提取分离，再采用树脂方法进行精制分离，获得多肽类抗生素安来霉素。
2、根据权利要求1所述的发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，其特征在于所述的链霉菌菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，本保藏中心登记入册编号是CGMCC NO.2410，分类命名：链霉菌，菌种的拉丁学名是Streptomyces sp.，参据的微生物(株)：NJWGY3665，保藏日期是2008年3月21日。
3、根据权利要求1所述的发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法，其特征在于所述的链霉菌Streptomyces sp.NJWGY3665在葡萄糖营养琼脂平板上培养后，大量的无色的营养菌丝体平铺于培养基表面，气生菌丝呈现白色至微灰色。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008100244299A CN101245362B (zh) | 2008-03-24 | 2008-03-24 | 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008100244299A CN101245362B (zh) | 2008-03-24 | 2008-03-24 | 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101245362A true CN101245362A (zh) | 2008-08-20 |
| CN101245362B CN101245362B (zh) | 2011-05-11 |
Family
ID=39946042
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2008100244299A Expired - Fee Related CN101245362B (zh) | 2008-03-24 | 2008-03-24 | 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101245362B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101899490A (zh) * | 2010-07-14 | 2010-12-01 | 山东胜利股份有限公司 | 一种微生物发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN102154419A (zh) * | 2010-12-20 | 2011-08-17 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基 |
| CN102174624A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-09-07 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN102250993A (zh) * | 2011-07-18 | 2011-11-23 | 南京工业大学 | 一种利用链霉菌发酵生产安来霉素的优化工艺 |
| CN102391363A (zh) * | 2011-09-26 | 2012-03-28 | 浙江升华拜克生物股份有限公司 | 一种恩霉素的提取方法 |
| CN101928701B (zh) * | 2009-06-23 | 2012-07-04 | 华东理工大学 | 提高真菌产酶或次级代谢物的方法 |
| CN103232870A (zh) * | 2013-04-26 | 2013-08-07 | 赛鼎工程有限公司 | 一种低阶煤制天然气的方法 |
| CN109536543A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-29 | 鲁东大学 | 一种微生物发酵法制备咔唑霉素b的方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102533898A (zh) * | 2012-02-04 | 2012-07-04 | 西南大学 | 产物合成期促进西罗莫司生物合成的方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1872854B (zh) * | 2005-05-31 | 2010-04-07 | 西北农林科技大学农药研究所 | 一种内酰胺类抗生素及其制备方法 |
| WO2007068055A1 (en) * | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Hancroft Pty Ltd | A method for preventing reduced feed intake in animals and treatment of disease conditions |
-
2008
- 2008-03-24 CN CN2008100244299A patent/CN101245362B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101928701B (zh) * | 2009-06-23 | 2012-07-04 | 华东理工大学 | 提高真菌产酶或次级代谢物的方法 |
| CN101899490A (zh) * | 2010-07-14 | 2010-12-01 | 山东胜利股份有限公司 | 一种微生物发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN101899490B (zh) * | 2010-07-14 | 2012-09-05 | 山东胜利股份有限公司 | 一种微生物发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN102154419A (zh) * | 2010-12-20 | 2011-08-17 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基 |
| CN102174624A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-09-07 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN102174624B (zh) * | 2010-12-31 | 2013-12-18 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种发酵生产恩拉霉素的方法 |
| CN102250993A (zh) * | 2011-07-18 | 2011-11-23 | 南京工业大学 | 一种利用链霉菌发酵生产安来霉素的优化工艺 |
| CN102391363A (zh) * | 2011-09-26 | 2012-03-28 | 浙江升华拜克生物股份有限公司 | 一种恩霉素的提取方法 |
| CN103232870A (zh) * | 2013-04-26 | 2013-08-07 | 赛鼎工程有限公司 | 一种低阶煤制天然气的方法 |
| CN103232870B (zh) * | 2013-04-26 | 2014-07-30 | 赛鼎工程有限公司 | 一种低阶煤制天然气的方法 |
| CN109536543A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-29 | 鲁东大学 | 一种微生物发酵法制备咔唑霉素b的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101245362B (zh) | 2011-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101245362B (zh) | 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法 | |
| CN102161975B (zh) | 链霉菌gsdx-1318及发酵法生产寡聚糖类抗生素阿维拉霉素的方法 | |
| CN101597578B (zh) | 一种安来霉素产生菌及利用大孔树脂提取的方法 | |
| CN104342390B (zh) | 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用 | |
| CN110373359B (zh) | 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法 | |
| CN102796673A (zh) | 一株阿魏酸酯酶生产菌株及应用该菌株生产阿魏酸酯酶的方法 | |
| CN103898004A (zh) | 假诺卡氏菌及其发酵生产骨化二醇的方法 | |
| CN101402929B (zh) | 一株耐碱纤维堆囊菌及其在制备埃博霉素中的应用 | |
| CN104845896B (zh) | 生产威兰胶的菌株及方法 | |
| CN103146624A (zh) | 一种三株地衣芽孢杆菌混合液体发酵工艺 | |
| CN105567609B (zh) | 一株耐高温园林废弃物分解菌st2及其应用 | |
| CN109182147A (zh) | 一种青霉及其生产烟曲霉素的方法 | |
| CN104560766B (zh) | 一种游动放线菌菌株及其应用 | |
| CN108841889B (zh) | 利用微生物发酵生产松刚霉素主份——灰黄霉素的方法 | |
| CN108823110B (zh) | 一株产灰黄霉素的菌株及其应用 | |
| CN108342437A (zh) | 一种利用构巢曲霉发酵高产棘白菌素b的方法 | |
| CN102417890B (zh) | 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法 | |
| CN103374537B (zh) | 一种制备恩拉霉素的方法及其生产菌株 | |
| CN102787153B (zh) | 微生物发酵补料生产恩拉霉素的方法 | |
| Phaff | Industrial microorganisms | |
| CN104762229A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用 | |
| CN104745554B (zh) | 芽孢杆菌产蛋白酶和芽孢的发酵培养基及发酵方法 | |
| CN106399218A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌工程菌及其应用 | |
| CN102649941A (zh) | 解磷恶臭假单胞菌l13及其发酵工艺 | |
| CN105567608B (zh) | 一株耐高温园林废弃物分解菌st1及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110511 |