CN101242850B - 文冠果的提取物和从提取物分离出的化合物的组成,功能和应用,以及它们的制备方法 - Google Patents
文冠果的提取物和从提取物分离出的化合物的组成,功能和应用,以及它们的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101242850B CN101242850B CN2004800367617A CN200480036761A CN101242850B CN 101242850 B CN101242850 B CN 101242850B CN 2004800367617 A CN2004800367617 A CN 2004800367617A CN 200480036761 A CN200480036761 A CN 200480036761A CN 101242850 B CN101242850 B CN 101242850B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- wood
- shinyleaf yellowhorn
- cancer
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 0 C*(C(*)=C(*(C)=O)N=*)=C Chemical compound C*(C(*)=C(*(C)=O)N=*)=C 0.000 description 1
- LWABGQGDJUBFLX-YTSZPLLASA-N OC[C@@H](C(C1O)O)O[C@H]1OC([C@@H](C(C(O)=O)O[C@H]1O)O)C1O[C@@H](C1O)OC(CO)C(O)=C1O Chemical compound OC[C@@H](C(C1O)O)O[C@H]1OC([C@@H](C(C(O)=O)O[C@H]1O)O)C1O[C@@H](C1O)OC(CO)C(O)=C1O LWABGQGDJUBFLX-YTSZPLLASA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/77—Sapindaceae (Soapberry family), e.g. lychee or soapberry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/06—Antimigraine agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Botany (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
Abstract
本专利提供了从文冠果(Xanthoceras sorbifolia)的提取物的组成,制备方法和工艺。文冠果的提取物含有生物碱,香豆素,糖,蛋白,多糖,糖甙,皂甙,单宁,酸,黄酮化合物和其它化合物。文冠果的提取物可以用于抗癌,防止脑衰老,增强记忆,改善脑功能,治疗夜尿,尿频,尿急,弱智,痴呆和老年痴呆,孤独症,脑创伤,帕金森病,和其它由于脑功能不健全或障碍所引起的病症,还可用于治疗关节炎,风湿症,循环不良,动脉硬化,雷诺氏症,心绞痛,心脏功能紊乱,冠心病,头痛,头晕,肾功能紊乱,阳萎和早泻。本专利提供新化合物,这些化合物含有糖,三萜类化合物皂甙原,在碳21和22位有含当归酰基的侧链。这些化合物具有各种药学和医疗学用途。
Description
本专利要求国际专利申请书(NO.PCT/US04/33359,2004年十月八日递交)的优先权,它要求获得美国专利申请书(U.S.Serial NOs.60/509,851,2003年10月9日递交和U.S.SerialNOs.60/532,101,2003年12月23日递交)中所要求的权利。这些正在审定的专利申请书的内容因而应全面地纳入本专利申请书中。
各种文献和出版物的内容在本专利申请书中被广泛引用,以便能更好地阐明本专利申请书中所要获得的权利。
发明领域
本发明涉及一种叫文冠果(Xanthoceras sorbifolia)的植物的提取物,其特征在于所述的提取物化合物的组成,功能和应用,及其制备方法。
发明背景
文冠果是无患子科(Sapindaceae)文冠果属(Xanthoceras)的植物,拉丁文名Xanthoceras sorbifolia Bunge,俗名又叫文冠花,文光果,文冠树,文官果,崖木瓜和西拉森登等,英文名叫叫“黄角树”(Goldenhorn,Yellowhorn)。落叶灌木或小乔木,可达8米高;奇数羽状复叶;总状花序,花白色,杂性;蒴果初为绿色,果壳厚,木质,成熟黑褐色,卵球形,多数原产于中国,主要分布于中国北部,野生或栽培,种子含油脂可达50%以上,可食用,茎叶可入药,治风湿,种仁在民间用于治遗尿症。种子,花和叶可食,可用于救荒。文冠果种子在民间用于治遗尿症,茎叶在蒙药中治风湿,已有很长的历史。但是,对文冠果药用方面的深入开发研究才是近年来的事。
中国专利(CN 1092992A)和(CN 1092991A)公开文冠果种仁的粉,和中国专利(CN1052636C)公开文冠果种仁的粉的乙醇提取物可以有效的治疗遗尿,并可能改善脑功能和增智。沈阳药科大学学报(2001,18(1):53-56)报导了文冠果的木材的正丁醇提取物和它的抗炎性作用。
美国专利申请公开书(No 20030096030)公开了文冠果果壳提取物和所含的四种皂甙(BunkankasaponinA.B.C.D)和两个甾醇化合物,以及它们改善功能和抗衰老的功能,和用于治疗夜尿,尿频,尿失禁,弱智,痴呆和增强人体抗御糖尿病的方法。美国专利申请公开书(No 20030082293)公开了从文冠果果壳中分离,提纯的四种皂甙(BunkankasaponinA.B.C.D),粗脂肪,粗蛋白,和糖类。
美国专利(No6,616,943,发布2003年9月9日)公开了文冠果果壳总提取物(combinedextarcts)的组成及其用途和制备的方法。该制备方法有以下步骤:采收文冠果,清选果壳和/或果柄;干燥和粉碎文冠果果壳和/或果柄;用醇类(如乙醇)等有机溶剂浸提文冠果果壳和/或果柄粉;回收溶剂,浓缩得流浸膏;干燥,灭菌得果壳总提取物(醇等有机溶剂提取物)。该果壳总提取物是文冠果果壳醇类等有机溶剂提取物,主要含有皂甙,糖类,蛋白质和其它物质。该果壳总提取物可用于制造药物和保健食品,用于抗衰老,增进记忆,和改善脑功能,治疗夜尿,尿频,尿失禁,弱智,痴呆,老年痴呆,孤独症,脑创伤,帕金森病和其它由于脑功能不健全或障碍所引起的病症。该文冠果果壳总提取物还分别可和维他命B,D,K,抗氧化剂,冬虫夏草及其提取物,银杏及其提取物,聚果菊及其提取物,石松碱A,叶酸,氨基酸,肌酸,纤维添加剂等一起制成各种造药物和保健食品。
陈英杰,Tadahiro Takeda,Yukio Ogihara等人1984和1985年在日本药物化学学报(Chem.Pharm.Bull.)上发表了四篇对文冠果化学研究的文章(1984,32(9):3378-3383;1985,33(1):127-134;1985,198533(3):1043-1048;1985,33(4):1387-1394)报导了从文冠果种子分离出的四种新皂甙(Bunkankasaponin A.B.C.D):Bunkanka皂甙A:22-O-乙酰基-21-O-(4-O-乙酰基-3-O-当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖酰基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸酰基]原七叶树皂甙,Bunkanka皂甙B:22-O-乙酰基-21-O-(3,4-O-双当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖酰基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸酰基]原七叶树皂甙,Bunkanka皂甙C:28-O-乙酰基-21-O-(4-O-乙酰基-3-O-当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖酰基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸酰基]原七叶树皂甙和Bunkanka皂甙D:28-O-乙酰基-21-O-(3,4-O-双当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖酰基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸酰基]原七叶树皂甙。他们还提出了前皂甙元(Prosapogenin)的结构:16-O-乙酰基-21-O-(3,4-O-双当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基原七叶树皂甙原;22-O-乙酰基-21-O-(3,4-O-双当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基原七叶树皂甙原;3-O-βD-葡萄糖醛酸吡喃糖甙;21-O-(3,4-O-双当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基茶树皂甙原B;21-O-(4-O-乙酰基-3-O-当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基茶树皂甙原B和21-O-(4-O-乙酰基-3-O-当归酰基)-β-D-吡喃岩藻糖酰基-22-O-酰基原七叶树皂甙原。
癌症是造成现代人类死亡的重要原因之一。致癌的原因是个种各样的,癌症可由不同类型的细胞畸变引起,因而会有各种不同的癌症。每种癌症有其特有的特征,反映了它的特殊起因。甚至癌症扩散已无法控制,也可以找出它的起因。因而,研发出的药物一定要有针对性,是很重要的。
卵巢癌在引起妇女死亡的病因中占第五位。妇科病中可造成死亡的重要病因。在美国,1.4-2.5%的妇女可能患卵巢癌,老年妇女患卵巢癌的危险更高。55到74岁的妇女有50%以上的死亡于卵巢癌。35到54岁的妇女约25%以上的死亡于卵巢癌(见http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000889.htm)。卵巢癌在引起妇女死亡率极高的原因在于,首先,病症不明显,容易误诊。当诊断出时,癌细胞已转移。同时,卵巢癌常把恶性细胞转移到子宫,膀胱,肠和肠网膜,在发现这些细胞以前,他们已开始形成新的肿瘤。另外,对卵巢癌没有免费监测的***,50%的患卵巢癌的妇女不能在癌症初期得到诊断。
本专利提供的从文冠果提取物分离出的化合物(或人工合成的)和其组合物,抗卵巢癌和其它癌症的潜力极大。
摘要
本发明专利的扼要摘要,为了使发明的重点条款根价明显,另一些条款的内容可能在本摘要中被简化甚至略去,但是,这不表明本发明专利仅限于这些在摘要中提到的内容。
本发明涉及文冠果的提取物的用途,其特征在于所述的提取物可治疗夜尿,遗尿,失禁,尿频。文冠果的提取物治疗夜尿,遗尿,失禁,尿频的功能不仅和它可以改善膀胱功能相关,而且和它可改善人的脑功能关系重大。
本发明专利还公开了一类组合物(composition),其特征在于所述组合物它可以改善大脑中枢***的功能和泌尿***信息的传递过程,使传递到大脑的信号不断增强,改善了睡眠警觉***,防止深度睡眠的发生,使大脑发出信号叫醒睡觉的人去撒尿,避免遗尿的发生。
本发明专利还公开了一类组合物(composition),其特征在于所述组合物有助于松弛膀胱,提高储尿量,从而避免遗尿的发生。
本发明专利公开的文冠果的提取物有助于消除由于精神紧张,压力,衰老,活动过度,反射亢进和不稳定而引起的避免逼尿肌不稳定和膀胱的紧张,从而防止尿急和尿频。文冠果提取物可松弛由乙酰胆碱(Ach)引起的膀胱的紧张。
文冠果提取物抑制乙酰胆碱酶(AchE)的合成,调解制尿贺尔蒙(ADH)的释放,从而控制膀胱产生过多的尿量,抗炎,从而避免遗尿的发生。
本发明公开文冠果的提取物,其特征在于所述文冠果的提取物为文冠果的果果壳和/或果柄,种仁,种壳,枝干,树皮和根的提取物。
本发明公开文冠果的提取物,其特征在于所述文冠果的提取物主要是醇等有机溶剂提取物,粗皂甙提取物,黄酮类提取物,生物碱提取物,香豆素提取物,芳香有机酸提取物,糖类提取物和单宁提取物。
本发明公开文冠果的醇等有机溶剂提取物,其特征在于所述文冠果的醇等有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的醇等有机溶剂提取物。
本发明公开文冠果的粗皂甙提取物,其特征在于所述文冠果的粗皂甙提取物主要含有粗皂甙化合物等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的粗皂甙提取物。
本发明公开文冠果的黄酮类提取物,其特征在于所述文冠果黄酮类提取物主要含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的黄酮类提取物。
本发明公开文冠果的的生物碱提取物,其特征在于所述文冠果的生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的生物碱提取物。
本发明公开文冠果的香豆素提取物,其特征在于所述文冠果的香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的香豆素提取物。
本发明公开文冠果的芳香有机酸提取物,其特征在于所述文冠果的芳香有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的芳香有机酸提取物。
本发明公开文冠果的糖类提取物,其特征在于所述文冠果的多糖类提取物主要含有多糖,糖苷,其它糖类,皂甙和单宁等化合物。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的糖类提取物。
本发明公开文冠果的单宁提取物,其特征在于所述文冠果的单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。本发明还公开了一种组合物,其特征在于所述组合物含有文冠果的单宁提取物。
本发明公开文冠果的提取物的制备方法,其特征在于所述文冠果的提取物的制备方法主要是醇等有机溶剂提取物,粗皂甙提取物,黄酮类提取物,生物碱提取物,香豆素提取物,芳香有机酸提取物,糖类提取物和单宁提取物的制备方法。其中,单宁提取物的制备方法有二:1)用95%乙醇提取;2)用丙酮/水提取。
本发明公开文冠果的提取物的用途,其特征在于所述文冠果提取物的用途有如下方面:促进膀胱生长,改善膀胱功能;改善睡眠警觉***;调节制尿荷尔蒙(ADH)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调节促肾上腺皮质的荷尔蒙(ACTH)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调节5-羟色胺(5-HT)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调解乙酰胆碱(Ach)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调节肾上腺素(AD)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调解去甲肾上腺素(NE)的释放,分解和摄取及其受体的功能;调节神经肽的合成,释放,分解和活性及其受体的功能;防止进入睡眠***状态;治疗遗尿。治疗癌症,如卵巢癌,膀胱癌,骨癌,乳腺癌,白血病,肝癌,***癌和脑癌,但又不限于上癌症。以及改善肺的功能。
本发明专利还公开了一种化合物,其特征在于所述化合物含有糖链,三萜皂甙原或其它皂甙原,和在碳21和22位上的侧链或当归酰胺,糖链含一个或一个以上的糖或糖的衍生物,这些基团有机(operatively)组成了具生物活性的化合物。
本发明专利公开了一种化合物,其特征在于所述化化合物中具有如下的化学结构:
本发明专利还公开了一类盐类,其特征在于所述盐类是由上述化合物衍生而来的盐类。
本发明专利还公开了一类组合物(composition),其特征在于所述组合物(composition)是由上述化合物或其盐类和适当载体形成的组合物(composition)。
本发明专利还公开了一类药物组合物,其特征在于所述组药物合物是由上述化合物或其盐类和适当药物载体所组成。
上述化合物或其盐类,以及组合物都具有生物活性。
本发明公开了从文冠果制备上述提取物的工艺方法,其特征在于所述工艺方法如下:
●采收文冠果样品,清选,干燥;
●粉碎文冠果样品,得文冠果样品粉;
●用适量的一种或几种有机溶剂浸提文冠果样品粉(适当的次数和时间),得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(适当的次数),得第二次提取物;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥和灭菌流浸膏,得粉状文冠果提取物。
本发明专利公开了一种三萜皂甙化合物,其特征在于所述化合物含有三个糖和一个或一个以上的双当归酰胺,它们连在皂甙原的母环上。
本发明专利公开了一种三萜皂甙化合物,其特征在于所述化合物含有两个糖和一个或一个以上的双当归酰胺,它们连在皂甙原的母环上。
本发明专利公开了一种三萜皂甙化合物,其特征在于所述化合物含有四个糖和一个或一个以上的当归酰胺,它们连在皂甙原的母环上。
本发明专利公开了一种三萜皂甙化合物,其特征在于所述化合物含有三个糖和一个当归酰胺,它们连在皂甙原的母环上。
本发明专利还公开了从文冠果提取物中分离和提纯化合物的方法,其特征在于所述方法如下:
●采收文冠果样品,清选,干燥;
●粉碎文冠果样品,得文冠果样品粉;
●用适量的一种或几种有机溶剂浸提文冠果样品粉(适当的次数和时间),得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(适当的次数),得第二次提取物;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥和灭菌流浸膏,得粉状文冠果提取物;
●把上述从从文冠果提出的粉状取物分离成一至多个成分;
●检测出上述成分中的具有生物活性的成分;
●用速效液相色谱(FPLC)分离和提纯上述具有生物活性的成分;
●再用高效液相色谱(HPLC)分离出具有生物活性的化合物。
本发明专利还公开了用上述方法分离出的化合物,其特征在于所述化合物的二维HMQC核磁共振谱的化学位移的数据见表2和二维HMBC核磁共振谱的化学位移的数据见表3。
本发明专利还公开了具有抗癌作用的上述从文冠果的提取物分离出的化合物,3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-12-烯五环三萜皂甙,其分子式为C57H88O23(C57H88023)或其衍生物的抗癌通路(pathways),其特征在于所述抗癌通路可调节G蛋白细胞和其受体,Fas蛋白细胞和其受体,赖氨酸激酶和其受体,***素和其受体等的代谢活动。
正常的干细胞产生的子细胞具有有限的增殖能力,当子细胞***产生了非***细胞,细胞***停止,进入终分化期。如果干细胞***是不能产生非干子细胞,它就会增殖形成肿瘤。同时,如果子细胞不能正常地增殖,这些细胞就会增殖形成肿瘤。
正常的细胞当成熟时,进入终分化期形成特化细胞,停止***。一旦细胞群体倍增数次,就会停止增值,进入衰退期。如果细胞***不能终止,不进入衰退和分化期,就会产生癌症。这些细胞在遗传上是不稳定的,并不理会内外调节细胞增值的信号。它们可以侵入其它组织,增值造成更多的肿瘤。
许多生物通路的活动不正常,引起细胞***无法终止,就会导致癌变。例如,转化生长因子α(TGF-alpha)和转化生长因子β(TGF-beta),转化生长因子β信号途径和SMAD编译调节基因,Ras-MAP激酶链信号途径,基因调控蛋白Myc等通路的生化环节或其受体被不适当地活化或动过分活跃,会引起癌细胞的生成和增殖。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物,可调节这些生物通路活动的生化环节或其受体,防止癌变。由于基因突变癌细胞的杀死细胞的信号被阻断了。因而,癌细胞就不断的***,导致了癌变。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物,可疏通阻滞癌细胞“***”信号传递的通路,使癌细胞“***”。
图的详细说明
图1(a)和(b).文冠果提取物X和Y给药9天后对小鼠学习记忆的改善作用(水迷宫法)。
图2(a)and(b).文冠果提取物X和Y对给戊巴比妥纳3天所至小鼠的记忆功障碍的影响(水迷宫法)。
图3.文冠果提取物X和Y给药10天对小鼠尿量的影响。
图4.人典型的睡觉周期。
图5.文冠果果壳提取物的高效液相色谱图谱。
图6.文冠果提取物对乳腺癌(IC50为65μg/ml,IC0为105μg/ml)和白血病癌细胞(IC50为35μg/ml,IC0为50μg/ml)的抑制作用的比较。
图7.文冠果提取物在低浓度可促进膀胱细胞的生长,在浓度10μg/ml时,膀胱细胞的生长增加25%。文冠果提取物在高浓度时抑制膀胱癌细胞的生长(IC50为45μg/ml,IC0为60μg/ml)。同时,文冠果提取物抑制卵巢癌细胞的生长(IC50为15μg/ml,IC0为20μg/ml)。
图8.文冠果提取物在浓度低于40μg/ml时,对脑细胞的生长无作用或有轻微刺激作用,在浓度10μg/ml时,膀胱细胞的生长增加8%。。文冠果提取物对***(IC50为50μg/ml,IC0为70μg/ml)和脑癌细胞的生长有抑制作用(IC50为70μg/ml,IC0为100μg/ml)。
图9.在培养基RPMI-1640中,文冠果提取物在浓度10ug/ml时,肺细胞可生长,50ug/ml时,生长增加20%。膀胱细胞在含有10μg/ml文冠果提取物的RPMI-1640培养液中生长增加25%。但是,文冠果提取物在高浓度时抑制膀胱癌细胞的生长IC50为45ug/ml,IC0为60μg/ml。文冠果提取物抑制肝癌细胞的生长,IC50为68μg/ml,IC0为95μg/ml。
图10.文冠果提取物对卵巢癌和***细胞的生长的抑制作用不同。文冠果提取物对卵巢癌的医疗前景十分可观,对***细胞的生长的抑制作用较弱。
图11.骨细胞在低浓度(如10μg/ml)含有文冠果提取物的RPMI-1640培养液中生长增加20%,在高浓度时,抑制骨癌细胞的生长,IC50为40μg/ml。
图21.用高效液相色谱(HPLC)在μbondapak C18柱上分离文冠果提取物的图谱。
图21A-M.用快速液相色谱(FPLC)从文冠果提取物中分离化合物Y。图21A-B是快速液相色谱的代表性洗脱图谱。图21C-K是从快速液相色谱获得的组分的HPLC图谱。图21L:原物质;图21M:薄层色谱(TLC)。从快速液相色谱选择的组分,用碳水化合物染色,在TLC上分析。
图22.文冠果提取物的吸收光谱。
横坐标:波长nm
纵坐标:光强度
文冠果提取物在207nm,278nm和500nm有3个吸收高峰。
图23A-23E.MTT法检测文冠果提取物影响细胞生长的曲线。各种细胞对文冠果提取物的敏感性排列如下:
图23A极敏感:卵巢细胞;
图23B敏感:膀胱和骨细胞;
图23C中等敏感:白细胞和肝细胞;
图23D稍敏感:***,乳腺和脑细胞;
图23E欠敏感:结肠,宫颈和肺细胞。
横坐标:浓度(μl/ml)
纵坐标:细胞生长(%)
图24.文冠果提取物在快速液相色谱(FPLC)上梯度(10-80%)洗脱谱。
横坐标:洗脱物体积(5ml/组分)
纵坐标:光强度(245nm)
图25.从快速液相色谱(FPLC)获得的文冠果提取物的各组分对膀胱细胞生长的影响(根据MTT检测)。图25A.从快速液相色谱(FPLC)获得的文冠果提取物组分。图25B.组分5962(Y)抑制细胞生长;组分610and 1116稍刺激细胞生长。
横坐标:浓度(μl/ml)
纵坐标:细胞生长(%)
图26.文冠果提取物组分5962的64%乙晴等梯度洗脱图谱。在FPLC上两个主要组分X和Y被分离出来。
横坐标:光强度(254nm)
纵坐标:组分编号(1ml/组分).
图27.文冠果提取物的组分X(2021)和Y(2728)对膀胱细胞生长的影响:仅Y抑制膀胱细胞生长。
图28.文冠果提取物组分Y的高效液相色谱(HPLC)35%乙晴等梯度洗脱图谱,显示Y(2728)组分含有4-5化合物:Y0,Y1,Y2,Y3和Y4。
图29.文冠果提取物组分Y的高效液相色谱(HPLC)45%乙晴等梯度洗脱图谱,显示Y3和Y4的峰迭合在一起,Y1和Y2清晰地和Y3和Y4分离开来。
图30.文冠果提取物组分Y的高效液相色谱(HPLC)45%乙晴在C18柱(Delta PakC18)上的等梯度洗脱图谱。Y1和Y2清晰地分离开来。
图31.比较文冠果提取物组分Y3和Y4Y峰的上行(曲线上半部)部分和下行曲线下半部)部分的质子核磁共振图谱。显示它们无差别。
图32.显示组分Y的纯度(从高效液相色谱Delta Pak C18柱上的45%乙晴梯度洗脱图谱上收集的)。
图33.显示提纯的化合物Y在抑制卵巢癌(OCAR-3)方面的潜力图。
33A点标度图(Point scale)。
33B线标度图(Linear scale)。
横坐标:浓度(μg/ml),纵坐标:细胞生长(%)(根据MTT检测),IC50约1μg/ml。
图34.比较化合物Y对卵巢和***细胞生长的影响:卵巢癌细胞对化合物Y敏感,而***细胞不敏感。卵巢癌细胞的IC50约1μg/ml,说明卵巢癌细胞对提纯的化合物Y很敏感。
图35.化合物Y的质子核磁共振(NMR)的化学位移图谱。
图36.化合物Y的二维NMR(HMQC)图谱(同时请看表10.2的化学位移数据)。
图37.化合物Y的HMBC图谱。A:水平1,B:水平2。同时请见表23的化学位移数据。
图38.化合物Y的质谱。(A):MALDI-TOP图谱。A-1图谱之一:Y+Matrix(CHCA)+Angiotensin 1“two point calibration”。A-2图谱之二:Y+Matrix(CHCA)+Angiotensin“one point calibration”。38A-3图谱之三:Y+Matrix(CHCA)。8A-4图谱之四:Matrix(CHCA)only。A-5图谱之五:Angiotensin 1+Matrix(CHCA)。(B)ESI-MS图谱。
图39.化合物Y的化学结构和名称:3-0-[β-D-吡喃半乳糖酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3-β-D-吡喃葡萄糖酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。
图40.化合物Y1质子核磁共振(NMR)图谱。化学位移数据见表24。
图41.化合物Y1二维核磁共振(HMQC)图谱。化学位移数据见表25。
图42.化合物Y2质子核磁共振图谱。化学位移数据见表26。
图43.化合物Y2二维核磁共振(HMQC)图谱。化学位移数据见表27。
图44.化合物Y5质子核磁共振图谱。化学位移数据见表28。
图45.化合物Y5二维核磁共振(HMQC)图谱。化学位移数据见表29。
图46.化合物Y1质子COSY-NMR图谱。化学位移数据见表30。
图47.化合物Y1三个可能的化学结构:
47A:化学结构Y1-1;
47B:化学结构Y1-2;
47C:化学结构Y1-3。
表24.化合物Y1的质子核磁共振谱数据
DU=C:/Bruker/XWIN-NMR,USER=guest,NAME=chan,EXPNO=8,PROCNO=1
F1=10.000ppm,F2=0.000ppm,MI=0.05cm,MAXI=10000.00cm,PC=1.000
表25.化合物Y1的二维质子(HMQC)核磁共振谱数据
DU=C:/Bruker/XWIN-NMR,USER=guest,NAME=chan,EXPNO=18,PROCNO=1
F1PLO=116.085ppm,F1PHI=10.797ppm,F2PLO=6.538ppm,F2PHI=0.368ppm
MI=1.00cm,MAXI=10000.00cm,PC=2.000
表26.化合物Y2的质子核磁共振谱数据
DU=C:/Bruker/XWIN-NMR,USER=guest,NAME=chan,EXPNO=10,PROCNO=1
FI=10.000ppm,F2=0.000ppm,MI=0.05cm,MAXI=10000.00cm,PC=1.000
表27.化合物Y2的二维质子(HMQC)核磁共振谱数据
表28.化合物Y5的质子核磁共振谱数据
DU=C:/Bruker/XWIN-NMR,USER=guest,NAME=chan,EXPNO=12,PROCNO=1
F1=10.000ppm,F2=0.000ppm,MI=0.05cm,MAXI=10000.00cm,PC=1.000
表29.化合物Y5的二维质子(HMQC)核磁共振谱数据
表30.化合物Y1的COSY二维质子核磁共振谱数据
专利申请的详细说明
当人睡眠时,要进入一个睡眠周期,这个睡眠周期包括相互交替的4-5个阶段,有的阶段是深度睡眠阶段,有的阶段是轻度睡眠阶段(图4)。而且,这些阶段的交替是没有一定顺序的。当进入轻度睡眠阶段时,睡眠人比较容易被叫醒。但是,当进入深度睡眠阶段时,叫醒就比较困难。健康的人在睡眠时,当膀胱涨满时,如果处于轻度睡,就比较容易醒来去撒尿;如果处于深度睡眠,就比较不容易醒来去撒尿,就可能会发生遗尿。遗尿,尿频和尿急等病症虽不至于之人于死命,但是,给患者带来的痛楚和不便确实一言难尽的。而且,孩童,成人,男女人都会患这类病症。本发明涉及一种植物提取物,包括文冠果的植物的提取物,可用于防止遗尿。
文冠果是无患子科(Sapindaceae)文冠果属(Xanthoceras)的植物,拉丁文名Xanthoceras sorbifolia Bunge,俗名又叫文冠花,文光果,文冠树,文官果,崖木瓜和西拉森登等,英文名叫叫“黄角树”(Goldenhorn,Yellowhorn)。落叶灌木或小乔木,可达8米高;奇数羽状复叶;总状花序,花白色,杂性;蒴果初为绿色,果壳厚,木质,成熟黑褐色,卵球形,多数原产于中国,主要分布于中国北部,野生或栽培,种子含油脂可达50%以上,可食用,茎叶可入药,治风湿,种仁在民间用于治遗尿症。种子,花和叶可食,可用于救荒。
本发明进一步说明文冠果的提取物的应用和制备方法。本发明提供的文冠果的提取物可改善大脑的功能,使传递信号顺畅或加强,及时叫醒睡觉的人,防止遗尿发生。当膀胱涨满尿时,膀胱的平滑肌会扩张,当膀胱的平滑肌扩张同时,它会通过盆骨和骶骨脊髓神经发出信号给大脑皮层和小脑。大脑皮层和小脑接到信号后,使膀胱持续收缩,而使***放松。这时尿液就会排出。当人在睡眠尿进入膀胱时,逼尿肌伸展使膀胱扩大。当尿在膀胱不断积累时,会刺激膀胱的伸展接收器(stretch receptor)不断产生信号给大脑。信号的强弱取决于膀胱中尿量积累的多少。当膀胱中尿量积累足够多时,传递到大脑的信号不断增强,就使大脑发出信号叫醒睡觉的人去撒尿。但是,如果由于大脑或膀胱功能缺陷,传递信号因而受阻断或不足够强,致使不能叫醒睡觉的人,就会发生遗尿。本发明提供的文冠果提取物有助于改善大脑或膀胱功能,使传递信号顺畅或加强,及时叫醒睡觉的人,防止遗尿发生。
膀胱壁有敏感膀胱伸展接收器(stretch receptor),它感知膀胱中尿量积累的多少,不断产生信号给神经中枢。本发明提供的文冠果提取物有助于神经中枢感知这产生的信号,防止遗尿发生。
同时,其它因素,如各种压力,精神紧张,膀胱都会收缩变小,而使储尿的能力降低和逼尿肌不稳定,提前被迫收缩,急于排尿,发生尿频。本发明提供的文冠果提取物有助于松弛膀胱,提高储尿量和减少排尿次数。
由于年龄增长,甚至中年人,膀胱都会收缩变小,而使储尿的能力降低和逼尿肌不稳定,活动过度,反射亢进,致使在膀胱储尿未满时,提前被迫收缩,急于排尿。本发明提供的文冠果提取物有助于松弛膀胱逼尿肌,提高储尿量和减少排尿次数。
病人由于逼尿肌不稳定,活动过度,反射亢进,致使在膀胱储尿未满时,提前被迫收缩,急于排尿,发生尿频和尿急。本发明提供的文冠果提取物有助于松弛膀胱逼尿肌,提高储尿量。
膀胱平滑肌有两种功能,当它放松时,膀胱储尿;当它收缩时,膀胱排尿。膀胱壁中有伸缩感应接收器,可感应膀胱中尿量的多少,并把这一信息通过脊髓丘脑束传递给脊髓神经***。当需要逼尿肌放松时,大脑发出抑制信号。当需要逼尿肌收缩时,大脑发出兴奋信号。乙酰胆碱酶(AchE)可抑制乙酰胆碱(Ach)的合成,乙酰胆碱的不足会影响上述信息的传递过程,从而引起遗尿。本发明提供的文冠果提取物可抑制乙酰胆碱酶(AchE)的合成,从而有助于乙酰胆碱的生成,防止遗尿发生。
在脑垂体后叶腺中有一种制尿贺尔蒙(ADH),它通过肾脏调节人体内水分的状况。从而影响肾脏产尿的多少。制尿贺尔蒙的释放受渗透压受体和压力受体控制。渗透压受体是下丘脑的一种特化的细胞,它们对血液中颗粒的浓度很敏感。当血液中的颗粒的浓度高时,垂体就会释放更多的制尿贺尔蒙,反之,被垂体释放的制尿贺尔蒙就会减少。压力受体的位置非常接近于右心房,大静脉和颈脉窦,对血流量和血压很敏感。当血压低时,心脏会发出信号给下丘脑和垂体,释放更多的制尿贺尔蒙,反之,释放的制尿贺尔蒙就减少。本发明提供的文冠果提取物可调节制尿贺尔蒙(ADH)的合成,以减少肾脏产尿量,防止遗尿发生。
本发明目提供文冠果提取物,其特征在于所述文冠果提取物为文冠果的果壳和/或果柄,种仁,种壳,枝干,树皮和根的提取物。
其中之一为文冠果果壳和/或果柄的黄酮粗提取物。制备工艺依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎文冠果果壳和/或果柄;
●用乙醇浸提果壳和/或果柄粉3-4次,得乙醇浸提液;
●回收乙醇得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏得黄色粉末状黄酮提取物。
该黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之二为文冠果的叶的黄酮粗提取物。文冠果叶粗黄酮提取物包扩水溶性和非水溶性黄酮。制备工艺依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶得文冠果叶粉;
●用乙醇浸提文冠果叶粉3次,得乙醇浸提液;
●浓缩乙醇浸提液;
●用热水浸浓缩了的乙醇浸提液,得水溶性浸提物和非水溶性浸提物;
●干燥,灭菌所得水溶性和非水溶性黄酮提取物,得水溶性和非水溶性黄色粉末状黄酮提取物。
该两种黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之三为文冠果的枝干的黄酮粗提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干得文冠果枝干粉;
●用乙醇浸提文冠果枝干粉4次,得乙醇浸提液;
●回收乙醇得流浸膏;
●干燥,灭菌,得黄色粉末状黄酮提取物。
该黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之四为文冠果种仁的黄酮粗提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼,得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁霜;
●用乙醇提取种仁霜3-4次;
●回收乙醇,得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏,得黄色粉末状黄酮提取物。
该黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之五为文冠果根的黄酮粗提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根得文冠果根粉;
●用乙醇浸提文冠果根粉3-4次,得乙醇浸提液;
●回收乙醇得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏得黄色粉末状黄酮提取物。
该黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之六为文冠果树皮的黄酮粗提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮得文冠果树皮粉;
●用乙醇浸提文冠果树皮粉3-4次,得乙醇浸提液;
●回收乙醇得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏得黄色粉末状黄酮提取物。
该黄酮提取物含有黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇等和其它化合物如酚类化合物,有机酸等。
其中之七为文冠果的果壳和/或果柄的有机熔剂(conbined)提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎文冠果果壳和/或果柄,得果壳和/或果柄粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇和其它有机溶剂)浸提文冠果果壳和/或果柄粉,得有机熔剂提取物;
●回收溶剂,浓缩得流浸膏;
●干燥,灭菌得果壳和/或果柄有机溶剂提取物。
该果壳和/或果柄有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之八为文冠果的叶的有机溶剂提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶,得文冠果叶粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果叶粉,得机溶剂浸提液;
●回收有机溶剂,得流浸膏;
●用乙醇和水浸提流浸膏,得二次流浸膏;
●用正丁醇浸提二次流浸膏,得正丁醇浸提物;
●回收正丁醇,得三次流浸膏;
●干燥,灭菌所得三次流浸,得叶有机溶剂提取物。
该叶有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之九为文冠果枝干的有机溶剂提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得枝干粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果枝干粉,得有机溶剂浸提液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏,得枝干有机溶剂提取物。
该枝干有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之十为文冠果种仁的有机溶剂提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉,得去油种仁霜;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提种仁霜,得有机溶剂浸提液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏得种仁有机溶剂提取物。
该种仁有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之十一为文冠果根的有机溶剂提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根,得根粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果根粉,得有机溶剂浸提液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏,得根有机溶剂提取物。
该根有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之十二为文冠果树皮的有机溶剂提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得树皮粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果树皮粉,得有机溶剂浸提液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●干燥,灭菌流浸膏,得树皮的有机溶剂提取物。
该树皮的有机溶剂提取物主要含有皂甙和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之十三为文冠果的果壳和/包括果柄的粗皂甙提取物,其制备工艺过程如下:
●采收文冠果,清选果壳,干燥;
●粉碎文冠果果壳;
●醇类等有机溶剂浸提文冠果果壳粉,按有机溶剂∶果壳粉2∶1的比例,在
室温下,浸提4-5次,每次20-35小时;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●脱去溶剂,得流浸膏;
●干燥,灭菌,得乙醇提取物;
●流浸膏再用水溶解,正丁醇萃取;
●正丁醇萃取物经色谱分离得粗皂甙。
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十四为文冠果的叶的粗皂甙提取物甙。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶得文冠果叶粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果叶粉(2∶1)4-5次,每次20-35小时,得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●溶解流浸膏于水中,得水浸提液;
●用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;
●用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物。
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十五为文冠果枝干的粗皂甙提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果枝干粉(2∶1)4-5次,每次20-35小时,得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●溶解流浸膏于水中,得水浸提液;
●用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;
●用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物。
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十六为文冠果种仁的粗皂甙提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁霜;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提种仁霜,(2∶1)4-5次,每次20-35小时,得有机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●溶解流浸膏于水中,得水浸提液;
●用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;
●用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物。
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十七为文冠果根的粗皂甙提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根,得文冠果根粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果根粉(2∶1)4-5次,每次20-35小时,得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●溶解流浸膏于水中,得水浸提液;
●用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;
●用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物。
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十八为文冠果树皮的粗皂甙提取物。制备方法工艺过程如下:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得文冠果树皮粉;
●用有机溶剂(乙醇,甲醇等)浸提文冠果树皮粉(2∶1)4-5次,每次20-35小时,得机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂得流浸膏;
●溶解流浸膏于水中,得水浸提液;
●用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;
●用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物.
该粗皂甙提取物主要含有皂甙。
其中之十九为文冠果果壳和/或果柄的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和/或果柄粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提果壳和/或果柄粉,得水浸提物;
●用***浸提果壳和/或果柄粉水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十为文冠果叶的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果果叶,得文冠果叶粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提文冠果叶粉,得水浸提物;
●用***浸提文冠果叶水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十一为文冠果枝干的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果果枝干,得文冠果枝干粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提文冠果枝干粉,得水浸提物;
●用***浸提文冠果叶水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十二为文冠果种仁的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提文冠果种仁粉,得水浸提物;
●用***浸提文冠果种仁粉水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十三为文冠果根的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果果根,得文冠果根粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提文冠果根粉,得水浸提物;
●用***浸提文冠果根水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十四为文冠果树皮的香豆素提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果果树皮,得文冠果树皮粉;
●用0.5%NaOH溶液浸提文冠果树皮粉,得水浸提物;
●用***浸提文冠果树皮水浸提物,得***浸提物;
●用HCl中和***浸提物;
●浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物。
该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和其它化合物如糖,粗蛋白等。
其中之二十五为文冠果果壳和/或果柄的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和/或果柄粉;
●用水在室温下浸提果壳和/或果柄粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70°℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之二十六为文冠果叶的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶,得文冠果叶粉;
●用水在室温下浸提文冠果叶粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70°℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之二十七为文冠果枝干的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用水在室温下浸提文冠果枝干粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70°℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之二十八为文冠果种仁的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁粉;
●用水在室温下浸提文冠果种仁粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之二十九为文冠果根的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶,得文冠果根粉;
●用水在室温下浸提文冠果根粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之三十为文冠果树皮的糖类提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得文冠果树皮粉;
●用水在室温下浸提文冠果树皮粉24小时,得水浸提物;
●再在60-70℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;
●过滤,浓缩二次水浸提物,得流浸膏。
该流浸膏主要含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁等其它化合物。
其中之三十一为文冠果果壳和/或果柄的生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和/或果柄粉;
●用水浸提果壳和/或果柄粉(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十二为文冠果叶的生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果果叶,得文冠果叶粉;
●用水浸提文冠果叶粉(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十三为文冠果枝干的生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用水浸提文冠果枝干粉(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十四为文冠果种仁的生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉,得去油种仁粉;
●用水浸提文冠果种仁粉(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十五为文冠果根生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果果根,得文冠果根粉;
●用水浸提文冠果叶根(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十六为文冠果树皮的生物碱提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果果树皮,得文冠果树皮粉;
●用水浸提文冠果树皮粉(6∶1)3-4次,每次10-15小时,得水浸提物;
●收集合并水浸提物;
●用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;
●用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;
●使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;
●减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物。
该粗生物碱提取物主要含有生物碱,香豆素,糖和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十七为文冠果果壳和/或果柄的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和/或果柄粉;
●用10%的盐酸浸果壳和/或果柄粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十八为文冠果叶的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶,得文冠果叶粉;
●用10%的盐酸浸提文冠果叶粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。
其中之三十九为文冠果枝干的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用10%的盐酸浸提文冠果枝干粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。
其中之四十为文冠果种仁的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁粉;
●用10%的盐酸浸提文冠果种仁粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。
其中之四十一为文冠果根的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根,得文冠果根粉;
●用10%的盐酸浸提文冠果根粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等
其中之四十二种为文冠果树皮的有机酸提取物。制备的方法依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得文冠果树皮粉;
●用10%的盐酸浸提文冠果树皮粉,得酸浸提液;
●用有机溶剂(***或苯)浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;
●用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;
●酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂;
●回收机溶剂,得粗有机酸提取物。
该粗有机酸提取物主要含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和其它化合物如粗蛋白等。
其中之四十三为文冠果果壳和/或果柄的单宁提取物,制备方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和/或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和或果柄粉;
●用95%的乙醇浸提果壳和/或果柄粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物;
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果,清选果壳和或果柄,干燥;
●粉碎果壳和/或果柄,得果壳和或果柄粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提果壳和/或果柄粉2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;
●在50℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提物;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
其中之四十四为文冠果叶的单宁提取物,制备的方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果叶,得文冠果叶粉;
●用95%的乙醇浸提文冠果叶粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物;
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果叶,清选,干燥;
●粉碎文冠果果叶,得文冠果叶粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提文冠果叶粉2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;
●在50℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提物;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
其中之四十五为文冠果枝干单宁提取物,制备方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用95%的乙醇浸提文冠果枝干粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物。
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果枝干,清选,干燥;
●粉碎文冠果枝干,得文冠果枝干粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提文冠果枝干粉2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;
●在50℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提物;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
其中之四十六为文冠果种仁单宁提取物,制备方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁粉;
●用95%的乙醇浸提文冠果种仁粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物。
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果,清选种子,干燥;
●剥壳得到种仁;
●压轧种仁去油得种仁饼;
●干燥,粉碎种仁饼得种仁粉;
●用正己烷提取种仁粉进一步去油;
●回收正己烷;
●干燥,磨粉得去油种仁粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提文冠果种仁粉2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;
●在50℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提物;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
其中之四十七为文冠果根单宁提取物,制备方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根,得文冠果根粉;
●用95%的乙醇浸提文冠果根粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物。
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果根,清选,干燥;
●粉碎文冠果根,得文冠果根粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提文冠果根粉2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;
●在50℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
其中之四十八为文冠果树皮根单宁提取物,制备方法有二。方法一工艺依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得文冠果树皮粉;
●用95%的乙醇浸提文冠果树皮粉,得乙醇浸提液;
●减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物。
方法二工艺依下列步骤:
●采收文冠果树皮,清选,干燥;
●粉碎文冠果树皮,得文冠果树皮粉;
●用丙酮的水溶液(1∶1)浸提文冠果树皮粉2-7天,得丙酮的水溶液提物;
●在50°℃回收丙酮,得浓缩的浸提物;
●过滤浓缩的浸提物;
●用***萃取过滤的浸提物,回收***得水溶液浸提物;
●用乙酸乙酯萃取水溶液浸提物;
●回收乙酸乙酯,得单宁提取物。
该单宁提取物主要含有单宁和其它化合物如有机酸,糖类,粗蛋白等。
本发明还提供了防治和医疗下列病症的方法,其特征在于所述方法可防治脑老化和脑血管病,增进记忆和开发智力,治疗夜尿,遗尿,失禁,尿频和弱智,老年痴呆,柏金逊症等由于脑功能不健全或障碍所引起的病症,并可防治风湿,关节炎,血管硬化症,血液循环病,雷诺氏综合症,心绞痛、心脏功能紊乱、冠心病、头痛、眩晕和肾脏功能紊乱;改善肺功能;治阳萎和早泻等症
本发明还提供了由上述这些文冠果提取物制成的药物或保健品,其特征在于所述这些文冠果提取物制成的药物或保健品分别可和维生素B,D,K,葡萄籽提取物或其它抗氧化剂,冬虫夏草及其提取物,银杏及其提取物,人参和西洋参及其提取物,聚果菊及其提取物,小金丝桃及其提取物,葛根及其提取物,天麻及其提取物,蜜环菌及其提取物,丹参及其提取物,三七及其提取物,红曲,黄芪及其提取物,地黄及其提取物,当归及其提取物,远志及其提取物,灵芝及其提取物,茯苓及其提取物,甘草及其提取物,石松碱A,敌百虫,拉西汀(Lacithin),脑洗泰来(Nocetile),叶酸,氨基酸,肌酸激酶和纤维添加剂等配伍一起制成各种造新药物和保健食品。例如,文冠果的果壳和/或果柄提取物和人参或提取物,或冬虫夏草或其提取物配伍可制成新的治疗的遗尿,尿频,尿失禁的药物。
本发明还提供了由上述这些文冠果提取物制成的药物或保健品,其特征在于所述这些文冠果提取物制成的药物或保健品可抑制5-羟色氨(5HT)的吸收。5-羟色氨的存在可维持和加强人的深度睡眠。文冠果提取物抑制5羟色氨的吸收,从而打破深度睡眠,使人在膀胱尿满时可以惊醒,避免尿床。
本发明提供的文冠果提取物可增加dopamine的活力,从而改善神经中枢***的能力。
本发明提供的文冠果提取物可调节制尿贺尔蒙(ADH)的合成,以减少肾脏产尿量,防止遗尿发生。
本发明提供的文冠果提取物抑制乙酰胆碱酶(AchE)的合成,调解乙酰胆碱(Ach)的释放,吸收和分解,从而改善大脑中枢***和泌尿***信息的传递过程,避免由5-羟色氨(5HT)造成的深度睡眠发生,而增加轻度睡眠。
本发明提供的文冠果提取物有助防止睡眠***(sleep paralysis)的发生。
本发明提供的文冠果提取物可改善睡眠警觉***。
本发明提供的文冠果提取物有助于膀胱和***的生长发育,从而避免遗尿的发生。发育不良的膀胱和***不能控制排尿过程。
本发明提供的文冠果提取物有助于消除精神紧张,延缓衰老,改善膀胱功能,避免逼尿肌不稳定,活动过度反射亢进,从而防止尿急和尿频。
本发明还提供的文冠果提取物,其特征在于所述文冠果提取物可抗癌,可抗膀胱癌,***,卵巢癌,***癌,肺癌,乳腺癌,结肠癌,肝癌和脑癌,以及其它癌症。
本发明公开了新的皂甙化合物,其特征在于所述皂甙化合物皂甙原为萜类化合物,碳21和22位有当归酰基或其它侧链,一至多个糖链。
本发明公开了的皂甙化合物,其特征在于所述皂甙化合化学结构如下:
皂甙化合物Y的名称:3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。即Xanifolia Y。
所述另外几种化合物化学结构如下:
化学结构1:
化学结构2:
化学结构3:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
和化学结构4:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
本发明还提供了上述新化合物形成的盐类。
本发明还提供了组合物,其特征所述组合物上述新化合物和适当载体构成。
本发明还提供了由上述新化合物或其盐类制成药物,其特征所述药物由适当浓度的上述新化合物或其盐类和适当载体构成。
本发明还提供了检测文冠果提取物的细胞特异性毒性反应的方法,其特征在于所述方法是MTT检测法。
材料和方法
细胞:下列人体癌细胞是从美国模式菌种保藏中心(American Type CultureCollection)获得:HTB-9(膀胱),HeLa-S3(宫颈),DU145(***),H460(肺),MCF-7(乳腺),k562(白细胞),HCT116(结肠),HepG2(肝),U20S(骨),T98G(脑),和OVCAR-3(卵巢)。培养:HeLa-S3(宫颈),DU145(***),MCF-7(乳腺),HepG2(肝)和T98G(脑)细胞培养在MEN(Earle盐)培养基上。HTB-9(膀胱),H460(肺),562(白细胞)和OVCAR-3(卵巢)培养在RPMI-1640培养基上,其它细胞在McCoy-5A培养基上。这些培养基都要添加10%的牛胎儿血清,谷氨酰胺和抗菌素。在CO2浓度为5%的培养箱内培养。
MTT检测
检测方法基本按照Carmicheal et al.1987的方法,仅个别地方小有改动。这些细胞培养在有96个***的培养皿的***中24小时;每穴1万HTB-9(膀胱),HeLa-S3(宫颈),H460(肺),HCT116(结肠),T98G(脑),和OVCAR-3(卵巢)的细胞;每穴1.5万DU145(***),MCF-7(乳腺),HepG2(肝)和U20S(骨)的细胞;每穴4万k562(白细胞)。然后,将文冠果提取物的试样放入穴中,再培养48小时(肝和骨癌细胞72小时,乳腺癌细胞96小时。然后,MTT(0.5mg/ml)加入每个穴中,培养1小时。产生的formazan溶于DMSO,然后用ELISA读数器(Dynatech,Model R700)测它的O.D.值(TD)。加入试样前的MTTO.D.值(TO)也要测出。每种细胞生长的百分数(%G)可按下面公式求出:
%G=(TD-TO/TC-TO)x 100
(TC是对照细胞组的O.D.值)
当TO<TD时,则细胞特异性毒性反应(LC)值为:
%LC=(TD-TO/TO)x 100
本专利申请的另一种抑制癌细胞生长的方法(pathways),其特征是所述方法是与下述从文冠果提取物的化合物有关,它们可从文冠果中提取,也可人工合成。
其中之一是化合物3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙,分子式:
C57H88O23,及其衍生物。
其它化合物化学结构如下:
化学结构1:
化学结构2:
化学结构3:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
和化学结构4:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
本发明提供的文冠果提取物的皂甙化合物及其衍生物Wnt信号途径中的生化环节或其受体,Wnt信号***(Wnt signaling pathway)调控胚胎发育和细胞的增殖,死亡和形态发育,同时在癌细胞的发生方面也起着重要作用。发现一些癌症发生是和Wnt信号***被不适当地活化有关。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控Wnt信号途径中的生化环节或其受体,避免Wnt信号***的不适当地活化,从而防止制癌细胞的生成和增殖。
细胞有丝***和Ras-MAP激酶链信号途径有关,如果Ras-MAP激酶链的活动过分活跃,会导致基因调控蛋白Myc的生成,Myc会加快一些基因的复制,如果这一活动过分活跃,会导致癌细胞的生成和增殖。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控Ras-MAP激酶链的活动,使Ras-MAP激酶途径的活动不能过分活跃,从而不会引起癌细胞的生成和增殖。
有时Ras信号途径中的氨基酸发生突变,引起含有这一氨基酸的蛋白永久性的过分活跃,导致从属的Ras信号途径在没有有丝***的刺激的情况下也过分活跃。同样,氨基酸发生突变也会引起Myc信号途径活动过分活跃。这都会导致细胞异常生长,而引起癌细胞的生成。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控氨基酸发生突变从属的Ras信号途径和Myc信号途径,使它们不能过分活跃,从而不会引起细胞异常生长而导致癌变。
本发明提供的文冠果提取物的皂甙化合物及其衍生物可启动不正常细胞内的监控点(checkpoint)机制,细胞内有一种监控点(checkpoint)机制,监控畸形有丝***和引起不正常过分活跃的细胞的死亡。癌细胞的监控点机制由于编译监控点机制的基因突变而不能活动,造成癌细胞无限制的生长和增殖。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可启动细胞内的监控点机制,及时制止不正常的有***活动发生和制止癌细胞的生长和增殖。
本发明提供的文冠果提取物的皂甙化合物及其衍生物可调控胞外生长信号途径。刺激细胞生长的胞外生长因子可通过细胞表面的受体启动胞内信号途径,激活PI3激酶促进蛋白质的合成,至少通过激活激酶eif4e和s6增加mRNA的扩增,从而刺激细胞的生长。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控胞外生长信号途径的环节或其受体,从而影响胞内生长信号途径,抑制细胞过分增殖,防止癌细胞的产生。
细胞***也要受到细胞核内的Myc蛋白的控制。Myc蛋白过多会引起细胞的过分增殖,癌细胞形成。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,控制细胞内Myc蛋白的过量产生,从而防止细胞过分增殖,导致肿瘤形成。
转化生长因子α(TGF-alpha)可诱导鼠和鸡的不成熟的先期造血细胞(例如BFU-E)的长期增值,还可诱导BFU-EDE细胞转化成红血球。转化生长因子α还可刺激培养的内皮细胞的增殖。它在肿瘤组织的血管化方面起重要作用。转化生长因子α是由keratimcyte,巨噬细胞,肝细胞和血小板等产生的,病毒感染可刺激转化生长因子α的合成。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控转化生长因子α信号途径的环节或其受体,从而抑制卵巢和膀胱癌细胞的生长。
转化生长因子β(TGF-beta)可调控细胞的增长,阻止许多细胞的生长。它有两种受体:受体1受体2。它们是丝氨酸-苏氨酸激酶,通过SMAD编译调节基因家族传递信号。转化生长因子β信号途径和SMAD编译调节基因的突变和癌变有关。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控转化生长因子β信号途径的环节或其受体,从而抑制卵巢和膀胱癌细胞的生长。
DAN肿瘤病毒可通过干扰细胞循环控制蛋白E6和蛋白p53引起癌变。蛋白p53基因的突变使癌细胞在DAN损伤的情况下继续生存和增长。***瘤病毒利用蛋白E6和E7去分别使蛋白p53和Rb排序,这一过程会启动突变的细胞,使他们生存,***和增长。损伤细胞的增长会导致癌变。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调控蛋白E6和E7和释放蛋白p53和Rb,而抑制畸形细胞的***生长。同时,还可以控制或者与这些蛋白质发生反应,引起癌细胞死亡。
蛋白p53可以帮助多细胞有机体在DAN损伤和其它不利的情况下安全的自我复制,并在危险的情况下停止细胞***和增长。癌细胞往往含有大量突变的蛋白p53,表明在不利的情况下遗传上的突变或者生长受到压抑会启动蛋白p53。因而,失去蛋白p53的活性是很危险的,因为它会使突变的细胞继续完成它的生长周期,避免死亡。所以,如果DAN受到损伤,一些细胞会死亡,那些没有修复损伤而生存下来并能继续增长的细胞,可能携带一组败坏的基因组,在基因扩增的过程中,导致失去抑制癌的基因,而启动致癌基因。同时,基因扩增也可能使细胞发展抗药性。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可调蛋白质53信号途径的环节或其受体,从而抑制癌细胞增殖。
所有细胞的细胞核内都有各种休眠的procaspase,等待命令去杀死细胞。procaspase是一种休眠的酶原,由***蛋白酶形成。它可通过蛋白酶的裂解被另外caspase酶组启动。两个裂解的碎片结合在一起组成了caspase的有活性的部分。一个有活性的酶都被认为是这两个部分之一的四分体。每一启动了的caspase分子可裂解成多个procaspase分子,它们反过来又启动更多的caspase分子。通过这一链式反应,导致大量procaspase分子的***式的活动。一些启动了的procaspase裂解成多个关键的蛋白质,包括细胞液蛋白和nuclear-lamins,控制细胞的死亡。启动细胞外的死亡受体也能启动procaspase。但是,由于基因突变癌细胞的杀死细胞的信号被阻断了。因而,癌细胞就不断的***,导致了癌变。本发明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物或其组合物,可疏通阻滞癌细胞“***”信号传递的通路,使癌细胞“***”。
本专利申请的一种抑制癌细胞生长的方法,其特征是所述方法是使一定量的具有下述化学结构的化合物和适当的药物载体所组成的药物去接触所述癌细胞,并调整其用量和药物载体:
其中R1=R2=R3=R4=CH3,R5=OH。
化学结构1:
化学结构2:
化学结构3:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
和化学结构4:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
本专利还公开了一种抑制癌细胞生长的方法,其特征是所述方法是使一定量的具有下述化学结构的化合物和适当的药物载体所组成的药物去接触所述癌细胞,并调整其用量和药物载体:
该化合物含有糖链,三萜类化合物或其它化合物的皂甙元,在碳21或C22位有一侧链或当归酰基基团,这些基团有机地(operatively)连接在一起即形成这一化合物。其中R1,R2,R3,R4是短的脂族侧链,R5=OH。
化学结构1:
化学结构2:
化学结构3:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
和化学结构4:
其中R1和R2=A或B或C;R2=A或B或C;R3=A或B或C;A=当归酰基;B=乙酰基;C=H。
本专利还公开了一种抑制癌细胞生长的方法,其特征是所述方法是使一定量的具有下述化学结构的化合物和适当的药物载体所组成的药物去接触所述癌细胞,并调整其用量和药物载体,这化合物含糖,三萜类化合物皂甙原或其它皂甙原,碳21和22位是当归酰基或其它侧链。
下面通过实施例进一步说明本专利公开的文冠果提取物,它的组成,功能和应用,以及他们的制备方法。
实施例之一
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y对小鼠的促智作用。
文冠果提取物X和Y对老龄小鼠记忆功能的影响(水迷宫法):
实验用雄性老龄小鼠,16个月小鼠,体重35-55g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%;水迷宫自动仪测试,水高11厘米,水温25±1℃,水迷宫由起点,四个盲点,终点台阶和相应通路等结构组成。实验前,将小鼠进行训练,计算出每次训练小鼠达到终点所需时间和所犯错误次数。共训练三次,选择2分钟可达终点的小鼠作为本试验的动物。然后将合格小鼠随机分成9组,每组1只:1)空白对照组,等量NC;2)阳性组,喜恩开0.9g/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药3天、6天和9天进行水迷宫训练,计算每次训练小鼠在给药后对学习记忆的改善作用,数据用t检验。
结果
实验结果显示:给药3天后,Y药500mg/kg剂量组可明显缩短小鼠到达终点的时间,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)。其余各给药组均可减少错误次数,缩短到达终点的时间(见表1.1)。
表1.1,给药3天后对小鼠学习记忆的改善作用
与生理盐水组比较P<0.05*
给药6天后,X和Y药各剂量组均可减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。Y药500mg/kg剂量组可明显缩短小鼠到达终点的时间(P<0.05)。其余各给药组也均可减少缩短到达终点的时间(见表1.2)。
表1.2给药6天后对小鼠学习记忆的改善作用
与生理盐水组比较P<0.05* P<0.01**
给药9天后,X和Y药各剂量组均可减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)。X药400mg/kg剂量组,Y药250mg/kg和500mg/kg剂量组可明显缩短小鼠到达终点的时间,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)(见表1.3)。
表1.3给药9天后对小鼠学习记忆的改善作用
与生理盐水组比较P<0.05* P<0.01**
上述实验结果显示,文冠果提取物X和Y对老龄小鼠记忆功能有明显的改善作用,而且,随着给药时间的延长,对小鼠学习记忆的改善作用也更加明显。
实施例之二
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y对戊巴比妥所致老龄小鼠记忆功能障碍的恢复具有明显的改善作用(水迷宫法):
将细节描述(一,1)中的各组小鼠第十天给药后注入戊巴比妥纳15mg/kg,30分钟后进行水迷宫试验,计算出每次训练小鼠达到终点所需时间和2分钟所犯错误次数。连续注入戊巴比妥纳3天,观察各给药组对戊巴比妥所致老龄小鼠的记忆功能障碍的影响。
结果
实验结果显示:文冠果提取物X和Y对给戊巴比妥纳所致老龄小鼠的记忆功障碍,注入1天,X药100mg/kg剂量组,Y药三个剂量组都明显缩短小鼠到达终点的时间,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。Y药500mg/kg剂量组可减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)(见表2.1)。
表2.1文冠果提取物X和Y对戊巴比妥纳导致小鼠的记忆功障碍的影响(1天)
与生理盐水组比较P<0.05* P<0.01**
注入2天,X药和Y药各个剂量组都明显缩短小鼠到达终点的时间,并均可减少错误次数,具有显著性差异(P<0.05)(见表2.2)。
表2.2文冠果提取物X和Y对戊巴比妥纳导致小鼠的记忆功障碍的影响(2天)
与生理盐水组比较P<0.05* P<0.01**
注入3天,X药和Y药各个剂量组都明显缩短小鼠到达终点的时间P<0.05),Y药250mg/kg和500mg/kg剂量组均可减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)(图2(a)和(b)(见表2.3)。
表2.3文冠果提取物X和Y对戊巴比妥纳导致小鼠的记忆功障碍的影响(13天)
与生理盐水组比较P<0.05*
上述试验表明,文冠果提取物X和Y对戊巴比妥纳造成小鼠的记忆功能障碍的恢复具有明显的改善作用。
实施例之三
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y对东莨菪碱所致老龄小鼠记忆功能障碍的影响(跳台法):
取ICR小鼠进行跳台训练。将小鼠轻放在跳台上,记录小鼠在跳台上停留的潜伏期(SDL)。小鼠自跳台跳下,四肢接触铜删时,立即给与36伏特电刺激,记录小鼠逃避至跳台上的潜伏期(EL)。选取SDL和EL在2-60秒的小鼠作为该实验的动物。将小鼠随机分成9组,每组10只,雌雄各半,体重16-20g。各组给药剂量同实施例之九,均灌胃给药,给药容量20ml/kg。给药后,和9天各进行跳台训练一次,记录SDL,EL,和5分钟内从自跳台跳下触电的次数(错误次数)。第10天给药后,腹腔注入东莨菪碱3ml/kg。30分钟后,进行跳台训练。第11天重复一次,观察文冠果提取物X和Y对东莨菪碱所致老龄小鼠记忆功能障碍的影响。
结果
1),文冠果提取物X和Y各剂量组给药3天后可缩短小鼠EL和延长DL;6和9天后,可明显减少错误次数,但是无统计学意义(见表3.1)。
表3.1文冠果提取物X和Y对小鼠的记忆功能的影响(跳台法,给药后9天)
2),第10天给药后,腹腔注入东莨菪碱造成小鼠记忆障碍,进行跳台训练,实验结果显示文冠果提取物X 400mg/kg剂量组,Y 250mg/kg和500mg/kg剂量组可明显减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)(见表3.2)。
表3.2文冠果提取物X和Y对东莨菪碱造成小鼠的记忆功能障碍的影响(跳台法,给药后10天)
与生理盐水组比较*p<0.05**p<0.01
3),第11天给药后,腹腔注入东莨菪碱造成小鼠记忆障碍,进行跳台训练,实验结果显示文冠果提取物X和Y各剂量组均可明显减少错误次数P<0.05),Y 250mg/kg剂量组可延长SDL时间,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)(见表3.3)。
表3.3文冠果提取物X和Y对东莨菪碱造成小鼠的记忆功能障碍的影响(跳台法)
与生理盐水组比较*p<0.05
上述小鼠跳台法试验表明,文冠果提取物X和Y对东莨菪碱造成小鼠的记忆功能障碍的恢复具有明显的改善作用。
实施例之四
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y对亚硝酸钠所致小鼠记忆功能障碍的影响(水迷宫法):
实验用雄性ICR小鼠,体重16-19g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%;水迷宫自动仪测试,水高11厘米,水温25±1℃,水迷宫由起点,四个盲点,终点台阶和相应通路等结构组成。实验前,将小鼠进行训练,计算出每次训练小鼠达到终点所需时间和所犯错误次数。共训练两次,选择2分钟可达终点的小鼠作为本试验的动物。然后将合格小鼠随机分成9组,每组11只:1)空白对照组,等量NC;2)阳性组,喜恩开0.9g/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,分别与给药3天、6天和9天进行水迷宫训练,计算每次训练小鼠在给药后对学习记忆的改善作用。第10天每组动物皮下注射亚硝酸钠120mg/kg,24小时后进行水迷宫测试,观察各给药组对亚硝酸钠所致小鼠脑内缺氧造成的记忆功能障碍的影响。资料用t检验。
结果:
1),水迷宫法小鼠在给药后对学习记忆实验结果显示:给药3天后,X和Y药各剂量组均可减少错误次数和缩短到达终点的时间(见表4.1)。
表4.1给药3天后对小鼠学习记忆的改善作用(水迷宫法)
与生理盐水组比较*P<0.05**P<0.01
给药6天后,X 400mg/kg和Y药500mg/kg剂量组均可减少错误次数,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.01)(见表4.2)。
表4.2给药6天后对小鼠学习记忆的改善作用(水迷宫法)
与生理盐水组比较*P<0.05**P<0.01,
给药9天后,X药250mg/kg剂量组,Y药250mg/kg和500mg/kg剂量组可明显缩短小鼠到达终点的时间,具有显著性差异(P<0.05)(见表4.3和图1(a)和(b))。
表4.3给药9天后对小鼠学习记忆的改善作用(水迷宫法)
与生理盐水组比较*P<0.05,
给药10天后,Y药250mg/kg和500mg/kg剂量组可明显减少错误次数。Y药500mg/kg剂量组可缩短小鼠到达终点的时间,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)(见表4.4)。
表4.4给药10天后对小鼠学习记忆的改善作用(水迷宫法)
与生理盐水组比较*P<0.05**P<0.01
2),对亚硝酸钠所至小鼠脑内缺氧造成的记忆功能障碍实验显示,X药100mg/kg,200mg/kg剂量组,Y药三个剂量组可明显可使小鼠减少错误次数,与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05)(见表4.5)。
表4.5文冠果提取物X和Y对亚硝酸钠导致小鼠的记忆功能障碍的影响
与生理盐水组比较*P<0.05**P<0.01
上述小鼠水迷宫法试验表明,文冠果提取物X和Y对亚硝酸钠造成小鼠的记忆功能障碍的恢复具有明显的改善作用。
综合上述所有对小鼠学习记忆实验表明,文冠果提取物X和Y有明显的促智作用。
实施例之五
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y取物对小鼠尿量的调节作用。
1,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药3天):
实验用雄性ICR小鼠112只,体重18-22g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%。将小鼠随机分成9组,每组14只:1)空白对照组,等量NC;2)双氢***组,400mg/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药3天,每天3次。末次给药后,将各组小鼠放在事先垫有滤纸的500ml烧杯中。分别于30分钟,60分钟,120分钟,180分钟,240分钟,300分钟和360分钟将滤纸取出,用电子分析天平称重,用减重法计算尿量,比较各时间段内文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影。据用t检验。
实验结果显示:X药400mg/kg剂量组给药30分钟后,尿量明显减少。Y药500mg/kg剂量组给药60分钟后,尿量明显减少,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.01)。X药200mg/kg剂量组,Y药125mg/kg和500mg/kg剂量组给药180分钟后,尿量明显减少,与生理盐水组比较具有显著性差异P<0.01)(见表5.1)。
表5.1文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药3天,X±S)
(续表5.1)
与生理盐水组比较P<0.05*and P<0.01**
2,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药5天):
实验用雄性ICR小鼠112只,体重18-22g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%。将小鼠随机分成9组,每组14只:1)空白对照组,等量NC;2)双氢***组,400mg/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药天,每天1次。末次给药后,将各组小鼠放在事先垫有滤纸的500ml烧杯中。分别于30分钟,60分钟,120分钟,180分钟,240分钟,300分钟和360分钟将滤纸取出,用电子分析天平称重,用减重法计算尿量,比较各时间段内文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影。资料用t检验。
实验结果显示:X药400mg/kg剂量组和Y药三个剂量组给药240分钟后,尿量明显增加,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。X药400mg/kg剂量组,Y药500mg/kg剂量组给药30分钟后,尿量有减少趋势(见表5.2)。
表5.2文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药5天,X±S)
(续表5.2)
与生理盐水组比较P<0.05*and P<0.01**
3,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药7天):
实验用雄性ICR小鼠112只,体重18-22g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%。将小鼠随机分成9组,每组14只:1)空白对照组,等量NC;2)双氢***组,400mg/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药7天,每天1次。末次给药后,将各组小鼠放在事先垫有滤纸的500ml烧杯中。分别于30分钟,60分钟,120分钟,180分钟,240分钟,300分钟和360分钟将滤纸取出,用电子分析天平称重,用减重法计算尿量,比较各时间段内文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影。据用t检验。
实验结果显示:X药200mg/kg,400mg/kg剂量组和Y药250mg/kg,500mg/kg剂量组给药120分钟后,尿量明显减少,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05);于300分钟后,尿量明显增加(P<0.05)(见表5.3)。
表5.3文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药7天,X±S)
(续表5.3)
与生理盐水组比较P<0.05*andP<0.01**
4,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药10天)
实验用雄性ICR小鼠112只,体重18-22g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%。将小鼠随机分成9组,每组14只:1)空白对照组,等量NC;2)双氢***组,400mg/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)X药III组:400mg/kg;6)Y药I组:125mg/kg;7)Y药II组:250mg/kg;8)Y药III组:500mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药10天,每天1次。末次给药后,将各组小鼠放在事先垫有滤纸的500ml烧杯中。分别于30分钟,60分钟,120分钟,180分钟,240分钟,300分钟和360分钟将滤纸取出,用电子分析天平称重,用减重法计算尿量,比较各时间段内文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影。据用t检验。
实验结果显示:X药200mg/kg,400mg/kg剂量组和Y药250mg/kg,500mg/kg剂量组给药120分钟后,尿量明显减少,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05)(见表5.4和图3)。
表5.4文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药10天,X±S)
(续表5.4)
与生理盐水组比较P<0.05*and P<0.01**
5,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响(给药20天)
实验用雄性ICR小鼠84只,体重18-22g,分笼饲养,全价颗粒饲料,自由饮水,室温20±2℃,湿度55-66%。将小鼠随机分成6组,每组14只:1)空白对照组,等量NC;2)双氢***组,33.4mg/kg;3)X药I组:100mg/kg;4)X药II组:200mg/kg;5)Y药I组:125mg/kg;6)Y药II组:250mg/kg。以上各组动物均灌胃给药,给药容量20ml/kg,分别给药20天,每天1次。末次给药后,将各组小鼠放在事先垫有滤纸的500ml烧杯中。分别于30分钟,60分钟,120分钟,180分钟,240分钟,300分钟和360分钟将滤纸取出,用电子分析天平称重,用减重法计算尿量,比较各时间段内文冠果提取物X和Y对小鼠尿量的影响。据用t检验。
实验结果显示:X药100mg/kg,200mg/kg剂量组和Y药125mg/kg,250mg/kg剂量组给药30分钟后,尿量明显减少。X药200mg/kg和Y药250mg/kg剂量组给药60分钟后,尿量明显减少,与生理盐水组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。综上所有实验结果表明,文冠果提取物X和Y对小鼠尿量有明显的调节作用。
实施例之五A
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物X和Y对小鼠的制尿作用(标准代谢笼法);
目的:用标准代谢笼法研究文冠果提取物FS(X)对小鼠的制尿作用
试药:文冠果取物FS(X)和FS(Y)。
实验用动物:实验用雄性SD小鼠100只,体重150-200g,分笼200(20x30x45cm)饲养,每笼5只。鼠笼底部用抛光的木板衬垫,平均每两天换一次,干燥后使用。鼠笼用前要消毒。全价颗粒饲料(动物实验中心自制),自由饮水,室温23±2℃,湿度40-70%,空调,自动排气和通风,自然光源,12小时光照,12小时黑暗。
小鼠训练:将小鼠放进笼内适应性训练两天,每天6-10小时。进笼前,挤压小鼠腹部下部,排除存尿。然后注射蒸馏水入胃内(38℃),25ml/kg。注射后,每两小时收集排在笼内的尿,并小心挤压小鼠腹部下部,采集余尿。尿量超过注射水量的40%的小鼠将用作试验。
实验用设备:标准代谢笼,自动尿液分析仪(Miditron JuniorII),尿压测定器,尿离子测定器(EL-ISE,Beckman)。
方法:
将小鼠随机分成6组,每组10只:1)空白对照组,灌胃给药,羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.5%悬浮液,每天10ml/kg;2)阳性对照组,小鼠放入笼前注射后叶素(pituitrin)入小鼠腹部空腔,0.25u/kg;3)FS(X)药I组:100mg/kg;4)FS(X)药II组:200mg/kg;5)FS(X)药III组:400mg/kg;6)FS(Y)药组:400mg/kg;分别给药25天,每天1次,入笼后30分给试药。
收集尿量和观察:入笼后18小时后开始收集尿样。挤压小鼠腹部下部,排除存尿。然后注射蒸馏水入胃内(38℃),50ml/kg。注射后小鼠放入笼内,在0.25小时,0.5小时,1小时,2小时,3小时,4小时,5小时和6小时时收集尿量。第6小时收集尿量后,挤压小鼠腹部下部,收集膀胱中存尿。
检测尿的常规指标:pH,红血球,白血球,蛋白等;测定Na+,K+,Cl-离子的浓度和尿渗透压。
数据处理:试药组的排尿速率,相对尿量,Na+,K+,Cl-离子的浓度和对照组比较据用t检验。
结果
1),对尿量的影响:试药组FS(X)的制尿作用与用药剂量相关,药II组:200mg/kg;FS(X)药III组:400mg/kg有明显的制尿作用(0.25小时至6小时)(表5A-1,见图53;图57)。FS(Y)和FS(X)400mg/kg药剂量组对排尿速率的影响最为明显(表5A-2,见图54;图58),可制尿2小时。试药FS(X)400mg/kg剂量组可明显减少尿量,但是,对总尿量的影响与用药剂量无关。阳性对照组不能减少总尿量,但是,可制尿2小时。
2),对尿中Na+,K+,Cl-离子的影响:因为试药可减少尿量,因而在不同程度上,增加了尿中离子的浓度,但是,与用药剂量无关。对Na+和Cl-离子的浓度几乎无影响,有促进K+***的作用。阳性对照组所有尿中离子的浓度和排出量都有明显的促进作用(表5A-4,见图56)。
3),对pH和尿渗透压的影响:试药FS(X)和FS(Y)对pH和尿渗透压的没有显著的影响,对尿比重有轻微的影响(表5A-3,见图55)。
实施例之六
本实例进一步说明本专利公开的文冠果提取物的制备方法。
概括如下:
●采收文冠果样品:果壳和/或果柄,种子(种仁,种壳),枝干,叶,树皮或根;
●清选,干燥;
●粉碎文冠果样品,得样品粉(种仁要预先去油);
●用有机溶剂浸提文冠果样品粉(2∶1),4-5次,每次20-35小时,得有机溶剂浸提液;
●收集浸提液,再回流热提(80℃)2-3次;
●收集合并提取液;
●回收有机溶剂,得流浸膏;
●干燥,灭菌,得文冠果提取物。
实施例之七
本实例进一步说明本专利公开的文冠果生物活性物质的分离,鉴定和提纯方法。用高压液相色谱(HPLC)分离提纯文冠果提取物。
方法和材料:
色谱柱:采用C18逆相μbondapak柱(Water P/N 27324),乙睛(10%),
三氟乙酰酸(TFA,0.005%)为流动相。
进样:样品溶入10%的乙睛-TFA(0.005%)中,浓度为1mg/ml;
进样:20μg。
洗脱:用乙睛逐梯度洗脱,在70分钟内,浓度由10%升到80%;
流速:0.5ml/分。然后,在浓度80%时再保持10分钟(70-80分)。然后,乙睛浓度降到10%(80-85分),并保持25分钟(85-110分)。
检测吸收波长:207nm。
记录纸速度:0.25cm/分。
光密度(OD):满程,0.128。
所用仪器:Waters Model 510溶剂传送***;Waters 484吸收率可调探测器;Waters745/745B数据模型。
光谱吸收分析:用分光光度计(SpectronicIns.Model Gene Sys2)检测文冠果提取物。
文冠果提取物溶在10%乙睛-TFA中,检测波长:200-700nm。
结果:
HPLC图谱显示,有60-70个峰。其中有4个为主要的峰,10个中等的峰,余者为小峰(见图5)。其中27个主要的峰按乙睛洗脱液的浓度递增的顺序编号为a-z(见图21)。三个被检测到的最大吸收波长:207nm,278nm,和500nm(见图22)。
实施例之八
本实例进一步说明本专利公开的MTT检测文冠果提取物的细胞特异性毒性反应的方法
方法和材料
细胞:下列人体癌细胞是从美国模式菌种保藏中心(American Type Culture Collection)获得:HTB-9(膀胱),HeLa-S3(宫颈),DU145(***),H460(肺),MCF-7(乳腺),k562(白细胞),HCT116(结肠),HepG2(肝),U20S(骨),T98G(脑),和OVCAR-3(卵巢)。
培养:HeLa-S3(宫颈),DU145(***),MCF-7(乳腺),HepG2(肝)和T98G(脑)细胞培养在MEN(Earle盐)培养基上。HTB-9(膀胱),H460(肺),562(白细胞)和OVCAR-3(卵巢)培养在RPMI-1640培养基上,其它细胞在McCoy-5A培养基上。这些培养基都要添加10%的牛胎儿血清,谷氨酰胺和抗菌素。在CO2浓度为5%的培养箱内培养。
MTT检测
检测方法基本按照Carmicheal et al.1987的方法,仅个别地方小有改动。这些细胞培养在有96个***的培养皿的***中24小时;每穴1万HTB-9(膀胱),HeLa-S3(宫颈),H460(肺),HCT116(结肠),T98G(脑),和OVCAR-3(卵巢)的细胞;每穴1.5万DU145(***),MCF-7(乳腺),HepG2(肝)和U20S(骨)的细胞;每穴4万k562(白细胞)。然后,将文冠果提取物的试样放入穴中,再培养48小时(肝和骨癌细胞72小时,乳腺癌细胞96小时。然后,MTT(0.5mg/ml)加入每个穴中,培养1小时。产生的formazan溶于DMSO,然后用ELISA读数器(Dynatech,Mode1R700)测它的O.D.值(TD)。加入试样前的MTTO.D.值(TO)也要测出。每种细胞生长的百分数(%G)可按下面公式求出:
%G=(TD-TO/TC-TO)x 100
(TC是对照细胞组的O.D.值)
当TO<TD时,则细胞特异性毒性反应(LC)值为:
%LC=(TD-TO/TO)x 100
结果:
在这10种癌细胞中,可根据对文冠果提取物的敏感程度分为4组:最敏感的是卵巢癌细胞;第二敏感的是膀胱,骨,***和白血病癌细胞;有点敏感的是肝,***和脑癌细胞;不太敏感的是结肠,宫颈和肺癌细胞(图6,10,11和23A-E)。它们的LC50值见(见表8-1)。
表8-1文冠果提取物MTT的检测结果
癌细胞类别 | IC50(ug/ml) |
卵巢(最敏感) | 15-15 |
膀胱(敏感) | 45-50 |
骨(敏感) | 40-55 |
***(敏感) | 40-50 |
白血病(敏感) | 45-50 |
肝(稍敏感) | 45-65 |
***(稍敏感) | 65 |
脑(稍敏感) | 70-85 |
结肠(欠敏感) | 90 |
宫颈(欠敏感) | 115 |
肺(欠敏感) | 110 |
同时发现,低浓度的文冠果提取物可刺激膀胱,骨,和肺细胞的生长(图7,9和11)。纯的文冠果提取物Y组分失去了刺激膀胱,骨,和肺细胞的生长的能力,但是,仍然保持抑制癌细胞的能力(比较图23A和25B,27)。并初步查明,文冠果生物活性物质在FPLC的组分610和1116中(图25B)。
实施例之九
本实例进一步说明本专利公开的提纯分离文冠果的提取物的方法
1,用快速液相色谱(FPLC)分离文冠果的提取物的方法
方法:
色谱柱:采用octadecyl活化的硅胶柱,2cm X 28cm,用乙睛(10%)-TFA(0.005%)为流动相。
进样:样品溶入10%的乙睛-TFA(0.005%),浓度为100mg/ml;
进样体积:1-2ml。
梯度洗脱:用10-80%的乙睛(总共500ml)梯度洗脱。
检测吸收波长:254nm。
收集分离组分:从10%-72%的乙睛洗脱液中共得到90个组分,每组分5ml。
所用仪器:AKTA-FPLC;泵:P920;检测器:UPC-900;Frac-900。
结果:
FPLC洗脱图谱显示,有4-5大的组分(见图4)。这些组分进一步用高效液相色谱(HPLC)分析,其中一些在图21L按a-z编号的特别的小峰(成分)再在FPLC的组分图谱上定位。
经FPLC分离的组分被分为7组,并用于膀胱细胞生长的MTT检测。结果表明,至少有一组(#5692)对膀胱细胞生长有抑制作用(图5)。
2,用快速液相色谱(FPLC)进一步分离文冠果生物活性物质组分#5692。
方法:
色谱柱:采用octadecyl活化的硅胶,50ml,2cm X 28cm,用乙睛(64%)-TFA(0.005%)为流动相。
进样:样品溶入65%的乙睛-TFA,浓度为1-2mg/ml;
进样体积:1-2ml。
洗脱:用64%乙睛等梯度洗脱。
检测吸收波长:254nm。
收集分离组分:从洗脱液中收集前90个组分,每组分1ml。
所用仪器:AKTA-FPLC泵:P920;检测器:UPC-900;Frac-900。
结果:
组分#5692用开式ODS-C18分流柱和64%的isocratic乙睛洗脱进一步分离和纯化,得到两个主要组分X和Y(图26)。但是,MTT检测结果显示,仅组分Y癌细胞有抑制反应(图27)。
3,高压液相色谱(HPLC)分离文冠果生物活性物质组分Y
方法:
色谱柱:采用Waters μbondapak C18(3.9mm x 300cm)。
洗脱:35%或45%的等梯度洗脱。
流动速率:0.5ml/分,207nm;稀释:0.128;
检测:O.D.标度0.128;记录纸速度:0.25cm/分。
结果:
用35%等梯度洗脱,组分Y分离出4-5成份(Y0,Y1,Y2,Y3,Y4)。其中Y3和Y4是主成分。Y1和Y2可为一组,Y3和Y4为一组(图28)。用45%等梯度洗脱,组分Y1和Y2聚合成一个峰,Y3和Y4聚合成一个峰(图29)。在峰Y3和Y4后还有成分Y5。
4,用HPLC把组分Y中的生物活性成分分离提纯出来
方法:
色谱柱:采用Waters Delta Pak C18-300A。
洗脱:45%的等梯度洗脱。
流动速率:1.0ml/分。
检测吸收波长:207nm。
收集有峰的组分,并真空冷冻干燥。
结果:
Y1和Y2被很好地分离出来,并分别予以收集。但是,Y3,Y4和Y5没有分离开(图30)。
用质子NMR谱对Y3和Y4聚合成一个峰的组分的上行和下行部分进一步分析,结果显示,Y3和Y4是同一成分(图31)。这一组分称为“Y组分”。对收集到的Y组分在HPLC上用C18柱反相色谱重新分析,结果显示也是一个峰(图32)。
最终提纯的Y组分外观呈不定型的白色粉末状。可溶于水醇中(甲醇和乙醇),50%的乙睛和100%的吡啶中。
Y组分MTT检测结果显示,它有很强的抑制卵巢癌细胞(OSCAR-3)生长的活性,IC50值仅为1μg/ml,比它的粗提物活性高10-15倍(图33a和b)。而且,它有选择性抑制癌细胞的性能,如抑制卵巢癌细胞而不太抑制***细胞(HeLa)(图34)。
实施例之十
本实例进一步说明本专利公开的文冠果生物活性物质的化学结构的测定方法文冠果生物活性物质Y组分的化学结构的测定
方法:
A),核磁共振(NMR)
纯的文冠果提取物Y组分样品溶在含有0.05%TMS的吡啶-d5(pydine-D5)中,用带有QXI探头(1H/13C/15N/31P)的Bruker Avance 600MHz核磁共振仪,获得所有样品的298k核磁共振谱。一维1H的核磁共振谱的扫描次数(16-128)取决于样品的浓度。二维HMQC核磁共振谱,谱宽6000x 24000Hz,t1和t2维的资料点分别为2024x 256,扫描次数为4-128。二维HMBC核磁共振谱,谱宽6000x 30000Hz,t1和t2维的资料点分别为2024x 256,扫描次数为64。这些二维数据通过数学演算和运用XWIN-NMR软件进行Fourier变换,最后得到的二维HMQC和HMBC核磁共振谱的矩阵的规模分别是2048x 256和2048x 512(data points,F2x F1)。
B),质谱
文冠果提取物样品的质量通过MALDI-TOF和ESL-MS质谱测定法来测定。
1)ALDI-TOF测定法
首先将样品溶于乙睛中,然和CHCA母液混合(α-氰-4-羟基肉硅酸10mg/ml,溶于50∶50水/乙睛和0.1%TFA中)。分子量通过高分辨率的质谱仪测定。
2)SI-MS测定法
样品通过LCQ DECA XP和Thermo Finningan制造的质谱仪来测定。样品用电喷雾电离(ESI),溶剂是乙睛。
结果
组分Y的质子核磁共振谱见图35。组分Y的质子的化学位移数据见表10-1。
表10.1.文冠果组分Y核磁共振的质子的化学位移
组分Y的二维HMQC核磁共振谱的数据见图36和图37A和B。化学位移的数据见表10-2(HMQC-峰移)和表10.3(HMBC-峰移)。
表10.2.组分Y核磁共振的质子的化学位移数据HMQC-峰移
EXPNO=5,PROCNO=1,F1PLO=144.360ppm,F1PHI=10.797ppm,F2PLO=7.966ppm,
F2PHI=0.417ppm,MI=1.00cm,MAXI=10000.00cm,PC=1.400
表10.3.组分Y二维核磁共振(HMBC)的化学位移
EXPNO=6,PROCNO=1
F1PLO=178.339ppm,F1PHI=10.721ppm,F2PLO=6.881ppm,F2PHI=0.573ppm MI=1.00cm,MAXI=10000.00cm,PC=1.400
表10-4(化合物Y的化学结构和二维核磁共振的化学位移的数据)表明从文冠果化合物Y的13C和质子的化学位移的数据而确定的化学功能基团。
根据这些资料和分析,文冠果组分(化合物)Y分子式:C57H88O23。
文冠果组分(化合物)Y的化学结构如下图所示:
化合物Y化学名称为:
3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。它属于三萜皂甙,皂甙元是五环三萜类化合物,有一个糖链和两个二党归酰基。
根据图40,41,46,表24,25,30中的这些资料和分析,文冠果组分(化合物)Y1化学结构如下:
化学结构2
其它化学结构如下:
化学结构1
化学结构3
其中R1=A or B or C;R2=A or B or C;R3=A or B or C;A=党归酰基;B=乙酰基;C=H。
化学结构4
其中R1=A or B or C;R2=A or B or C;R3=A or B or C;A=党归酰基;B=乙酰基;C=H。
化合物Y化学名称为:
3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。它属于三萜皂甙,皂甙元是五环三萜类化合物,有一个糖链和两个二党归酰基。
表10.4.文冠果化合物Y的13C和1H的化学位移的数据(溶在吡啶-d5中)a
a功能集团根据HMQC和HMBC的关连数据确定(The data wereassigned based on HMQC and HMBC correlations.)
图38是化合物Y的质谱图谱(MALDT-TOF和ESI-MS测试技术)。
结语
从文冠果分离提出的具有生物活性的化合物是一种三萜皂甙化合物Y,含有有三个糖的糖链和双党归酰基,分子式C57H88O23,名称:3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖吡喃酰基-21,22-O-二党归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。
根据图40,41,46,表24,25,30中的这些资料和分析,文冠果化合物Y1化学名称:3-0-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃酰基-22-0-(3,4-双当归酰基)-α-L-鼠李糖吡喃酰基-22-0-乙酰基-3β,16α,21β,22α,28-五羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。
参考文献
1,陈奇主编《中药药理研究方法学》人民卫生出版社1995第一版,P892
2.黄兆胜,刘明平,陈长州等,养寿丹改善学习记忆功能的实验研究,中国中西医结合杂志1997,9(17)9,P553
3.张艳,张鹤云,李卫平等,安吉复的促智作用研究,中国药理学报,1995,7,11(3)P233
4.扬军,王静,冯平安等脑康泰胶囊对小鼠学习记忆的改善作用,中药新药与临床药理2000,1(11)1,P29
5.扬军,王静,张继训等,赤芍总甙对小鼠学习记忆的改善作用。中国药理学通报2000,2(16)1,P46
6.夏卫军,金妙文,张莉等,抵当汤治疗老年期血管性痴呆的实验研究,中药药理与临床2000,16(4)
7.卞慧敏,俞晶早,龚婕宁等通脉益智胶囊对小鼠记忆功能的影响,中药药理与临床2000,16(5)P40
8.魏小龙,张永祥,老年性痴呆动物模型研究进展,中国药理学通报2000,8,(16)4,P372
9.***药政局,新药研究指南,神经***药物药效学指导原则(促智药)P45
10.张丹参,张均田,人参总皂甙对B-淀粉样肽致小鼠记忆障碍的影响,中国药理学通报2000,8,(16)4,P422
Claims (52)
3.一种化合物,其特征在于所述化合物的化学名称如下:3-O-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃酰基-21,22-O-双当归酰基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。
4.一种化合物,其特征在于所述化合物的化学名称如下:3-O-[β-D-半乳糖吡喃酰基(1→2)]-α-L-***糖呋喃酰基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃酰基-22-O-(3,4-双当归酰基)-α-L-鼠李糖吡喃酰基-22-O-乙酰基-3β,16α,21β,22α,28-五羟基齐墩果-12-烯五环三萜皂甙。
5.权利要求1所述的化合物在制备治疗癌症的药物中的应用。
6.按权利要求2所述的化合物,其特征在于所述化合物中的侧链为当归酰基或由连接当归酰基的糖链组成。
7.按权利要求2所述的化合物,其特征在于所述化合物含有一个或一个以上糖链和一个或一个以上当归酰基基团。
8.按权利要求2所述的化合物,其特征在于其中含有三萜类皂甙的化合物中,含有三个糖或其衍生物的糖链和两个当归酰基基团,这个糖链和两个当归酰基基团连接在三萜类皂甙元上。
9.按权利要求2所述的化合物,其特征在于其中含有三萜类皂甙的化合物中,含有两个糖链和一个或一个以上当归酰基基团,这两个糖链和一个或一个以上当归酰基基团连接在三萜类皂甙元上。
10.按权利要求2所述的化合物,其特征在于其中含有三萜类皂甙的化合物中,含有四个糖链和一个或一个以上当归酰基基团,这四个糖链和一个或一个以上当归酰基基团连接在三萜类皂甙元上。
11.按权利要求2所述的化合物,其特征在于其中含有三萜类皂甙的化合物中,含有一个或一个以糖链和一个或一个以上当归酰基基团,这一个或一个以糖链和一个或一个以上当归酰基基团连接在三萜类皂甙元上。
12.一种盐类化合物,其特征在于所述盐类化合物是权利要求1-11中的任一化合物衍生而来的钾盐或钠盐。
13.按权利要求1-12所述任一化合物,其特征在于所述化合物从文冠果植物中提取得到。
14.一种能抑制肿瘤或癌细胞生长的组合物,其特征在于所述组合物含有效量的如权利要求1-12的任一化合物。
15.按权利要求14所述的能抑制肿瘤或癌细胞生长的组合物,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是卵巢癌。
16.按权利要求14所述的能抑制肿瘤或癌细胞生长的组合物,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是乳腺癌,白血病,肝癌,卵巢癌,膀胱癌,***癌,皮肤癌,骨癌或脑癌。
17.权利要求1-12的任一化合物在制备治疗癌症的药物中的应用。
18.按权利要求17的应用,其特征在于给该应用施以有效量的如权利要求1-12的任一化合物。
19.一种组合物,其特征在于所述组合物是由权利要求1-12的任一化合物和适当的载体所组成。
20.一种药物组合物,其特征在于所述药物组合物是由权利要求1-12的任一化合物和适当的药物载体所组成。
21.一种药物组合物,其特征在于所述药物组合物由权利要求1-12任一能抑制肿瘤或癌细胞生长的化合物所组成。
22.按权利要求21所述的药物组合物,其特征在于所述药物组合物能抑制的肿瘤或癌细胞是卵巢癌。
23.一种由权利要求1-12任一化合物所组成的组合物,其特征在于所述组合物能医治如下疾病:改善膀胱功能,治疗遗尿;改善大脑皮层和小脑的反映能力,增进记忆和改善脑功能,治疗痴呆、弱智、阿兹海默症、孤独症、脑损伤和帕金森病;治疗癌症其中癌症是指卵巢癌,膀胱癌,骨癌,乳腺癌,白血病,肝癌,***癌和脑癌。
24.一种自文冠果中分离提取治疗癌症或抑制肿瘤和癌细胞生长如权利要求第1项所述的化合物的方法,其特征在于所述方法包含下列步骤:
(a)用适量的有机溶剂,在适当的时间内,浸提适当数量的粉碎了的文冠果样品适当的次数,得有机溶剂浸提物;
(b)收集有机溶剂浸提物;
(c)用适当的有机溶剂在适当的时间内,回流热提有机溶剂浸提物适当的次数,得第二提取物;
(d)回收有机溶剂,得流浸膏;
(e)干燥和灭菌第二提取物的流浸膏,得文冠果粗提取物;
(f)用高效液相色谱检测文冠果的粗提取物;
(g)在高效液相色谱检测结果的基础上,用快速液相色谱
把文冠果的粗提取物分离成一至多个成分;
(h)筛选检查每一成分的细胞毒性;
(i)用细胞活性测定法检测每一成分,找出抑制肿瘤和癌细胞生长的成分;
(j)再用HPLC提纯和分离上述成分;
(k)用核磁共振和质谱法确定这些成分中的化合物的化学结构。
25.一种自文冠果中分离提取治疗癌症或抑制肿瘤和癌细胞生长如权利要求第1项所述的化合物之方法,其特征在于所述方法包含下列步骤:
(a)获得文冠果粗提取物;
(b)用高效液相色谱检测文冠果的粗提取物;
(c)在高效液相色谱检测结果的基础上,用快速液相色谱
把文冠果的粗提取物分离成一至多个成分;
(d)筛选检查每一成分的细胞毒性;
(e)用细胞活性测定法检测每一成分,找出抑制肿瘤和癌细胞生长的成分;
(f)提纯和分离上述成分;
(g)用核磁共振和质谱法法确定这些成分中的化合物的化学结构。
26.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述粉碎了的文冠果样品是粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳。
27.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述有机溶剂是乙醇,甲醇,***,氯仿,丙酮。
28.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述有机溶剂和粉碎了的文冠果样品的比例是2∶1。
29.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述第(a)步中的适当的时间是每次20-35小时,适当的浸提次数是4-5次。
30.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述第(c)步中的适当的次数是2-3次。
31.按权利要求24所述的方法,其特征在于所述第(c)步中的回流热提。
32.按权利要求25所述的方法,其特征在于所述筛选检查每一成分的细胞毒性的方法是MTT法。
33.一种含文冠果的提取物的组合物在制备药物治疗癌症或能抑制肿瘤或癌细胞生长的应用,其特征在于所述组合物含有治疗癌症或能抑制肿瘤或癌细胞生长的皂甙。
34.如权利要求33所述的应用,其特征在于制备含有治疗癌症或能抑制肿瘤或癌细胞生长的文冠果提取物之方法包含下列步骤:
(i)用一种或多种有机溶剂,在适当的时间内,浸提适当数量的粉碎了的文冠果样品适当的次,得有机溶剂浸提物;
(ii)收集有机溶剂浸提物;
(iii)用适当的有机溶剂在适当的时间内,回流热提收有机溶剂浸提物适当的次数,得第二提取物;
(iv)回收有机溶剂,得流浸膏;
(v)干燥和灭菌第二提取物的流浸膏,得粉状文冠果粗提取物;
35.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述粉碎了的文冠果样品是粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳。
36.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述有机溶剂是乙醇,甲醇,***,氯仿,丙酮或其它醇。
37.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述有机溶剂和粉碎了的文冠果样品的比例是2∶1。
38.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述第(i)步中的适当的时间是每次20-35小时,适当的浸提次数是4-5次。
39.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述第(iii)步中的适当的次数是2-3次。
40.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述第(iii)步中的回流热提。
41.按权利要求34所述的应用,其特征在于所述组合物含有治疗癌症或能抑制肿瘤或癌细胞生长的皂甙的提取物。
42.按权利要求41所述的应用,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是卵巢癌。
43.按权利要求41所述的应用,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是骨癌。
44.按权利要求41所述的应用,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是膀胱癌。
45.按权利要求41所述的应用,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是***癌。
46.按权利要求41所述的应用,其特征在于所述能抑制的肿瘤或癌细胞是乳腺癌,白血病,肝癌,卵巢癌,膀胱癌,***癌,皮肤癌,骨癌或脑癌。
47.如权利要求33所述的应用,其特征在于所述药物具有治疗癌症其中癌症是指卵巢癌,膀胱癌,骨癌,乳腺癌,白血病,肝癌,***癌和脑癌的作用。
48.一种可抑制癌细胞生长的含文冠果的提取物的组合物,其特征在于所述组合物含有皂甙;或生物碱;或黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇,酚类化合物;或多糖,糖苷,其它糖类;或单宁;或香豆素,香豆素糖苷;或芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸;或蛋白质,或者含任两种或两种以上的上述成分;该文冠果的提取物来自文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳。
49.按权利要求48的组合物,其特征在于所述组合物能治疗癌症其中癌症是指卵巢癌,膀胱癌,骨癌,乳腺癌,白血病,肝癌,***癌和脑癌。
50.一种制备如权利要求47的组合物之方法,其特征在于所述方法包含下列步骤:
(A)用乙醇浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品3次,得乙醇浸提物;收集和浓缩乙醇浸提物,得浓缩浸提物;用热水浸提浓缩浸提物,得水溶性浸提物和非水溶性浸提物;干燥,灭菌所得水溶性浸提物和非水溶性浸提物,得水溶性和非水溶性黄色粉末状黄酮提取物;该水溶性和非水溶性黄色粉末状黄酮提取物含黄烷醇,黄酮醇,黄烷酮醇,酚类化合物,有机酸和其它化合物。
(B)用乙醇,甲醇或其它有机溶剂浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品,得有机溶剂浸提物;回收溶剂得流浸膏;干燥,灭菌所得流浸膏,得皂甙提取物;该皂甙提取物含有文冠果皂甙和糖,粗蛋白;
(C)用乙醇,甲醇或其它有机溶剂浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品4-5次,每次20-35小时,得有机溶剂浸提物,其中有机溶剂与样品的体积比例为2比1;收集有机溶剂浸提液,再在80℃回流热提2-3次,得第二有机溶剂浸提物;溶解第二有机溶剂浸提物于水中,得水浸提液;用正丁醇浸提水浸提液,得正丁醇浸提物;用色谱法分离正丁醇浸提物,得粗皂甙提取物;该粗皂甙提取物主要含有皂甙;
(D)用0.5%NaOH溶剂浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品,得水浸提物;收集水浸提液并用***浸提文冠果水浸提物,得***浸提物;用HCl中和***浸提物;浓缩,酸化***浸提物,得香豆素提取物;该香豆素提取物主要含有香豆素,香豆素糖苷和糖,粗蛋白;
(E)室温下,用水浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品24小时,得水浸提物;再在60-70℃的温度下热提1-2小时,得二次水浸提物;过滤二次水浸提物,得过滤水浸提物;浓缩二次水浸提物,得流浸膏;该流浸膏含有多糖,糖苷,其它糖类,和皂甙,单宁;
(F)用水浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品3-4次,每次10-15小时,其中水与样品的体积比例为6比1,得水浸提物;收集合并水浸提物;用NaOH碱化合并的水浸提物,使pH达到10-12,得碱化浸提物;用甲苯浸提碱化浸提物,得甲苯浸提物;使甲苯浸提物通过pH为5-7的2%二羧酸,得二羧酸浸提液;减压浓缩二羧酸浸提液,得粗生物碱提取物;该提取物含有生物碱,香豆素,糖和粗蛋白;
(G)用10%的盐酸浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品,得酸浸提液;用***或苯有机溶剂浸提酸浸提液,得有机溶剂浸提物;用5-10%HaHCO3浸提有机溶剂浸提物,得HaHCO3浸提物;酸化HaHCO3浸提物,过滤,沉淀,再用有机溶剂萃取沉淀物,得二次有机溶剂浸提物;回收机溶剂,得粗芳香有机酸提取物;该提取物含有芳香有机酸,有机脂肪酸,萜类有机酸和粗蛋白;
(H)用95%的乙醇浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品,得乙醇浸提液;减压浓缩乙醇浸提液,得单宁提取物;或
(I)用丙酮的水溶液按体积1比1的比例浸提浸提粉碎了的文冠果的果壳,种仁,枝,树干,叶,根,树皮,或种壳样品,2-7天,得丙酮的水溶液浸提物;在50℃回收丙酮,过滤浓缩的浸提物;用***萃取过滤的浸提物,回收***,得水溶液浸提物;用乙酸乙酯和正丁醇萃取水溶液浸提物,得乙酸乙酯和正丁醇浸提物;回收乙酸乙酯和正丁醇,得单宁提取物;该取物含有单宁有机酸,糖类,和粗蛋白。
51.一种组合物在制备治疗癌症药物中的应用,其特征在于所述组合物能调节Wnt通路中的组元或它们的受体以阻止癌细胞的增殖;或能调节Ras-MAP激酶链中的组元或它们的受体;或能调节Ras-dependent或Myc的通路中的组元或它的受体;或能启动“检查机制”以阻止癌细胞的增殖;或能调节胞外生长的组元或其受体的;或能调节Ras和MAP激酶链中的组元或其受体以阻止卵巢癌细胞的增殖;或能调节Myc细胞增殖以阻止癌细胞的裂殖;或能调节α-TGF的组元或其受体;或能调节β-TGF的组元或其受体;或能调节蛋白质E6,E7和调节蛋白质Rb,p53的释放以抑制畸形细胞的裂殖;或能调节或能与蛋白质起反应以引起癌细胞死亡;或能调节合成蛋白质p53的通路和其受体以抑制癌细胞裂殖;或能使细胞中被阻断的***信号重新释放;或能调节BMP,GF,Jak-jnk-STAT和Jun-fos的通路和其受体;或能调节糖肾上腺皮质激素,***,酪氨酸激酶,G-蛋白,和EGF的受体;该组合物是由一定浓度如权利要求1-12中所述的任一化合物或权利要求33所述的组合物所组成。
52.一种能减少尿量或排尿次数的组合物,其特征在于所述组合物由一定浓度如权利要求1-12任一化合物所组成。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US50985103P | 2003-10-09 | 2003-10-09 | |
US60/509,851 | 2003-10-09 | ||
US53210103P | 2003-12-23 | 2003-12-23 | |
US60/532,101 | 2003-12-23 | ||
PCT/US2004/033359 WO2005037200A2 (en) | 2003-10-09 | 2004-10-08 | Composition comprising xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101242850A CN101242850A (zh) | 2008-08-13 |
CN101242850B true CN101242850B (zh) | 2013-03-20 |
Family
ID=34467961
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2004800367617A Expired - Fee Related CN101242850B (zh) | 2003-10-09 | 2004-10-08 | 文冠果的提取物和从提取物分离出的化合物的组成,功能和应用,以及它们的制备方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20090041877A1 (zh) |
EP (1) | EP1670491B1 (zh) |
JP (1) | JP4815558B2 (zh) |
KR (1) | KR101135824B1 (zh) |
CN (1) | CN101242850B (zh) |
AU (1) | AU2004281707B2 (zh) |
CA (1) | CA2541425C (zh) |
HK (1) | HK1090303A1 (zh) |
NZ (1) | NZ546138A (zh) |
WO (1) | WO2005037200A2 (zh) |
Families Citing this family (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7727561B2 (en) | 2001-08-31 | 2010-06-01 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
US7524824B2 (en) | 2003-09-04 | 2009-04-28 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
US7514412B2 (en) | 2003-10-09 | 2009-04-07 | Pacific Arrow Limited | Anticancer biangeloyl saponins |
US7262285B2 (en) | 2003-10-09 | 2007-08-28 | Pacific Arrow Limited | Anticancer biangeloyl saponins |
US8614197B2 (en) | 2003-10-09 | 2013-12-24 | Pacific Arrow Limited | Anti-tumor compounds with angeloyl groups |
US7488753B2 (en) | 2003-10-09 | 2009-02-10 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising triterpene saponins and compounds with angeloyl functional group, methods for preparing same and uses thereof |
TWI454269B (zh) * | 2003-12-23 | 2014-10-01 | Pacific Arrow Ltd | 由文冠果(xanthoceras sorbifolia)單離之化合物、其製備方法以及其用途 |
WO2006002602A1 (fr) * | 2004-07-07 | 2006-01-12 | Baizhen Yang | Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations |
US9382285B2 (en) | 2004-09-07 | 2016-07-05 | Pacific Arrow Limited | Methods and compounds for modulating the secretion or expression of adhesion proteins or angiopoietins of cells |
US8735558B2 (en) * | 2005-02-14 | 2014-05-27 | Pacific Arrow Limited | Blocking the migration or metastasis of cancer cells by affecting adhesion proteins and the uses of new compounds thereof |
EP1811840B1 (en) * | 2004-09-07 | 2016-04-13 | May Sung Mak | Anti-tumor compounds with angeloyl groups |
WO2008133766A1 (en) * | 2007-02-16 | 2008-11-06 | Pacific Arrow Limited | Blocking the migration or metastasis of cancer cells by affecting adhesion proteins and the uses of new compounds thereof |
US8586719B2 (en) | 2005-04-27 | 2013-11-19 | Pacific Arrow Limited | Triterpenes for modulating gene expression and cell membrane, and as antiprotozoal agents |
CN100482254C (zh) * | 2006-01-12 | 2009-04-29 | 哈尔滨三乐生物工程有限公司 | 文冠果子仁有效部位的提取方法 |
CN101553497B (zh) * | 2006-09-01 | 2013-03-27 | 太平洋艾瑞有限公司 | 能抑止癌细胞生长的抗肿瘤化合物 |
US20100040758A1 (en) * | 2006-12-28 | 2010-02-18 | Chitra Vasant Savngikar | Integrated production of phytochemical rich plant products or isolates from green vegetation |
WO2011009032A1 (en) * | 2009-07-16 | 2011-01-20 | Pacific Arrow Limited | Inhibiting the invasion and metastasis of cancer cells |
US20120277308A1 (en) | 2010-07-16 | 2012-11-01 | Pacific Arrow Limited | compounds for treating cancer and other diseases |
US9499577B2 (en) | 2009-07-16 | 2016-11-22 | Pacific Arrow Limited | Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases |
CN101948897B (zh) * | 2010-09-11 | 2013-02-13 | 山西金绿禾燕麦研究所 | 从文冠果中提取文冠果油、文冠果多糖、文冠果水解蛋白肽的方法 |
KR101317368B1 (ko) * | 2011-10-11 | 2013-10-11 | 이정택 | 조루증 치료용 한약 조성물 |
CN103242461A (zh) * | 2012-02-06 | 2013-08-14 | 陕西理工学院 | 一种同时提取天麻多糖和天麻素的新方法 |
ES2423254B1 (es) * | 2012-02-15 | 2014-03-26 | Laboratec, S.L. | Composición farmacéutica para el tratamiento de incontinencia urinaria y enuresis |
CN103509077B (zh) * | 2012-06-15 | 2015-08-05 | 沈阳药科大学 | 三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途 |
CN102793647A (zh) * | 2012-09-04 | 2012-11-28 | 山东理工大学 | 一种文冠果黄酮物质提取方法及其在抗衰老行业的应用 |
CN102796067A (zh) * | 2012-09-04 | 2012-11-28 | 山东理工大学 | 一种文冠果壳中黄酮类物质提取方法 |
CN102813212A (zh) * | 2012-09-04 | 2012-12-12 | 山东理工大学 | 文冠果黄酮在抗衰老领域的应用及其制备方法 |
CN102784087B (zh) * | 2012-09-04 | 2014-05-28 | 山东理工大学 | 文冠果黄酮提取物在美白领域的应用及其提取方法 |
CN102783655B (zh) * | 2012-09-04 | 2013-10-16 | 山东理工大学 | 文冠果黄酮提取物在减肥降脂领域的应用及其提取方法 |
CN103884731B (zh) * | 2013-12-28 | 2016-09-28 | 丽珠集团利民制药厂 | 一种参芪扶正注射液核磁共振质量控制方法 |
WO2016157029A1 (en) * | 2015-03-27 | 2016-10-06 | Levius Vita Foods S.R.L. | A process for the production of a phytoderivative |
CN112341504A (zh) * | 2015-12-21 | 2021-02-09 | 河北科技师范学院 | 一种有机溶剂浸提法提取葡萄籽中单宁的条件优化方法 |
CN105596257B (zh) * | 2016-01-19 | 2018-07-27 | 杨凌普天农业科技有限公司 | 文冠果叶的抗氧化活性物、提取方法及在化妆品中的应用 |
CN107028175A (zh) * | 2016-02-03 | 2017-08-11 | 苏州工业园区新国大研究院 | 马来樱桃叶提取物、其制备方法及其在制备能量缓释的食品中的应用 |
CN105707369A (zh) * | 2016-02-05 | 2016-06-29 | 山西双林富农林开发有限公司 | 文冠果果柄保健茶及其制备方法、*** |
CN105693876B (zh) * | 2016-02-17 | 2017-12-15 | 杨凌普天农业科技有限公司 | 文冠果叶多糖提取物、提取方法及其应用 |
CN105832601A (zh) * | 2016-04-18 | 2016-08-10 | 山西双林富农林开发有限公司 | 一种从文冠果中提取表面活性剂的方法 |
CN105918551A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-09-07 | 山西双林富农林开发有限公司 | 文冠果果壳保健茶及其制备方法、*** |
CN106726785B (zh) * | 2017-01-23 | 2019-09-20 | 杨凌普天农业科技有限公司 | 以文冠果油为基础油的护肤品 |
CN107897559A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-04-13 | 李现伟 | 一种蛋鸡饲料添加剂及蛋鸡饲料 |
CN107873959A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-04-06 | 李现伟 | 一种蛋鸡饲料添加剂及蛋鸡饲料 |
CN109999046B (zh) * | 2019-05-20 | 2021-06-04 | 湖北中医药大学 | 一种茯苓寡糖及其制备方法和应用 |
CN110179814B (zh) * | 2019-06-13 | 2022-09-16 | 安徽大学 | 一种蝉花虫草多糖、制备方法及在制备预防肾间质纤维化药物中应用 |
CN111166801B (zh) * | 2019-12-31 | 2021-11-30 | 北京海达华环境科技有限公司 | 一种从文冠果鲜果壳中连续提取氨基酸、黄酮、皂苷、色素的方法 |
CN113549118B (zh) * | 2021-06-23 | 2022-04-22 | 广东菁萃生物科技有限公司 | 一种高纯度三萜皂苷的提取方法及其应用 |
CN114736917B (zh) * | 2022-03-27 | 2023-08-01 | 苏州大学 | Usp11在抑制细胞因子il6降解中的应用 |
CN116179601B (zh) * | 2023-03-22 | 2023-12-15 | 四川大学华西第二医院 | 一种构建具有社交障碍的自闭症疾病动物模型的方法及应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1107302A2 (en) * | 1999-12-07 | 2001-06-13 | Applied Materials, Inc. | Method and apparatus for reducing fixed charges in a semiconductor device |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2304124A1 (en) * | 1997-09-17 | 1999-03-25 | The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research | Bci-2-like protein bim and methods of use thereof |
IN183330B (zh) * | 1998-03-23 | 1999-11-20 | Dalmia Ct For Biotechnology | |
CN1307473A (zh) * | 1998-05-19 | 2001-08-08 | 研究发展基金会 | 三萜组合物和它们的使用方法 |
DE69918166T2 (de) * | 1998-12-22 | 2005-07-07 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Antiprotozoale saponine |
AU7003101A (en) * | 2000-06-22 | 2002-01-02 | American Cyanamid Co | Qs-21 and il-12 as an adjuvant combination |
US7727561B2 (en) * | 2001-08-31 | 2010-06-01 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
US7524824B2 (en) * | 2003-09-04 | 2009-04-28 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
US6616943B2 (en) * | 2001-08-31 | 2003-09-09 | Fountain Silver Limited | Composition comprising Wenguanguo extracts and methods for preparing same |
CN1350001A (zh) | 2001-10-31 | 2002-05-22 | 杨柏珍 | 可提取包括文冠果总皂甙、粗脂肪、粗蛋白、糖的果壳 |
CN100346805C (zh) * | 2001-10-31 | 2007-11-07 | 杨柏珍 | 治疗脑功能低下、抗糖尿病活性的文冠果果壳提取物 |
US7488753B2 (en) * | 2003-10-09 | 2009-02-10 | Pacific Arrow Limited | Composition comprising triterpene saponins and compounds with angeloyl functional group, methods for preparing same and uses thereof |
US7262285B2 (en) * | 2003-10-09 | 2007-08-28 | Pacific Arrow Limited | Anticancer biangeloyl saponins |
US7514412B2 (en) * | 2003-10-09 | 2009-04-07 | Pacific Arrow Limited | Anticancer biangeloyl saponins |
US8614197B2 (en) * | 2003-10-09 | 2013-12-24 | Pacific Arrow Limited | Anti-tumor compounds with angeloyl groups |
US20060263458A1 (en) * | 2003-10-09 | 2006-11-23 | Mak May S | Composition comprising growth factor of xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof |
US20060111310A1 (en) * | 2003-10-09 | 2006-05-25 | Chan Pui-Kwong | Composition comprising triterpene saponins and compounds with angeloyl functional group, methods for preparing same and uses thereof |
EP1677801A4 (en) * | 2003-10-10 | 2010-09-22 | Sk Chemicals Co Ltd | EFFICIENT TRITERPENES TO IMPROVE BRAIN FUNCTIONS |
GB0323965D0 (en) * | 2003-10-13 | 2003-11-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic compositions |
WO2006002602A1 (fr) * | 2004-07-07 | 2006-01-12 | Baizhen Yang | Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations |
ES2395818T3 (es) * | 2004-07-13 | 2013-02-15 | Charite - Universitatsmedizin Berlin | Composición que comprende un agente farmacológicamente activo acoplado a un componente específico de célula diana, y una saponina |
BRPI0514103B1 (pt) * | 2004-08-04 | 2016-02-10 | Reckitt Benckiser Inc | dispostivo de distribuição |
CN1754541A (zh) * | 2004-09-30 | 2006-04-05 | 成都地奥制药集团有限公司 | 甾体皂苷药物组合物及其制备方法和用途 |
US20050209445A1 (en) * | 2004-11-30 | 2005-09-22 | Gokaraju Ganga R | Process for producing enriched fractions containing upto 100% of bacoside a and bacoside b from plant materials of bacopa species |
US20070196517A1 (en) * | 2005-07-13 | 2007-08-23 | Dictuc S.A. | Modified Saponin Molluscicide |
US8048457B2 (en) * | 2006-04-18 | 2011-11-01 | Sartec Corporation | Saponin and preservative compositions and methods |
TW200823182A (en) * | 2006-08-01 | 2008-06-01 | Praecis Pharm Inc | Chemical compounds |
US7544668B2 (en) * | 2006-11-17 | 2009-06-09 | Hong Kong Baptist University | Saponins derived from Ilex pubescens and method of purifying the same |
-
2004
- 2004-10-08 CA CA2541425A patent/CA2541425C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-08 WO PCT/US2004/033359 patent/WO2005037200A2/en active Application Filing
- 2004-10-08 CN CN2004800367617A patent/CN101242850B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-08 NZ NZ546138A patent/NZ546138A/en unknown
- 2004-10-08 KR KR1020067008896A patent/KR101135824B1/ko active IP Right Grant
- 2004-10-08 EP EP04809909.7A patent/EP1670491B1/en not_active Not-in-force
- 2004-10-08 AU AU2004281707A patent/AU2004281707B2/en not_active Ceased
- 2004-10-08 JP JP2006534419A patent/JP4815558B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-11-03 HK HK06112129.3A patent/HK1090303A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-08-20 US US12/195,112 patent/US20090041877A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1107302A2 (en) * | 1999-12-07 | 2001-06-13 | Applied Materials, Inc. | Method and apparatus for reducing fixed charges in a semiconductor device |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
朱丹;胡群;李霞冰.文冠果化学成分预试与综合利用的研究.国土与自然资源研究 1.1997,(1),69-71. * |
程文明;杨柏珍;李春如.文冠果果壳中两种甾醇成分的结构研究.中草药32 3.2001,32(3),199-201. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1670491B1 (en) | 2015-07-29 |
WO2005037200A8 (en) | 2005-09-01 |
WO2005037200B1 (en) | 2005-10-06 |
JP2007508317A (ja) | 2007-04-05 |
CN101242850A (zh) | 2008-08-13 |
AU2004281707B2 (en) | 2011-06-09 |
WO2005037200A2 (en) | 2005-04-28 |
NZ546138A (en) | 2009-12-24 |
CA2541425A1 (en) | 2005-04-28 |
AU2004281707A1 (en) | 2005-04-28 |
KR20060109893A (ko) | 2006-10-23 |
JP4815558B2 (ja) | 2011-11-16 |
US20090041877A1 (en) | 2009-02-12 |
KR101135824B1 (ko) | 2012-04-16 |
EP1670491A4 (en) | 2009-11-11 |
CA2541425C (en) | 2013-01-29 |
WO2005037200A3 (en) | 2005-06-16 |
HK1090303A1 (zh) | 2006-12-22 |
EP1670491A2 (en) | 2006-06-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101242850B (zh) | 文冠果的提取物和从提取物分离出的化合物的组成,功能和应用,以及它们的制备方法 | |
TWI454269B (zh) | 由文冠果(xanthoceras sorbifolia)單離之化合物、其製備方法以及其用途 | |
US7524824B2 (en) | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof | |
US8859012B2 (en) | Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof | |
CN104257715B (zh) | 万年蒿提取物及其制备方法和用途 | |
CN103222988B (zh) | 一种美洲大蠊提取物及其制备方法和应用 | |
CN101123880A (zh) | 带有当归酰基的抗肿瘤化合物 | |
CN103804443B (zh) | 黄酮苷类化合物及其制备方法 | |
CN106389453B (zh) | 黄酮糖苷组合物 | |
CN104800252B (zh) | 一种具有肿瘤抑制作用的精制多酚及其制备方法和应用 | |
CN101648937B (zh) | 异黄酮类化合物及其制备和应用 | |
CN102365089B (zh) | 一种预防和治疗阿尔茨海默氏症的药物及其制备方法 | |
CN103735653B (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的中药提取物及其制备方法和用途 | |
CN108976264A (zh) | 一种补肾、益精血、防辐射雪莲淫羊藿红景天中药组合物 | |
KR0160108B1 (ko) | 조각자나무로부터 추출한 생약 성분으로 된 항암제 | |
CN104147104B (zh) | 山豆根黄酮组合物在制备具有降低血糖同时防治高血脂症药物中的应用 | |
CN105640971A (zh) | 未成熟罗汉果提取物中的总皂苷在制备辅助降血糖药物方面的应用 | |
CN104398532B (zh) | 一种强心苷化合物的用途 | |
CN1919229B (zh) | 可用于治疗糖尿病和肥胖症的双肾藤,其提取物 | |
CN104987340B (zh) | 碱蓬黄酮a及其制备方法和用途 | |
CN105017199B (zh) | 一种碱蓬黄酮及其制备方法和用途 | |
CN104306369B (zh) | 一种色满化合物及其提取方法和应用 | |
CN101693715A (zh) | 一种香豆素类化合物及其制备方法和应用 | |
김정화 | Hepatoprotective constituents of Opuntia ficus-indica seeds against ethanol-intoxicated rat primary hepatocytes | |
CN101302238A (zh) | 香鳞毛蕨苷e及其分离方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130320 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |