CN101240241A - 大球盖菇菌种保藏方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种大球盖菇菌种保藏方法，包括a)配置引导驯化平板培养基，b)耐冻、耐负压的菌丝体制备；c)菌丝体真空冷冻干燥：将安瓿管放入冷冻干燥机，降温速度为每分钟2℃，冷却至－40℃，恒温预冻1.5小时，然后开启真空泵，在15分钟内真空度达到22.5帕后，以每30分钟隔板温度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板温度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，样品温度升高至24℃时，真空冷冻干燥完成。本发明通过对大球盖菇菌丝体进行引导驯化，以提高其低温耐冻性、耐负压性及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保藏。具有适用范围广、保藏期长、成活率高等优点。

Description

大球盖菇菌种保藏方法
技术领域
本发明涉及一种食用菌菌种保藏方法，具体说是大球盖菇的菌种保藏方法。
背景技术
菌种作为一种重要的生物资源，为了保持其优良性状不变，应当及时对其进行保藏，目前食用菌菌种保藏方法主要有液氮低温保藏法、斜面定期移植法、液体石蜡保藏法、砂土管保藏法以及自然基质保藏法等，其中液氮低温保藏法是目前较为先进的一种方法，但费用较高，国外保藏机构多采用此法；在我国，目前生产或研究中所食用菌菌种仍然主要采用试管或瓶保藏法，主要缺点有：保存时间较短，菌种稳定性不好，易发生变异或退化，成本高，携带不方便等缺点。
现有食用菌菌丝体活干菌种及其生产方法，以菌丝体作为材料利用真空冷冻干燥技术冻干得到食用菌活干菌丝体菌种产品，但实践表明菌丝体不适于冻干。
发明内容
本发明目的是提供一种大球盖菇菌种保藏方法，
a)、配置引导驯化平板培养基：其组成配方：小麦提取液20g、酵母提取液1g、蔗糖0.75g、乳糖1g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、氯化钠0.3g、柠檬酸铁0.2g、琼脂1.2g和蒸馏水92.55g，pH6.8，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸。
b)、耐冻、耐负压的菌丝体制备：然后待培养基冷却至20～25℃时，将大球盖菇菌种接种至载体上，在25℃无菌培养箱内培养144小时，然后在无菌条件下将载体连同菌种一并取下，并按照安瓿管(瓶)底部大小剪切至相应大小放置于安瓿管(瓶)底部，加入保护剂0.1～0.2mL，其配方如下：脱脂牛奶18g、葡萄糖1g、甘露醇2g、纤维素1g和蒸馏水100ml。
c)、菌丝体真空冷冻干燥：将安瓿管放入冷冻干燥机，降温速度为每分钟2℃，冷却至-40℃，恒温预冻1.5小时，然后开启真空泵，在15分钟内真空度达到22.5帕后，以每30分钟隔板温度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板温度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，样品温度升高至24℃时，真空冷冻干燥完成。
本发明通过对大球盖菇菌丝体进行引导驯化，以提高其低温耐冻性、耐负压性及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保藏。
本发明具有适用范围广、保藏期长、成活率高等优点。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：
首先配置引导驯化平板培养基，其组成配方：小麦提取液20g、酵母提取液1g、蔗糖0.75g、乳糖1g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、氯化钠0.3g、柠檬酸铁0.2g、琼脂1.2g、蒸馏水92.55g，pH6.8，制成无菌平皿，待培养基略凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸，然后待培养基冷却至20～25℃时，将大球盖菇菌种接种至载体上，在25℃无菌培养箱内培养144小时，然后在无菌条件下将载体连同菌种一并取下，并按照安瓿管(瓶)底部大小剪切至相应大小放置于安瓿管(瓶)底部，加入保护剂0.1～0.2mL，其配方如下：脱脂牛奶18g、葡萄糖1g、甘露醇2g、纤维素1g、蒸馏水100ml，将安瓿管放入冷冻干燥机，降温速度为每分钟2℃，冷却至-40℃，恒温预冻1.5小时，然后开启真空泵，在15分钟内真空度达到22.5帕后，以每30分钟隔板温度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板温度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，样品温度升高至24℃时，真空冷冻干燥完成。复水实验结果显示，菌种存活率75％以上。

Claims (1)

1.一种大球盖菇菌种保藏方法，其特征在于：它包括下列步骤，
a)、配置引导驯化平板培养基：培养基组成配方为小麦提取液20g、酵母提取液1g、蔗糖0.75g、乳糖1g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、氯化钠0.3g、柠檬酸铁0.2g、琼脂1.2g和蒸馏水92.55g，pH6.8，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层多孔纸；
b)、耐冻、耐负压的菌丝体制备：待培养基冷却至20～25℃时，将大球盖菇菌种接种至载体上，在25℃无菌培养箱内培养144小时，然后在无菌条件下将载体连同菌种一并取下，并按照安瓿管底部大小剪切至相应大小放置于安瓿管底部，加入保护剂0.1～0.2mL，保护剂配方为脱脂牛奶18g、葡萄糖1g、甘露醇2g、纤维素1g和蒸馏水100ml；
c)、菌丝体真空冷冻干燥：将安瓿管放入冷冻干燥机，降温速度为每分钟2℃，冷却至-40℃，恒温预冻1.5小时，然后开启真空泵，在15分钟内真空度达到22.5帕后，以每30分钟隔板温度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板温度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，样品温度升高至24℃时，真空冷冻干燥完成。
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