CN101230106B - 香蕉多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种香蕉多糖的制备方法，依次由下述过程组成：将香蕉洗干净、切段、用酸溶液浸泡处理，再用热水热烫数分钟，冷却、打浆备用，加水加热提取。双酶进行水解，然后进行酶灭活；过滤，清液进行醇沉，静置过夜。离心，过滤，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，即得香蕉多糖粗品。取香蕉多糖粗品用水溶解，离心，过滤，滤液上DEAE层析柱进行吸附分离纯化，收集目标物，用超滤膜进行超滤，收集截留液，醇沉，静置过夜。离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，即得高纯度的香蕉多糖。这种提取方法简单、安全、无污染，而且收率高、生产成本低，得到的香蕉多糖纯度高，适合大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及食品、医药化工的生产工艺，具体地说是香蕉多糖的制备方法。
背景技术
在生命科学研究领域里，糖生物学一直是该领域的研究前沿和热点。多糖具有多方面的复杂生物活性与功能，多糖的糖链能控制细胞的***与分化，调节细胞的生长与衰老。
成熟香蕉中含糖量近20％，香蕉多糖对由环磷酰胺引起的小鼠白细胞下降有一定抑制作用，即有一定的免疫活性，这为香蕉多糖的开发应用提供了科学依据。
然而香蕉现在大多数只是作为一种水果来食用，而其药用价值往往被忽略。香蕉多糖具有免疫活性作用。爱滋病(AIDS)的危害，使人们对免疫缺损的严重后果有了更深刻的认识，因此寻找具有良好免疫调节作用的药物已成为当代新药研制的发展方向之一。因此，研究和开发利用香蕉多糖具有广阔的市场前景。
香蕉中含有很多的活性酶，容易发生褐变，对香蕉多糖的提取有很大的不利。由于香蕉中的香蕉多糖极易被氧化，所以在香蕉多糖的提取纯化过程中，香蕉多糖很容易发黑，使最后得到的香蕉多糖发黑。
发明内容
本发明的目的在于提供一种香蕉多糖的制备方法。
本发明采用如下技术方案：
(1)将香蕉洗干净、切段、用pH为3.0～4.5酸溶液浸泡处理，再用90℃～100℃热水热烫数分钟，冷却、打浆备用；
(2)取备用浆液，加水加热至90℃以上进行提取两次，每次加入香蕉肉重量的3～4倍水进行提取，收集提取液，降温到室温，用酸调pH值至3.0～4.0，加入木瓜酶或胃蛋白酶等酸性蛋白酶，搅匀后，维持pH值在3.0～4.0，45℃～50℃的条件水解；
(3)用碱将水解后的提取液调pH值至9.0～9.5，加入胰酶或胰蛋白酶等中性、碱性蛋白酶，搅匀后，维持pH值在9.0～9.5，45℃～50℃的条件水解，酶解结束后加热升温进行酶灭活，降温至室温；
(4)酶解液用酸调pH至6.0～6.5离心，过滤，收集滤液；滤液，进行醇沉，静置过夜；
(5)将步骤(4)中醇沉后的溶液过滤，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗2次，真空干燥，即得香蕉多糖粗品；
(6)取香蕉多糖粗品，加水搅拌进行溶解，离心，过滤，取滤过液；
(7)将滤过液用DEAE层析柱进行层析分离；
(8)收集层析分离后的目标物，用超滤膜进行超滤，收集截留液；
(9)截留液再次进行醇沉，静置过夜；
(10)将步骤(9)中醇沉后的溶液进行离心，过滤，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗2次，进行真空干燥，即得香蕉多糖精品。
酶灭活的时间和温度根据酶的种类进行确定，一般加热至100℃，保温5～15分钟。
所述的调pH值用的碱可以为氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠或氨水。
所述的调pH值用的酸可以为盐酸、磷酸、柠檬酸或硫酸。
用酶进行水解的过程，可以通过控制水解时间来掌握水解进程，水解时间短，水解不充分造成收率低，但水解时间过程长又会延长生产周期，增加成本及增加受污染的机会。一般步骤(2)中水解时间可以为450～500分钟。同样，所述的步骤(3)中水解时间为200～250分钟。
所述的层析时用的磷酸盐缓冲液为10～30mmol/L pH5.8～6.8磷酸盐缓冲液。
所述的超滤采用分子截留为5～10KD的超滤膜。
本发明通过对香蕉进行双酶水解，经过乙醇醇沉的方法，第一步分离纯化除去其他杂质，然后用DEAE层析柱吸附分离纯化，用分子截留为5～10KD的超滤膜进行超滤，收集截留液，再经过酒精醇沉，第二步分离纯化除去其他杂质。这种方法的优点如下：
1、香蕉直接经双酶酶解等生产工艺提取香蕉多糖，具有简单、安全、环保、低成本等优点。
2、本发明的制备香蕉多糖的方法所制备的香蕉多糖纯度高，收率高，成色好，可大量生产等优点。
3、本发明的香蕉多糖的制备方法所用的原料成本低，来源广，果皮、果肉都可进行提取多糖，药用效果明显等优点。
4、制备工艺简单易行，原料易得，反应条件温和，收率高，稳定性好，对制备设备及场所要求也很低，适合于大规模工业化生产。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例：
取200个成熟香蕉，将香蕉洗干净、称重得6.0kg、切段、用pH为3.0～4.5的盐酸溶液浸泡处理，再用100℃热水热烫7min，冷却、打浆备用。加入20.0l水加热至100℃提取1.5小时，降至室温，用滤布过滤。香蕉渣再加入20.0l水加热至100℃提取1.5小时，降至室温，用滤布过滤。收集两次提取液，离心，过滤，待滤过液降温至45℃～50℃，用30％(w％)柠檬酸调pH至3.0～4.0，按每kg浆液加入10万国际单位(比活力)木瓜酶的比例，加入50万国际单位(比活力)木瓜酶，搅匀后，维持pH3.0～4.0、45℃～50℃的条件水解8小时。用18％(w％)Na0H将木瓜酶水解浆液调pH至9.0～9.5，按每kg浆液加入4万国际单位(比活力)胰酶的比例，加入20万国际单位(比活力)胰酶，搅匀后，维持在pH 9.0～9.5、45℃～50℃水解3.5小时，酶解结束后加热升温至100℃，保温15分钟进行酶灭活，降温至30℃以下。用30％(w％)柠檬酸调pH6.0～6.5，离心，抽滤，得上清液36.0kg，上清液加入95％(v/v)的酒精至醇浓度为70％，静置过夜进行醇沉。离心，过滤，取沉淀，沉淀分别用95％(v/v)乙醇和丙酮洗2次，抽干，置真空干燥箱中干燥，即得香蕉多糖粗品268.34g。香蕉多糖粗品加6.0L水搅拌溶解，离心，过滤，收集滤液得5.7kg；用18％NaOH调pH至6.8～7.0，备用。用注射用水将DEAE调成糊状，采用淤浆式法装柱，装柱压力0.5Mpa。装柱后先用400mmol/L pH6.8磷酸盐缓冲液清洗，再用20mmol/L pH6.8磷酸盐缓冲液平衡，将上述滤液上DEAE层析柱进行吸附，用20mmol/L pH6.8磷酸盐缓冲液洗脱。收集目标物得8.9kg，用对分子截留为100K的滤膜进行超滤，收集截留液得7.0kg，离心，过滤，加入95％的酒精至醇浓度为70％，静置过夜进行醇沉。离心，过滤，取沉淀，沉淀分别用95％乙醇和丙酮洗2次，抽干，置真空干燥箱中干燥，即得香蕉多糖精品20.21g。取样进行含量测定，分子量测定等检测，备用。
检验结果：
1.多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
2.多糖含量：99.26％(用苯酚-硫酸法测定)
3.多糖分子量测定：43109道尔顿(参考2005年药典二部附录VH)。
Claims (11)
1.一种香蕉多糖的制备方法，该方法依次由下述过程组成：
(1)将香蕉洗干净、切段、用pH为3.0～4.5的酸溶液浸泡处理，再用90℃～100℃热水热烫数分钟，冷却、打浆备用；
(2)取备用浆液，加水加热至90℃以上进行提取两次，每次加入香蕉肉重量的3～4倍水进行提取，收集提取液，降温到室温，用酸调pH值至3.0～4.0，加入木瓜酶，搅匀后，维持pH值在3.0～4.0，45℃～50℃的条件水解；
(3)用碱将水解后的提取液调pH值至9.0～9.5，加入胰酶，搅匀后，维持pH值在9.0～9.5，45℃～50℃的条件水解，酶解结束后加热进行酶灭活，降温至室温；
(4)用酸调pH至6.0～6.5，过滤，收集滤液；滤液进行醇沉，静置过夜；
(5)将步骤(4)中醇沉后的溶液过滤，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤，真空干燥，即得香蕉多糖粗品；
(6)取香蕉多糖粗品，加水搅拌进行溶解，离心，过滤，取滤过液；
(7)将滤过液用DEAE层析柱进行层析分离；
(8)收集层析分离后的目标物，用超滤膜进行超滤，收集截留液；
(9)截留液再次进行醇沉，静置过夜；
(10)将步骤(9)中醇沉后的溶液进行离心，过滤，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤，进行真空干燥，即得香蕉多糖精品。
2.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的香蕉为整个香蕉果实，包括果肉和果皮。
3.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的调pH值用的碱为氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠或氨水。
4.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的调pH值用的酸为盐酸、磷酸、柠檬酸或硫酸。
5.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(2)中水解时间为450～500分钟。
6.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)中水解时间为200～250分钟。
7.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(4)中过滤过程包括：先用滤布进行粗过滤，再用高速冷冻离心机进行离心，再进行抽滤。
8.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(5)中的过滤过程为：用高速冷冻离心机离心，倒出上清液，收集沉淀至容器中，分别用95％的乙醇和丙酮洗涤，用抽滤器抽干。
9.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(4)、(9)中醇沉用的乙醇浓度为40％～95％。
10.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的步骤(7)中层析用磷酸盐缓冲液为10～30mmol/L，pH5.8～6.8磷酸盐缓冲液进行洗脱。
11.根据权利要求1所述的香蕉多糖的制备方法，其特征在于：所述的超滤采用分子截留为5～100KD的超滤膜。
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Effective date of registration: 20091218 Address after: North Building No. 3 Hainan province Haikou DeMax Rhine Wenhua Road, room 702, post encoding: 570203 Applicant after: Hainan Yietai Bio-Engineering Co., Ltd. Address before: Xinhai town Xixiu Xiuying District village of Hainan Province, Haikou City, No. 053 post encoding: 570312 Applicant before: Wu Zengli |
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Effective date of registration: 20100414 Address after: 570000 Hainan city in Haikou Province, the national science and technology road high tech Zone Yuke Building Room 518 Applicant after: Hainan Stand Bio-Technology Co., Ltd. Address before: No. 3 North Rhine 570203 Hainan city of Haikou Province Yu Wenhua Road Room 702 Applicant before: Hainan Yietai Bio-Engineering Co., Ltd. |
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Denomination of invention: Preparation method of banana polysaccharide Effective date of registration: 20171122 Granted publication date: 20100609 Pledgee: Wenchang Hainan rural commercial bank Limited by Share Ltd Pledgor: Hainan standard biological Polytron Technologies Inc Registration number: 2017460000010 |
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