CN101209284A

CN101209284A - 从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

Info

Publication number: CN101209284A
Application number: CNA2007100601272A
Authority: CN
Inventors: 李淑芬; 贾冬冬; 杨鸿玲; 林江博; 田松江
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2007-12-24
Filing date: 2007-12-24
Publication date: 2008-07-02

Abstract

本发明涉及一种以桑叶为原料连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法。包括以下步骤：选用溶剂为20％～90％的乙醇或10％～90％的丙酮回流提取，得到滤液和滤渣；滤液浓缩、加水溶解后，通过大孔树脂分离得含量为30％～50％的黄酮类化合物；经过大孔树脂后的溶液，再通过离子交换树脂分离得含量为40％～60％的生物碱类化合物；桑叶滤渣，用水煎煮并脱色，10％～60％醇沉，得含量为55％～85％的酸性多糖类化合物。本发明通过一次投料连续高效地分离了桑叶中生物碱、黄酮及多糖三种生物活性成分，各步骤互不干扰且提取率高，工艺操作简单，成本低，利于工业推广和应用。

Description

从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

技术领域

本发明涉及一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，属于从天然产物中提取生物活性成分的技术。

背景技术

桑叶异名铁扇子，为桑科植物桑(Morus alba.L)的叶，味苦，甘、寒，分布于全国大部分地区。现代药理研究证明桑叶可抑制血糖升高，可预防和治疗糖尿病。此外，桑叶还具有祛风清热、凉血明目的功效，药性平和且无毒副作用，已经被国家***正式归入“既是食品又是药品”之列。

桑叶中含有多种活性成分，包括生物碱、多糖、黄酮、多酚、氨基酸以及多种微量元素，其中最主要的活性成分为生物碱、多糖及黄酮。Asano N从桑叶中分离鉴定出11种生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(DNJ)在桑叶中的含量达0.1％，远高于其他植物，是α-葡萄糖苷酶最有效的抑制剂之一，具有很强的降血糖作用。桑叶总多糖也是桑叶中的主要活性成分，对四氧嘧啶糖尿病小鼠有显著的降血糖作用。桑叶中总黄酮含量约占桑叶干重的1.0％～3.0％，主要含有芦丁、异槲皮苷，槲皮素-3-三葡萄糖苷及紫云英苷等，具有抗氧化、抑制血清脂质增加以及抑制动脉粥样硬化形成等作用。有研究表明，桑叶黄酮也具有降血糖作用，且将黄酮与DNJ结合，比单独的DNJ更能有效地抑制血糖的上升。且因此提取分离和纯化桑叶中的生物碱、多糖以及黄酮类活性有效部位，制成中成药或功能保健食品均具有广阔的前景。

目前关于桑叶中活性有效部位的分离方面已有一些相关专利，如国内专利号03101988.9“一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法”，公开了一种桑叶中的生物碱的制备方法；专利号200510012388.8“一种桑叶黄酮提取方法”，公开了一种分离桑叶中的黄酮的方法；专利号01129976.2“一种桑叶多糖产品及其用途”，公开了一种多糖的提取工艺；专利号200610038713.2“桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法”公开了一种分离桑叶中的生物碱和多糖的方法。但是这些专利仅能分离出一种或两种有效成分，其它有效成分则在纯化过程中不得不被作为杂质除去，不仅造成了很大的资源浪费，产品成本也较高。而且现有的专利均以水为溶剂提取桑叶中的生物碱，而我们的研究实验表明，水对生物碱的提取率低于一定浓度溶剂的提取率，而且水提液中成分复杂，给后续的分离带来了困难。另外，目前对提取的桑叶多糖一般概念笼统，对其结构和类别的分析还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，该方法过程简单，提取物中生物碱、黄酮和多糖含量高。

本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，其特征在于包括以下过程：

1)按干燥桑叶重量与溶液的体积比为1∶10～15，将粉碎后的干燥桑叶浸泡于体积浓度为20％～90％的乙醇溶液，或浸泡于体积浓度为10％～90％的丙酮溶液，在95℃条件下回流提取3次，每次提取30min，将提取液混合并减压过滤，得到滤液和滤渣。

2)将步骤1)所得滤液经减压蒸发除去乙醇，然后按干燥桑叶重量与去离子水的体积比为1∶10～15加入去离子水，静置2h，离心分离。上清液通过大孔树脂X-5、D101、D4020、或H103，在20～30℃吸附，首先用离子水洗脱大孔树脂，然后用乙醇或丙酮溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，洗脱液经减压蒸发去除乙醇或者丙酮，得到质量含量为30％～50％的黄酮类化合物，黄酮的主要成分是芦丁和异槲皮苷。

3)流经过大孔树脂后的溶液，通过型号为001×7、001×4或001×7×7的阳离子交换树脂在20～30℃吸附5～10h，先用去离子水冲洗树脂，再以氨水洗脱树脂得到洗脱液，洗脱液浓缩至无氨水残留，再通过型号为201×7、D201或201×4的阴离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱阴离子交换树脂得洗脱液，洗脱液经减压蒸发，得到质量含量为40％～60％的生物碱化合物，生物碱的主要成分是1-脱氧野尻霉素(DNJ)。

4)将步骤1)中得到的桑叶滤渣用10～15倍体积的去离子水在60～90℃下煎煮两次，减压过滤，收集滤液，滤液经过活性炭脱色，脱色后的滤液减压浓缩至提取液体积的1/5～1/10，之后向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇体积浓度为10％～60％，静置10～15h，离心分离得沉淀物。再依次用无水乙醇、丙酮以及***洗涤沉淀物，得到质量含量为55％～85％的多糖类化合物，该多糖化合物主要成分为酸性多糖，其分子量500,000～550,000Da。

本发明的优点在于，选用的20％～90％的乙醇或10％～90％的丙酮溶液对桑叶中的生物碱和黄酮具有很好的浸取能力，而对桑叶中多糖浸取能力差，另外，过程中所采用的大孔树脂对黄酮有较强的吸附能力，但对生物碱吸附能力较差，因此过程中能连续地将桑叶中的生物碱、黄酮和多糖分离，且分离速率快，产物中成分含量高。

附图说明

图1为本发明实施例2所提取的黄酮的液相色谱图，图中峰1为芦丁成分，峰2为异槲皮苷成分。

图2为本发明实施例2所提取的生物碱的液相色谱图，图中峰1为1-脱氧野尻霉素成分。

图3为本发明实施例2所提取多糖的HP-GPC图，图中峰1为多糖成分。

具体实施方式

例1

将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的30％乙醇水溶液，在95℃条件下回流提取，重复提取3次，每次30min，三次得到的提取液分别为2.9L、3.7L、4.1L，合并提取液，过滤。滤渣晾干备用，将所得滤液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入2L去离子水将其溶解，静置2h，离心分离。上清液通过200g D4020大孔树脂，在25℃条件下吸附5h。然后先用2L去离子水冲洗大孔树脂，再用1L的60％的乙醇水溶液洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱液，减压蒸干洗脱液，得到浸膏6.3g，其中总黄酮的质量含量为31％。

流经大孔树脂后的溶液，通过50g的001×4阳离子交换树脂在25℃下吸附5h，先用500ml去离子水冲洗树脂，再以150ml氨水洗脱树脂得洗脱液，将洗脱液浓缩至30ml，浓缩后得洗脱液再通过201×4阴离子交换树脂(50g)，并用500ml去离子水洗脱阴离子交换树脂，洗脱液经减压蒸发，得浸膏1.3g，其中生物碱DNJ的质量含量为43.0％。

以上述提取完生物碱及黄酮后的桑叶滤渣为原料，加入3L去离子水，放入70℃恒温水浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为1.8L和2.7L，合并提取液并过滤，调节滤液pH3.0，滤液经200g活性炭脱色后浓缩至500ml，然后在浓缩后的提取液中加入乙醇，调节乙醇体积浓度为40％，静置12h，离心分离得沉淀。依次采用无水乙醇、丙酮以及***洗涤沉淀物，得桑叶总多糖沉淀6.2g，其中中性多糖含量21％，酸性多糖含量为51.3％。

例2

将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的70％乙醇水溶液，在95℃回流提取3次，每次30min，得到三次的提取液分别为2.8L、3.3L、3.8L，合并提取液并过滤，滤渣晾干备用，将所得滤液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入4L蒸馏水，静置2h，离心分离。上清液通过200g的H-103大孔树脂，在30℃条件下吸附。然后先用2L去离子水冲洗大孔树脂，再用1L的60％的丙酮水溶液洗脱大孔树脂，减压蒸干洗脱液，得到浸膏7.6g，其中总黄酮的质量含量为36％。

流经大孔树脂后的溶液，通过60g的001×7阳离子交换树脂在25℃下吸附5h，先用600ml去离子水冲洗树脂，再以300ml氨水洗脱树脂得洗脱液，将洗脱液浓缩至50ml，浓缩后得洗脱液再通过201×7阴离子交换树脂(80g)吸附，并用500ml去离子水洗脱阴离子交换树脂，减压蒸干洗脱液，得浸膏1.0g，其中生物碱DNJ质量含量50.2％。

以上述提取完生物碱及黄酮成分后的桑叶滤渣为原料，加入2L去离子水，放入60℃恒温水浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为1.1L和1.9L，合并提取液并过滤，调节滤液pH4.0，滤液经200g活性炭脱色后浓缩至400ml，然后在浓缩后的提取液中加入乙醇，调节乙醇体积浓度为60％，静置12h，离心分离得沉淀。依次用无水乙醇、丙酮以及***洗涤沉淀物，得桑叶总多糖沉淀7.1g，其中中性多糖含量15％，酸性多糖含量为56.8％。

例3

将粉碎后的桑叶原料400g加入4L的30％乙醇水溶液，95℃回流提取3次，每次30min，得到三次的提取液分别为2.8L、3.5L、4.2L，合并提取液并过滤，滤渣晾干备用，将所得滤液中乙醇蒸干得浸膏，然后在浸膏中加入4L蒸馏水，静置2h，离心分离。上清液通过200g的D101大孔树脂，在28℃下吸附。然后先用2L去离子水冲洗大孔树脂，再用1L的60％的丙酮水溶液洗脱大孔树脂，将得到的洗脱液减压蒸干，得到浸膏6.5g，其中总黄酮的质量含量为37％。

流经大孔树脂后的溶液，通过80g的001×7×7阳离子交换树脂在25℃下吸附5h，先用800ml去离子水冲洗树脂，再以200ml氨水洗脱树脂，收集氨水洗脱液并浓缩至50ml，浓缩后的洗脱液再过D201阴离子交换树脂(100g)吸附，并用1L去离子水洗脱阴离子交换树脂，减压蒸干洗脱液，得浸膏1.2g，其中生物碱DNJ的质量含量为40.3％。

以上述提取完生物碱及黄酮成分后的桑叶滤渣为原料，加入2L去离子水，放入80℃恒温水浴中，浸提1.5h，提取2次，两次提取液分别为1.1L和1.9L，合并提取液并过滤，调节滤液pH2.0，滤液经300g活性炭脱色后浓缩至500ml，然后在浓缩后的提取液中加入乙醇，调节乙醇体积浓度为15％，静置12h，离心分离得沉淀。依次用无水乙醇、丙酮以及***洗涤沉淀物，得桑叶总多糖沉淀7.0g，其中中性多糖含量25％，酸性多糖含量为59.2％。

Claims

1.一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，其特征在于包括以下过程：

1)按干燥桑叶重量与溶液的体积比为1∶10～15，将粉碎后的干燥桑叶浸泡于体积浓度为20％～90％的乙醇溶液，或浸泡于体积浓度为10％～90％的丙酮溶液，在95℃条件下回流提取3次，每次提取30min，将提取液混合并减压过滤，得到滤液和滤渣；

2)将步骤1)所得滤液经减压蒸发除去乙醇，然后按干燥桑叶重量与去离子水的体积比为1∶10～15加入去离子水，静置2小时，离心分离，上清液通过大孔树脂D4020或H103在20～30℃吸附，首先用离子水洗脱大孔树脂，然后用乙醇或丙酮溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，洗脱液经减压蒸发去除乙醇或者丙酮，得到黄酮类化合物浸膏；

3)流经过大孔树脂后的溶液，通过型号为001×7或001×7×7的阳离子交换树脂在20～30℃吸附5～10小时，先用去离子水冲洗树脂，再以氨水洗脱树脂得到洗脱液，所得洗脱液浓缩到无氨水残留，浓缩后的洗脱液再通过型号为201×7或201×4的阴离子交换树脂吸附，再用去离子水洗脱阴离子交换树脂得洗脱液，洗脱液经减压蒸发，得到生物碱化合物浸膏；

4)将步骤1)中得到的桑叶滤渣用3倍体积的去离子水在60～80℃下煎煮两次，减压过滤，收集滤液，滤液经过活性炭脱色，脱色后的滤液减压浓缩至提取液体积的1/5～1/10，之后向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇体积浓度为10％～60％，静置10～15小时，离心分离得沉淀物，再依次用无水乙醇、丙酮以及***洗涤沉淀物，得到质多糖类化合物。