CN101181317B - 马齿苋提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，是以中药马齿苋为原料制备的一种提取物和提取方法，以及将该提取物用于制备抗缺氧、抗疲劳、抗应激的药物及食品。常用的马齿苋提取物是采用水或醇提取后取上清液，离心产生的沉淀被作为无效成分丢弃。本发明经研究发现马齿苋水或醇提液适当浓缩后，离心产生的沉淀物反而具有显著的抗缺氧、抗疲劳、抗应激作用。本发明提供了一种新的马齿苋提取物的制备方法，该方法制得的马齿苋提取物经实验证明其具有较好的抗缺氧、抗疲劳、抗应激作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及以中药马齿苋为原料制备的一种提取物及提取方法，以及将该提取物用于制备抗缺氧、抗疲劳、抗应激的药物及食品。
背景技术
马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科植物，又名马齿草、五行草、长命菜、九头狮子草、酸味菜等，广布于全球温带和热带地区，为药食两用植物。中药马齿苋以其地上部分入药，其味酸、性寒，具有清热解毒、凉血消肿之功效，可用来治疗腹泻、痢疾、***等。现代药理研究表明马齿苋具有抗菌、降血脂、抗衰老、抗氧化、松弛肌肉、抗炎、镇痛以及促进伤口愈合等作用。但是如果采用马齿苋原药材或总提物入药，存在用药量过大，服用不便，难于接受的问题，应用受到严重制约。目前，基于新药和保健食品的研发目的，为制备工业上可接受的中药提取物，在先期研究中，就一般情况而言多采用以下方法制备提取物供药理筛选：①采用水提醇沉方法；②药材水或醇提液适当浓缩后，采用***溶剂分段萃取；③药材水或醇提液适当浓缩后，离心，沉淀物弃掉，上清液过大孔树脂吸附分段。④药材水或醇提液适当浓缩后，离心，沉淀物弃掉，将上清液进行后续处理。如中国专利200410016122.6，公开了一种马齿苋提取物及其抗缺氧用途，该马齿苋提取物就是采用水提取后取上清液，离心产生的沉淀被作为无效成分丢弃。目前尚无对马齿苋提取物过程中离心后产生的沉淀进行化学成分和药理研究的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以中药马齿苋为原料制备的提取物，及其提取方法，以及将该提取物在制备抗缺氧、抗疲劳、抗应激的药物及食品中的应用。
申请人在进行马齿苋抗缺氧、抗疲劳、抗应激研究过程中，也采用背景技术中①-④的方法制备了多种马齿苋提取物，经反复研究表明，这些提取物药理作用并不理想。而马齿苋药材的水或醇提液适当浓缩后，离心产生的沉淀物反而具有显著的抗缺氧、抗疲劳、抗应激作用，这种结果大大出乎意料。据此，我们对此沉淀物药理作用、工艺条件、质量标准进行了反复研究、优化，形成了本发明所述的马齿苋提取物的制备工艺。
一种马齿苋提取物的制备方法，包括如下步骤：
(A)制备提取液
将马齿苋粗粉以水或各种浓度的乙醇或甲醇水溶液作为提取溶剂提取，合并，过滤，即得提取液。
本步骤制备提取液所用的溶剂可以为水或各种浓度的乙醇或甲醇水溶液，优选50％-95％乙醇或甲醇水溶液，最优选80％乙醇或甲醇水溶液。当然，考虑到可能的有机溶剂残留、生产中的安全因素以及生产成本因素，乙醇水溶液更为常用。
提取方式可以选择常规热回流提取、渗漉提取或浸泡提取，以及其他药学上可接受的提取方式。如热回流提取可以选择10倍、8倍、8倍，1.5小时、1小时、1小时，也可选择其他可接受的提取溶剂用量、提取次数、提取时间。渗漉提取、浸泡提取可以选择5-100倍溶剂，选用过多或过少的溶剂，尽管也可部分或全部实现本专利所述的提取物，但并不能对本发明构成实质性改变。
(B)浓缩
将上述提取液减压回收至无醇味，即得浓缩液。浓缩方式可以采用40-100℃减压浓缩、烘干浓缩以及其他药学上可接受的浓缩方式。当然顾及到过高的温度可能对提取物中化学成分稳定性造成影响，选用50-75℃温度浓缩更为可行。
(C)沉淀
将上述浓缩液放冷，析出沉淀，分取沉淀。沉淀方式可以采用过滤、离心及其他可接受的沉淀、分取方法。譬如可采用5000rpm，1-5分钟，离心，分取沉淀。
在本步骤若调整浓缩液的pH值为7-11，譬如采用10％NaOH溶液调整pH值为7.6，可以进一步降低提取物得率，而提取物本身药理作用无显著改变。
(D)干燥、粉碎
将上述沉淀干燥、粉碎，即得提取物。
干燥方式可以50-100℃常压烘干、真空干燥及其他可接受的干燥方式。粉碎方式可以采用球磨机、冲击式粉碎机、流能磨粉碎以及其他可接受的粉碎方式。如将喷雾干燥、冷冻干燥技术用于本步骤，可同时实现烘干、粉碎，应用更为方便。
本专利所述提取物经采用化学成分检定、***化学成分分离、鉴定、以及GC-MS方法进行化学成分分析，表明其主要含有亚麻酸、亚油酸、9，12-十八碳二烯酸乙酯、亚麻酸乙酯、4α-甲基-3β-羟基木栓烷等成分。
本发明还提供了以上述制备方法制得的马齿苋提取物。
本发明的马齿苋提取物经实验证明具有抗缺氧、抗疲劳、抗应激的作用，因而可用于制备防治抗缺氧、抗疲劳、抗应激的药物及食品。
本发明所述的提取物主要含有亚麻酸、亚油酸、9，12-十八碳二烯酸乙酯、亚麻酸乙酯、4α-甲基-3β-羟基木栓烷等低极性成分，而采用如背景技术所述方法④制备的提取液系离心后的上清液，恰恰不含或含有非常少的此类成分，申请人采用HPLC方法检测也证明了这一点。另外，本发明所述的提取物在抗缺氧、抗疲劳、抗应激等多方面的药理作用显著强于背景技术所述方法④制备的提取液。总之，本发明所述提取物的优点是显而易见的。
本发明提取物的制备方法具有工艺简便，成本低廉，安全高效，无有机溶剂残留等显著优点，完全可以作为标准提取物的制备工艺。同时，由于此提取物最大限度地去除了非药效成分，克服了马齿苋原药材或总提物直接入药而带来的用量过大、服用不便等问题。鉴于在现代自然、社会环境中，特别是在军事领域，缺氧、疲劳、受应激人群急剧扩大，因而此提取物具有广阔的应用前景，潜在的社会和经济效益巨大。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明的实施并不仅限于此。
实施例1制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，以80％乙醇，10倍、8倍、8倍，1.5小时、1小时、1小时，回流提取，提取液趁热过滤，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为1g(生药)/ml，以10％NaOH溶液调整pH值为7.6，5000rpm，1分钟，离心，分取沉淀，60℃真空干燥8h，粉碎，得提取物20.90g。采用HPLC方法进行检测：岛津LC-20AD高效液相色谱仪(配有四元梯度***，DAD检测器)，流动相：甲醇-乙腈-0.5％磷酸水溶液(66％∶22％∶12％)，柱温：26℃；检测波长：210nm；流速：1.10 ml/min，结果表明本发明提取物的中亚麻酸和亚油酸的含量分别为1.25％和0.82％。
实施例2制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，以水作为提取溶剂，其余同实施例1，得提取物31.64g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为0.96％和0.26％。
实施例3制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，浓缩液不调pH值，其余同实施例1，得提取物42.54g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为2.79％和1.27％。
实施例4制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，以95％乙醇作为提取溶剂，其余同实施例1，得提取物18.64g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为2.83％和1.32％。
实施例5制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，以80％甲醇作为提取溶剂，其余同实施例1，得提取物22.51g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为1.31％和0.79％。
实施例6制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，以30倍的80％乙醇作为提取溶剂，渗漉提取，其余同实施例1，得提取物17.54g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为1.63％和1.02％。
实施例7制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，采用喷雾干燥，其余同实施例1，得提取物18.26g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为1.31％和0.91％。
实施例8制备马齿苋提取物
马齿苋药材粗粉1kg，采用冷冻干燥，其余同实施例1，得提取物19.52g，亚麻酸和亚油酸的含量分别为1.19％和0.72％。
实施例9马齿苋提取物的药理实验
1、耐缺氧实验
选取体重18～22g健康昆明种小鼠，随机分5组，每组10只，雌雄各半。实施例1制备的马齿苋提取物分别以0.5％CMC-Na配制为1g/ml、2g/ml、4g/ml(生药浓度)混悬液。人参茎叶总皂苷以0.5％CMC-Na配制为10mg/ml混悬液。各组动物连续灌胃给药一周，给药体积0.5ml，空白对照组给予等体积空白混悬剂。各组动物于末次给药后放入盛有10g钠石灰的200ml广口瓶内，每瓶1只，用凡士林涂抹瓶口，盖严使之不漏气，外用保鲜膜再次封住瓶口，从瓶盖封严即刻计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠因缺氧而窒息性死亡的时间。结果见表1。结果表明马齿苋提取物低、中、高剂量组都具有显著的抗缺氧作用。
表1 马齿苋提取物耐缺氧实验结果
| 组别 | 动物数(只) | 剂量 | 耐缺氧时间(min) |
| 空白对照组人参茎叶总皂苷组马齿苋提取物低剂量组马齿苋提取物中剂量组马齿苋提取物高剂量组 | 1010101010 | -10mg/只0.5g/只1g/只2g/只 | 43.4±5.255.6±6.5*52.7±6.8*56.8±7.9*63.4±9.3* |
注：与空白对照组比*P＜0.05
2、抗疲劳实验
实验分组及给药方法同上，末次给药1h后，在小鼠尾部加10％体重的负荷，放置于水温(30±2)℃，水深为25cm的水槽内，各组动物的存活时间以小鼠沉到水底6s内不再游出水面为止，记录小鼠游泳时间。结果见表2。结果表明马齿苋提取物低、中、高剂量组都具有显著的抗疲劳作用。
表2 马齿苋提取物抗疲劳实验结果
| 组别 | 动物数(只) | 剂量 | 存活时间(min) |
| 空白对照组人参茎叶总皂苷组马齿苋提取物低剂量组马齿苋提取物中剂量组马齿苋提取物高剂量组 | 1010101010 | -10mg/只0.5g/只1g/只2g/只 | 25.2±3.332.8±4.8*28.3±2.7*36.4±4.9*39.8±4.1* |
注：与空白对照组比*P＜0.05
3、抗高温应激实验
实验分组及给药方法同上，末次给药后1h，分别将各组小鼠(单只放入鼠笼内)置于烘箱中(调至45℃)，观察记录各组小鼠的存活时间。结果见表3。结果表明马齿苋提取物中、高剂量组都具有显著的抗高温应激作用。
表3 马齿苋提取物抗高温应激实验结果
| 组别 | 动物数(只) | 剂量 | 存活时间(min) |
| 空白对照组人参茎叶总皂苷组马齿苋提取物低剂量组马齿苋提取物中剂量组马齿苋提取物高剂量组 | 1010101010 | -10mg/只0.5g/只1g/只2g/只 | 14.6±2.715.9±3.8*13.8±1.716.5±3.9*20.7±2.1* |
注：与空白对照组比*P＜0.05
4、抗低温应激实验
实验分组及给药方法同上，末次给药后1h，分别将各组小鼠(单只放入鼠笼内)置于低温冰箱中(调至-22℃)，观察记录各组小鼠的存活时间。结果见表4。结果表明马齿苋提取物低、中、高剂量组都具有显著的抗低温应激作用。
表4马齿苋提取物抗低温应激实验结果
| 组别 | 动物数(只) | 剂量 | 存活时间(min) |
| 空白对照组人参茎叶总皂苷组马齿苋提取物低剂量组马齿苋提取物中剂量组马齿苋提取物高剂量组 | 1010101010 | -10mg/只0.5g/只1g/只2g/只 | 65.1±5.774.4±7.8*71.9±9.780.3±8.9*76.2±8.0* |
注：与空白对照组比*P＜0.05
Claims (8)
1.一种马齿苋提取物的制备方法，包括如下步骤：
(A)制备提取液
将马齿苋药材用50％～95％乙醇或甲醇水溶液作为提取溶剂提取，得提取液；
(B)浓缩
将上述提取液减压回收至无醇味，得浓缩液，调整浓缩液的pH值为7-11；
(C)沉淀
将上述浓缩液放冷，分取沉淀；
(D)干燥、粉碎
将上述沉淀干燥，粉碎，得提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于(A)步骤中选用的提取溶剂为70％～95％乙醇或甲醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于(A)步骤中选用的提取溶剂为80％乙醇或甲醇水溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于(C)步骤中分取沉淀的方法为过滤或离心。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于(C)步骤中分取沉淀的方法为5000rpm离心，1-5分钟。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于(D)步骤中的干燥方法为常压烘干、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥中的任一或两种或多种的组合方法。
7.权利要求1至6任一项权利要求所述方法制备的马齿苋提取物。
8.权利要求7所述的马齿苋提取物在制备抗缺氧、抗疲劳、抗应激药物及食品中的应用。
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