CN101173888B - 尿中粒子分析仪及其分析方法 - Google Patents
尿中粒子分析仪及其分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101173888B CN101173888B CN2007101020958A CN200710102095A CN101173888B CN 101173888 B CN101173888 B CN 101173888B CN 2007101020958 A CN2007101020958 A CN 2007101020958A CN 200710102095 A CN200710102095 A CN 200710102095A CN 101173888 B CN101173888 B CN 101173888B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- urine
- particle
- bacterium
- equilibrium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 166
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 137
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 99
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 52
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 22
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 20
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 18
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 3
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 claims description 2
- 208000006750 hematuria Diseases 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 18
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 15
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 11
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 9
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 4
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 4
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 3
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010205 computational analysis Methods 0.000 description 2
- KPHWPUGNDIVLNH-UHFFFAOYSA-M diclofenac sodium Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl KPHWPUGNDIVLNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 210000000682 transitional epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical group C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001990 heterocyst Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000012771 pancakes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001316 polygonal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 238000009603 uroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
- G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/493—Physical analysis of biological material of liquid biological material urine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
- G01N2015/016—White blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N2015/1493—Particle size
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/11—Automated chemical analysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/11—Automated chemical analysis
- Y10T436/113332—Automated chemical analysis with conveyance of sample along a test line in a container or rack
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/11—Automated chemical analysis
- Y10T436/113332—Automated chemical analysis with conveyance of sample along a test line in a container or rack
- Y10T436/114998—Automated chemical analysis with conveyance of sample along a test line in a container or rack with treatment or replacement of aspirator element [e.g., cleaning, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/11—Automated chemical analysis
- Y10T436/117497—Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/12—Condition responsive control
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明涉及一种尿中粒子分析仪。其包括用尿液标本、第一染色剂和第二染色剂制备试样的制样***;包括光源、采集该试样产生的散射光的采集器和采集该试样产生的荧光的荧光采集器的光学检测***;根据从上述散射光和荧光信号测定至少含红细胞的尿中粒子的第一测定***;及根据散射光和荧光信号测定尿中细菌的第二测定***。本发明还提供一种尿中粒子分析方法,包括:制样步骤,用尿液标本、第一染色剂和第二染色剂制备试样;光检步骤,用光束照射上述制备的试样,检测该试样产生的散射光和荧光信号;第一测定步骤,根据上述检测出的散射光和荧光信号测定至少含红细胞的尿中粒子;及第二测定步骤,根据上述检测出的散射光和荧光信号测定尿中细菌。
Description
技术领域:
本发明涉及尿中粒子分析仪及其方法。具体而言,涉及应用流式细胞术从光学角度测定、分析尿中所含成份的尿中粒子分析仪及其方法。
背景技术:
尿中粒子的一般测定项目有红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及细菌,但其中所谓管型是指Tomm-Horsfall粘蛋白在少量血浆蛋白(白朊)存在的环境下在肾小管内凝集,以此为基质,血液细胞和肾小管上皮细胞等包含其中形成的圆柱状物。管型有的大小可达数十μm以上,从其形状上又被称为圆柱体尿(cylinder),由于以肾小管为铸模而形成,故被称为管型(cast)(管型的存在意味着肾小管曾被一时性堵塞,是暗示肾实质有病理性变化的重要依据,特别是血液细胞和上皮管型等包入其中的管型很有临床意义)。
上皮细胞由偏平上皮细胞和移行上皮细胞组成。偏平上皮细胞是圆形或多角形的极薄的细胞,是尿道部分剥离而形成。而移行上皮细胞则有梨形和纺织形等多种形状,是构成肾盂、尿道膀胱甚至内尿道口的细胞。大小从数十μm到表层型100μm以上不等。
红细胞的测定对判断肾小球到尿道有无出血十分重要,特别是肾泌尿***疾病、出血性疾病、白血病等患者的尿液中多见。红细胞大小一般为8μm左右,两面呈凹形圆盘状,但在尿中往往被破坏。特别是来源于肾小球的红细胞都变形,大小也变小。被破坏的红细胞溶血、有析出物。
白细胞多见于肾、尿道感染症、肾结核等患者的尿液中。因此,通过测定尿中白细胞可以早期发现炎症和感染症。白细胞大小为6~14μm。测定细菌是调查有无感染的检查。该细菌有球菌和杆菌。球菌是0.5~2μm左右的球形菌,杆菌是长径为2~10μm左右的菌。球菌增殖则形成单列排列呈念珠状的连锁型和不规则排列呈葡萄房状的葡萄型等集块。
一直以来,尿中粒子的分析一般在检查室主要用显微镜目测。这种方法首先离心分离尿液,对其浓缩,视情况染色后,将其沉渣置于显微镜载玻片上,在显微镜下进行分类和计数。这种镜检首先是在100倍的低倍率视野(LPF)中把握尿中有无粒子和尿液标本的状态,再在400倍的高倍率视野(HPF)进行成份分类。检测项目中,管型即使出现,个数也很少,但其检出在临床上非常有用,因此,以低倍率视野(LPF)寻找。其他粒子以高倍率视野(HPF)分类,红细胞和白细胞个数以高倍率视野(HPF)报告。这种尿中粒子检查具备定性检查(比如:关于细菌“++”)、定量检查(比如:关于红细胞“5个/HPF”)和形态检查(比如:关于红细胞“确认存在异形细胞”)三个要素。
作为尿中粒子检查的自动化发明了自动显微镜装置。流式自动显微镜分析装置使用UA-2000(SYSMEX公司制),这种装置不必浓缩尿液标本即可将尿液标本流入扁平形流动池,拍摄在流动池流动的状态并存储下来。存储的影像以粒子大小区分,用户根据该影像对各种粒子进行分类。
近年,在这种自动显微镜方式的基础上又提出了自动分类粒子的装置,但是尿中粒子形态多种多样,被破坏的粒子也很多,高精度地分类影像有困难。特别是小型粒子红细胞(尤其红细胞碎片)、细菌和结晶精确分类很难,使用户不得不再分类。
作为检查尿中粒子的自动分类装置,有应用流式细胞仪的全自动尿有形成份分析装置UF-100(SYSMEX公司生产)。此装置用染色剂对尿中粒子 染色,结合散射光信号和荧光信号,对红细胞、白细胞、上皮细胞、管型和细菌进行分类。分类试剂由使用对各种粒子的膜和核进行染色的色素和保持尿中粒子形态的组分构成(比如参照专利公开平成8-170960号公报)。如上所述,尿中粒子形态多样,被破坏的粒子也很多,仅靠将流式细胞仪测得的散射光信号强度和荧光信号强度组合起来很难精确分类。于是,通过将散射光信号的强度和脉冲幅度、荧光信号强度和脉冲幅度组合起来分别对尿中粒子进行分类(如可参照美国专利No.5,325,168)。这种采用流式细胞仪的尿中粒子测定装置想尽办法提供尿中粒子的分类和形态报告。比如,通过对红细胞散射光信号的分析,提供尿中红细胞来源(来源于肾小球或非肾小球)的信息(如可参照美国专利No.6,118,522)。用此装置可以自动分类尿中粒子,对尿液检查的自动化作出了巨大贡献。
有些标本即使用如此想尽办法分析散射光信号和荧光信号的装置也会妨碍高精度的测定。其原因之一是有的标本细菌难以分类。细菌非常微小,而形态却各式各样。比如,有的标本只出现小型细菌即非集块状的球菌。上述装置对大型粒子(管型、上皮细胞)、中型粒子(白细胞、红细胞)、小型粒子(细菌)均可一次测定,因为要测定数十μm的大型粒子,就很难连1μm以下的细菌都测出。尿中粒子检查中的细菌测定是调查是否出现了足以能用镜检确认的量,一般是检查有无约104/ml以上的细菌。如果细菌浓度在104/ml以上,则多为球菌增殖形成块状,通常,能够满足尿中粒子检查的要求。然而,有时会放过小型球菌未形成块状的标本。
相反,在大型细菌即集块变大的球菌和大型杆菌出现的标本中,有时细菌的出现区域会扩大,甚至扩大进红细胞和白细胞出现区域。即使没有扩大到红细胞和白细胞出现区域,也会与粘液丝、酵母样真菌和***重叠,得出错误的细菌测定结果。
另一方面,尿的细菌检查根据临床目的也要求更高灵敏度的检查。但是,用显微镜的目测检查很难检出数量少的细菌特别是小型细菌,没有用于高灵敏度的检查。在这种情况下,培养试样检测细菌的培养检查与尿中粒子检查分开,另行在细菌检验室进行。培养检查需要培养天数,因此,人们呼唤不培养即可进行高灵敏度细菌检查。
于是,用流式细胞仪分析细菌、即用染色剂对细菌染色、用散射光信号和荧光信号测定细菌的方法应运而生。比如,欧洲专利申请公告No.EP1136563和美国专利申请公告No.US2002/0076743记载的方法是用含阳离子型表面活性剂的染色剂以便溶解细菌外的杂质,即使试样含有和细菌同样大小的杂质也能精确测定。
发明内容:
本发明的范围只由后附权利要求书所规定,在任何程度上都不受这一节发明内容的陈述所限。
本发明的第一部分涉及一种尿中粒子分析仪,包括:
将尿液标本分配为第一等分和第二等分的标本分配器;在上述第一等分加入第一染色剂混合、制备第一试样的第一制样***;在上述第二等分加入第二染色剂混合、制备第二试样的第二制样***;光学检测***,包括用光照射用于分别使所述第一试样和所述第二试样在其内流动的流动池和流经所述流动池中的所述第一试样或所述第二试样的光源、采集所述第一试样或所述第二试样产生的散射光的散射光采集器和采集所述第一试样或所述第二试样产生的荧光的荧光采集器;根据从上述第一试样检测出的散射光和荧光信号测定至少含红细胞的尿中粒子的第一测定***;及根据从上述第二试样检测出的散射光和荧光信号测定尿中细菌的第二测定***。
其中进一步包括根据所述第二测定***测定结果判断细菌是否影响所述第一测定***的测定结果的分析器。
其中所述散射光采集器可采集所述试样发出的前向散射光和侧向散射光;及所述第一测定***根据前向散射光和侧向射光测定尿中粒子。
其中所述第一染色剂含有对膜染色的色素,所述第二染色剂含有染色核的色素。
其中所述第二制样***在所述第二等分中加入表面活性剂混合,制备所述第二试样。
其中上述第一测定***结束测定动作后,所述第二测定***才开始测定。
其中进一步包括将所述第一制样***温度调节为第一温度、将所述第二制样***温度调节得比上述第一温度高的第二温度的调温***。
其中所述标本分配器有定量尿液标本的定量机构;所述调温***有调节所述第一制样***温度的第一调温***和调节所述第二制样***温度的第二调温***;及定量机构、第二制样***和第二调温***从结构上其热度一致。
其中所述光源是半导体激光器。
其中上述第一染色剂和上述第二染色剂其吸收波长峰值在所述半导体激光器发光波长附近。
其中所述第二测定***只要尿中细菌浓度超过5×103个/m1,即可测定该尿液细菌。
本发明提供的一种测定尿中所含细菌和至少含红细胞的尿中粒 子的尿中粒子分析仪,包括:将尿液标本分配为第一等分和第二等分的标本分配器;第一制样***,用于在上述第一等分加入第一染色剂、制备测定至少含红细胞的尿中粒子用的第一试样;第二制样***,用于在上述第二等分加入第二染色剂、制备测定细菌用的第二试样;光学检测***,包括照射所供试样的光源、采集该试样产生的散射光的散射光采集器和采集该试样产生的荧光的荧光采集器;及调温***,用于将上述第一制样***的温度调为第一温度、将上述第二制样***的温度调到比第一温度略高的第二温度。
本发明还提供一种尿中粒子分析方法,包括:标本分配步骤,将尿液标本分配为第一等分和第二等分;在上述第一等分加入第一染色剂混合、制备第一试样的第一制样步骤和在上述第二等分加入第二染色剂混和、制备第二试样的第二制样步骤;第一光检步骤,检测上述第一试样发出的散射光和荧光;第二光检步骤,检测上述第二试样发出的散射光和荧光;;第一测定步骤,根据上述检测出的散射光和荧光信号测定至少含红细胞的尿中粒子;及第二测定步骤,根据上述检测出的散射光和荧光信号测定尿中细菌。
附图说明:
图1为本发明尿中粒子分析仪一实施方式及其附属个人电脑的斜视示意图;
图2为尿中粒子分析仪的制样***及光学检测***的功能略图;
图3为光学检测***的结构图;
图4为显示第一染色剂一例的吸收波长和吸光度关系的附图;
图5为显示第二染色剂一例的吸收波长和吸光度关系的附图;
图6为图1所示尿中粒子分析仪的整体结构框图;
图7为尿中粒子分析仪的定量机构及制样***的斜视略图;
图8为尿中粒子分析仪的定量机构及制样***的示意图;
图9为使用本发明一实施方式的尿中粒子分析仪分析尿液的步骤流程图(前半部分);
图10为使用本发明一实施方式的尿中粒子分析仪分析尿液的步骤流程图(后半部分);
图11(a)-图11(e)为在本发明一实施方式的尿中粒子分析仪获得的散射图一例的例示图;
图12为本在发明一实施方式的尿中粒子分析仪获得的细菌类的散射图一例的例示图;
图13为本在发明一实施方式的尿中粒子分析仪获得的细菌类的散射图一例的例示图。
具体实施方式:
下面根据附图,详细说明本发明尿中粒子分析仪的实施方式。图1为本发明尿中粒子分析仪一实施方式及其附属个人电脑的斜视说明图。图1中,为简单明了,部分省略了存放尿中粒子分析仪组件的机壳。
[装置的结构]
在图1中,尿中粒子分析仪U具有制备试样的制样***2、运送样品架(试管架)3的样品架台4、从试样中检测尿中粒子和细菌信息的光学检测 ***5和电路部分14。机壳侧面通过旋臂15装配操作台16,上面放置有个人电脑13。个人电脑13与尿中粒子分析仪U的电路部分14局域网连接。
图2是上述制样***2及光学检测***5的功能概要图。图中,放入试管T内的尿液(标本)被无图示的注射式泵通过吸移管17抽取,用标本分配器1注入制样***。本实施方式的制样***由制样***(第一制样***)2u和制样***(第二制样***)2b组成,标本分配器1将尿液(标本)等分定量,分配给制样***2u和制样***2b。
制样***2u的尿液等分部分与稀释液19u和染色液(染色剂)18u混合后被该染色液(染色剂)18u中所含色素染色。此染色试样成为分析红细胞、白细胞、上皮细胞和管型等较大尿中粒子(尿沉渣)的悬浮液。另一方面,制样***2b的尿液等分部分与稀释液19b和染色液(染色剂)18b混合后被该染色液(染色剂)18b中所含色素染色。此染色试样成为分析细菌的悬浮液。
如上制备的2种悬浮液(试样)中,首先制样***2u的悬浮液(第一试样)被导入光学检测***5,在鞘液流动池51中形成被鞘液包裹的细流,受激光照射。然后同样,制样***2b的悬浮液(第二试样)被导入光学检测***5,在鞘液流动池51中形成被鞘液包裹的细流,受激光照射。这种动作由后述微处理器11(控制装置)控制无图示的驱动器和电磁阀等自动进行。
图3是光学检测***5的结构示意图。图中聚光镜52将光源半导体激光器53发出的激光聚光到鞘液流动池51,聚光镜54将尿中粒子的前向散射光聚光到作为散射光采集器的发光二极管55。另一个聚光镜56将上述粒子的侧向散射光和侧向荧光聚光至分色镜57。分色镜57将侧向散射光反射到作为散射光采集器的光电倍增管58,滤出侧向荧光输送到荧光采集器光电倍增管59。这些光信号反映了尿中粒子的特征。发光二极管55、光电倍增管58和光电倍增管59将光信号转换成电信号,再分别输出前向散射光信号(FSC)、侧向散射光信号(SSC)和侧向荧光信号(SFL)。这些输出信 号被无图示的前置放大器放大后,供下一步处理。
作为光源也可以用气体激光器取代半导体激光器,但从低成本、小型化且低耗电量来说,还是采用半导体激光器为好,采用半导体激光器不仅可以降低产品成本,还可期待装置的小型化和节电化。半导体激光器中,以红色半导体激光器为宜,因为红色半导体激光器成本低、寿命长、厂家供货稳定。
图6为显示尿中粒子分析仪U的整体结构的框图。图中,尿中粒子分析仪U具有:前述标本分配器1、制样***2和光学检测***5、对经前置放大器放大的光学检测***5的输出信号进行放大和滤波处理的模拟信号处理电路6、将模拟信号电路6的输出转换为数字信号的A/D转换器7、对数字信号进行所定波形处理的数字信号处理电路8、连接数字信号处理电路8的存储器9、与模拟信号处理电路6及数字信号处理电路8连接的微处理器11和接在微处理器11上的网卡12。外部的个人电脑13(分析器)通过网卡12与尿中粒子分析仪U形成局域网连接,用此个人电脑13可以对在尿中粒子分析仪取得的数据进行分析。上述模拟信号处理电路6、A/D转换器7、数字信号处理电路8和存储器9构成了对光学检测***5输出的电信号进行信号处理的信号处理电路10。
(尿中粒子测定试剂)
关于测定这些尿中粒子的试剂,专利公告平成8-170960有详细说明。此试剂的一个实施方式是染料选择的是能对膜染色的色素,以便也能对无核的粒子染色。作为试剂,为了达到防止红细胞溶血的目的和取得稳定的荧光强度,应加入渗透压补偿剂,将浓度调整为100~600mOsm/kg,以使渗透压适于分类测定。尿中粒子的细胞膜和核(核膜)被此试剂染色。作为含可对膜染色的色素的染色剂,可以使用缩合苯衍生物,比如可使用花青系色素NK-529(商品名。林原生物化学研究所制)。此染色剂不仅染色细胞 膜,还对核膜染色。使用这种染色剂,白细胞和上皮等有核细胞细胞质(细胞膜)中的染色强度和核(核膜)中的染色强度重合,以此可以将白细胞和上皮等有核细胞与红细胞等无核尿中粒子区别开。
(细菌分析用试剂)
欧洲专利申请文件No.EP1136563对能从含有同样大小的杂质的试样中精确测定细菌的试剂有详细说明。此试剂的一个实施方式是使用能染色核酸的色素作为染料。作为含有核染色色素的染色剂比如可以使用以下结构式(化1)中所示美国专利申请公告No.US2002/0076743记载的花青类色素。
其中,特别是以下结构式(化2)所示花青类色素更为适用。
在这种情况下,最好在用于测定至少含红细胞的尿中粒子的尿液标本中加入的染色剂(第一染色剂)含有膜染色色素,而在用于测定细菌的尿液标本中加入的染色剂(第二染色剂)最好含有染色核酸的色素。尿中粒子中含有象红细胞那样没有核的细胞,由于第一染色剂含有膜染色的色素,包括这种无核的细胞在内,尿中粒子都可以检测出来。又由于第二染色剂含有核染色的色素,细菌的核被有效地染色,即使很小的细菌也可以很精确地测定。
上述第一染色剂和第二染色剂其吸收波长的峰值最好存在于上述半导体激光器的发光波长附近。通过选择靠近上述半导体激光器的发光波长的第一染色剂和上述第二染色剂的吸收波长峰值,可以通过半导体激光器测定被染色的尿中粒子和细菌。图4显示了这种第一染色剂一例(含有NK-529(商品名,林原生物化学研究所制)的染色剂)的吸收波长和吸光度的关系,其吸收波长的峰值存在于红色半导体激光器发光波长(635nm)附近的640nm处。图5显示了第二染色剂一例(含上述(化2)所示美国专利申请公告No.US2002/0076743上记载的花青系列色素的染色剂))的吸收波长和吸光度的关系,其吸收波长的峰值存在于红色半导体激光器发光波长(635nm)附近的636nm处。此外,图5还显示了在试剂温度为15℃和35℃的情况下吸光度的变化,但可以知道,只要是常温左右的温度,试剂的吸光度没有大的变化。
细菌测定用试剂含有阳离子型表面活性剂,其目的是使染料透过膜尽快染色以及收缩粘液丝和红细胞碎片等杂质。在此情况下,由于表面活性剂可以破损细菌的细胞膜,因此通过使用第二染色剂所含色素可以高效地对细菌的核酸染色。其结果是经过短时间的染色处理即可更精确地进行上述细菌的测定。在第二等分部分加入表面活性剂混合的情况下,最好细菌测定在尿中粒子测定结束后进行。第二试样含表面活性剂,如果在测定细菌后测定尿中粒子,由于试样携带,表面活性剂会混入第一试样,有可能破坏含红细胞的尿中粒子细胞膜,影响该尿中粒子的测定。而测定完尿中粒子再测定细菌,可以防止第一试样中混入表面活性剂,精确地测定尿中粒子。
本实施方式的结构是,从一个尿液标本分别制备测定至少含红细胞的尿中粒子用的第一试样和测定细菌用第二试样,用上述第一试样测定至少含红细胞的尿中粒子,用上述第二试样测定细菌。这样,一个分析装置可 以分别精确地测定至少含红细胞的尿中粒子和细菌。又因第一试样和第二试样共用一个光学检测***,可以简化装置结构,可以在降低产品成本的同时,实现装置小型化。
图7为本实施方式尿中粒子分析仪的定量机构及制样***的斜视略图;图8是其说明图。本实施方式采用常用的进样阀30作为将一定量的尿液标本分配到制样***(第一制样***)2u和制样***(第二试样设备器)2b的定量机构。此进样阀30由2个圆盘形的固定元件和两个固定元件夹着的可动元件组成,上述可动元件受电动机31操作转动。
上述进样阀30有互相重叠的2个矾土陶瓷制的圆盘30a、30b。圆盘30a、30b内部形成供试样流通的流路,其中一个圆盘30b以其中心轴为旋转中心旋转,上述流路被分断,以此定量试样。此进样阀30通过内部有试样用流路32的流体盒33与上述制样***2b连为一体。即,进样阀30、流体盒33和制样***2b互相紧密地配置,使之在热度上成为一体,进样阀30的温度与制样***2b的温度基本一致。与此相反,制样***2u则留有一定空隙S用螺钉35固定在固定于机壳上的安装板34,因此,制样***2u处于与上述进样阀30和制样***2b在热度上基本隔离的状态。
上述制样***2u和制样***2b分别由构成调温***的加热器36u、36b加热。以此将制备上述第一试样的制样***2u的温度调节为第一温度,将制备上述第二试样的制样***2b的温度调节为比第一温度略高的第二温度。具体而言,制样***2u调为35±2℃,制样***2b调为比此略高的42±2℃。试样温度越高,该试样所含红细胞和细菌等所定部位(膜和核等)越能快速染色,从而缩短测定时间,但另一方面,红细胞易因高温受损,温度过高,可能无法正确测定。因此,将用于测定比其他尿中粒子更耐热的细菌的第二试样的温度调节得高于用于测定尿中粒子的第一试样,换言之,通过将制样***2u和制样***2b分别调节到适于各自的测定温度, 即可精确地测定含红细胞的尿中粒子和细菌。制样***2u和制样***2b的温度比如可以用电热调节器测定。然后根据此测定结果开关加热器36u、36b,即可将制样***2u和制样***2b调节到上述所定范围的温度。
由于进样阀30和制样***2b连为一体,热度一样,可以防止在进样阀30调温的试样在运送到制样***2b时冷却。如此可以减少调温的浪费。此时,供应给温度低于制样***2b的制样***2u的试样由于从进样阀30运送时试样流路通过上述空隙S,可以使其自然下降。
[分析步骤]
下面按照图9~10所示流程,说明使用本发明一实施方式的尿中粒子分析仪进行尿液分析的步骤。
首先,预先从主计算机中取得在该机中管理的标本号、与该标本号相关的患者的姓名、年龄、性别和门诊科等患者信息以及测定项目等标本信息(步骤S1)。接着,通过个人电脑13的键盘和鼠标等输入手段下达实施测定的指示(步骤S2)。根据这一指示,装有试样的试管T的样品架3被样品架台4运送至所定的吸移位置(步骤S3)。在此吸移位置,上述试管T旋转,读取该试管T外面贴的ID标签上的条形码(步骤S4)。以此可知道试样的标本号,通过与在步骤S1取得标本号的标本信息作比照,即可特定该试样的测定项目。
然后,吸移管17下降,其前端***试管T内的试样中,在这种状态下反复轻轻抽吐上述试样,使试样充分搅拌(步骤S5)。搅拌后,吸样所定量(800μL),用进样阀30分别向制备测定至少含红细胞的尿中粒子(SED)用试样的制样***2u和制备测定尿中细菌(BAC)用试样的制样***2b各以150μL和62.5μL频率加样(步骤S7和步骤S11)。
制样***2u中一定量染色液(染色剂)和稀释液与上述试样一道定量加入(步骤S8和步骤S9)。另一方面,制样***2b中也同样,一定量染色液(染 色剂)和稀释液与上述试样一道定量加入(步骤S12和步骤S13)。制样***2u和制样***2b分别用加热器36u、36b加温至一定温度,在此状态下用螺旋桨状的搅拌器(无图示)搅拌试样(步骤S10和步骤S14)。另外,在步骤S9中加入制样***2u的稀释液含有表面活性剂,可以破坏细菌膜,从而高效对细菌的核染色。
接下来,向光学检测***5的鞘液流动池51中加入鞘液(步骤S15),然后,先将测定尿中粒子(SED)用试样导入光学检测***5,在上述鞘液流动池51中形成被鞘液包裹的细流(鞘液流)(步骤S16)。再用半导体激光器53发出的激光束照射形成的鞘液流(步骤S17)。之所以先测定尿中粒子是因为细菌测定用试样中含有表面活性剂,如果测定细菌后再测定尿中粒子,试样携带会使表面活性剂混入尿中粒子测定用试样,从而破坏含红细胞的尿中粒子细胞膜,影响该尿中粒子的测定。
上述激光束照射产生的尿中粒子的前向散射光、荧光和侧向散射光分别被光电二极管55、光电倍增管59和光电倍增管58采集并转换为电信号,作为前向散射光信号(FSC)、荧光信号(FL)和侧向散射光信号(SSC)输出(步骤S18~20)。这些输出信号通过前置放大器放大(步骤S21~23)。
另一方面,用测定尿中粒子(SED)用试样测定结束后,继续用在步骤S14制备的试样测定尿中细菌。此时,用测定尿中粒子时使用的光学检测***5与上述步骤S15~23同样操作,输出前向散射光信号(FSC)和荧光信号(FL)并放大。
放大的上述前向散射光信号(FSC)、荧光信号(FL)和侧向散射光信号(SSC)在上述信号处理电路10(参照图6)被转换为数字信号并施以一定的波形处理(步骤S24~27),通过网卡12输送到个人电脑13。另外,步骤S25中的“FLH”是用高增益放大荧光信号(FL)的高灵敏度物质,步骤S26的“FLL”是同样荧光信号(FL)用低增益放大的低灵敏度物质。
个人电脑13汇总尿中粒子(SED)原始数据(步骤S28),同时根据这些数据绘制散射图(步骤S29)。再通过运算分析对散射图进行分类(步骤S30),统计每类各粒子的数量(步骤S31)。
关于细菌也同样,放大的上述前向散射光信号(FSC)和荧光信号(FL)在上述信号处理电路10被转换为数字信号并施以一定的波形处理(步骤S32~34)。步骤S32中的“FSCH”是用高增益放大前向散射光信号(FSC)的高灵敏度物质,步骤S33的“FSCL”是同样前向散射光信号(FSC)用低增益放大的低灵敏度物质。
然后,通过网卡12输送到个人电脑13。在个人电脑13算出细菌(BAC)的原始数据(步骤S35)同时根据这些数据绘出散射图(步骤S36)。再通过计算分析对上述绘制的散射图进行分类(步骤S37),统计每类各粒子的数量(步骤S38)。如上得出的测定结果显示在个人电脑13的显示器荧光屏上(步骤S39)。
作为尿中粒子(SED)的测定结果,根据前向散射光、侧向散射光和荧光各信号绘出散射图。图11a是以荧光强度(低灵敏度)(FLL)为横轴、以前向散射光强度(FSC)为纵轴时的散射图。荧光信号强度大的区域出现有核的大细胞--上皮细胞(EC)和白细胞(WBC)。大半上皮细胞比白细胞大,比白细胞出现在荧光强度大的区域,但小型上皮细胞也有的会出现在和白细胞交迭的区域。为了识别二者使用侧向散射光信号。图11b为以侧向散射光强度(SSC)为横轴、以前向散射光强度(FSC)为纵轴时的散射图。上皮细胞出现在比白细胞侧向散射光强度大的区域,因此从此散射图可以识别上皮细胞。
图11c为以荧光强度(高灵敏度)(FLH)为横轴、以前向散射光强度(FSC)为纵轴时的散射图,显示荧光强度低的区域。红细胞(RBC)无核,故分布于荧光强度弱的区域。结晶(XTAL)有的出现在红细胞出现的区域,因此使用 侧向散射光信号确认结晶的出现。图11b为以侧向散射光强度(SSC)为横轴、以前向散射光强度(FSC)为纵轴时的散射图。结晶不一定分布于侧向散射光强度中心,也会出现在强度大的区域,因此通过此散射图可以将其与红细胞区分开。
图11d是以荧光宽度(FLLW)为横轴、以荧光宽度2(FLLW2)为纵轴时的散射图。FLLW表示捕捉到细胞膜被染色的粒子的荧光信号宽度,FLLW2表示强度高于核的荧光信号的宽度。如图所示,管型(CAST)的FLLW大,有内容物的管型(P.CAST)FLLW2大。无内容物的管型(CAST)出现在FLLW2低的区域。在此,信号的宽度指在以信号强度为纵轴、以时间为横轴的脉冲形信号波形中反映测出光信号的时间长短。
另一个细菌测定结果是从前向散射光信号和荧光信号生成的散射图。图11e是以荧光强度(B-FLH)为横轴、前向散射光信号强度(高灵敏度)(B-FSC)为纵轴的散射图。在尿中粒子测定中如图11c所示,细菌的出现区域与粘液丝(MUCUS)、酵母样真菌(YLC)和***(SPERM)的出现区域重叠。但在细菌测定中由于细菌测定试剂将粘液丝和红细胞碎片等杂质收缩,显示的区域内只有细菌独立出现,同时比在尿中粒子测定时灵敏度提高了大约10倍,因此,小型细菌也能精确地检测出来,从而能够提出正确的细菌检测报告。
在本实施例中,细菌是单独测定的,由此可阻止起因于细菌自动分类装置中的可信度低(细菌由大到小个头不一,且分布无规则可循,因此画面上会和其他白细胞和红细胞等成份混淆,从而难以正确区分成份)的情况。而且,在判断是否需要指示用显微镜复检(Review)时,在发出复检指令时,能够附以测定结果可信度低的理由。
图11e显示了细菌(BACT)的标准出现区域,但实际出现区域因细菌而异。图13是球菌大量连锁型出现的标本的测定例。该散射图中,细菌(BACT) 出现的区域以对横轴(荧光强度)约呈45度分布。即,细菌(BACT)出现在前向散射光强度(FSC)高的区域。在这种标本中,测定尿中粒子(SED)时细菌广泛出现,一直到红细胞出现区域中的前向散射光强度(FSC)低的区域都有细菌出现。对于这种标本,红细胞测定的可信度较低。另一方面,图12是含杆菌的标本的测定例。在此散射图中,细菌(BACT)出现区域以对横轴(荧光强度)呈低角度(约5~10度)分布。即,细菌(BACT)出现在前向散射光强度(FSC)低的区域。这种标本即使含大量杆菌,细菌出现的区域是比红细胞出现区域前向散射光强度(FSC)低的区域,红细胞的测定不会受细菌的影响。同样,在尿中粒子(SED)测定中细菌对白细胞(WBC)出现区域的影响也可以从细菌测定(BAC)中的细菌分布确认。这种根据细菌分布倾向判断有无影响其他粒子测定结果工作通过个人电脑13(分析器)中的计算分析进行,该判断结果在上述步骤S39中与其他结果一起显示在屏幕上。
如此从细菌测定(BAC)获得细菌分布信息,以此推断细菌在尿中粒子(SED)测定中的出现区域,即可确认其他粒子测定的可信度。因此,根据细菌测定(BAC)的分布可以判断是否需要指示用显微镜复检(Review),可以减少假阳性判断,下达适宜的复检指令。还可以减少由于无法进行可信度高的区分而作出复检判断的次数。
本实施方式当尿中的细菌浓度超过5x103个/ml时,即可测定该尿液中的细菌。具体而言,将测定时间设长一些、多设定测定试样的量,即可测定5x103个/ml这种低浓度的细菌。由于尿中细菌浓度超过5x103个/ml时即可测定该尿液细菌,因此,可以根据尿检中求得的敏感度测定细菌。
如上所示,本发明一个实施方式的尿中粒子分析仪对于尿液标本是用第一染色剂和第二染色剂制备试样,再通过第一测定***测定至少含红细胞的尿中粒子,通过第二测定***测定细菌。因此,用一个分析装置即可分别精确地测定至少含红细胞的尿中粒子和细菌。
本实施方式的尿中粒子分析仪的光学检测***可采集从上述试样发出的前向散射光和侧向散射光,上述第一测定***可根据二种散射光测定尿中粒子。因此,利用侧向散射光可以区分比如上皮细胞和白细胞或上皮细胞和细菌,得以提高自动分类精度的同时,减少送去显微镜复检的标本数量。
前述的详细说明及附图是通过文字解释和图示来进行的,其目的不在于限定权利要求的保护范围。本说明书中的具体实施方式的各个变种对于普通技术人员来说显而易见,并处于权利要求及其等同技术的保护范围内。
Claims (13)
1.一种尿中粒子分析仪,包括:
将尿液标本分配为第一等分和第二等分的标本分配器;
在所述第一等分加入第一染色剂混合、制备第一试样的第一制样***;
在所述第二等分加入第二染色剂混合、制备第二试样的第二制样***;
光学检测***,包括用光照射用于分别使所述第一试样和所述第二试样在其内流动的流动池和流经所述流动池中的所述第一试样或所述第二试样的光源、采集所述第一试样或所述第二试样产生的散射光的散射光采集器和采集所述第一试样或所述第二试样产生的荧光的荧光采集器;
根据从所述第一试样检测出的散射光和荧光信号测定并计数至少含红细胞的尿中粒子的第一测定***;及
根据从所述第二试样检测出的散射光和荧光信号测定并计数尿中细菌的第二测定***。
2.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中进一步包括根据所述第二测定***测定结果判断细菌是否影响所述第一测定***的测定结果的分析器。
3.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中:
所述散射光采集器可采集所述试样发出的前向散射光和侧向散射光;及
所述第一测定***根据前向散射光和侧向散射光测定尿中粒子。
4.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中所述第一染色剂含有对膜染色的色素,所述第二染色剂含有染色核的色素。
5.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中所述第二制样***在所述第二等分中加入表面活性剂混合,制备所述第二试样。
6.如权利要求5所述的尿中粒子分析仪,其中所述第一测定***结束测定动作后,所述第二测定***才开始测定。
7.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中进一步包括将所述第一制样***温度调节为第一温度、将所述第二制样***温度调节得比所述第一温度高的第二温度的调温***。
8.如权利要求7所述的尿中粒子分析仪,其中:
所述标本分配器有定量尿液标本的定量机构;
所述调温***有调节所述第一制样***温度的第一调温***和调节所述第二制样***温度的第二调温***;及
定量机构、第二制样***和第二调温***从结构上其热度一致。
9.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中所述光源是半导体激光器。
10.如权利要求9所述的尿中粒子分析仪,其中所述第一染色剂和所述第二染色剂其吸收波长峰值在所述半导体激光器发光波长附近。
11.如权利要求1所述的尿中粒子分析仪,其中所述第二测定***只要尿中细菌浓度超过5×103个/ml,即可测定该尿液细菌。
12.一种测定尿中所含细菌和至少含红细胞尿中粒子的尿中粒子分析仪,包括:
将尿液标本分配为第一等分和第二等分的标本分配器;
第一制样***,用于在所述第一等分加入第一染色剂混合、制备测定至少含红细胞的尿中粒子用的第一试样;
第二制样***,用于在所述第二等分加入第二染色剂混合、制备测定细菌用的第二试样;
光学检测***,包括照射所供试样的光源、采集该试样产生的散射光的散射光采集器和采集该试样产生的荧光的荧光采集器;及调温***,用于将所述第一制样***的温度调为第一温度、将所述第二制样***的温度调到比第一温度略高的第二温度。
13.一种尿中粒子分析方法,包括:
标本分配步骤,将尿液标本分配为第一等分和第二等分;
在所述第一等分加入第一染色剂混合、制备第一试样的第一制样步骤和在所述第二等分加入第二染色剂混和、制备第二试样的第二制样步骤;
第一光检步骤,向制备的所述第一试样照射光,并检测所述第一试样发出的散射光和荧光;
第二光检步骤,向制备的所述第二试样照射光,并检测所述第二试样发出的散射光和荧光;
第一测定步骤,根据所述第一光检步骤检测出的散射光和荧光信号测定并计数至少含红细胞的尿中粒子;及
第二测定步骤,根据所述第二光检步骤检测出的散射光和荧光信号测定并计数尿中细菌。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006137511 | 2006-05-17 | ||
JP2006-137511 | 2006-05-17 | ||
JP2006137511A JP4759438B2 (ja) | 2006-05-17 | 2006-05-17 | 尿中有形成分分析装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101173888A CN101173888A (zh) | 2008-05-07 |
CN101173888B true CN101173888B (zh) | 2012-11-14 |
Family
ID=38325395
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2007101020958A Active CN101173888B (zh) | 2006-05-17 | 2007-05-17 | 尿中粒子分析仪及其分析方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8501482B2 (zh) |
EP (1) | EP1857804B1 (zh) |
JP (1) | JP4759438B2 (zh) |
CN (1) | CN101173888B (zh) |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3680643A1 (en) * | 2007-02-01 | 2020-07-15 | Sysmex Corporation | Sample analyzer and computer program product |
JP5334643B2 (ja) | 2009-03-30 | 2013-11-06 | シスメックス株式会社 | 尿試料分析装置 |
JP5351585B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2013-11-27 | シスメックス株式会社 | 腎疾患診断支援装置およびコンピュータプログラム |
KR101257299B1 (ko) | 2009-09-09 | 2013-04-22 | 한국전자통신연구원 | 휴대형 배뇨 분석용 디지털 리더기 |
KR101257298B1 (ko) * | 2009-09-09 | 2013-04-22 | 한국전자통신연구원 | 휴대형 배뇨 분석용 디지털 리더기 |
JP2011095182A (ja) * | 2009-10-30 | 2011-05-12 | Sysmex Corp | 細胞分析装置及び細胞分析方法 |
JP5685378B2 (ja) * | 2010-01-08 | 2015-03-18 | シスメックス株式会社 | 検体分析装置および検体分析方法 |
EP2348301B1 (en) | 2010-01-08 | 2013-08-21 | Sysmex Corporation | Sample analyzer |
WO2014133160A1 (ja) | 2013-02-28 | 2014-09-04 | シスメックス株式会社 | 尿検体分析装置及び尿検体分析方法 |
US9746461B2 (en) | 2013-02-28 | 2017-08-29 | Sysmex Corporation | Urine sample analyzer and sample analyzing method |
JP2014209090A (ja) * | 2013-03-29 | 2014-11-06 | シスメックス株式会社 | 細胞分析方法及び装置 |
JP6196502B2 (ja) | 2013-08-30 | 2017-09-13 | シスメックス株式会社 | 検体分析方法および検体分析装置 |
JP6225085B2 (ja) * | 2013-08-30 | 2017-11-01 | シスメックス株式会社 | 検体分析方法および検体分析装置 |
JP2015087176A (ja) * | 2013-10-29 | 2015-05-07 | シスメックス株式会社 | 尿検体分析装置および尿検体分析方法 |
JP6116502B2 (ja) * | 2014-02-28 | 2017-04-19 | シスメックス株式会社 | 検体分析装置および検体分析方法 |
EP3112863B1 (en) * | 2014-02-28 | 2019-07-17 | Sysmex Corporation | Method for detecting casts and erythrocytes in urine samples |
CN106062556B (zh) * | 2014-02-28 | 2019-07-12 | 希森美康株式会社 | 尿样品分析方法、尿样品分析用试剂及尿样品分析用试剂盒 |
JP6317976B2 (ja) * | 2014-03-31 | 2018-04-25 | シスメックス株式会社 | 尿検体分析方法及び尿検体分析装置 |
JP6238856B2 (ja) * | 2014-08-25 | 2017-11-29 | シスメックス株式会社 | 尿中異型細胞の分析方法、尿分析装置および体液中異型細胞の分析方法 |
JP6228085B2 (ja) | 2014-08-27 | 2017-11-08 | シスメックス株式会社 | 検体分析装置及び検体分析方法 |
WO2016157982A1 (ja) * | 2015-03-31 | 2016-10-06 | シスメックス株式会社 | 尿分析システム、撮像装置、細胞撮像装置、尿分析方法、管理装置および情報処理方法 |
WO2017106439A1 (en) | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Abbott Laboratories | Particle detection methods and systems for practicing same |
CN105671123B (zh) * | 2016-01-19 | 2018-11-20 | 西南交通大学 | 一种液体中细菌的计数方法 |
CN111239128A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-06-05 | 长沙协大生物科技有限公司 | 一种***分泌物检测仪及其检测方法 |
CN114459982B (zh) * | 2022-01-17 | 2024-05-31 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0882983A2 (en) * | 1997-05-19 | 1998-12-09 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent and method for classification and counting of leukocytes |
EP1089078A1 (en) * | 1994-10-20 | 2001-04-04 | Sysmex Corporation | Reagent and method for analyzing solid components in urine |
EP1136563A2 (en) * | 2000-03-22 | 2001-09-26 | Sysmex Corporation | Method of staining, and detecting and counting bacteria |
CN1755348A (zh) * | 2004-09-30 | 2006-04-05 | 希森美康株式会社 | 检体中粒子分析方法、分析装置及分析试剂 |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3213334B2 (ja) | 1991-05-14 | 2001-10-02 | シスメックス株式会社 | 尿中の細胞分析装置 |
JPH05322882A (ja) * | 1992-05-21 | 1993-12-07 | Hitachi Ltd | 血液分析装置 |
JP3580615B2 (ja) | 1994-10-20 | 2004-10-27 | シスメックス株式会社 | 尿中有形成分分析用試薬及びその試薬を用いた有形成分分析方法 |
JP3739482B2 (ja) * | 1996-05-23 | 2006-01-25 | シスメックス株式会社 | 尿中の有形成分分析方法および試薬 |
JP3642658B2 (ja) | 1997-06-30 | 2005-04-27 | シスメックス株式会社 | 尿中有形成分分析装置および分析方法 |
JPH1183849A (ja) * | 1997-09-12 | 1999-03-26 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 尿中有形成分の分析方法及びその分析試薬 |
JP3867880B2 (ja) * | 1998-04-08 | 2007-01-17 | シスメックス株式会社 | 尿中赤血球の鑑別装置および方法 |
NO994228D0 (no) * | 1999-09-01 | 1999-09-01 | Oddbjoern Gjelsnes | Metode og innretning for telling av celler i urin |
US7309581B2 (en) * | 2000-11-01 | 2007-12-18 | Sysmex Corporation | Method of staining, detection and counting bacteria, and a diluent for bacterial stain |
US7044911B2 (en) * | 2001-06-29 | 2006-05-16 | Philometron, Inc. | Gateway platform for biological monitoring and delivery of therapeutic compounds |
US6979570B2 (en) * | 2001-07-26 | 2005-12-27 | Sysmex Corporation | Particle analyzer and particle analyzing method |
US9429509B2 (en) * | 2002-01-28 | 2016-08-30 | Sysmex Corporation | Particle analyzer and particle analysis method |
JP4299597B2 (ja) * | 2002-07-29 | 2009-07-22 | シスメックス株式会社 | 血液分析装置及び方法 |
JP4236893B2 (ja) | 2002-10-04 | 2009-03-11 | シスメックス株式会社 | 菌計数方法および菌計数装置 |
JP3863087B2 (ja) * | 2002-10-25 | 2006-12-27 | シスメックス株式会社 | 試料分析装置およびその装置に使用されるピペット洗浄用希釈液 |
JP4484442B2 (ja) * | 2003-04-10 | 2010-06-16 | シスメックス株式会社 | 細菌測定方法と装置とプログラム |
JP4626938B2 (ja) * | 2003-12-10 | 2011-02-09 | 旭化成ファーマ株式会社 | 試験用具及び測定方法 |
JP4417143B2 (ja) | 2004-03-11 | 2010-02-17 | シスメックス株式会社 | 試料分析装置、プログラムおよびそのプログラムを記録した記録媒体 |
JP4503370B2 (ja) * | 2004-06-30 | 2010-07-14 | シスメックス株式会社 | 有形成分分析装置及び方法 |
JP4805710B2 (ja) | 2006-03-31 | 2011-11-02 | シスメックス株式会社 | 検体分析装置 |
-
2006
- 2006-05-17 JP JP2006137511A patent/JP4759438B2/ja active Active
-
2007
- 2007-05-10 US US11/798,066 patent/US8501482B2/en active Active
- 2007-05-14 EP EP07009621.9A patent/EP1857804B1/en active Active
- 2007-05-17 CN CN2007101020958A patent/CN101173888B/zh active Active
-
2013
- 2013-08-05 US US13/959,034 patent/US9329133B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1089078A1 (en) * | 1994-10-20 | 2001-04-04 | Sysmex Corporation | Reagent and method for analyzing solid components in urine |
EP0882983A2 (en) * | 1997-05-19 | 1998-12-09 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent and method for classification and counting of leukocytes |
EP1136563A2 (en) * | 2000-03-22 | 2001-09-26 | Sysmex Corporation | Method of staining, and detecting and counting bacteria |
CN1755348A (zh) * | 2004-09-30 | 2006-04-05 | 希森美康株式会社 | 检体中粒子分析方法、分析装置及分析试剂 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JP特开2006-17555A 2006.01.19 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2007309728A (ja) | 2007-11-29 |
EP1857804A3 (en) | 2008-07-02 |
US20090050821A1 (en) | 2009-02-26 |
US20130316444A1 (en) | 2013-11-28 |
CN101173888A (zh) | 2008-05-07 |
EP1857804B1 (en) | 2018-07-25 |
US8501482B2 (en) | 2013-08-06 |
JP4759438B2 (ja) | 2011-08-31 |
EP1857804A2 (en) | 2007-11-21 |
US9329133B2 (en) | 2016-05-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101173888B (zh) | 尿中粒子分析仪及其分析方法 | |
CN101074914B (zh) | 尿中粒子分析仪及其方法 | |
JP4078600B2 (ja) | フローサイトメトリーに基づく血液学装置 | |
JP4468590B2 (ja) | 全血液サンプルにおけるセル分析方法および装置 | |
Horan et al. | Fluorescent cell labeling for in vivo and in vitro cell tracking | |
Hercher et al. | Detection and discrimination of individual viruses by flow cytometry. | |
DE69534429T2 (de) | Verfahren und vorrichtung zur durchführung automatischer analysen | |
TW316948B (zh) | ||
JP6232046B2 (ja) | 尿検体分析装置及び尿検体分析方法 | |
JP2002503333A (ja) | 自動分析実施方法および装置 | |
JPH06507971A (ja) | 絶対白血球サブセット計数値および白血球の多数の部の差を得るための方法および装置 | |
JP2000310642A (ja) | 自動分析システム及びその方法 | |
EP1857805B1 (en) | Apparatus for analyzing particles in urine and method thereof | |
WO2007129485A1 (ja) | 粒子分類方法および装置 | |
JP4279900B2 (ja) | 細胞生存率、有核赤血球、および白血球分類の同時分析方法 | |
Nakayama et al. | Outline and features of UF-5000, fully automated urine particle analyzer | |
US20080182290A1 (en) | Apparatus and methods for determining viability of cell-based products | |
JP4825033B2 (ja) | 尿分析装置 | |
JP2021516335A (ja) | 生体細胞を含む生体試料の分析方法及びその分析方法を実施する分析装置 | |
Ma et al. | Hematology Analyzers and Reagents | |
AU2001263405B2 (en) | Flow cytometry-based hematology system | |
AU2001263405A1 (en) | Flow cytometry-based hematology system |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |