CN101156854A - 喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法，首先将喜树碱类药物微晶体置于去离子水中，超声分散，第二步将分散后的喜树碱类药物微晶体置于聚阳离子溶液中吸附，之后离心、洗涤，第三步再将吸附了聚阳离子的喜树碱类药物微晶体置于聚阴离子溶液中吸附，离心、洗涤，然后依次重复第二步和第三步，从而得到具核壳结构的药物微胶囊。这种微胶囊很稳定，可实现药物的控制释放，可以制成微纳米药物口服液或注射液，也可构成药物胶囊、片剂等。本发明工艺简单，反应条件温和，易操作，重现性好，环境友好，为喜树碱类及其它具有疗效高，但毒性大，水溶性差等特点药物的应用研究提供物质基础与技术保障，具有良好的应用前景。

Description

喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法

技术领域

本发明涉及一种喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法。

背景技术

寻找开发抗癌活性物质和研制新型高效毒副作用小的抗癌药物制剂是当今医药科学中一项迫切和重要的研究内容。喜树碱(CPT)是从中国特有植物喜树中分离得到的具广谱抗癌活性的天然化合物，它通过可选择性地抑制拓扑异构酶，干预肿瘤细胞DNA复制，从而达到抑制肿瘤细胞生长的作用，喜树碱这一独特抗癌机理的发现，引起全世界医药界研究领域的极大兴趣。但是由于喜树碱具毒副作用大、水溶性差、体内半衰期短等缺点，使得其应用受到一定的限制。

微囊技术是一种用高分子成膜材料把固体、液体或气体包覆形成微小粒子的技术。药物微囊化后，既提高了药物的稳定性，又可实现对药物缓释的目的，降低毒副作用，延长药物在体内活性时间，也可使药物浓集于靶区，提高疗效，降低毒副作用。此外，通过微胶囊的包埋还可增加水难溶型药物在水中的分散性。因此，采用微囊药物传递***是解决喜树碱类药物诸多缺点的一种有效途径。因此，为获得低毒副作用、水分散性好的喜树碱药物制剂，许多科学工作者已开始从这方面着手进行研究。目前，在已有喜树碱类药物微粒传递***的专利中，脂质体、微凝胶体、微乳液、聚合物微粒等多种微粒结构已被作为喜树碱类药物的微载体，如专利“10-羟基喜树碱长循环脂质体及其冻干制剂；10-羟基喜树碱长循环囊泡及其冻干制剂；一种10-羟基喜树碱自微乳组合物；喜树碱衍生物的纳米微粒、制备方法及其药物用途；载有喜树碱的聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)纳米粒子及其制备方法；一种羟基喜树碱聚乳酸纳米粒的制备方法”等。本发明所采用的技术与以上专利中所用技术均不相同，而且至今尚未有用该技术制备喜树碱类药物微胶囊的报道。

尽管近年来对喜树碱类药物缓释微囊给药研究取得了一些进展，但面临的困难仍然很多，主要表现在以下几方面：(1)筛选生物相容性和生物降解性优良的囊壁材料；(2)改善微粒制备方法，提高收率；(3)提高药物载量；(4)实现药物释放速率可控，降低起始爆释率，获得药物连续平稳释放；(5)提高药物在体内循环时间。

发明内容

本发明的目的在于针对喜树碱类药物的上述不足之处，提供一种喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法。

本发明采用的技术方案是：

(1)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体分散于去离子水中，超声1～100分钟以分散喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体，制成混悬液，

(2)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体置于含有0.01～100mg/mL的聚阳离子试剂的0.01～10mol/L pH值为1～6之间的盐溶液中吸附0.1～100分钟，离心或过滤除去未被吸附的聚阳离子，用0.01～1mmol/L盐酸重复洗涤1～10次，每次洗涤0.1～100分钟，

(3)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱置于含有0.01～100mg/mL的聚阴离子试剂的0.01～10mol/L pH值为1～6之间盐溶液中吸附0.1～100分钟，离心或过滤除去未被吸附的聚阴离子，用0.01～1mmol/L盐酸重复洗涤1～10次，每次洗涤0.1～100分钟，

(4)依次重复步骤(2)和(3)，得组装了不同高分子层数的喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱的缓释微胶囊。

这种微胶囊很稳定，把该药物微胶囊分散于水性中可构成多种类型的微纳米药物口服液或注射液，把该药物微胶囊与辅料混合，可构成药物胶囊、片剂等。

本发明的方法具有以下优点：

(1)囊壁厚度小，喜树碱类药物微晶体为微米级，囊壁厚度为纳米级，

(2)药物的包封率与载药率高，

(3)药物释放速度可以通过囊壁的厚度或包覆层数控制，

(4)本发明工艺简单，反应条件温和，易操作，重现性好，环境友好，为喜树碱类及其它具有疗效高，但毒性大，水溶性差等特点药物的应用研究提供物质基础与技术保障，具有良好的应用前景，

(5)本发明特别适用于包覆喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱药物微晶体。

(6)本发明能够控制药物释放速率、使之平稳释放、延长药物在体内循环时间的、生物利用度高的喜树碱类药物缓释微胶囊，从而解除癌症患者采用喜树碱类药物进行化疗时由于剧烈的毒副作用而带来的痛苦，减少给药频率，为患者用药提供方便。

附图说明

图1是本发明包覆了5个单层壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)的喜树碱微胶囊，最外层用异硫氰酸荧光素(FITC)进行荧光标记的激光共聚焦显微镜荧光照片。

图2是包覆了5个单层壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)的喜树碱微胶囊的激光共聚焦显微镜透射照片。

图3是喜树碱微晶体用壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)包覆5个单层，再用二甲基亚砜(DMSO)溶解释放出喜树碱，所得高分子空壳最外层用FITC标记的共聚焦显微镜荧光照片。

图4是喜树碱微晶体用壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)包覆5个单层，再用二甲基亚砜(DMSO)溶解释放出喜树碱，所得高分子空壳的共聚焦显微镜透射照片。

图5是包覆层数对喜树碱释放速率的影响：(1)喜树碱微晶体在pH＝7.4的磷酸缓冲溶液(PBS)中，(2泡覆了5个单层壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)的喜树碱微胶囊在pH＝7.4的磷酸缓冲溶液(PBS)中，(3)包覆了11个单层壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)的喜树碱微晶体在pH＝7.4的磷酸缓冲溶液(PBS)中，(4)包覆了17个单层壳聚糖/海藻酸钠(CHI/ALG)的喜树碱微晶体在pH＝7.4的磷酸缓冲溶液(PBS)中。

图6是包覆5个氯化铁/硫酸葡聚糖钠(Fe/DS)双层的10-羟基喜树碱微胶囊的共聚焦显微镜照片。

图7是10-羟基喜树碱微晶体用氯化铁/硫酸葡聚糖钠(Fe/DS)包覆5个双层后，再用二甲基亚砜(DMSO)溶解释放出部分10-羟基喜树碱，所得的半空心10-羟基喜树碱微胶囊的共聚焦显微镜照片。

图8是10-羟基喜树碱微晶体用氯化铁/硫酸葡聚糖钠(Fe/DS)包覆5个双层后，再用二甲基亚砜(DMSO)溶解释放出全部10-羟基喜树碱，所得的高分子微胶囊空壳的共聚焦显微镜照片。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作进一步的详细描述，但这些实例并不用来限制本发明。

实施例1

(1)将喜树碱微晶体分散于去离子水中，超声分散50分钟，得到喜树碱微晶体的混悬液，

(2)将喜树碱微晶体置于50mg/mL的壳聚糖(CHI)溶液中吸附30分钟，离心除去未被吸附的壳聚糖(CHI)，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(3)将喜树碱微晶体置于50mg/mL的海藻酸钠(ALG)溶液中，吸附30分钟，离心除去未被吸附的海藻酸钠(ALG)，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(4)依次重复步骤(2)和(3)，直至得到囊壁层数分别为5、11、17的喜树碱微胶囊，

(5)将包覆5层高分子的喜树碱微胶囊置于激光共聚焦扫描电镜下观察载有喜树碱晶体的微胶囊形态，图像见图1，图2，

(6)用二甲基亚砜(DMSO)将喜树碱溶出，再用激光共聚焦显微镜观察剩余的微胶囊空壳，图像见图3，图4，

(7)将包覆了不同层数的喜树碱微胶囊置于pH＝7.4的磷酸缓冲溶液(PBS)中，保持37℃，观察包覆不同层数的喜树碱微胶囊的体外释放特性。体外释放曲线见图5。

本实施例中，聚阳离子除了可选用壳聚糖(CHI)外，还可选用鱼精蛋白、聚精氨酸、聚烯丙基铵盐酸盐(PAH)、聚二烯丙基二甲季铵盐、胶原、多聚赖氨酸、阳离子葡聚糖、氯化铁、二苯胺-4-重氮树脂、取代二苯胺重氮树脂。

本实施例中，聚阴离子除了可选用海藻酸钠(ALG)外，还可选用硫酸葡聚糖(DS)、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纤维素钠、聚阴离子纤维素、聚苯乙烯磺酸钠(PSS)、硫酸软骨素、聚丙烯酸钠、透明质酸、聚甲基丙烯酸。

本实施例中，高分子层数可以是1～50层。

实施例2

(1)将10-羟基喜树碱微晶体分散于去离子水中，超声分散50分钟，得到10-羟基喜树碱微晶体的混悬液，

(2)将10-羟基喜树碱微晶体置于50mg/mL pH＝2的氯化铁溶液中吸附30分钟，离心除去未被吸附的氯化铁，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(3)将10-羟基喜树碱微晶体置于50mg/mL的硫酸葡聚糖(DS)溶液中，吸附30分钟；离心除去未被吸附的DS，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(4)依次重复步骤(2)和(3)，直至得到囊壁层数分别为8、12、16的10-羟基喜树碱微胶囊，

(5)用二甲基亚砜(DMSO)将微胶囊中的10-羟基喜树碱溶出，用激光共聚焦显微微观察溶出过程及剩余的微胶囊空壳，图像见图6，7，8。

本实施例中，聚阳离子除了可选用氯化铁外，还可选用壳聚糖(CHI)、鱼精蛋白、聚精氨酸、聚烯丙基铵盐酸盐(PAH)、聚二烯丙基二甲季铵盐、胶原、多聚赖氨酸、阳离子葡聚糖、二苯胺-4-重氮树脂、取代二苯胺重氮树脂。

本实施例中，聚阴离子除了可选用硫酸葡聚糖(DS)外，还可选用海藻酸钠(ALG)、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纤维素钠、聚阴离子纤维素、聚苯乙烯磺酸钠(PSS)、硫酸软骨素、聚丙烯酸钠、透明质酸、聚甲基丙烯酸。

本实施例中，高分子层数可以是1～50层。

实施例3

(1)将9-硝基喜树碱微晶体分散于去离子水中，超声分散50分钟；得到9-硝基喜树碱微晶体的混悬液，

(2)将9-硝基喜树碱微晶体置于50mg/mL pH＝2的聚烯丙基铵盐酸盐(PAH)溶液中吸附30分钟，离心除去未被吸附的PAH，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(3)将9-硝基喜微晶体置于50mg/mL的聚苯乙烯磺酸钠(PSS)溶液中，吸附30分钟，离心除去未被吸附的PSS，用1mmol/L盐酸溶液重复洗涤10次，每次洗涤10分钟，

(4)依次重复步骤(2)和(3)，直至得到囊壁层数分别为3、5的喜树碱微胶囊。

本实施例中，聚阳离子除了可选用聚烯丙基铵盐酸盐(PAH)外，还可选用壳聚糖、鱼精蛋白、聚精氨酸、聚二烯丙基二甲季铵盐、胶原、多聚赖氨酸、阳离子葡聚糖、氯化铁、二苯胺-4-重氮树脂、取代二苯胺重氮树脂。

本实施例中，聚阴离子除了可选用聚苯乙烯磺酸钠(PSS)外，还可选用海藻酸钠、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纤维素钠、聚阴离子纤维素、硫酸葡聚糖(DS)、硫酸软骨素、聚丙烯酸钠、透明质酸、聚甲基丙烯酸。

本实施例中，高分子层数可以是1～50层。

Claims (4)

1.一种喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法，其特征在于：

(1)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体分散于去离子水中，超声1～100分钟以分散喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体，制成混悬液，

(2)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱微晶体置于含有0.01～100mg/mL的聚阳离子试剂的0.01～10mol/L pH值为1～6之间的盐溶液中吸附0.1～100分钟，离心或过滤除去未被吸附的聚阳离子，用0.01～1mmol/L盐酸重复洗涤1～10次，每次洗涤0.1～100分钟，

(3)将喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱置于含有0.01～100mg/mL的聚阴离子试剂的0.01～10mol/L pH值为1～6之间盐溶液中吸附0.1～100分钟，离心或过滤除去未被吸附的聚阴离子，用0.01～1mmol/L盐酸重复洗涤1～10次，每次洗涤0.1～100分钟，

(4)依次重复步骤(2)和(3)，得组装了不同高分子层数的喜树碱或10-羟基喜树碱或9-硝基喜树碱的缓释微胶囊。

2.根据权利要求1所述的喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法，其特征在于：所述聚阳离子试剂为壳聚糖、鱼精蛋白、聚精氨酸、聚烯丙基铵盐酸盐、聚二烯丙基二甲季铵盐、胶原、多聚赖氨酸、阳离子葡聚糖、氯化铁、二苯胺-4-重氮树脂、取代二苯胺重氮树脂。

3.根据权利要求1所述的喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法，其特征在于：所述聚阴离子试剂为海藻素钠、硫酸葡聚糖、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纤维素钠、聚阴离子纤维素、聚苯乙烯磺酸钠、硫酸软骨素、聚丙烯酸钠、透明质酸、聚甲基丙烯酸。

4.根据权利要求1所述的喜树碱类药物缓释微胶囊的制备方法，其特征在于：所述高分子层数为1～50层。

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