CN101134758A

CN101134758A - 从银杏叶中提取分离银杏内酯a、b、c、j及白果内酯单体的方法

Info

Publication number: CN101134758A
Application number: CNA2007100502421A
Authority: CN
Inventors: 孙莉莉; 罗增桂; 唐江明; 李振志
Original assignee: GUILIN ZHENDA BIOLOGY SCIENCE TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUILIN ZHENDA BIOLOGY SCIENCE TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2007-10-15
Filing date: 2007-10-15
Publication date: 2008-03-05
Anticipated expiration: 2027-10-15
Also published as: CN101134758B

Abstract

本发明将公开一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤为：1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，用乙醇结晶得银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J；5)回收收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J单体。

Description

从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法

(一)技术领域：

本发明涉及从植物中提取有效成份的方法，具体涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法。

(二)背景技术：

银杏树又称白果树，属裸子植物，是银杏科银杏属的唯一生存的老树种之一，其叶和果具有重要的药用价值。目前研究最多的是银杏叶提取物，它包括黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。黄酮类化合物约有38种，总含量为22-27％；银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为5.4-6.6％。银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J和M单体；据文献报道，银杏内酯中各单体的药物功能有一定差异，其中，银杏内酯A、B对治疗心脑血管疾病具有显著疗效；而白果内酯对治疗神经***疾病则药效独特，为了提高其药用治疗效果，有时必须将各单体分离纯化；由于白果内酯是倍半萜物质，而银杏内酯A、B、C、J、M是二萜类物质，它们的分子结构较为相似，极性差异也很小，致使银杏内酯类化合物中的各单体的提取与分离比较困难，只有少许企业将它们单独分离出来，如申请号为200410065104.7，名称为<<一种银杏内酯单体的分离纯化方法>>的中国发明专利，公开了一种银杏内酯单体的分离纯化方法，它是采用柱色谱—重结晶—超临界CO₂精制纯化组合工艺，制取高纯度的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯M和白果内酯；其中柱色谱采用正相或反相固定填料，使用水、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、氯仿、石油醚等溶剂梯度洗脱，超临界CO₂精制纯化和晶型整理工艺条件为：压力≤100MPa，温度≤150℃，夹带剂为乙酸乙酯、乙醇等；由该方法分离所得的单体含量最高可达99.8％，总收率≥90％，但该方法采用了超临界CO₂精制纯化组合工艺，生产条件要求较高，相应的成本也较高。

(三)发明内容：

本发明将公开一种提取所得率高、所得各单体纯度高的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法。

本发明从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤如下：

1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；

称取一定量的银杏叶，可先用体积浓度为60-80％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶8-10；将银杏叶分离出来，再用体积浓度为30-55％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶6-8；再将银杏叶分离出来，用体积浓度为10-25％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶5-7；合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至银杏叶重量的8-10倍体积；

2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；

可向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯萃取，一般来说，萃取3次所达到的效果较好；

3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；

所述选择性极性无孔吸附树脂柱的型号可为ADS-15，或ADS-17，或ADS-F8；将步骤2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀释后上柱，可先用水洗，直至流出液无色；然后再用体积浓度为50-70％的乙醇洗脱，所述洗脱剂的体积用量可为上述浸膏重量的30-60倍；将收集得到的洗脱液回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为50-80％的乙醇为溶剂结晶，所得结晶即为银杏内酯类化合物；

4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J；

所述正己烷和乙酸乙酯的混合液中正己烷和乙酸乙酯的体积比最好为9∶1-2∶8；在洗脱的过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，分段收集洗脱液，依次得到含有白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J的洗脱液；

5)回收步骤4)中收集的各洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J单体。

回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，用体积浓度为20-40％的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到白果内酯单体；用体积浓度为60-80％的乙醇对银杏内酯A洗脱液进行结晶，得到银杏内酯A单体；用体积浓度为30-70％的乙醇对银杏内酯B洗脱液进行结晶，得到银杏内酯B单体；用体积浓度为20-40％的乙醇对银杏内酯C洗脱液进行结晶，得到银杏内酯C单体；用体积浓度为20-40％的乙醇对银杏内酯J洗脱液进行结晶，得到银杏内酯J单体。

本发明的优点：

本发明采用由高到低不同浓度的乙醇对银杏叶进行提取，使银杏内酯类化合物的提取率提高了10％以上，特别是白果内酯和银杏内酯J的提取率较现有技术提高了15％；本发明中还采用了特殊的选择性极性无孔吸附树脂进行除杂，可除掉大部分影响硅胶柱分离的杂质，实现了一次上柱即可分离得到银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体，且各单体的纯度达到99％以上；与现有技术相比，本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得单体纯度高，更易于产业化的生产。

(四)具体实施方式：

实施例1

1)取10千克银杏叶，用100升体积浓度为80％的乙醇在50℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用60升体积浓度为55％的乙醇在70℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用50升体积浓度为25％的乙醇在50℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至100升浓缩液；

2)向浓缩液中加入100升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓缩得到500克浸膏；

3)将步骤2)中所得浸膏加50倍体积水稀释后上ADS-15柱，先用水洗，直至流出液无色，再用15升体积浓度为50％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为50％的乙醇结晶，得到70克银杏内酯类化合物晶体；

4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液进行梯度洗脱，其中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9∶1-2∶8；在洗脱过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，分段收集洗脱液，依次得到含有白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J的洗脱液；

5)回收步骤4)中收集的各洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为20％的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到12.01克的白果内酯单体；用体积浓度为60％的乙醇对银杏内酯A洗脱液进行结晶，得到3.12克的银杏内酯A单体；用体积浓度为40％的乙醇对银杏内酯B洗脱液进行结晶，得到4.55克的银杏内酯B单体；用体积浓度为30％的乙醇对银杏内酯C洗脱液进行结晶，得到4.72克的银杏内酯C单体；用体积浓度为30％的乙醇对银杏内酯J洗脱液进行结晶，得到1.30克的银杏内酯J单体。

实施例2

1)取50千克银杏叶，用400升体积浓度为60％的乙醇在70℃时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用400升体积浓度为30％的乙醇在70℃时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用300升体积浓度为10％的乙醇在70℃时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至500升浓缩液；

2)向浓缩液中加入500升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓缩得到1.5千克浸膏；

3)将步骤2)中所得浸膏加200倍体积水稀释后上ADS-17柱，先用水洗，直至流出液无色，再用60升体积浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为70％的乙醇结晶，得到233克银杏内酯类化合物晶体；

5)回收步骤4)中收集的各洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为30％的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到5.17克的白果内酯单体；用体积浓度为75％的乙醇对银杏内酯A洗脱液进行结晶，得到28.71克的银杏内酯A单体；用体积浓度为30％的乙醇对银杏内酯B洗脱液进行结晶，得到81.90克的银杏内酯B单体；用体积浓度为25％的乙醇对银杏内酯C洗脱液进行结晶，得到3.47克的银杏内酯C单体；用体积浓度为40％的乙醇对银杏内酯J洗脱液进行结晶，得到4.01克的银杏内酯J单体。

实施例3

1)取40千克银杏叶，用280升体积浓度为70％的乙醇在70℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用280升体积浓度为50％的乙醇在60℃时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用280升体积浓度为20％的乙醇在70℃时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至400升浓缩液；

2)向浓缩液中加入400升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓缩得到1.2千克浸膏；

3)将步骤2)中所得浸膏加100倍体积水稀释后上ADS-F8柱，先用水洗，直至流出液无色，再用70升体积浓度为60％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为80％的乙醇结晶，得到225克银杏内酯类化合物晶体；

5)回收步骤4)中收集的各洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为25％的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到44.51克的白果内酯单体；用体积浓度为70％的乙醇对银杏内酯A洗脱液进行结晶，得到31.76克的银杏内酯A单体；用体积浓度为50％的乙醇对银杏内酯B洗脱液进行结晶，得到16.72克的银杏内酯B单体；用体积浓度为40％的乙醇对银杏内酯C洗脱液进行结晶，得到17.68克的银杏内酯C单体；用体积浓度为20％的乙醇对银杏内酯J洗脱液进行结晶，得到4.01克的银杏内酯J单体。

Claims

1.从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤如下：

5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J单体。

2.根据权利要求1所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤1)中，先用体积浓度为60-80％的乙醇对银杏叶进行提取；然后用体积浓度为30-55％的乙醇对银杏叶进行提取；再用体积浓度为10-25％的乙醇对银杏叶进行提取。

3.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤1)中，所述提取的温度为50-70℃。

4.根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤1)中，第一次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶8-10；第二次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶6-8；第三次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶5-7。

5.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤2)中，所述加入的乙酸乙酯的体积与浓缩后的提取液的体积比为1∶1，萃取的次数为3次。

6.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤3)中，所述选择性极性无孔吸附树脂型号为ADS-15，或ADS-17，或ADS-F8。

7.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤3)中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为50-70％。

8.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤3)中，所述结晶用乙醇的体积浓度为50-80％。

9.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤4)中，所述正己烷和乙酸乙酯混合液中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9∶1-2∶8。

10.根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其特征在于：步骤4)中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，分段收集洗脱液。